POLISSACARDEOS DE RESERVA DE PAREDE CELULAR EM SEMENTES.

ESTRUTURA, METABOLISMO, FUNES E ASPECTOS ECOLGICOS1

MARCOS S. BUCKERIDGE2*, MARCO A. S. TIN3, HENRIQUE P. DOS SANTOS4 E DENIS U. DE LIMA4
Seo de Fisiologia e Bioqumica de Plantas, Instituto de Botnica de So Paulo, So Paulo, SP

RESUMO - Entre os principais polissacardeos de reserva em plantas esto o amido, os frutanos e os polissacardeos de reserva de parede celular. Estes ltimos ocorrem principalmente em sementes e podem ser classificados de acordo com suas estruturas qumicas em mananos, xiloglucanos e galactanos. Apesar das diferenas marcantes nas estruturas qumicas, os polmeros dos trs grupos apresentam propriedades fsico-qumicas semelhantes. Eles possuem em comum a funo de reserva, uma vez que so completamente degradados aps a germinao da semente e seus produtos so utilizados como fontes de carbono e energia para o crescimento inicial das plntulas. Por outro lado, cada um deles apresenta funes secundrias tais como o controle da embebio e distribuio de gua nos tecidos das sementes e o controle da expanso celular dos cotildones. Na presente reviso, apresentamos uma atualizao sobre as estruturas qumicas, ocorrncia e metabolismo desses polissacardeos em sementes. So discutidos alguns pontos de controle de sua deposio e mobilizao, bem como suas funes biolgicas e papis ecolgicos. Estes aspectos so abordados com nfase nos possveis mecanismos evolutivos que levaram s alteraes nas relaes estrutura-funo nas paredes celulares primrias de plantas superiores e ao surgimento das paredes de reserva. TERMOS ADICIONAIS PARA INDEXAO: Parede celular, polissacardeos, reserva, sementes, galactomanano, xiloglucano, galactano, evoluo

ABSTRACT - Among the main plant storage polysaccharides are starch, fructans and the cell wall storage polysaccharides (CWSP). The CWSP occur mainly in seeds and can be classified as mannans, xyloglucans and galactans. In spite of marked differences in chemical structure, these polymers present similar physico-chemical properties. They have in common their storage function, since they are completely degraded after germination and their products are used as a source of carbon and energy for the growing plantlet. On the other hand, each one of them presents secondary functions such as the control of imbibition and distribution of water among different seed tissues or the control of cell
1. Palestra proferida no VII Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal, Braslia, julho de 1999; atividades relacionadas ao processo FAPESP 97/05124-8, Programa BIOTA-FAPESP 2. Pesquisador Cientfico V, Instituto de Botnica de So Paulo, Seo de Fisiologia e Bioqumica de Plantas, Caixa Postal 4005, CEP 01061-970, So Paulo SP, Brasil, e-mail mbuckeridge@smtp-gw.ibot.sp..gov.br * autor para correspondncia 3. Doutorando UNICAMP, Depto de Biologia Celular 4. Doutorando UNICAMP, Depto de Biologia Vegetal

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expansion in the cotyledon. In the present review, we update the chemical structure, occurrence and metabolism of these polymers in seeds. Some of the control points in the deposition and mobilisation of these polysaccharides in seeds are discussed, as well as their biological and ecological functions. Emphasis is given to the possible evolutionary mechanisms that led to the changes in the structurefunction relationship in the primary cell walls of higher plants, which culminated in the storage cell walls. ADDITIONAL INDEX TERMS: Cell wall, polysaccharide, storage, seed, galactomannan, xyloglucan, galactan, evolution INTRODUO As Angiospermas apresentam diferentes estratgias de adaptao aos seus respectivos ambientes, entre as quais encontra-se o acmulo de certos compostos de reserva em suas sementes. Estas substncias so mobilizadas aps a germinao, durante o desenvolvimento das plntulas, e seus produtos de degradao so usados para diferentes propsitos, tais como a gerao de energia e a produo de matria prima (protenas, cidos nuclicos, carboidratos e lipdeos) para a construo de novos tecidos e clulas (Mayer e Poljakoff-Mayber,1975). Dentre as principais substncias armazenadas pelas plantas, muitos polmeros de carboidratos foram selecionados durante a evoluo. Como compostos de reserva, o amido e os frutanos possuem as vantagens de serem formados por glucose [Neste trabalho, a nomenclatura dos carboidratos (principalmente polissacardeos) ser utilizada de forma a facilitar a compreenso e agilizar a distino entre compostos similares. Ao invs de glicose, ser utilizado o termo glucose. Isto visa distinguir termos como glicosdeos (um aglicon ligado a um acar qualquer) de glucosdeos (um aglicon, ligado a uma molcula de glucose). Esta designao permite utilizar o termo geral glicano(s) para polissacardeos compostos de qualquer mistura de monossacardeos, ao contrrio do termo glucanos, que ser usado para designar polissacardeos compostos inteira ou predominantemente por molculas de glucose, tais como a celulose, amido, glucanos de ligao mista ou xiloglucanos] e frutose, respectivamente. Esses acares so prontamente utilizados pelo metabolismo de gerao de energia e tambm fornecem carbono para a biossntese da maioria das biomolculas presentes em clulas vegetais. O amido particularmente bem adaptado funo de reserva, sendo mobilizado por hidrlise ou por mecanismos que envolvem a fosforilao direta de resduos de glucose terminais (Bewley e Black, 1994). Este mecanismo parece ser exclusivo do amido e, at o momento, no foi possvel demonstrar a presena de um mecanismo de fosforilao para outros tipos de polissacardeos de reserva, tais como os frutanos e os polissacardeos de parede celular (compare Somme, 1970, com Reid, 1971). De fato, um mecanismo de mobilizao de polmeros de parede celular por fosforilao teria que envolver a secreo de fosfato ou compostos fosforilados e posteriormente a absoro de produtos tambm fosforilados. Nesse caso, os mecanismos de transporte de tais compostos seriam energeticamente caros e provavelmente teriam sido inviveis do ponto de vista evolutivo. Cada um dos principais polissacardeos de reserva (da parede celular, frutanos e amido) apresenta caractersticas que fazem com que eles sejam mais convenientes para o metabolismo celular em certas situaes. Uma dessas caractersticas o fato de que nenhum deles possui radicais livres. Esta uma vantagem quando comparada ao acmulo de monossacardeos, uma vez que a presena de tais compostos poderia levar glicosilao inespecfica de elementos celulares. Outra vantagem a relativa inatividade osmtica dos polmeros. Uma vez que o amido insolvel e

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Polissacardeos de reserva de parede ... altamente compactado em organelas celulares especficas (os amiloplastos), este menos ativo osmoticamente do que os frutanos, por exemplo. Por outro lado, os estados de baixa compactao e alta solubilidade dos frutanos esto possivelmente relacionados com uma segunda funo desses compostos: controlar o potencial osmtico das clulas (Bieleski, 1993). Os polissacardeos de reserva de parede celular (PRPC) so relativamente inertes no que concerne sua reatividade qumica e apresentam diferentes graus de solubilidade em gua. Essas caractersticas conferem vantagens que so similares s do amido (alta compactao e baixa reatividade) e tornam possvel a existncia de um compartimento celular (a parede celular) que permite o fluxo de gua com um grau de liberdade considervel, como acontece com os frutanos nos vacolos. Por outro lado, o custo para produzir tais polmeros alto, pois tais compostos necessitam de um complexo sistema de biossntese, secreo e montagem no meio extracelular. Uma comparao pode ser feita com os frutanos, que so

139 rapidamente sintetizados por um mecanismo de transglicosilao atravs da transferncia de unidades de frutose provenientes de sacarose, sem o envolvimento de nucleotdeo acares. A biossntese dos polissacardeos de parede celular requer nucleotdeo-acares como doadores de monossacardeos. Na tabela 1 esto relacionados alguns dos polissacardeos de parede celular e seus respectivos nucleotdeo-acares doadores. As enzimas de biossntese so traduzidas, montadas no retculo endoplasmtico e transportadas para o complexo de Golgi, onde a maioria das reaes de biossntese ocorre. Ao fim do processo de biossntese e incio da produo das vesculas secretoras, os resduos de fucose e metila so adicionados aos xiloglucanos e pectinas, respectivamente. Os polissacardeos so secretados para o espao intercelular onde ocorrer a montagem da parede celular atravs da orientao das microfibrilas de celulose e constituio dos diferentes domnios polissacardicos da parede. Como esta montagem ocorre ainda um mistrio, mas h indcios de que protenas similares

TABELA 1 - Nucleotdeos acares doadores de monossacardeos para biossntese de polmeros de parede celular. Polissacardeos Celulose Calose Glucanos de Cadeia Mista Xiloglucano Galactomanano Glucoronoarabinoxilanos Ramnogalacturonano UDP-glucose UDP-glucose UDP-glucose UDP-glucose, UDP-galactose, UDP-xilose, GDP-fucose GDP-manose, UDP-galactose UDP-arabinose, UDP-xilose, UDP-cido galacturnico GDP-ramnose, UDP-cido galacturnico Nucleotdeos-acares

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140 vitronectina e miosina possam estar envolvidas no processo. Apesar de todo o conhecimento adquirido sobre os processos de biossntese de polissacardeos da matriz extracelular vegetal, nenhuma das sintetases foi isolada de tecido vegetal at o presente. O principal problema que estas enzimas esto associadas s membranas celulares e as tentativas de solubilizao destas resultam em rpida perda de atividade, mesmo quando detergentes so adicionados aos extratos enzimticos para proteger os domnios hidrofbicos das protenas enzimticas. A tabela 2 resume as principais caractersticas dos trs grupos mais importantes de polissacardeos de reserva de plantas. Estas caractersticas evidenciam diferentes funes desses polmeros, considerando como eles so sintetizados, como eles so degradados e seus locais de deposio na clula e na planta. Enquanto o amido desempenha a funo exclusiva de reserva, os frutanos e os polissacardeos de reserva de parede celular tm outras funes paralelas. Os frutanos participam no controle osmtico e os PRPC esto associados dureza (mananos em endospermas de sementes de palmeiras, tomate e alface), relaes hdricas (xiloglucanos em cotildones e galactomananos em endospermas de sementes de leguminosas) e no controle da expanso celular (galactanos nos cotildones de lupino e, em menor proporo, em sementes de feijo e soja). Buckeridge e Reid (1996) e Buckeridge et al. (2000) propuseram que estas funes secundrias seriam importantes no mecanismo evolutivo que levou as plantas a utilizarem polissacardeos da parede celular como reserva de carbono. Estas funes secundrias seriam relevantes em processos fisiolgicos como amadurecimento de frutos, crescimento, desenvolvimento e senescncia (veja Rose e Bennett, 1999 para uma reviso).

Buckeridge et al. Esta reviso objetiva a atualizao das principais descobertas relacionadas ocorrncia, metabolismo e significado eco-fisiolgico dos polissacardeos de reserva de parede celular. Em especial, sero discutidos aspectos relacionados aos pontos de controle da degradao e os fatores evolutivos que agregaram valor adaptativo aos PRPC e conduziram sua seleo como compostos de reserva para o crescimento inicial de plntulas de leguminosas tropicais. POLISSACARDEOS DE RESERVA DE PAREDE CELULAR (PRPC) Os PRPC so classificados em trs grupos distintos: os mananos, os xiloglucanos e os (arabino)galactanos. Esta classificao baseada essencialmente na estrutura qumica desses polmeros, sendo os mananos subdivididos em mananos puros, glucomananos e galactomananos (Tabela 3). Os modelos mais recentes de parede celular (Carpita e Gibeaut, 1993; McCann e Roberts, 1991) propem que esta seja formada de trs domnios independentes (celulosehemicelulose, pectinas e protenas). Nestes modelos os trs domnios formam um compsito com caractersticas semelhantes a um cristal lquido (Roland et al., 1992). Nas figuras 1A e 1B esto representados um modelo da parede celular. Neste modelo, a parede vista em corte transversal como um compsito de polmeros em que as microfibrilas de celulose so envolvidas por hemiceluloses e a rede se interliga por polmeros de hemicelulose. Este domnio est imerso em uma matriz de polmeros pcticos, a qual cimenta todo o sistema. Os PRPC podem ser vistos como variaes desse modelo, em que um domnio, ou um de seus polissacardeos, tenha sido depositado em maior quantidade em relao aos demais. Os arabinogalactanos so depsitos de

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Polissacardeos de reserva de parede ... TABELA 2 - Caractersticas dos principais polissacardeos de reserva em plantas. Composto de reserva Amido Biossntese A partir de ADP-glucose Mobilizao Hidrlise e fosforilao Localizao celular Plastdeos e grnulos no citosol

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Localizao na planta Sementes, caule, folhas, frutos e rgos subterrneos Folhas, razes, caules e rgos subterrneos Sementes e rgos subterrneos

Frutanos

A partir de sacarose por transglicosilao

Hidrlise

Vacolos

Polissacardeos de A partir de UDP/GDPHidrlise e parede celular acares no complexo transglicosilao de Golgi

Parede celular

polmeros derivados das pectinas enquanto os mananos e xiloglucanos so depsitos de polmeros de hemicelulose (Figuras 1C e 1D, respectivamente). Como ser discutido em seguida, em muitos casos o processo de deposio dos PRPC parece ser derivado do metabolismo de biossntese da parede celular primria (Figura 1). Com base nisso, possvel propor que eles tenham surgido ou por diminuio na sntese de celulose ou por sntese de hemiceluloses em maior intensidade do que os polissacardeos dos demais domnios. Ainda no est claro se a celulose permanece nos depsitos de reserva da parede celular, mas h fortes indcios de que isso ocorra, pois em alguns casos j foi observado que materiais fibrosos tornaram-se aparentes aps a mobilizao do polmero de reserva. certo, no entanto, que a proporo de celulose muito pequena e isso pode facilitar o processo de mobilizao, o qual seria consideravelmente mais complexo se propores normais de celulose estivessem presentes.

OCORRNCIA, ESTRUTURA E METABOLISMO DOS PRPC Mananos - Os mananos puros so artificialmente definidos como contendo mais de 90% de manose formando uma cadeia linear do tipo -14 sem ramificaes, podendo ou no o restante estar ramificado com galactose (Figura 2B). Abaixo de 10% de ramificao, os mananos tornam-se insolveis e precipitam rapidamente em soluo aquosa (Dea et al.,1986). Assim, os mananos so estruturalmente relacionados aos galactomananos, apenas apresentando um grau menor de ramificao com galactose. Os mananos, portanto, apresentam alto grau de interatividade intermolecular, formando cristais na parede celular, o que confere dureza e diminui sua solubilidade. Os mananos so encontrados em endospermas de sementes de espcies de monocotiledneas (por exemplo, Phoenix dactylifera e Phytelephas macrocarpa) e dicotiledneas (Coffea arabica) (Reid, 1985).

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TABELA 3 - Algumas das caractersticas dos principais polissacardeos de reserva de parede celular e sua ocorrncia.
Resduo de acar na cadeia principal Resduo de acares nas ramificaes Nucleotdeo acar necessrio para a biossntese Enzimas hidrolticas envolvidas na mobilizao

Polissacardeo

Localizao na planta e exemplo

Manano

Manose

Ocasionalment e galactose

GDP-man, UDP-gal Endo--mananase

Sementes (Palmae, caf, gergelim)

GDP-man, Glucomanano Manose e glucose Ocasionalment e galactose UDP-glc, UDP-gal

Endo--mananase Endo--glucanase -galactosidase

Sementes (alface, tomate), e rgos subterrneos (Liliaceae)

Endo--mananase GDP-man, Galactomanano Manose Galactose UDP-gal -galactosidase exo--mananase Sementes (Leguminosae, Convolvulaceae, Annonaceae)

XET, UDP-glc, Xiloglucano Glucose Xilose, galactose, fucose, arabinose UDP-xil, UDP-gal, UDP-fuc -galactosidase, -xilosidase, -glucosidase, -fucosidase Sementes (Leguminosae, Tropaeolaceae, Myrcinaceae)

UDP-gal, (Arabino)galactano Galactose Arabinose UDP-ara

Exo-galactanase, -arabinosidase

Sementes (Leguminosae, caf)

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A
Ligao cruzada entre as microfibrilas microfibrila de celulose

Domnio de pectinas

Lamela mdia

Parede celular

Membrana plasmtica

hemicelulose fortemente ligada celulose

hemiceluloses fracamente ligadas celulose

Parede primria

Parede de reserva com pectinas

Parede primria

Parede de reserva com hemicelulose

FIGURA 1 - Representao esquemtica da parede celular primria (A) em corte transversal. As microfibrilas de celulose esto cobertas por hemicelulose (xiloglucanos, arabinoxilanos ou mananos) que podem estar forte ou fracamente ligadas celulose (ver B). O domnio celulose-hemicelulose est embebido em um domnio pctico (A). Em C est representada a parede de reserva em que o polmero acumulado derivado das pectinas (arabinogalactanos em sementes de lupino e de caf). Nesse caso, possvel que ainda existam algumas microfibrilas e hemiceluloses embebidas por grande quantidade de polissacardeos pcticos. Em D esto representadas as paredes cujo polmero de reserva o galactomanano ou o xiloglucano. Estas representaes assumem que as amplificaes de hemiceluloses ou pectinas ainda possuem algumas microfibrilas juntamente com pequenas quantidades de outros polissacardeos tpicos da parede celular. Isto baseia-se em anlises qumicas dos polissacardeos extrados e tambm em algumas observaes citoqumicas ao microscpio tico e ao microscpio eletrnico utilizando complexos enzima-ouro coloidal como sondas. Este modelo foi baseado no desenho apresentado por Cosgrove (1999). O domnio protico, que normalmente representa menos do que 10% da parede celular, foi omitido.

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OH

Buckeridge et al.

A
HO HO OH Galactose OH O OH Epimerizao HO HO OH Glucose OH O OH

HO HO Epimerizao

O OH OH Manose

Descarboxilao

HO HO OH

O OH Xilose

B
HO HO OH HO HO O O OH HO O OH O OH OH O HO OH O HO O O OH HO O OH O OH O HO OH O OH HO O OH HO O HO OH HO OH O

Manose
OH OH O O O HO O OH HO O OH OH O OH

Galactose

C
HO HO OH O HO HO O O OH O OH HO O O O OH O O O HO OH OH OH O O O HO HO OH OH HO O O O HO HO HO OH O

HO HO O O OH OH HO HO O O OH HO O O O HO O

O O

HO

HO OH OH HO O OH OH O

O OH O

O OH O OH

Glucose Xilose

HO HO

HO HO

Galactose
HO HO

D
HO HO OH OH O O OH OH HO O HO OH O OH O O OH OH HO O HO OH O OH O O OH OH HO O HO OH O OH O O OH OH HO O OH

Galactose

FIGURA 2 Estruturas qumicas dos principais polissacardeos de reserva de parede celular que ocorrem em sementes e os monossacardeos que os constituem (A). As setas em (A) indicam as posies dos carbonos que sofreram alteraes (epimerizao ou descarboxilao) a partir da glucose, dando origem aos outros monossacardeos. Os PRPC so classificados como (B) (galacto)mananos, (C) xiloglucanos e (D) galactanos. Em (B) o polissacardeo denominado galactomanano quando a ramificao com resduos de galactose for superior a 10%, do contrrio, denomina-se manano puro. Os xiloglucanos em (C) apresentam variaes apenas no grau de galactosilao, enquanto que a proporo glucose/xilose fixa no polmero. A estrutura dos galactanos apresentada em (D) esquematiza o tipo de galactano mais freqente, que composto por ligaes -(14) com ramificaes de L-arabinofuranose a cada 16-21 resduos da cadeia principal (no mostradas). O segundo tipo de galactano formado por ligaes -(13),(16).

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Polissacardeos de reserva de parede ... A germinao de sementes de Phoenix dactylifera foi estudada por Sachs (1862) e, mais tarde, por Keusch (1968). Nestas sementes, um pequeno embrio de forma cnica se desenvolve lentamente. Seus cotildones so transformados em haustrios, os quais absorvem os produtos de degradao das reservas do endosperma durante a germinao. Nessas sementes, uma endo-mananase e uma -manosidase foram detectadas na zona de dissoluo prxima ao haustrio. Foi proposto (Keusch, 1968) que as enzimas so produzidas no endosperma, mas suas clulas necessitam de um sinal proveniente do haustrio. Os mananos aparentemente tm outras funes alm da de reserva. Eles conferem grande dureza s sementes que os acumulam e isso pode ser associado com um sistema de proteo do embrio contra danos mecnicos. Mananos como compostos de reserva j foram detectados em sementes de espcies como pimenta (Watkins et al., 1985), aipo (Jacobsen e Pressmann, 1979), tomate (Groot et al., 1988), alface (Halmer e Bewley, 1979) e caf (Wolfron et al., 1961), sendo que em todas elas j foi observada a presena de atividade de endo-mananase. Estas espcies apresentam endospermas mais finos em relao s palmeiras e sua presena tem sido correlacionada com a restrio mecnica para a protruso da radcula. Na maioria dos casos, a degradao do manano pode ser induzida por cido giberlico, que promove a germinao, e em alguns casos inibida por cido abscsico. Recentemente, Bewley et al. (1997) clonaram o gene que codifica para uma endo-mananase de sementes de tomate. Estes autores encontraram baixa homologia com mananases de fungos (28-30%) e observaram que sua expresso exclusiva do endosperma, sendo ausente em outras partes da planta. A posse de tal seqncia gnica ser provavelmente uma ferramenta valiosa para estudar o controle da produo da endo-mananase e, mais especificamente, compreender como a giberelina e o cido abscsico afetam o catabolismo dos mananos.

145 Uma demonstrao direta de que os mananos esto relacionados com a dureza do endosperma foi obtida atravs da observao de que os mananos presentes na regio endosprmica prxima extremidade da raiz de tomate exercem papel crucial na protruso da radcula (Groot e Karssen, 1987; Groot et al., 1988). Esses autores demonstraram que o amolecimento do endosperma, induzido pela adio de giberelina, facilitou a germinao. Posteriormente, Groot e Karssen (1992) apresentaram evidncias de que o efeito promovido pela giberelina podia ser revertido por cido abscsico. Paralelamente, outros autores afirmam que os mananos presentes em endosperma de sementes de tomate (Toorop et al., 1996) e de caf (Takaki e Dietrich, 1980; Giorgini e Comoli, 1996) so completamente degradados aps a germinao, sendo, portanto, correto consider-los como compostos de reserva. As observaes acima sobre os mananos de mono e dicotiledneas (exceto leguminosas) sugerem que este polmero seja uma molcula bifuncional. O manano, nesse caso, exerceria as funes de constritor e protetor mecnico do embrio e tambm de polissacardeo de reserva. Galactomananos - Os primeiros estudos com espcies que armazenam galactomananos em suas sementes foram realizados por Nadelmann em 1890, incluindo uma espcie tropical, Schizolobium sp. Estes polissacardeos so compostos por uma cadeia linear de resduos de manose unidas por ligaes glicosdicas -(14), qual resduos de galactose esto unidos por ligaes do tipo -(16) (Figura 2B). Os galactomananos ocorrem tipicamente em endosperma de sementes de leguminosas (Figuras 3A e 3B), mas eles tambm esto presentes em sementes de espcies de outras famlias como Compositae e Convolvulaceae (Dea e Morrison, 1975; Guzmn e Hernandez, 1982).

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146 Sendo uma das maiores famlias no reino vegetal, Leguminosae (18.000 espcies) tem o maior nmero de espcies estudadas at hoje quanto presena de galactomananos. A razo manose:galactose e a distribuio dos resduos de galactose ao longo da cadeia de manose variam de espcie para espcie, sendo importante para estudos quimiotaxonmicos e evolutivos (Reid e Meier, 1970; Buckeridge e Dietrich, 1990; Buckeridge et al., 1995b). As trs subfamlias de Leguminosae (Caesalpinioideae, Mimosoideae e Faboideae) podem ser distinguidas utilizando-se este parmetro. Embora um grande nmero de espcies tenha sido relatado como acumuladoras de galactomanano em suas sementes (Dea e Morrison, 1975; Ganter et al.,1993; Buckeridge et al., 1995b; Anulov et al., 1998), apenas algumas delas tiveram seu metabolismo ps-germinativo estudado em detalhe. Entre as leguminosas, as espcies mais estudadas so Cyamopsis tetragonolobus (que produz a goma guar), Trigonella foenum-graecum e Ceratonia siliqua (que produz a goma caroba). Nas sementes de T. foenum-graecum e C. tetragonolobus as clulas endosprmicas no so vivas, sendo que, durante a maturao, o citoplasma reduzido em funo da deposio macia do galactomanano nas paredes celulares (McClendon et al., 1976; Reid, 1971). Estas sementes apresentam uma camada de aleurona (Figuras 3A e 3B), a qual acredita-se ser responsvel pela produo das enzimas hidrolticas que promovem a degradao dos polissacardeos de reserva da parede celular durante a germinao (Reid, 1985). Por outro lado, em sementes de Ceratonia siliqua, as clulas endosprmicas so vivas e o galactomanano pode ser visto como um espessamento da parede. Neste caso, no h uma distino clara entre o endosperma e a camada de aleurona, e as enzimas so, provavelmente, produzidas e liberadas dentro da parede celular pelas prprias clulas endosprmicas.

Buckeridge et al. A mobilizao de galactomananos foi estudada em outras espcies de leguminosas (Reid e Meier, 1972; McCleary e Matheson, 1976; Buckeridge et al., 1995a; Buckeridge e Dietrich, 1996), sendo detectada a presena de trs enzimas hidrolticas (-galactosidase, endo--mananase e -manosidase), confirmando que a mobilizao do galactomanano ocorre atravs da hidrlise. Em todos os casos estudados, o polissacardeo desmontado at seus monossacardeos constituintes (manose e galactose) ao mesmo tempo em que h produo de sacarose (Buckeridge et al., 2000). Aparentemente, a sacarose o acar de transporte que levar os produtos da mobilizao da reserva at o embrio em crescimento. Paralelamente degradao de galactomanano no endosperma, o amido produzido transitoriamente nos cotildones (Reid, 1971; Buckeridge e Dietrich, 1996) e, recentemente, Dirk et al. (1999) propuseram que a degradao de reservas de parede celular e a sntese de amido poderiam estar bioquimicamente relacionadas. McCleary e colaboradores (McCleary, 1983; McCleary e Matheson, 1976) realizaram estudos sobre o destino dos produtos da mobilizao do galactomanano de C. tetragonolobus. Eles detectaram, no endosperma, atividade das enzimas fosfomanoisomerase e fosfoglucoisomerase e sugeriram que estas enzimas so, provavelmente, responsveis pela epimerizao da manose em glucose, a qual seria usada na sntese de sacarose no endosperma. Estes autores forneceram manose e galactose marcadas radioativamente a embries de C. tetragonolobus em crescimento e demonstraram que os produtos da mobilizao do galactomanano so usados em vrios processos bioqumicos durante o crescimento da plntula. Em todas as espcies de leguminosas estudadas, a mobilizao do galactomanano iniciase aps a germinao (protruso da radcula). Foi demonstrado que em endospermas de sementes de Trigonella foenum-graecum e Ceratonia siliqua, as enzimas endo--mananase para a primeira espcie

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Polissacardeos de reserva de parede ...

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FIGURA 3 Cortes transversais de tecidos de reserva em sementes. (A, B) Sesbania marginata, que acumula galactomanano em paredes celulares do endosperma (End); (B) detalhe do endosperma no qual possvel observar a camada de aleurona (Al) e as espessas paredes com galactomanano (Gm). (C, D) Hymenaea courbaril, que acumula xiloglucano (Xg) em paredes celulares dos cotildones; (C), semente quiescente; (D), semente 60 dias aps o incio da embebio, mostrando a reduo das paredes pela mobilizao do Xg e a formao de amido transitrio (Am) no citoplasma. (E, F) Lupinus angustifolius, que acumula galactanos (Gl) em cotildones de sementes; (E), antes, e (F) aps o perodo de mobilizao. Cp, corpos proticos situados nos citoplasmas celulares. A barra na figura A corresponde a 100 m e as barras das figuras B, C, D, E e F correspondem a 40 m.

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148 e -galactosidase para ambas as espcies so sintetizadas de novo (Reid e Meier, 1973; Seiler, 1977). Estes fatos levaram sugesto de que a mobilizao seja induzida durante ou depois da germinao por algum fator. Considerando o grande nmero de estudos efetuados com cereais em que o cido giberlico tem sido demonstrado como indutor da degradao das reservas de amido (Bewley e Black, 1994), algumas tentativas foram feitas para verificar a ao desse regulador de crescimento sobre a mobilizao de galactomananos. At o momento, as poucas tentativas de induzir a degradao de galactomananos em Leguminosae utilizando cido giberlico falharam, o que sugere que os sistemas das leguminosas tm um controle metablico diferente quando comparados com as sementes que armazenam mananos. Por outro lado, o cido jasmnico e seu precursor, o cido linolnico, so capazes de inibir a degradao do galactomanano em C. siliqua e T. foenumgraecum (Kontos e Spyropoulos, 1996). O cido abscsico um potente inibidor da degradao do galactomanano em T. foenumgraecum (Reid e Meier, 1973), C. siliqua (Seiler, 1977) e Sesbania marginata (Potomati, 2000). possvel especular que o ABA tenha um papel geral (em leguminosas e no-leguminosas) como um modulador das interaes bioqumicas e fisiolgicas entre o endosperma e o embrio durante a germinao e crescimento inicial da plntula. A presena do ABA inibe a degradao do galactomanano e somente quando o hormnio degradado e metabolizado, a transferncia de carbono e energia entre os rgos pode ser iniciada. Alm do papel de reserva, o galactomanano influencia no fluxo de gua devido a sua maior solubilidade nos primeiros estgios da germinao. Este polissacardeo absorve, proporcionalmente, grande quantidade de gua e a

Buckeridge et al. distribui ao redor do embrio. O endosperma embebido protege o embrio contra perda de gua atravs de um efeito conhecido como tampo de gua, durante perodos de seca ps-embebio (Reid e Bewley, 1979). Outras leguminosas tropicais (Dimorphandra mollis e Sesbania marginata) apresentam um comportamento similar (Buckeridge et al., 1995a; Buckeridge e Dietrich, 1996; Zpevak, 1999). As funes de reserva e embebio parecem estar associadas quase que exclusivamente s leguminosas, ao passo que em espcies no-leguminosas mais evidente a funo de dureza e proteo do embrio. No entanto, possvel que a funo de dureza esteja ainda preservada em leguminosas (sementes de soja, por exemplo, armazenam relativamente pequenas quantidades de galactomanano; veja Dea e Morrison, 1975, para outros exemplos), mas nenhum estudo neste sentido foi realizado. Tais experimentos seriam importantes para a compreenso das funes ecolgicas do galactomanano na germinao das sementes e crescimento da plntula, bem como o mecanismo de seleo desempenhado durante a evoluo, que levou a estes tipos de adaptaes. O grau de ramificao dos mananos define suas relaes estrutura-funo. Quanto menos ramificado, maior a indicao de que a funo biolgica est relacionada com a dureza e proteo do embrio. Isso pode ser visto claramente em Palmae. Por outro lado, quanto maior o grau de ramificao, mais solvel o polissacardeo e maior a participao deste em funes como as relaes hdricas. No entanto, no se sabe ao certo qual dessas funes a primria: reserva, dureza ou relaes hdricas. certo, por outro lado, que os mananos e galactomananos so molculas multifuncionais, desempenhando suas funes durante fases distintas do crescimento e desenvolvimento das

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Polissacardeos de reserva de parede ... plantas. Como isso pode ter ocorrido durante a evoluo ser discutido posteriormente. Xiloglucano - A presena e a mobilizao de xiloglucano durante a germinao foi primeiramente reportada em sementes de Impatiens balsamina, Tropaoelum majus e Cyclamen europaeum (Heinricher, 1888; Reiss, 1889). A distribuio botnica de xiloglucano foi revisada por Kooiman (1960) utilizando a capacidade deste polmero de corar com iodo/iodeto (apresentando uma colorao azul), como uma forma de deteco em sementes de diferentes espcies. Xiloglucanos de sementes apresentam uma cadeia principal de -D-(14)-glucano ramificada com ligaes -(16) por resduos de D-xilopiranosdeos ou -D-galactopiranosdeo(12)-D-xilopiranosdeos (Figura 2C) (White e Rao, 1953). Exceto pela ausncia de terminais fucosil ligados [-L-(12)] nos grupos -Dgalactosdeos, existe uma grande semelhana entre xiloglucanos de reserva (em sementes) e xiloglucanos estruturais de paredes primrias, em tecidos vegetativos de dicotiledneas (Hayashi, 1989). Utilizando uma celulase microbiana, Kooiman (1961) determinou que xiloglucanos de sementes de tamarindo so formados por unidades de um heptassacardeo Glc4:Xil3, com variaes nas substituies dos resduos de galactose. A estrutura dos blocos de oligossacardeos que constituem os xiloglucanos de diferentes fontes, incluindo sementes, foi determinada entre os anos 80 e 90, utilizando hidrlise por celulase microbiana seguida por anlises por metilao, espectrometria de massa e ressonncia magntica nuclear (para uma reviso ver Hayashi, 1989). Foi proposta uma nomenclatura para os blocos estruturais do xiloglucano com base na cadeia principal (Fry et al., 1993). Glucoses no substitudas so denominadas G; glucoses ramificadas com xilose so denominadas X e, se a

149 galactose est ligada xilose, o trissacardeo denominado L . Por exemplo: Gal | Xil | Xil Xil | |

Glc- Glc- Glc- Glc

X G

Um estudo comparativo em xiloglucanos de sementes de Tropaeolum majus, Tamarindus indica e Copaifera langsdorffii, utilizando uma celulase fngica de Trichoderma altamente purificada, apresentou as mesmas quatro unidades estruturais bsicas XXXG, XLXG, XXLG e XLLG nas trs espcies (Buckeridge et al., 1992). As propores entre estas unidades demonstraram a existncia de estruturas finas (distribuio das ramificaes com galactose) especficas entre as diferentes espcies e entre populaes de mesma espcie crescidas em diferentes ambientes. Uma diferena nas ramificaes de xilose foi encontrada recentemente em xiloglucanos de sementes de Hymenaea courbaril (jatob), sendo este polmero formado por uma mistura de unidades de XXXG e XXXXG que podem ser ramificadas com galactose nas diferentes posies (Buckeridge et al.,1997). Apesar das diferenas em estrutura fina, todos os xiloglucanos de sementes examinados apresentam proporo de monossacardeos muito prxima, preservando, desse modo, o total de ramificaes com galactose de forma independente da sua distribuio. Em nosso laboratrio, observamos que xiloglucanos, assim como galactomananos, retardam a entrada da gua em sementes de H. courbaril. Mais experimentos esto

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150 sendo realizados, e se confirmada a hiptese acima, isto pode ser considerado como uma evidncia de que o xiloglucano de sementes tambm poderia apresentar outras funes alm da funo de reserva. A funo reserva dos xiloglucanos em cotildones foi demonstrada de forma circunstancial em sementes de T. majus (Edwards et al., 1985), T. indica (Reis et al., 1987), C. langsdorffii (Buckeridge et al., 1992) e H. courbaril (Tin et al., 2000), nas quais a mobilizao de xiloglucano in vivo foi acompanhada pelo incremento e queda da atividade de quatro hidrolases: -galactosidase, endo--(14)-glucanase (ou XET), -xilosidade e -glucosidase. J foram isoladas as quatro principais enzimas responsveis pela degradao de xiloglucano em T. majus. Elas so: 1) uma endo-(14)-glucanase especfica para xiloglucano ou xiloglucano endo-transglicosilase (XET) (Edwards et al., 1986; Fanutti et al., 1993); 2) uma galactosidase com alta especificidade para xiloglucano (Edwards et al., 1988); 3) uma xilosidase ou oligoxiloglucano exo-xilohidrolase especfica para oligossacardeos de xiloglucanos (Fanutti et al., 1991); e 4) uma -glucosidase (Crombie et al., 1998). Com base nestes resultados e outros estudos sobre o modo de ao da XET (Edwards et al., 1986; Fanutti et al., 1993), Crombie et al. (1998) propuseram um modelo aproximado para a mobilizao de xiloglucano em Tropaeolum majus. Neste modelo, as quatro enzimas atacam o polmero de um modo sincronizado, produzindo galactose, glucose e xilose livres. Em T. majus, XET e -galactosidase so as nicas enzimas capazes de atacar o polmero. Sob baixas concentraes de oligossacardeos de xiloglucano (receptores), a atividade hidroltica da XET predomina (Fanutti et al., 1993). Assim, quando em contato com xiloglucano de alto peso

Buckeridge et al. molecular, esta atividade hidroltica produz oligossacardeos que so prontamente atacados pelas exo-glicosidases (-xilosidase e glucosidase), reduzindo o polmero aos seus monossacardeos constituintes. Reis et al. (1987) descreveram citoquimicamente a digesto do xiloglucano de parede celular de cotildones em Tamarindus indica. Utilizando as tcnicas de marcao com iodo-iodeto de potssio e uma sonda preparada pelo complexo entre -galactosidase de Escherichia coli e ouro coloidal, eles estudaram a mobilizao de xiloglucano em nvel ultraestrutural com grande especificidade. Foi observado a presena de uma parede interna e uma parede externa, que no foram degradadas, tornando-se mais visveis durante o processo de mobilizao. Um material fibroso tambm permaneceu aps a mobilizao, mostrando que nem toda a parede mobilizada. Eles tambm mostraram que durante a degradao do xiloglucano a proporo entre monossacardeos (glucose:xilose:galactose) no se alterou significativamente. Em C. langsdorffii, a mobilizao das espessas paredes celulares dos cotildones foi observada cito, fisio e bioquimicamente por Buckeridge et al. (1992). Em sementes de duas populaes diferentes, originrias de mata atlntica e cerrado, no foram encontradas diferenas significativas na velocidade de mobilizao de xiloglucano entre as duas populaes. No entanto, houve diferenas significativas na estrutura fina dos xiloglucanos. Tais diferenas foram atribudas ao sistema de biossntese do polissacardeo, que poderia ter sido influenciado pelas condies ambientais distintas nos dois biomas. Tin et al. (2000), estudando a mobilizao do xiloglucano de Hymenaea courbaril, verificaram que o polmero foi mobilizado aps a germinao e, ao mesmo tempo, observaram a produo de frutose, glucose e

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Polissacardeos de reserva de parede ... sacarose. As mesmas quatro enzimas encontradas por Reid e colaboradores em T. majus foram detectadas em H. courbaril (Crombie et al., 1998; Fanutti et al., 1993; Fanutti et al., 1991; Edwards et al., 1988; Edwards et al., 1986). Tin et al. (2000) tambm encontraram evidncia para a presena da atividade de transglicosilao (XET) nesta espcie. Como em Copaifera (Alcntara et al., 1999), toda atividade de -galactosidase que pde ser detectada utilizando substrato sinttico teve um pH timo em 3,2, enquanto as demais hidrolases foram ativas em pH 4,5. Os resultados obtidos para as -galactosidases de Copaifera e Hymenaea sugerem que estas enzimas so um importante ponto de controle do metabolismo de xiloglucanos em leguminosas, pois em todos estudos efetuados, nenhuma -galactosidase livre de atividade de endo-glucanase apresentou atividade sobre o polmero, hidrolisando apenas os oligossacardeos. Estes resultados sugerem que o controle da desmontagem do xiloglucano in muro pode ser exercido pelas mudanas no pH da parede, pelo menos em leguminosas, com base na diferena de pH timo das enzimas. O controle da mobilizao de xiloglucano in vivo foi estudado por Hensell et al. (1991). Eles demonstraram que a mobilizao de xiloglucano em cotildones de Tropaeolum majus controlada por auxina. Dados preliminares indicam que isto parece ocorrer tambm para Hymenaea (Santos, Mercier e Buckeridge, dados no publicados). Alm disto, os cotildones tornam-se receptivos ao hormnio somente dentro de um certo perodo de tempo, sendo provvel que a auxina module as relaes entre o crescimento da plntula e a mobilizao das reservas dos cotildones. No tm sido publicados trabalhos sobre o metabolismo dos produtos de degradao do xiloglucano. Evidncias de nosso laboratrio apontam para a existncia de amido transitrio em Hymenaea (Figura 3D) e o transporte, em forma de

151 sacarose, de acares livres derivados da degradao de xiloglucano. Embora nenhuma evidncia direta indique ainda que os xiloglucanos de sementes tenham dupla funo, esta proposio pode ser feita com base no fato de que os xiloglucanos possuem propriedades hidrodinmicas muito semelhantes s encontradas em galactomananos, isto , os xiloglucanos teriam funes no controle da embebio de gua e xeroproteo. interessante observar que, como citado para os galactomananos, as relaes entre estrutura e funo em xiloglucano esto nas mudanas da estrutura fina que so tambm relacionadas com o posicionamento das galactoses na molcula. Galactanos - Em sementes, material contendo galactose foi detectado pela primeira vez em 1892 (Schulze e Steiger, 1892). No entanto, a identificao de um galactano como polissacardeo distinto s foi conseguida em 1947 (Hirst et al. 1947) em sementes de lupino (Lupinus albus). Com base na determinao estrutural, concluiu-se que o polissacardeo era um -(14)-D-galactano (Figura 2D). Em um extensivo estudo de galactanos de quatro espcies de lupino, Al-Kaisey e Wilkie (1992) descobriram que havia dois tipos de galactanos. Um formado por ligaes (13),(16) com algumas ligaes -(14) e o outro, mais freqente, composto por ligaes (14) com ramificaes de L-arabinofuranose a cada 16-21 resduos da cadeia principal. Brillouet e Riochet (1983) encontraram uma correlao positiva entre a razo galactose:arabinose no polissacardeo de parede e a porcentagem de material na parede das clulas da semente. Eles tambm encontraram uma correlao positiva entre a quantidade de material de reserva nas sementes de lupino e a razo ramnose:cido galacturnico. Esta correlao foi atribuda ao aumento nos stios de ligao da ramificao de

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152 galactano cadeia principal de pectina (ramnogalacturonano). A mobilizao dos galactanos em cotildones de Lupinus angustifolius foi descrita por Crawshaw e Reid (1984), e as alteraes ultraestruturais que acompanham este processo foram documentadas por Parker (1984). Antes da germinao, o material de parede dos cotildones rico em resduos galactosil (71%) e arabinosil (20%), sendo o restante composto por pequenas quantidades de glucose, cido urnico e ramnose. Aps a germinao, a maior parte da galactose e arabinose removida da parede, deixando um material residual enriquecido em ramnose, cido urnico e glucose. Matheson e Saini (1977) reportaram a presena de duas -arabinosidases e trs galactosidases em cotildones de Lupinus luteus. Estas enzimas aumentaram aps a germinao e os autores levantaram a possibilidade do galactano estar envolvido no controle da expanso celular, alm de ser um polissacardeo de reserva. Buckeridge e Reid (1994) isolaram uma exo--(14)-galactanase de cotildones de Lupinus angustifolius a partir de uma famlia de galactosidases imunologicamente relacionadas que aumentam aps a germinao e diminuem aps o perodo de mobilizao das reservas. Os polipeptdeos foram detectados utilizando anticorpos purificados por afinidade pela principal exo-galactanase. Aparentemente as galactosidases so sintetizadas aps a germinao, uma vez que no h peptdeos que apresentam reao cruzada com o anticorpo nas sementes quiescentes. Alm disso, esses autores observaram a presena de reao cruzada entre o anticorpo anti-galactanase e um peptdeo de alto peso molecular presente nos cotildones em um perodo em que no havia praticamente atividade de galactosidases. A medida em que esta protena desapareceu, vrias -galactosidases foram detectadas, sugerindo que elas poderiam resultar de ao proteoltica seletiva. A exo-galactanase claramente uma enzima chave na mobilizao de polissacardeos de reserva de parede em cotildones de L.

Buckeridge et al. angustifolius aps a germinao. Ela possui alta especificidade para -(14)-galactanos, o componente estrutural dominante nas paredes de reserva. A atividade de galactanase acompanha a mobilizao das reservas de polissacardeo na parede. Quando galactanase pura foi incubada in vitro, a enzima liberou 82% da galactose total do galactano solvel e 63% da galactose total da parede intacta (Buckeridge e Reid, 1994). Baseado nos dados bioqumicos e estruturais, pode-se propor um modelo de degradao de galactano em Lupinus. Acredita-se que as molculas de galactano estejam ligadas covalentemente pelo seu terminal redutor cadeia principal de ramnogalacturonano (Al-Kaisey e Wilkie, 1992). De fato, foi confirmado que aps a mobilizao do PRPC in vivo ou por galactanase pura in vitro, o material residual era enriquecido em cido galacturnico e ramnose. Alm disso, aps a mobilizao de galactano, as paredes celulares contm material fibroso que no reage a uma sonda conjugada galactanase-ouro coloidal. Se o galactano de Lupinus est presente como uma cadeia lateral de pectina, razovel v-lo tambm como um polissacardeo componente da parede celular primria que foi ampliado e adaptado para armazenamento (Figura 1). A exo-galactanase isolada por Buckeridge e Reid (1994) parece ser a enzima mais importante na mobilizao de galactano de Lupinus. No entanto, modificaes psgerminativas na parede das clulas cotiledonares como um todo vo alm da mobilizao da reserva. Resduos de galactose que podem estar presentes em molculas que no o -(14) galactano e polmeros ricos em arabinose tambm so mobilizados aps a germinao. Alm disso, o colapso da parede em certas regies do cotildone com a formao simultnea de aernquima aps a mobilizao do galactano implica em degradao de componentes de parede primria. Isto sugere que pectinases e talvez celulases possam estar ativas durante o perodo de formao do aernquima. Seja ou no a presena de ramificaes do ramnogalacturonano com galactanos e arabinanos um fator importante na

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Polissacardeos de reserva de parede ... restrio da ao da celulase e pectinase nos estgios iniciais da germinao, razovel supor que estas ramificaes neutras possam estar regulando, at certo ponto, a expanso e morfognese dos cotildones. Portanto, pode ser apropriado caracterizar o galactano tambm como uma molcula de mltiplas funes, sendo tanto reserva quanto um importante elemento na modulao da expanso cotiledonar durante o desenvolvimento. PRINCIPAIS EVENTOS RELACIONADOS DEPOSIO E MOBILIZAO DE PRPC DE SEMENTES Apesar das diferenas entre os mecanismos especficos de biossntese e degradao de cada um dos PRPC, pode-se perceber um conjunto comum de eventos pelo qual estas substncias so acumuladas e posteriormente degradadas e utilizadas pelas plntulas em desenvolvimento. Os principais passos e os nveis em que tais eventos ocorrem esto representados na Figura 4. Durante o perodo final da maturao das sementes at que estas se tornem quiescentes, os principais fenmenos so as atividades de biossntese e deposio dos polissacardeos na parede celular. Muito pouco conhecido sobre os mecanismos de controle desses processos, tais como possveis hormnios que poderiam estar envolvidos ou mesmo sobre os mecanismos de biossntese. Antes da deposio, Reid (1971) detectou um aumento nos nveis de sacarose, acares da srie rafinsica e amido transitrio. Weber et al. (1997) observaram que a razo sacarose/monossacardeo (S/M) funciona como um marcador do estado fisiolgico dos tecidos em desenvolvimento, sendo menor que 1 no perodo de diviso e crescimento celular e maior que 1 durante o espessamento da parede (biossntese dos PRPC).

153 O perodo de quiescncia interrompido pela embebio de gua, processo em que os PRPC exercem funo importante. H ento um perodo em que as reservas de rafinose so degradadas e o contedo de sacarose se mantm elevado (McCleary e Matheson, 1974; Buckeridge et al., 1995a; Buckeridge e Dietrich, 1996). Foi demonstrado que sacarose e rafinose esto em toda a semente, inclusive no embrio, sendo provvel que sejam reservas locais e muito pouco transportadas (Reid, 1971). Poderia se pensar que esses compostos so reservas de carbono e energia para os processos de reorganizao celular dos tecidos na fase preliminar da mobilizao dos PRPC. Com isso, difcil discernir fonte-dreno nessa fase. Aps a germinao inicia-se a mobilizao dos PRPC com a sntese e/ou processamento de suas enzimas de hidrlise. Como mencionado anteriormente, h evidncias de que diversos hormnios, dependendo do PRPC, so ativos nessa fase, possivelmente ativando os genes envolvidos no processo. A mobilizao culmina na produo de uma grande quantidade de acares livres, ao mesmo tempo em que se estabelece a relao fonte-dreno entre o rgo de reserva e o eixo embrionrio. A razo sacarose/monossacardeos decresce. Porm, no se sabe se esta inverso ocorre como causa ou conseqncia da mudana do estado fisiolgico do tecido de reserva. Ainda assim, esta razo pode servir como marcador desta mudana. Nesse estgio a produo de acares livres to grande que parte deles acumulada como amido (transitrio) que ser posteriormente degradado durante o crescimento da plntula (Tin, 1997). Apesar de haver um nmero relativamente pequeno de descries na literatura, os eventos discutidos acima podem ser considerados como processos em comum para todos os PRPC durante a deposio e mobilizao.

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154
Diviso e crescimento celular
S/M < 1 Hormnios ?

Buckeridge et al.

Biossntese e deposio

Monossacardeos

S/M > 1 Hormnio s

Polissacardeos Parede celular Amido transitrio Drenos Intracelular

Germinao

Monossacardeos Embebio e Mobilizao

S/M < 1 Hormnios

Sacarose

FIGURA 4 - Representao das etapas de biossntese e mobilizao dos PRPC. No incio da formao dos tecidos na semente, as clulas esto em um perodo de diviso e crescimento. Neste momento a concentrao de sacarose menor que a dos monossacardeos (S/M<1). Em seguida, a razo S/M se inverte e as clulas entram em um estgio de acmulo dos PRPC, quando os monossacardeos (na forma de nucleotdeo-acar) so utilizados na biossntese dos polissacardeos e estes so depositados na parede celular (do endosperma ou dos cotildones). Aps a germinao, a razo S/M volta a ser menor que um, ao mesmo tempo em que a ao conjunta das enzimas de degradao hidrolisa o polmero na parede e os monossacardeos resultantes so internalizados pela clula. Uma vez no citoplasma, os monossacardeos so isomerizados, utilizados na biossntese de sacarose e, nesta forma, transportados para os drenos ativos (eixo embrionrio, por exemplo). Caso a sada de carboidratos (como sacarose) seja menor que a entrada (proveniente da parede), o excesso pode ser utilizado na biossntese de amido temporrio, evitando o aumento de acares livres no citossol. Os elementos de controle destes processos ainda no esto esclarecidos, assim como no se sabe se estas alteraes da razo sacarose/monossacardeos causa ou conseqncia das mudanas do estado fisiolgico das clulas, mas os hormnios envolvidos parecem variar de acordo com o PRPC depositado e com a famlia qual a planta pertence.

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Intracelular

Polissacardeos de reserva de parede ... TRANSFERNCIA DE FUNES EM POLISSACARDEOS DE RESERVA Em 1996, Buckeridge e Reid propuseram que os polissacardeos de reserva de parede em leguminosas poderiam ter passado por etapas de transferncia de funes ao longo da evoluo, os quais seriam parte das transformaes que levaram formao de uma parede de reserva a partir da parede primria. O conceito de transferncia de funes poderia explicar por que a maioria dos PRPC considerada molcula multifuncional. O mecanismo geral pelo qual a transferncia de funes poderia ter operado sobre os polissacardeos de parede ao longo da evoluo foi sugerido por Buckeridge et al. (2000). De acordo com esta hiptese, um polissacardeo teria uma funo primria e, pelo menos, uma secundria. Funes distintas seriam exercidas em propores diferentes de forma que em leguminosas, por exemplo, a maioria dos polissacardeos de reserva teria esta funo como primria, mas ainda preservando funes que seriam suas na parede primria como dureza, no caso dos mananos, e controle da porosidade da parede, no caso dos galactanos. Considerando o modelo de arquitetura da parede primria, para chegar ao estgio atual (Figura 1), a transferncia de funes provavelmente demandou algumas transformaes chave no metabolismo e nas propriedades de alguns dos polissacardeos de parede, entre elas: 1) separao temporal entre a biossntese e a degradao; 2) aumento da proporo de um dos polissacardeos da matriz de pectina ou hemicelulose (Figuras. 1C e 1D); e, 3) alteraes na estrutura fina no que diz respeito s ramificaes. Nos primeiros dois casos, as transformaes provavelmente envolveram o mecanismo de turnover dos componentes da parede celular. Durante o crescimento, acredita-se que a biossntese e a degradao ocorram ao

155 mesmo tempo e aproximadamente na mesma velocidade, sendo que este fluxo de material pode, em certas circunstncias, servir de armazenamento temporrio de carboidratos. A troca de carbono entre a parede e o compartimento intracelular est prxima a um equilbrio. Portanto, a primeira alterao seria o aumento da biossntese ou a reduo da degradao de um dos polissacardeos de parede durante a maturao da semente. Durante a mobilizao das reservas o contrrio ocorre, ou seja, a hidrlise o principal evento enquanto a biossntese est ausente ou muito baixa. Se o processo descrito realmente ocorreu, pode-se assumir que as mudanas principais provavelmente ocorreram ao nvel gentico, isto , a expresso dos genes que codificam para sintases e hidrolases foi alterada de forma que eles sejam expressos em momentos distintos do desenvolvimento e em intensidades diferentes. Isto demonstra a importncia de estudos de gentica molecular dos sistemas descritos, pois ser necessrio compreender o controle da expresso dos genes para entender como a evoluo operou. Apesar disso, no estgio atual, apenas alguns genes foram clonados de sementes contendo PRPC e muito pouco se sabe a respeito da sua expresso. As poucas informaes a este respeito levam idia de que as hidrolases presentes no sistema de degradao de PRPC so especficas para estes sistemas. No terceiro caso, claro que certas alteraes estruturais ocorreram na transferncia de funo de polissacardeos como o xiloglucano, o galactomanano e o galactano. Nos trs casos citados, as mudanas na distribuio e grau de galactosilao so bastante aparentes. Isto envolve os mecanismos de biossntese, sobre os quais temos menos informao que sobre a hidrlise. O nico gene clonado at hoje parece ser o da galactosil transferase de T. foenum-graecum (Edwards et al., 1999). importante notar que

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156 alguma hidrlise tambm parece ser necessria para a deposio de PRPC. Isso foi proposto por Edwards et al. (1992) e DeMason (1994), que mostraram que -galactosidase est envolvida em mudanas finais no galactomanano durante a maturao da semente. Algumas mudanas na estrutura fina do polissacardeo tambm foram necessrias para a formao de uma parede de reserva funcional. Uma foi o grau de galactosilao e/ou a distribuio das galactoses. Esta mudana, junto com a reduo da quantidade de celulose, possibilitou a produo de polissacardeos solveis, evitando problemas de embebio e, ao mesmo tempo, facilitando a mobilizao, uma vez que as interaes intermoleculares no so to fortes quanto na parede primria. No caso dos mananos de no-leguminosas, a retirada das galactoses permite interaes intermoleculares ao longo das cadeias principais, conferindo grande dureza ao endosperma. Isto est provavelmente relacionado ao fenmeno de ps-maturao que ocorre em espcies de Palmae e outras espcies e pode estar ligado ao controle da protruso da radcula, como em tomate. No caso especfico do xiloglucano, o aumento no peso molecular e a supresso da fucosilao foram passos importantes na transferncia de funes da parede primria para a de reserva. Enquanto o alto peso molecular leva a uma menor interao intermolecular entre os xiloglucanos, facilitando o processo de mobilizao, a reduo na fucosilao est provavelmente relacionada ao fato de que oligossacardeos de xiloglucano fucosilados possuem efeito anti-auxina (McDougall e Fry, 1989; Nishitani, 1997) e tambm interferem em interaes intermoleculares. Glucanos de ligao mista ((13),(14)-ligados) e arabinoxilanos em sementes de gramneas podem ser considerados passos intermedirios na transferncia de funes. Apesar das mudanas de proporo na matriz

Buckeridge et al. extracelular (estes polissacardeos constituem at 90% da parede celular), a quantidade total de carboidratos armazenada na parede muito menor que a quantidade de amido no endosperma, que considerado o material de reserva destas sementes. No entanto, como visto com mananos, pequenas quantidades de polissacardeos na parede podem ser de grande relevncia fisiolgica para semente. No caso dos cereais, parece que as paredes celulares esto relacionadas mobilizao do amido, uma vez que a sntese de novo de glucanases responsveis pela hidrlise dos glucanos de ligao mista tambm promovida por giberelinas durante a germinao (Hrmova et al., 1997). Apesar das mudanas ao longo da evoluo que levaram s alteraes dos sistemas de reserva, estes sistemas ainda tm muito em comum com a parede primria, tanto em relao ao metabolismo quanto s propriedades qumicas dos polissacardeos. Neste contexto, os estudos de parede celular de reserva podem, no futuro, trazer informaes relevantes ao metabolismo da parede, podendo ser estendidas a fenmenos fisiolgicos igualmente importantes em que a parede celular primria alterada, tais como, o amadurecimento de frutos e a expanso celular.

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