Bacteriofagos

Los virus son molculas de DNA o RNA rodeadas por una envoltura proteica que necesitan clulas viables para poder replicarse. Los virus utilizan la maquinaria metablica de las clulas para sintetizar su material gentico y protenas de la envoltura. Existen distintos tipos de virus que pueden infectar clulas procariontes o clulas eucariontes. Los bacterifagos o fagos son virus que se reproducen en clulas procariontes. El genoma de los fagos puede ser RNA simple cadena (MS2, Q), RNA doble cadena (phi 6), DNA simple cadena (phi X174, fd, M13) o DNA doble cadena(T3, T7, lambda , T5, Mu, T2, T4). Estos cidos nucleicos pueden contener bases inusuales que son sintetizadas por protenas del fago. En los T-pares el genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina, mientras que en otros tipos de fago alguna de las bases esta parcialmente sustituida. Bacterifago T4

Replicacin del Bacterifago T4

Esquema del Ciclo de Replicacin de un Bacterifago T4

El ciclo de replicacin de un bacterifago T4 se puede dividir esquemticamente en distintas etapas, las que son comunes a otros virus bacterianos y eucariticos. 1. 2. 3. 4. 5. 6. Adsorcin Inyeccin del material gentico viral Replicacin del material gentico viral Sntesis de las envolturas proteicas Empaquetamiento del DNA dentro de la envoltura proteica y ensamblaje de la envoltura Lisis y liberacin de las partculas viral

Adsorcin: El virus se fija o adsorbe a componentes de la superficie celular que actan como receptores especficos. La zona de adsorcin del virus es complementaria al receptor celular, por lo tanto un determinado virus slo puede infectar un nmero limitado de cepas celulares que contengan a un determinado receptor. La naturaleza de la zona de adsorcin vara con el tipo de fago. En el T4 se localiza en el extremo de la cola, en donde se encuentran la placa basal, las espculas y las fibras de la cola.

Esquema de los principales eventos en la adsorcin del bacterifago T4 a la pared celular de la bacteria E. coli.(a) el fago libre muestra las fibras y las espculas de la cola. (b)Adhesin de las fibras de la cola. (c) El fago se acerca a la pared celular y las espculas entran en contacto con la pared celular. Inyeccin del material gentico viral: Despus de la adsorcin, se produce un cambio configuracional en las protenas de la placa basal, alguna de las cuales tienen actividad enzimtica y producen un poro en la membrana citoplasmtica de la clula. La vaina del fago se contrae y el material gentico viral ingresa en la clula, mientras que la envoltura proteica queda en el exterior.

Esquema del mecanismo de penetracin del material gentico del fago T4 o T2 a travs de la pared celular de la bacteria. (a) Las espculas del fago entran en contacto con la pared celular y la vaina se encuentra extendida. (b) La vaina de la cola se contrae y el material gentico del fago penetra la pared celular; la lisozima presente en el fago digiere la porcin de pared celular localizada directamente bajo la partcula viral. Replicacin del material gentico viral: El material gentico viral que ingresa en una clula contiene bases modificadas que evitan la degradacin por nucleasas bacterianas. Esta modificacin consiste en la glicosilacin y/o metilacin de algunas determinadas bases. En el caso del fago T4 se glucosila la base 5'-hidroximetilcitosina. Para lograr una efectiva replicacin del genoma viral se deben sintetizar algunas protenas ni bien el material gentico ingresa en la clula. Esta protenas tempranas reparan el poro de la membrana citoplasmtica por donde ingres el genoma viral, degradan el DNA bacteriano lo que proporciona una fuente de precursores, evita la sntesis de RNA y protenas bacterianas, y proporciona ribosomas para la sntesis de protenas del fago. Adems algunas de estas protenas tempranas participan en la sntesis de las bases inusuales. La forma de replicacin del genoma viral es dependiente del tipo de material gentico (si es RNA o DNA, si es simple o doble cadena). En el caso del fago T4, las molculas replicadas se aparean en los extremos y formando una molcula de DNA ms larga denominada concatmero. Despus una enzima corta esta larga molcula lineal en molculas ms pequeas de igual longitud. Las molculas de DNA del T4 tienen se caracterizan por estar permutadas circularmente (el DNA del T4 es lineal) de esta forma todas las molculas de DNA resultantes contienen genes completos y funcionales. La enzima del T4 que corta al

concatmero produce molculas de DNA de tamaos similares pero no reconoce sitios especficos sobre la molcula, en cambio la enzima del T7 reconoce sitios especficos sobre el DNA. Sntesis de las envolturas proteicas: Las protenas de la envoltura (cpside, vaina, fibras, etc) son protenas tardas que se sintetizan despus de iniciada la replicacin del material gentico. La sntesis de cada componente proteico se realiza separadamente. En el caso del fago T4, el material gentico es encapsidado antes del ensamble del resto de los componentes. Ensamble: Todas las protenas de la envoltura se ensamblan para formar una partcula viral madura capaz de infectar a otra clula cuando sea liberada. Lisis celular y liberacin de las partculas virales: La lisis celular se debe a la sntesis de protenas tardas codificadas en el genoma del fago. En el fago T4, estas protenas son enzimas que lesionan la membrana citoplasmtica y la pared celular.

Lisogenia
Poco tiempo despus de que fueron descubiertos los fagos, se aislaron cepas bacterianas que parecan ser portadoras silenciosas de ciertos tipos de fagos. Los lquidos obtenidos a partir de cultivos de estas cepas portadoras mostraban la presencia de fagos; sin embargo, las cepas portadoras no eran sensibles a ser destruidas por el fago que portaban. Por otra parte, cepas de bacterias emparentadas con la cepa portadora resultaban ser sensibles al fago presente en las cepas portadoras. Las cepas de bacterias portadoras de fagos silenciosos o latentes fueron denominadas cepas lisognicas. A principios de los aos cincuenta se descubri que los fagos son capaces de adsorberse a las bacterias lisognicas, pero no se produce la subsecuente lisis de estas bacterias. Por otra parte, cuando el fago procedente de una cepa lisognica es sembrado en una cepa de bacterias sensibles, se pueden aislar en estos cultivos colonias de bacterias que se comportan igual que las cepas lisognicas. En 1950, Andr Lwoff cultiv una sola clula procedente de una cepa lisognica de Bacillus megaterium y observ bajo el microscopio la divisin de esta bacteria. Posteriormente, Lwoff removi una de las clulas hijas junto con un poco del medio de cultivo. Este proceso fue repetido varias veces: cada vez que se divida la clula remanente, era removida una de las clulas hijas y algo del medio de cultivo; las clulas hijas y el viejo medio de cultivo fueron sembrados en agar para determinar si daban origen a una poblacin de bacterias lisognicas y a la presencia de fago en el medio de cultivo. Estos

experimentos mostraron que las bacterias lisognicas pueden crecer y dividirse sin liberar fagos al medio de cultivo. Sin embargo, por alguna razn desconocida, algunos filtrados obtenidos a partir de extractos de bacterias lisognicas mostraban la presencia de partculas virales, o sea, fagos. Lwoff razon que en las cepas lisognicas el fago se encuentra en forma de un precursor no infeccioso al que denomin profago. La lisis de algunas de estas bacterias lisognicas ocurre solamente cuando estas clulas han sido estimuladas para producir fagos. Lwoff y colaboradores observaron que la irradiacin con luz ultravioleta (U.V.) era capaz de inducir la produccin de fagos en una poblacin de bacterias lisognicas, mismas que eran lisadas en la medida que se incrementaba la concentracin de fagos liberados al medio de cultivo. Por lo tanto, una bacteria lisognica posee la capacidad de heredar el fago a sus descendientes, muy pocos de los cuales se lisarn en forma espontnea. Sin embargo, la mayor parte de la progenie de una bacteria lisognica puede ser inducida a producir el fago por medio de la irradiacin con U.V. o tratamiento con otros factores inductores. Se denomina temperados a los bacterifagos capaces de existir en forma de profago en el interior de una bacteria hospedera. Despus de que el profago ha sido inducido por irradiacin, ocurre un breve periodo de eclipse en el cual no se puede detectar la presencia del fago dentro de la bacteria. Sin embargo, es posible detectar la aparicin de protenas y cido nucleico especficos del fago; estos elementos sern ensamblados para formar los nuevos fagos maduros poco antes de que ocurra la lisis de la bacteria hospedera. En 1951, Esther Lederberg descubri en forma accidental que la cepa de E. coli K12 era de tipo lisognico. El fago latente en dicha cepa fue aislado al mezclar E. coli Kl2 con derivados no lisognicos de esta cepa bacteriana. El fago resultante es ahora conocido como fago y representa el caso ms estudiado del fenmeno de lisogenia. Las bacterias infectadas por fagos temperados continan dividindose por varias generaciones y son inmunes o resistentes a ser superinfectadas por el mismo tipo de fago que albergan o por otros fagos pertenecientes a clases emparentadas con el fago temperado original. Estas bacterias contienen cuando menos una copia ntegra del genoma del fago. Las bacterias infectadas por fagos temperados portan la informacin gentica correspondiente al fago, a travs de mltiples divisiones bacterianas, o sea, el genoma del fago es replicado al mismo tiempo que ocurre la replicacin del genoma bacteriano; este hecho hace posible que la bacteria original pueda heredar el fago temperado a la subsecuente progenie bacteriana. Transduccin La transduccin fue cronolgicamente el ltimo sistema de transferencia gentica bacteriana que se descubri. En 1951 Joshua Lederberg y su colaborador Zinder estaban investigando en Salmonella la posible existencia de un sistema de conjugacin al estilo del que se acababa de descubrir en su pariente Escherichia coli). Mezclaron dos cepas de Salmonella, cada una con un juego distinto de marcadores genticos. (Eureka! Obtuvieron recombinantes. Descartaron que se tratara de transformacin, ya que los resultados eran similares si aadan DNasa al sistema. Entonces, era un fenmeno de conjugacin? Realizaron el experimento del tubo en "U", con una membrana separando los dos brazos de la U, en cada uno de los cuales se colocaba una de las cepas. La membrana impide el paso de bacterias y los contactos intercelulares directos entre las dos cepas. Pues bien... segua habiendo recombinantes. Esto descartaba, pues, que se tratara de conjugacin. Se postul que deba de existir un "agente filtrable" resistente a las nucleasas, responsable ltimo de la transferencia gentica. Cul era la naturaleza exacta del misterioso agente filtrable? Por experimentos independientes se saba que una de las dos cepas de Salmonella produca un fago (llamado P22), de tipo moderado. Con una serie de ensayos se demostr que era precisamente este fago el responsable de los recombinantes: el tratamiento de sobrenadantes de esa cepa con calor o con antisuero provocaba la inactivacin tanto del fago como del agente filtrable; las cepas de Salmonella resistentes a P22 (porque no adsorben el fago) no pueden interaccionar con el agente filtrable, y por lo tanto tampoco dan recombinantes; finalmente, se comprob que la cepa productora del agente filtrable posea un fago moderado en forma de profago. La induccin de esta cepa lisognica era la responsable de producir algunas partculas de fagos portadoras de material gentico de la cepa de origen, que los fagos inyectaban posteriormente a las clulas de la cepa receptora. As pues, se acababa de descubrir un nuevo sistema de transferencia gentica entre bacterias, sistema que fue bautizado con el nombre de transduccin. La transduccin se puede definir como el proceso de transferencia gentica desde una clula donadora a otra receptora mediatizado por partculas de bacterifagos que contienen ADN genmico de la primera. En la transduccin podemos distinguir dos etapas diferenciadas:

1.

Formacin de la partcula fgica transductora: un trozo de material gentico de la clula donadora se introduce en el interior de la cabeza de la cpsida de un fago. Las partculas transductoras son en cierta manera "subproductos" anmalos del ciclo normal del fago. 2. La partcula transductora inyecta de forma habitual el ADN que porta a la clula receptora, donde este ADN puede eventualmente recombinarse y expresar su informacin.

La transduccin descubierta por Lederberg y Zinder se llama transduccin generalizada. Mediante ella se puede transferir cualquier marcador del genforo del donador, con aproximadamente la misma frecuencia relativa (de ah el calificativo de generalizada). La transduccin generalizada se produce slo como consecuencia de infecciones lticas. El ADN del genomio de la bacteria donadora que es introducido en la partcula transductora suele ir sin acompaamiento de ADN del propio fago. Por ello, a esta peculiar partcula consistente en cpsida del fago que encierra slo ADN genofrico de la bacteria se la denomina pseudovirin. Siguiendo con la buena racha de descubrimientos, pocos aos ms tarde (1956), el mismo Lederberg (esta vez junto con su mujer, y con Morse) hallaron un tipo nuevo de transduccin, mientras estaban estudiando el sistema del fago moderado l y su hospedador, E. coli. Este tipo de transduccin recibi el nombre de transduccin especializada, y sus caracteres distintivos son: slo se transfieren marcadores cromosmicos cercanos al sitio de integracin del ADN del fago (profago) en la clula lisognica (p. ej., en el caso de l , los marcadores gal o bio); se produce nicamente como consecuencia de la induccin de la clula lisognica por escisin del profago y consiguiente entrada a fase ltica, productora de nuevas partculas de fago; el ADN genmico de la bacteria transportado por la partcula transductora va unido a ADN del fago; la clula transductante se suele convertir en lisognica para el fago correspondiente. Bibliografa:

http://omega.ilce.edu.mx:3000/sites/ciencia/volumen2/ciencia3/071/htm/enlafron.htm http://www.microbiologia.com.ar/virologia/procariontes.php?Mostrar=generalidades http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/19transduccion.htm