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FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA
2011
Vol. 1 No. 1:2
doi: 10:3823/601
Libro de resmenes:
Sesiones orales Farmadrid XX
Comit Organizador: Emilio Ambrosio Flores, Alejandro Higuera Matas,
Javier Ibias Martn, Nuria del Olmo Izquierdo, Miguel Miguns Vzquez,
Santiago Morales Coria, M Amparo Assis Duart, David Roura Martnez,
Gonzalo Lpez Montoya, Departamento de Psicobiologa. Facultad de
Psicologa. UNED
Sesin de Apertura
Lugar
Facultad de Psicologa
Saln de Actos
C/ Juan del Rosal, 10
Ciudad Universitaria
28040 - MADRID
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FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA
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doi: 10:3823/601
La Pleiotrofina (PTN) es un factor neurotrfico que ejerce importantes funciones en la supervivencia y diferenciacin de
neuronas dopaminrgicas, as como en la modulacin de la
potenciacin a largo plazo (LTP) hipocampal. La PTN se sobreexpresa en distintas reas cerebrales en respuesta a distintas
drogas de abuso como la anfetamina, lo que sugiere que la
PTN podra modular los efectos neuroadaptativos y farmacolgicos inducidos por esta droga. Para probar esta hiptesis,
estudiamos los efectos de la anfetamina en ratones knockout
de PTN (PTN-/-) y en ratones wyld type (PTN+/+). En estos estudios, observamos que una dosis intermedia de anfetamina (3
mg/Kg) induce un condicionamiento preferencial al sitio (CPP)
similar en ratones PTN-/- y PTN+/+. Adems, los ratones PTN/- mostraron un significativo aumento en el comportamiento
de bsqueda de la droga comparado con los PTN+/+ despus
de 5 das de la ltima administracin de anfetamina. Una dosis
menor de esta droga (1 mg/Kg) caus un mayor CPP en ratones
PTN-/- y, de nuevo, los ratones PTN-/- continuaron mostrando
un llamativo comportamiento de bsqueda de la droga comparado con los ratones PTN+/+ 5 das despus de la ltima
administracin de anfetamina.
Por otra parte, se conoce que la administracin de anfetamina
durante la adolescencia en ratas provoca deficiencias cognitivas en el animal adulto. En este sentido, tratamos de averiguar
si la PTN puede ser uno de los factores implicados en los dficits cognitivos observados en el adulto despus de la administracin de anfetamina durante la adolescencia (3 mg/Kg i.p./
da, durante 10 das). Veinticuatro horas despus de la ltima
administracin de la droga, los ratones PTN+/+ mostraron una
retencin de memoria significativa en el ensayo de evitacin
pasiva independientemente del tratamiento recibido. Por el
contrario, en los ratones PTN-/- encontramos un dficit significativo en la fase de retencin inducido por anfetamina en el
test de la evitacin pasiva, as como 6 das despus de la ltima
administracin de la droga en el test del laberinto en Y. Sin
embargo, 13 y 26 das despus de la ltima administracin de
anfetamina, no se encontraron diferencias significativas en el
laberinto en Y entre los ratones PTN-/- pretratados con anfetamina y con salino (control). Adems, observamos un aumento
significativo de la LTP hipocampal en rodajas de ratones PTN/- pretratados con salino comparados con PTN+/+. Curiosamente, el tratamiento con anfetamina durante la adolescencia
aument significativamente la LTP en ratones PTN+/+ adultos,
pero no produjo ningn efecto en ratones PTN-/-, lo que sugiere mecanismos de saturacin de LTP en ratones PTN-/-. Estos
datos sugieren que el tratamiento con anfetamina durante la
adolescencia provoca un dficit cognitivo transitorio dependiendo de la expresin endgena de PTN, as como una aumento a largo plazo de la LTP en ratones normales (PTN+/+).
O.2.Efecto de la metanfetamina en la activacin
de las metaloproteinasas: Implicacin en la
neurotoxicidad.
A. Urrutia, A. Rubio-Araiz, MD Gutierrez-Lpez; A El Ali, DM Hermann, E. OShea, MI Colado. Departamento de Farmacologa.
Facultad de Medicina. UCM
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Agradecimientos:
MICINN (SAF2010-21529; RD06/0001/006), PNSD (PR47/10-17826),
UCM (910258), FEDER y RTA
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Existe cada vez mayor evidencia de una relacin entre depresin e inflamacin. Adems, el hecho de que existan entre un
30 40 % de pacientes que no responden a los tratamientos
con antidepresivos hace necesario encontrar una nueva diana
teraputica o un tratamiento farmacolgico alternativo. Nrf2
es un factor de transcripcin que juega un papel fundamental en defensa celular frente a dao oxidativo y electroflico.
Adems se ha descrito que est implicado en la atenuacin de
procesos patolgicos relacionados con inflamacin. Con estos
antecedentes nos planteamos la hiptesis de si Nrf2 podra
estar relacionado con la fisiopatologa de la depresin y por
lo tanto constituir una diana teraputica frente a dicha enfermedad. As, realizamos distintos test predictivos de comportamiento depresivo en ratones salvajes y ratones knock out
para Nrf2. Los tres tests realizados mostraron que los ratones
Nrf2 (-/-) presentan un fenotipo depresivo por observarse un
aumento del tiempo de inmovilidad en el test de natacin forzada, en el test de suspensin de la cola y una disminucin
del tiempo de lamido en el test de sacarosa. No se observaron
alteraciones en la actividad motora. Las alteraciones a nivel de
comportamiento se vieron acompaadas de alteraciones a nivel de plasticidad sinptica (BDNF, VEGF y sinaptofisina) y otros
parmetros alterados en pacientes de depresin mayor como
son la fosforilacin de GSK3 en la Ser9 o los niveles de receptor glucocorticoide (medidos mediante western blot). Adems
se observ mediante qrt-PCR que la microgla se encuentra
activada en los ratones Nrf2 (-/-). Al administrar rofecoxib,
un antiinflamatorio no esteroideo, durante 7 das el fenotipo
depresivo de los ratones Nrf2 (-/-) se vio revertido. Con estos
resultados podemos concluir que Nrf2 podra estar implicado
en la fisiopatologa de la depresin por un mecanismo relacionado con la inflamacin ya que al eliminar esta protena los
ratones muestran un comportamiento depresivo acompaado
de alteraciones a nivel molecular de distintos parmetros relacionados con neuroplasticidad y resistencia a glucocorticoides.
O.4.Estimulacion del ncleo medial del rafe
(NMR) modula el status epilepticus (se) inducido por pentilentetrazol (PTZ) en ratas
jvenes.
Julin. Javela1, Pablo Bascuana1, Eduardo D. Martn2, Miguel
A. Pozo1 1. Unidad de Cartografa Cerebral, Instituto Pluridisciplinar, Universidad Complutense de Madrid; 2. Grupo de Neurofisiologa y Plasticidad Sinptica, Centro Regional de Investigaciones Biomdicas, Universidad Castilla-La Mancha.
En los ltimos aos se ha incrementado la evidencia que vincula la neurotransmisin serotonrgica con la modulacin de
una gran variedad de modelos experimentales de epilepsia.
Si bien esta modulacin se ha relacionado con la activacin
de receptores postsinpticos serotonrgicos tipo 5-HT1A, los
mecanismos circuitales que subyacen a este control no han
sido claramente determinados. El objetivo del presente trabajo ha sido investigar los circuitos serotonrgicos implicados
en la modulacin de las crisis epilpticas del lbulo temporal,
en particular la va Rafe-Hipocampo, utilizando un modelo de
status epilepticus (SE) inducido por pentilentetrazol (PTZ). Ratas
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El uso teraputico de los cannabinoides ha sido ampliamente demostrado a lo largo de la historia, como analgsicos,
antiinflamatorios, antiemticos y actualmente como agentes
neuroprotectores para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas como el Alzheimer. En la actualidad el uso
de estos frmacos est limitado por sus efectos psicotrpicos.
Existen ms de 84 cannabinoides en Cannabis sativa algunos
de los cuales carecen de efectos psicoactivos, entre ellos est
el cannabinol (CBN). Se trata del producto primario de la degradacin del THC y no se suele encontrar demasiado en la
planta. Es un psicoactivo muy leve cuya afinidad es superior
en el caso del receptor CB2 y baja en el CB1. En base a esto y
a los nuevos descubrimientos en la actividad neuroprotectora de los cannabinoides, hemos diseado una nueva ruta de
sntesis de CBN y estructuras anlogas diseadas mediantes
tcnicas de docking molecular con el objetivo de inhibir a la
acetil colinesterasa y desarrollar un potencial frmaco para el
tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.La nueva ruta de
sntesis que hemos desarrollado consigue la sntesis total del
CBN y otras estructuras anlogas en 5 pasos. Se basa en una
primera condensacin de 2 ciclos mediante una adicin aromtica a un carbonilo, seguida de la isomerizacin del correspondiente alcohol benclico y posterior ciclacin obteniendo
el sistema de cromeno caracterstico de los cannabinoides. Se
ha realizado un estudio de las propiedades QSAR de los compuestos sintetizados mediante tcnicas computacionales as
como las Ki tericas para cada anlogo con el fin de encontrar
un cabeza de serie y correlacionar los resultados con los ensayos de inhibicin in vitro.
O.14.Derivados de hispanolona suprimen la va
de sealizacin inflamatoria JAK-STAT en
clulas de microglia estimuladas con interferon-g.
Florencia Cidre1, Sandra Herranz1, Beatriz de las Heras2, Eva
Cano3, Sonsoles Hortelano1. 1.Unidad de Inflamacin y Cncer.
Centro Nacional de Microbiologa. Instituto de Salud Carlos III.
Madrid. 2. Departamento de Farmacologa. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. 3. Unidad de Neuroinflamacin. Centro Nacional de Microbiologa. Instituto de
Salud Carlos III. Madrid.
La bsqueda de nuevos agentes antiinflamatorios derivados
de productos naturales se ha incrementado enormemente
en los ltimos aos. Recientemente se ha descrito que derivados de la hispanolona como la dehidroisohispanolona (T4)
o el 8,9-dehidrohispanolona-15,16-lactol (T11) ejercen efectos
anti-inflamatorios en macrfagos peritoneales. Las acciones
anti-inflamatorias de los derivados de la hispanolona parecen
estar relacionados con la inhibicin de la liberacin de mediadores inflamatorios como el xido ntrico (NO) y las prostaglandinas, as como de citoquinas como TNF-a e IL-6 a travs
de un mecanismo que implica la inhibicin de la activacin
del factor de trancripcin NF-kB. Sin embargo, no se conocen
los efectos de estos compuestos en otros tipos celulares implicados en la inflamacin como la microgla. As, en este trabajo
hemos evaluado los efectos anti-inflamatorios de los derivados
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de hispanolona en clulas BV2 y en cultivos primarios de microgla tras estimulacin con IFN-g. Nuestros datos muestran que
ambos compuestos son capaces de inhibir la liberacin de NO,
a nivel transcripcional, siendo el compuesto T11 el ms activo
de los dos. Utilizando tcnicas de microarray y anlisis de PCR
cuantitativa comprobamos que el compuesto T11 ejerce una
clara inhibicin de genes regulados por IFN-g tales como las
quimioquinas CXCL-10 (IP-10) y CXCL-9 (MIG). Los efectos inhibitorios del T11 parecen estar mediados por la inhibicin de la va
de sealizacin JAK-STAT. En definitiva, nuestros resultados indican un nuevo mecanismo por el cual los derivados de hispanolona ejercen sus efectos anti-inflamatorios actuando como
reguladores negativos de la va JAK-STAT. As, la inhibicin de la
activacin de la microglia por parte de los derivados de hispanolona puede constituir una nueva estrategia teraputica para
numerosas enfermedades neuroinflamatorias. Este trabajo se
ha llevado a cabo gracias a las ayudas del FIS PI08/0070 y eI
ISCIII MPY1410/09 para S.H. y del FIS PI09/0218 y dele ISCIII
MPY1415/09 para E.C.
O.15.Efectos neuroprotectores de la combinacin
de fitocannabinoides del Sativex en modelos experimentales de la enfermedad de
Huntington.
Sara Valdeolivas1,2,3, Valentina Satta1,4, M. Ruth Pazos1,2, Javier
Fernndez-Ruiz1,2,3 y Onintza Sagredo1,2,3. 1. Departamento
de Bioqumica y Biologa Molecular, Instituto Universitario de
Investigacin en Neuroqumica, Universidad Complutense,
Madrid, Espaa; 2. Centro de Investigacin Biomdica en Red
sobre Enfermedades Neurodegenerativas (CIBERNED); 3. Instituto Ramn y Cajal de Investigacin Sanitaria (IRYCIS); 4.
Department of Neuroscience, University of Cagliari, Cagliari
(Italia).
La manipulacin farmacolgica del sistema cannabinoide
puede servir como estrategia neuroprotectora en diferentes
trastornos neurodegenerativos, entre los cuales se encuentra
la enfermedad de Huntington, una patologa hereditaria de
transmisin autosmica dominante causada por la expansin
del triplete CAG localizado en el exn 1 del gen IT15 que codifica la protena huntingtina. La enfermedad se caracteriza por
la degeneracin progresiva de las neuronas GABArgicas de
proyeccin estriatal y tambin de diferentes subpoblaciones
de neuronas piramidales de la corteza cerebral, las cuales son
altamente susceptibles a la toxicidad causada por la huntingtina mutada. Mltiples evidencias han demostrado que entre
los diferentes mecanismos citotxicos implicados en esta enfermedad se encontraran el estrs oxidativo, la excitotoxicidad
y la inflamacin. Para estudiar estos mecanismos y el potencial de los cannabinoides frente a ellos, hemos trabajado con
distintos modelos experimentales de la enfermedad de Huntington, generados tanto en ratas como en ratones, utilizando
neurotoxinas tales como el malonato, el 3-nitropropionato o el
quinolinato. Hemos observado que la administracin de Sativex, una mezcla de extractos botnicos ricos en 9-THC y CBD
combinados en proporcin 1:1, redujo el dficit de GABA que
se produce en el estriado en el modelo de 3-nitropropionato
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de Madrid. 2. Instituto Tefilo Hernando, Fundacin de Investigaciones Biomdicas, Hospital Universitario de la Princesa.
Madrid.
En el Instituto Tefilo Hernando (ITH) nos hemos embarcado
en la bsqueda de potenciales frmacos que prolongue la supervivencia de neuronas vulnerables en enfermedades neurodegenerativas e ictus. La alteracin de los movimientos de
Ca2+ en la neurona en general, y en la mitocondria en particular, desencadena la apoptosis y la muerte de estas neuronas.
Recientemente, hemos descubierto que el compuesto CGP
37157, una benzotiazepina que bloquea inespecficamente el
intercambiador Na+/Ca2+ mitocondrial (INCm), protege clulas
cromafines y neuronas de hipocampo de rata frente a un estmulo de estrs por sobrecarga de Na+ y Ca2+(Nicolau y col,
2009 y 2010) . Estos datos sugieren que el INCm podra convertirse en una nueva diana para el desarrollo de frmacos neuroprotectores, mitigando la excesiva circulacin neuronal y mitocondrial del Ca2+. Para ello hemos emprendido un proyecto de
investigacin para sintetizar nuevos derivados del CGP 37157,
con estructura general como la que se muestra en la Figura 1.
R2
Cl
Cl
S
R1
N
H
Me
Cl
S
N
H
FIGURA 2. TH505
Presentamos aqu el perfil farmacolgico inicial de uno de estos derivados, al que denominamos ITH505, cuya estructura
qumica aparece representada en la Figura 2. El ITH505 produjo
una proteccin significativa cuando se ensay en un modelo
de estrs oxidativo sobre clulas de neuroblastoma humano
SH-SY5Y, sometidas al cctel txico de rotenona 30 mM y oligomicina A 10 mM, a las concentraciones de 0.3, 1 y 3 mM. Adicionalmente, mostr perfil neuroprotector en un modelo de
rodajas de hipocampo de rata sometidas tanto a la incubacin
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poco se conoce del papel de otros neurotransmisores, en especial de la serotonina. El objetivo de nuestro trabajo consisti en
estudiar el papel de la transmisin serotonrgica en la epileptognesis inducida por PTZ. Para ello, se administr de forma
subcrnica fluoxetina (FLX), frmaco inhibidor del transportador de serotonina. Se evalu la eventual modulacin que dicho frmaco ejerce sobre los efectos comportamentales, electrofisiolgicos, metablicos y neuroqumicos inducidos por la
administracin repetida de PTZ. Se emplearon ratas macho
Sprague-Dawley de 250 g. El paradigma empleado consisti
en la administracin diaria durante 16 das de FLX (10 mg/Kg
i.p.), perodo durante el que se administr PTZ (40 mg/Kg i.p.) 6
veces, evalundose el comportamiento (escala modificada de
Racine) durante 20 minutos despus de la inyeccin del PTZ,
adems de obtener el registro electrofisiolgico en hipocampo. Tres das despus de la ltima administracin, se midi la
actividad metablica cerebral in vivo mediante tomografa por
emisin de positrones (PET), determinndose la captacin de
fluordesoxiglucosa (FDG) en distintas reas cerebrales. Finalizado los estudios in vivo, los animales fueron sacrificados y los cerebros extrados para la realizacin de estudios histolgicos y
autorradiogrficos. En nuestras condiciones experimentales, la
FLX fue capaz de modular la actividad convulsivante inducida
por la administracin PTZ, reduciendo la severidad de las crisis
as como la actividad epileptiforme en el registro. Adems, el
tratamiento con FLX disminuy significativamente la actividad
metablica, medida mediante el SUV (standard uptake value)
en diversas reas cerebrales.La FLX al contrarrestar diversos
efectos inducidos por PTZ, revela un posible papel protector
de la transmisin serotonrgica en la epileptognesis.
Sesin Oral V - Diabetes/obesidad
O.22.Papel de la AMPK en la regulacin de la funcin vascular en ratas sensibles y ratas resistentes al desarrollo de obesidad.
Danila Del Rio2, Concha F. Garca-Prieto1, Marisol FernndezAlfonso2, Beatriz Somoza1, Mariano Ruiz-Gayo1. 1Departamento de Ciencias Farmacuticas y de la Alimentacin. Facultad de
Farmacia Universidad San Pablo-CEU. 2Instituto Pluridisciplinar
y Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid.
La quinasa dependiente de AMP (AMPK) se expresa a nivel arterial tanto en clulas endoteliales como en clulas musculares.
Tiene un papel protector de la funcin vascular a travs de la
estimulacin de la formacin de xido ntrico. El objetivo principal de este trabajo es determinar si la funcin de la AMPK vascular se ve alterada durante el desarrollo de obesidad. Para ello
se han utilizado ratas macho de la cepa Sprague Dawley de12
semanas de edad, que se dividieron en dos grupos alimentados
con una dieta control (n=5) que aporta un 10% de Kcal a partir
de grasa animal y con una dieta grasa (n=10), que aporta un
45% de Kcal a partir de grasa animal (D12451; Research Diets,
EEUU), durante 8 semanas. Tras la primera semana de dieta, las
ratas sometidas a la dieta grasa se subdividieron en dos grupos
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1 nM), un agonista de receptores b-adrenrgicos sobre la corriente transitoria de salida (Ito), los componentes ultrarrpido
(IKur) y lento (IKs) de la corriente rectificadora tarda, y sobre la
corriente con rectificacin interna (IK1). Las corrientes se registraron utilizando la tcnica de patch-clamp en miocitos disociados enzimticamente a partir de muestras de las orejuelas de
las aurculas derecha (AD) e izquierda (AI) de pacientes en ritmo
sinusal (RS) y con FAC sometidos a ciruga cardiaca. En miocitos
de pacientes en RS, el Iso apenas inhiba la Ito (14.73.3% a
+30 mV). La inhibicin de la Ito producida por Iso en miocitos
procedentes de pacientes con FAC aumentaba significativamente alcanzando un 28.72.6% en la AD y un 41.16.4% en
la AI (P<0.05 vs AD). El Iso no modificaba la IKur en los miocitos
procedentes de pacientes en RS y con FAC. En miocitos de pacientes en RS la amplitud de la IKs era muy pequea (25.04.5
pA a +30 mV) y el Iso la aumentaba en un 36.06.5% a +30 mV.
Tal y como habamos demostrado previamente, la amplitud
de la IKs aumentaba marcadamente en miocitos de pacientes
con FAC (59.78.3 pA a +30 mV, P<0.05) y en estos miocitos
el Iso aumentaba la amplitud de la IKs significativamente ms
en los procedentes de la AI (87.86.8%) que en los de la AD
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