UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD CIENCIAS MDICAS

ESCUELA TECNOLOGA MDICA
LABORATORIO CLNICO

TEMA: IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM POSITIVOS IDENTIFICACIN DE STREPTOCOCCUS. NOMBRE: PUMA CARRILLO ERIKA ELIZABETH CTEDRA: BACTERIOLOGA LABORATORIO SEMESTRE: CUARTO FECHA: 19 DE OCTUBRE DEL 2011

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Reconocer las caractersticas del estreptococo.

OBJETIVOS SECUNDARIOS
Aplicar las diferentes pruebas para identificar con precisin y responsabilidad la especie de Strptococcus que estamos estudiando. Aprender diferentes modos de clasificacin del estreptococo. Relacionar las caractersticas de cada una de las pruebas de identificacin con la adecuada clasificacin de grupos dentro del gnero analizado. Realizar la prctica de manera responsable y con las debidas normas de biosegurida pues estamos trabajando con diferentes muestras de bacterias vivas,

MARCO TERICO

ESTREPTOCOCOS
Los estreptococos son un grupo grande y heterogneo de bacterias, algunos son miembros de la flora humana normal, otros se asocian con enfermedades humanas importantes atribuibles en parte a la infeccin y a la sensibilizacin a ellos.

MORFOLOGIA
Son cocos gran positivos esfricos, anaerobios facultativos, todos son catalasa-negativos que se disponen en cadenas cortas o largas de 10-15 esferas. Las cadenas largas tienen el aspecto de un rosario o un collar de perlas violetas, inmviles. Los carbohidratos contenidos dentro de la pared de muchos estreptococos forman la base de la clasificacin serolgica en los grupos de Lancefield A-H y K-U. Esta divisin ha sido til para la identificacin rpida de algunos patgenos estreptoccicos como por ejemplo el estreptococo pyogenes que causa faringitis estreptoccica. Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D Grupo E

La hemlisis o reaccin de las bacterias en una placa de agar sangre es una de las caractersticas ms tiles que tambin nos sirve para clasificar a los estreptococos y adems representar un criterio de patogenicidad: 1. Beta-hemolticos: disrupcin completa de eritrocitos con formacin de un halo notorio (trasparente) de hemlisis alrededor de las colonias 2. Alfa-hemolticos: lisis incompleta de eritrocitos producen un halo verdoso 3. Gamma-hemolticos: no producen hemlisis.

Los estreptococos de mayor importancia mdica son los de los grupos A, B y D GRUPO A.- Estreptococo Pyogenes, beta hemoltico este es un patgeno considerado prototipo de afeccin humana que se ve asociado con invasin local o sistmica y trastornos inmunolgicos postestreptoccicos Grupo B: Streptococcus agalactiae, betahemoltico, miembro de la flora normal, agentes de meningitis, y sepsis neonatal. Grupo D: Streptococcus faecalis (Enterococo) y S. bovis o S. equinus (no enterococos) alfahemliticos
Grupo C,F,G.

RECURSOS: 1. Colonias bien aisladas del microorganismo a probar. 2. Cepa de Streptococcus beta hemoltico del grupo A-B. 3. Staphylococcus aureus productor de beta hemolisina. 4. Cagas de agar sangre de cordero. 5. Mechero de Bunsen. 6. Asas bacteriolgicas. 7. Disco de optoquina de 5ug. 8. Discos diferenciales de bacitracina Taxo A (0,04 unidades/disco). 9. Placa agar sangre enterococo faecalis. 10. Placa agar sangre enterococo bovis.

PROCEDIMIENTO:

En esta prctica desarrollamos las siguientes pruebas para identificacin streptococos.

1.-REALIZACIN DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA: Mediante un asa, seleccionamos tres o cuatro colonias bien aisladas del microorganismo a probar y las estriamos en la mitad de la caja con agar sangre de cordero. Colocamos el disco de optoquina (Taxo P) en el centro del rea sembrada, presionando suavemente. A continuacin incubamos a 35 C durante 18 a 24 horas en jarra con vela o en estufa con 5-7% de CO2, y por ltimo observamos los resultados.

2.- PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA: Con un asa recta tomamos de tres a cuatro colonias aisladas de Streptococcus beta hemoltico y estriar el inculo hasta el centro de la mitad de la caja agar sangre. Luego con un asa redonda diseminar el inculo por toda la mitad de la caja. Colocamos el disco de bacitracina Taxo A, presionando con suavidad en el centro del rea diseminada. Finalmente incubar en atmosfera normal a 35C. Observacin luego de 24 horas.

3.- PRUEBA DEL CAMP PARA IDENTIFICACIN DEL GRUPO B: Estriamos una colonia previamente seleccionada de Staphylococcus aureus en la mitad de la caja en forma vertical En forma horizontal estriamos las colonias de un Streptococcus del grupo A-B o beta hemoltico a unos 5mm de separacin de la colonia de Staphylo seguido de la colonia de prueba que quremos identificar. Por consiguiente incubamos de 18-24 horas a 35C aerbicamente o en atmosfera de CO2 al 5%. Al final de ello observamos los resultados.

RESULTADOS: PRUEBAS OPTOQUINA RESULTADOS Resistente

Fundamentola optiquina inhibe en forma selectiva el crecimiento de S. pneumoniaea muy bajas concentraciones, es soluble en H2O se difunde con facilidad.

BACITRACINA

Resistente

Fundamento la susceptilidad a bajas concentraciones del antibitico polipeptdico bacitracina y combinacin de sulfamidas ayuda a identificar S. B hemolticos del grupo A y B.

CAMP

Negativo

Grupos identificados

Bacitracina resistente: presumiblemente Grupo B

PRUEBAS OPTOQUINA
Fundamentola optiquina inhibe en forma selectiva el crecimiento de S. pneumoniaea muy bajas concentraciones, es soluble en H2O se difunde con facilidad.

RESULTADOS Resistente

BACITRACINA
Fundamento la susceptilidad a bajas concentraciones del antibitico polipeptdico bacitracina y combinacin de sulfamidas ayuda a identificar S. B hemolticos del grupo A y B.

Resistente

CAMP

Negativo

Grupos identificados

Bacitracina resistente: presumiblemente Grupo B

RESULTADOS
PRUEBA DE CATALASA La rpida aparicin y produccin sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica una reaccin positiva. Si no hay presencia de burbujas la prueba se considera negativa Esto reaccin se debe porque la enzima hemoprotena descompone el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. Esta prueba nos permite diferenciar la familia Micrococcacea (Staphylococcus) de la Streptococcacea.

PRUEBA DE COAGULSA La coagulasa es una protena, que tiene actividad similar a la pro trombina, capaz de convertir el fibringeno en fibrina, dando como resultado la formacin de cogulo visible. Podemos encontrar dos formas libre (prueba en tubo) y ligada (prueba en placa).

 Prueba en portaobjetos Una reaccin positiva debe detectarse dentro de 20 segundos, debe oservarse una aglutinacin de los microorganismos en la suspensin. El control con suero fisiolgico debe mantenerse uniforme y lechoso. En esta reaccin est presente la coagulasa ligada, que est unida a la pared celular bacteriana, en estas clulas se forman bandas de fibrina cuando se suspende en plasma y formando grumos visibles.

Prueba en tubo La reaccin positiva en tubo se considera cuando se presenta la formacin de cogulo despus de horas, si son negativos se reincuban hasta 18 horas. En esta reaccin esta la coagulasa libre que es una sustancia similar a la trombina presente en los filtrados de cultivos, es por ello que cuando se trata de bacterias productoras de coagulasa se forma un coagulo visible.

PRUEBA DE MANITOL Luego de haber incubado por 24 horas aerobicamente a 37C vamos observar un cambio de ph presente en el medio rojo fenol a color amarillo si es positivo Medio de color amarillo Positivo Medio de color rojo Negativo

PRUEBA DE LA NOVIOBICINA. Se verifica con la medicin del halo de inhibicin que se observa en el medio. Un halo de menor a 16 mm es resistente. La resistencia a novobiocina es intrnseca en S. saprophyticus. Un halo de inhibicin mayor a 16 es sensible, para S. epidermidis, aureus u otros de coagulasa negativa.

RESULTADO DE LA PRUEBA DE GRAM DEL CALDO DE TIOGLICOLATO Con esto podemos observar la morfologa de los microorganismos. Luego de haber realizado la coloracin de Gram se pudo observar en el microscopio que las bacterias que estn formando la colonia son cocobacilos.

CONCLUSIONES
Luego de haber realizado las diferentes pruebas de identificacin pudimos deducir lo siguiente: Con la prueba de la catalasa, cuyo resultado en la prctica fue positivo poedemos decir que las bacterias son de la familia Staphylococcus. Al aplicar las diferentes pruebas de identificar para ver que especie de Staphylococcus y obtener los siguientes resultado: Coagulasa en placa negativo; coagulasa en tubo negativo Prueba de manitol negativo Prueba de: novobiocina sensible polimixina B resistente Gram de tioglicolato cocobacilos He llegado a la conclusin que es un Staphylococcus sparophyticus. Realizamos la prctica de manera responsable y con las debidas normas de biosegurida as hemos evitado contagio alguno con las diferentes sepas de bacterias.

RECOMENDACIONES Al poner en contacto una porcin de la bacteria del cultivo con el asa en un portaobjetos y al coger la colonia con el asa de siembra no se debe tomar parte del agar sangre debido a que la catalasa presente en los eritrocitos puede producir resultados falsos positivos. Realizar los procedimientos de las diversas pruebas con las debidas precauciones para que los resultados sean reales. Al momento de realizar esta prctica debemos llevar la adecuada proteccin para no atentar a nuestra bioseguridad.

BIBLIOGRAFA PABN, Lucrecia C.MSc.: Manual de prcticas en bacteriologa, Ecuador-Quito; Editorial Fussion; Primera edicin; 2009 Manual de Prcticas de laboratorio de Anlisis Clnicos III, Vigente a partir de febrero de 2009.