Universidad Tcnica Federico Sta.

Mara
Departamento de Qumica Anlisis Instrumental Qui-325

Informe II

Espectroscopa UV-Vis Produccin de Bioetanol

Integrantes:

Diego Castillo B. Franco Spada C. 1 Dra. Erika Valds 28 de Diciembre de 2011

Grupo: Profesor: Fecha:

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OBJETIVOS
Estudio de fermentacin de glucosa mediante levadura de cerveza saccharomyces cerevisiae

Anlisis colorimtrico del producto de fermentacin. Obtencin de los espectros en el rango UV-VIS de los reactivos involucrados en la reaccin, as como de los productos de la reaccin.

DESCRIPCIN DEL TRABAJO REALIZADO Determinacin de la glucosa remanente (% de conversin): Preparacin de la curva de calibracin:

Esta parte de la experiencia fue realizada por las profesoras guas del laboratorio con anterioridad, para evitar errores y optimizar el tiempo. Consista en tomar alcuotas de 5, 10, 20 y 40 [mL] de una solucin de glucosa un matraz de aforo de 50 [mL]. Luego se aforaba con agua desionizada. 0,01 [M] y traspasarlas a

La concentracin de glucosa en los matraces corresponda a 0,001; 0,002; 0,004 y 0,008 [M] respectivamente. Preparacin de la muestra (Producto Bioetanol):

Se filtr una pequea porcin de muestra utilizando un embudo Bchner. Desarrollo de color:

Se transfiri 1 [mL] de cada una de las soluciones de calibracin y de muestra a diferentes tubos con tapa rosca. A cada tubo se le adicionaron 3 gotas de NaOH al 10% y 1 [mL] de solucin de reactivo DNS con una pipeta de 5 [mL]. Se homogeneiz la solucin de cada tubo y se dej en bao a ebullicin por 5 minutos, luego de pasado el tiempo se enfriaron en un bao de hielo por otros 5 minutos. Se traspas a un matraz de aforo de 10 [mL] y se afor con agua desionizada y se dej reposar por 15 minutos. Posteriormente se ley la absorbancia de cada uno de los puntos de la curva, la muestra y el blanco de reactivos a una longitud de onda de 540 [nm], frente a un blanco con agua.

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Obtencin de espectros UV-VIS: Ajustes y seleccin de condiciones en Espectrofotmetro UV-VIS:

Al encender el equipo ste realiza automticamente una calibracin interna y ajustes de sistema ptico. Una vez que termina de realizar este test de calibracin est en condiciones de ser usado: Se seleccion el modo de trabajo Barrido. Pues en este modo se obtienen espectros de absorcin. Luego se seleccion el rango de longitudes de onda entre las cuales se obtendra el espectro de absorcin. Se realiz un barrido utilizando un solvente puro en las cubetas. Esto corresponde a un background o autozero. Se obtuvieron los espectros y los registros de las soluciones colocando en una de las cubetas la muestra y en la celda de referencia el solvente puro.

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RESULTADOS a) A partir de las mediciones de absorbancia de las soluciones estndares de glucosa, obtenga la regresin lineal para Absorbancia vs Concentracin de glucosa. Esta curva se construir en base a los datos entregados en la clase del da viernes 16 de Diciembre: Glucosa [mM] 0 1 2 4 8 Absorbancia [UA] 0,026 0,09 0,179 0,371 0,735

Tabla 1: Mediciones Glucosa

Con estos datos, se presenta a continuacin la curva generada para las distintas concentraciones de glucosa y sus respectivas mediciones de absorbancia:

Absorbancia vs Conc. Glucosa

0.8 0.7 0.6 Absorbancia 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 2 4 6 8 10 Glucosa [mM]
Ilustracin 1: Curva Glucosa

y = 0.0902x + 0.0095

Como se puede observar en el grfico, la ecuacin de la recta que se ajusta a los datos, es la siguiente: [ ]

*Recordando que la concentracin de glucosa, se encuentra en milimolar.

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b) Calcular el contenido de glucosa en la muestra fermentada, expresada como concentracin molar. Calcular el % de conversin de glucosa aproximado a las 68 horas y despus de 7 das de reaccin. Contenido de glucosa en la muestra fermentada:

La muestra fermentada (solucin de estudio) corresponde a la de tiempo de reaccin de 36 horas, la cual arroj una absorbancia de 0,532 [UA]. Utilizando este dato de absorbancia, segn la ecuacin obtenida para la glucosa, se tiene: [ [ ] ]

Por lo tanto, el contenido de glucosa en la muestra fermentada es de: [ *Muestra con dilucin 10/100. [ ] ] [ ] [ ] [ [ ]

% de conversin de glucosa a las 68 horas:

Esta muestra arroj una absorbancia de 0,310 [UA]. Utilizando este dato de absorbancia, segn la ecuacin obtenida para la glucosa, se tiene: [ [ Por lo tanto, el contenido de glucosa en la muestra es de: [ ] [ ] ] ]

Para determinar la conversin de glucosa necesitamos conocer su concentracin inicial: [ ] [ ] [ ] [ ] [ ]

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Debemos considerar que esta muestra no se encontraba diluda: Por lo tanto, considerando la concentracin de glucosa a las 68 horas, se tiene:

% de conversin de glucosa despus de 7 das de reaccin:

Esta muestra arroj una absorbancia de 0,270 [UA]. Utilizando este dato de absorbancia, segn la ecuacin obtenida para la glucosa, se tiene: [ [ Por lo tanto, el contenido de glucosa en la muestra es de: [ ] [ ] ] ]

Debemos considerar que esta muestra no se encontraba diluda: Por lo tanto, considerando la concentracin de glucosa despus de 7 das de reaccin, se tiene:

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c) A partir de su medicin de la muestra de estudio y de los datos obtenidos por los otros grupos de laboratorio, complete la siguiente tabla: Dilucin de la solucin 5/250 5/250 5/100 10/100 20/100 20/100 1 Concentracin S/diluir [moles glucosa/L] 0,440 0,213 0,110 0,058 0,028 0,013 0,007

Tiempo de reaccin [h] 0 12 24 36 48 60 72

Absorbancia [UA] 0,785 0,394 0,504 0,532 0,509 0,242 0,626

Tabla 2 Datos de todos los grupos

d) Grafique Concentracin de glucosa vs tiempo de reaccin y determine el tiempo requerido para tener 90% de conversin de glucosa.

Conc. glucosa vs Tiempo Reaccin

0.500 0.450 0.400 Conc. Glucosa [moles/L] 0.350 0.300 0.250 0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Tiempo de Reaccin [h]

y = 0,4358e-0,058x

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[ ] Con la ecuacin que se presenta en el grfico, se calcula el tiempo estimado:

[ ] [ ]

e) Explique por qu no se puede analizar directamente glucosa, mediante espectroscopa UV-VIS y por qu se escoge la longitud de onda igual a 540 [nm]. La glucosa no es absorbida en el rango ultravioleta ni en el visible (Vase Anexo 1), es por esto que se utiliza el DNS para la reaccin con glucosa porque el producto final (cido 3-amino-5-nitrosaliclico) es estable y porque tiene una adecuada sensibilidad, es decir tiene la capacidad de discriminar entre concentraciones muy prximas del analito. As pequeos cambios en la concentracin del analito producen grandes cambios en la medicin analtica. Adems el cambio de color que presenta es fcilmente reconocible de amarillo verdoso (DNS) a rojo (cido 3-amino-5-nitrosaliclico). La medicin de absorbancia se efecta a una longitud de onda igual 540 [nm], pues a una longitud menor a sta se absorbe tanto el reactivo DNS, como nuestro producto de reaccin. El DNS presenta su mximo peak a una longitud de onda de 372 [nm] y deja de absorberse cerca a los 540 [nm] (vase anexo 2). El DNS Glucosa, presenta 2 mximos, uno a una longitud de onda de 422 [nm] y otro a una longitud de onda de 372 [nm], sin embargo a diferencia del DNS, a una longitud de onda igual a 540 [nm] (vase anexo 3), an presenta absorbancia, por lo que es posible identificarlo en el espectro fotomtrico claramente.

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f) Asigne una posible identificacin a su solucin de compuesto desconocido por comparacin con los datos de Lambda Mx y coeficiente de absortividad molar que aparecen en las tablas entregadas en clases.

Compuesto A-2

Datos obtenidos de Anexo 4: Long. Onda (mx) [nm] 245 Absorbancia [UA] 3,2389 Concentracin [M] 8,7 E-5

Tabla 3 Compuesto A-2

Para determinar el coeficiente de absortividad molar () sabemos que:

[ *Asumiendo un paso ptico de 1 [cm]. Por lo tanto tenemos lo siguiente:

El compuesto desconocido A-2 podra corresponder a HEXANOTRIENO.

Compuesto C-2

Datos obtenidos de Anexo 5: Long. Onda (mx) [nm] 220 Absorbancia [UA] 2,9976 Concentracin [M] 8,56 E-5

Tabla 4 Compuesto A-2

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Para determinar el coeficiente de absortividad molar () sabemos que:

[ *Asumiendo un paso ptico de 1 [cm]. Por lo tanto tenemos lo siguiente:

[ El compuesto desconocido C-2 podra corresponder a BUTANODIENO.

Es muy importante sealar que la posibilidad de que ambos compuestos nombrados en esta parte del informe sean los indicados, no es muy alta, debido a que los datos que nos entregaron los Anexos 4 y 5, no coinciden plenamente con las tablas de comparacin entregadas en clases, sino que slo se aproximan. Adems pueden haber ocurrido una serie de errores experimentales que hacen que los datos obtenidos por el equipo de medicin no sean los adecuados.

Conclusiones Al utilizar el espectro de absorcin obtuvimos la regresin lineal de la concentracin de glucosa versus la [ ] absorbancia de las soluciones, cuya ecuacin result ser , con la concentracin de glucosa en milimolar. A travs de esta herramienta de trabajo, conseguimos la concentracin de glucosa de nuestra muestra de 68 horas y 7 das posterior a la creacin de la misma, dndonos como resultado 3,33 mM (99,24% de conversin de glucosa) y 2,89 mM (99,34% de conversin), siendo estos datos los esperados, ya que la mayor parte de la reaccin se produce en las primeras horas y obtuvimos mayor % de conversin a los 7 das que a las 68 horas, por lo que la reaccin si bien estaba casi estabilizada, segua convirtiendo el resto de la glucosa. Al completar la tabla del punto c) y luego graficar en d), concluimos que la relacin entre la concentracin de glucosa y el tiempo de reaccin es del tipo exponencial con pendiente negativa, ya que en un principio

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disminuy fuertemente la concentracin conforme pasaban las primeras horas, pero de3spus decay el nivel de disminucin de la misma. Con este grfico, pudimos obtener la concentracin de glucosa para as ver el tiempo de reaccin en que el porcentaje lleg al 90% de conversin, resultado que nos arroj 39,53 horas, aproximadamente. Vimos tambin que es necesario un rango ptimo de longitud de onda en la electroscopa, pues no siempre se arroja la absorbancia de la solucin, teniendo sta un ptimo en 540 nm, para que no desaparezcan las propiedades de la glucosa DNS ni del producto de reaccin. Con la ecuacin , pudimos obtener la naturaleza de los compuestos desconocidos en el laboratorio, siendo stos hexanotrieno y butanodieno, aunque no estamos 100% seguros de aquello, pero son los que ms se acercan a las tablas entregadas en clases, ya que puede haber ocurrido una serie de errores experimentales que hacen que los datos obtenidos por el equipo de medicin no sean los adecuados.

ANEXOS
Anexo N 1: Barrido Espectral Glucosa Anexo N 2: Barrido Espectral DNS Anexo N 3: Barrido Espectral DNS Glucosa Anexo N 4: Barrido Espectral Compuestos Desconocido A-2 Anexo N 5: Barrido Espectral Compuestos Desconocido C-2 Anexo N 6: Barrido Espectral Curcumina

BIBLIOGRAFA
Anlisis Qumico Cuantitativo, 3 Edicin, Captulo 20 Daniel C.Harris. Apuntes/Presentacin Power Point UV-VIS, Anlisis Instrumental, 2-2011.