Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
INTRODUCCIN La acuicultura en Espaa se trata de un sector industrial con grandes perspectivas de futuro debido a varios factores, tales como, las caractersticas geogrficas espaolas, las altas tasas de consumo de pescado y las crecientes dificultades para obtener productos de la pesca para el consumo humano. Por ello en los ltimos tiempos se han incrementado los esfuerzos para controlar su produccin y evitar prdidas a la vez que aumentan los riesgos de aparecer enfermedades que hasta ahora no han sido descritas en la poblacin salvaje. Cuando alguna de estas enfermedades aparece en poblaciones en cultivo, los efectos son devastadores, puesto que en estas condiciones se produce un elevadsimo ndice de morbilidad y mortalidad y pueden verse afectadas con mayor facilidad otras poblaciones cercanas. Por ello, en el presente documento se abordan los aspectos prcticos que deben ser tenidos en cuenta en la lucha frente a las enfermedades de los peces que, a continuacin se mencionan:
ANEMIA INFECCIOSA DEL SALMN (AIS) NECROSIS HEMATOPOYTICA INFECCIOSA (NHI) SEPTICEMIA VIRAL HEMORRGICA (SVH)
Aunque en los captulos siguientes se abordarn los distintos aspectos relacionados con estas enfermedades, es necesario adelantar que la AIS afecta fundamentalmente a cultivos de salmones en agua marina y las otras dos, NHI y SVH, aparecen en muchas especies, no slo en salmnidos, en piscifactoras de aguas continentales y en el caso de SVH tambin en piscifactoras marinas. Ninguno de los virus causantes de estas enfermedades afectan a la especie humana o a otros mamferos y por ello su conocimiento, comparado con otros virus, es muy limitado en numerosos aspectos. En la actualidad, las investigaciones se estn centrando en los virus que afectan a las especies de mayor inters comercial, y que ocasiona por ello grandes prdidas a la industria del sector. Estas enfermedades son consideradas como exticas dentro del Territorio Nacional, ya que nunca ha sido detectada su presencia. Por otra parte, su incidencia est aumentando en otras zonas dentro del mbito de la Unin Europea. Asimismo, las enfermedades objeto del presente manual, coinciden en que presentan una etiologa vrica, afectan principalmente a salmnidos, provocan una gran mortalidad y ocasionan graves prdidas econmicas tanto directas como indirectas. Adems no existe un tratamiento eficaz frente a las mismas, y todava no se dispone de vacunas eficaces, por lo que las medidas de lucha se deben basar en la prevencin y el control. Por estos motivos, y en cumplimiento de la Directiva 93/53, de 24 junio de 1993, por la que se establecen medidas comunitarias mnimas de lucha contra determinadas enfermedades de los peces, incorporada al ordenamiento jurdico
interno mediante el Real Decreto 1488/1994, de 1 de julio, por el que se establecen medidas mnimas de lucha contra determinadas enfermedades de los peces, se ha elaborado el presente manual que tiene por objeto servir de gua de trabajo a los Servicios Veterinarios Oficiales en caso de sospecha y/o confirmacin de alguna de las citadas enfermedades.
En ocasiones pueden observarse hemorragias en los ojos. El anlisis de sangre pone de manifiesto una intensa anemia con disminucin importante en el valor hematocrito que estar por debajo de 10. A nivel histolgico se observa degeneracin y necrosis de los hepatocitos, tanto en el parnquima como en los endotelios de los sinusoides hepticos donde se pueden observar partculas vricas mediante microscopa electrnica. Tambin en los ventrculos cardiacos se ha podido detectar la presencia de esas partculas vricas. En general son los endotelios vasculares los principales puntos de localizacin del virus as como tambin los leucocitos polimorfonucleares circulantes. TRATAMIENTO Y PROFILAXIS Las mismas pautas que se indicaran en el caso de la Necrosis Hematopoytica Infecciosa (IHN). No existen vacunas.
RESISTENCIA Se ha observado una rpida perdida de infectividad en el agua a temperatura ambiente. Los agentes inactivantes ms eficaces frente al virus son: 6- mercaptopurina, Virazol, 5-fluorocytidina, 7-deazaadenosina, 5-fluorouridina, Cloroquina, Levamisol y 9-S-(2,3-dihidroxypropyl)-adenina. Entre los inactivantes clsicos, el Ozono es ms eficaz que el Cloro para inactivar el virus, si bien ambos son buenos viricidas. Tambin es inactivado por el Cloroformo y el ter. La conservacin ptima del virus se realiza entre 70C y -270C, siendo inactivado en varias semanas a +4C y en 15 minutos a 60C. La prdida de infectividad del virus IHN depende tambin de la salinidad del agua, puesto que en el medio salino se inactiva ms rpidamente. La estabilidad del virus disminuye a pH inferior a 5 y superior a 8. La deshidratacin provoca la prdida de la infectividad del virus en 7 das. EPIDEMIOLOGA 1.- Especies Afectadas Esta enfermedad se ha descrito tanto en especies de agua dulce como salada, no obstante, son los salmnidos los que presentan la enfermedad con mayor frecuencia, especialmente en Trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) y Trucha comn (Salmo trutta) as como en diversas variedades de salmn de Norteamrica: Salmn Sockeye (O. nerka), Salmn Chinook (O. tshawytscha), Salmn Chumb (O. keta), Salmn Amago (O. rhodururs) y Salmn Yamane (O. masou). Tambin el Lucio (Esox lucius) parece ser susceptible a la infeccin y a la enfermedad si bien la padece de forma leve. 2.- Tasas de Infeccin Afecta a peces de todas las edades, jvenes y adultos, si bien la mayor letalidad se observa en jvenes, con especial gravedad en animales de 3 semanas a 6 meses de vida, debido posiblemente a que no han sido capaces de desarrollar todava una respuesta inmune adecuada. Las tasas de morbilidad y la letalidad son muy elevadas, alcanzando en ocasiones el 100% de los peces sensibles, y siendo lo ms frecuente un 70-90 % en ambos parmetros. No se ha observado diferencia entre sexo cuanto a la gravedad de la enfermedad clnica, sin embargo si se ha observado que el nivel de infeccin, y por tanto de portadores asintomticos, es ms elevado entre las hembras. 3.- Factores de riesgo Un importante factor que afecta a la aparicin de la enfermedad en su forma clnica y a las elevadas tasas de morbilidad y letalidad es la temperatura, puesto que en peces que se encuentran a temperaturas entorno a los 12C, la manifestacin de la enfermedad es ms intensa, mientras que por encima de los 14C la mortalidad se reduce hasta el punto de que por encima de 18C la enfermedad no se ha detectado nunca y por debajo de los 6C la mortalidad
pasa a ser prcticamente nula, quedando esos animales como portadores asintomticos. Adems de la importancia de la temperatura, existen otros factores que influyen en la presentacin de la enfermedad, es el caso de las condiciones ambientales como el dficit de oxgeno, la mala alimentacin y en general cualquier causa productora de estrs. 4.- Fuentes virulentas La enfermedad se transmite a partir de los animales enfermos, tanto agudos como crnicos, as como a partir de los portadores asintomticos, puesto que todos ellos actan como portadores de los virus. La eliminacin de los virus se produce por heces y orina as como los productos sexuales en los animales adultos en fase de freza, y en ocasiones incluso a travs del mucus de la piel. En los animales infectados el virus se localiza en rin, bazo, encfalo y tracto digestivo. 5.- Vas de transmisin Una vez eliminado el virus, los mecanismos de transmisin pueden ser "horizontales", tanto en forma "directa" como "indirecta", y "verticales". CUADRO CLNICO En animales muy jvenes la nica manifestacin de enfermedad que se observa es la repentina muerte de los animales, muerte que puede llegar a alcanzar el 100% de la poblacin. En estos casos la mortalidad suele comenzar entre los 5 y 14 das postinfeccin. En animales ya jvenes o en adultos la enfermedad cursa de forma menos grave. El proceso comienza rpidamente, en un perodo que abarca desde las 24 a 72 horas postinfeccin, con la inapetencia del pez, eliminacin de finas hebras de heces que son restos de descamacin del epitelio intestinal. El pez comienza a presentar un estado letrgico y natacin anormal con prdida del sentido de la orientacin. Se observa oscurecimiento de la superficie corporal, distensin abdominal con ascitis, exoftalmos, en la base de las aletas y la cola se pueden observar fenmenos hemorrgicos en forma de petequias, y ms espordicamente las hemorragias se observan en la dermis, msculo, cabeza y boca, y finalmente los peces pierden totalmente el sentido de la orientacin, nadan errticos para finalmente morir. En algunos casos, las branquias aparecen muy plidas y en la boca, piel y musculatura se observan hemorragias. En los animales supervivientes puede observarse escoliosis y lordosis. En sangre se observa leucopenia, degeneracin de leucocitos y trombocitos y acmulo de restos celulares. Las lesiones producidas por este virus se localizan en cavidad abdominal con acmulo de material seroso y hemorrgico en algunas ocasiones. Este material tambin se presenta en el intestino. Tambin afecta al tejido heptico, esplnico, renal e intestinal, as como a msculo esqueltico y vejiga natatoria que en general se presentan anmicos y con petequias. Ocasionalmente el pncreas presenta un intenso estado necrtico y en las fases ms avanzadas de la enfermedad ese tejido necrtico se observa en hgado, que adems sufre el acmulo de tejido ceroide, y en los glomrulos y en los tbulos renales. Las clulas de estos rganos sufren intensos fenmenos de necrosis con picnosis, cariorrexis e infiltracin intracitoplasmtica.
Existe en estos tejidos una intensa infiltracin de macrfagos y leucocitos polimorfonucleares. Se observan acmulos de eritrocitos en el tejido muscular estriado que ocasionalmente puede aparecer necrosado. TRATAMIENTO Y PROFILAXIS Se trata de una enfermedad incluida en la lista II de enfermedades de declaracin obligatoria de la Unin Europea en el mbito de la acuicultura, as como en la lista B del cdigo Zoosanitario Internacional de la O.I.E., por lo que se trata de una enfermedad frente a las que deben instaurarse medidas de erradicacin en aquellas zonas donde se localiza y de prevencin en aquellas otras zonas para las que constituye riesgo como enfermedad extica. TRATAMIENTO Los tratamientos de carcter curativo a base de antibiticos son absolutamente ineficaces para el control y erradicacin de la enfermedad, y solamente las medidas de manejo y control de los peces de las piscifactoras van a permitir evitar y controlar la presencia de estos virus. PROFILAXIS 1.- Higinica As pues, el mejor mecanismo de control de estas enfermedades es la prevencin mediante la aplicacin de medidas de carcter higinico-sanitarias basadas en la limpieza de los estanques, el uso continuado de desinfectantes (amonios cuaternarios, formalina, clorados, organofosforados, iodforos) y medidas que eviten el estrs de los animales tales como manejo adecuado, el control de la excesiva densidad de poblacin, anestesia a los animales en la manipulacin de los mismos, etc. La posibilidad de que la enfermedad se transmita de forma vertical, hace que el momento de la fecundacin de los huevos pueda constituir un punto clave en la infeccin de los mismos, por ello, la fecundacin deber realizarse en presencia de Iodforos que inactivan el virus, lo que evitar (o reducir) la posibilidad de que se produzca la transmisin vertical. Del mismo modo, debemos controlar la entrada en la piscifactora de potenciales portadores asintomticos, de forma especial las especies cticas de vida salvaje existentes en el ro que pueden ser portadores de los virus y provocar de nuevo la infeccin en la piscifactora, as como las aves ictifagas y mamferos que pueden entrar en las mismas, y que actan como vehculos de los agentes vricos. Las importaciones de huevos embrionados y alevines deben realizarse a partir de piscifactoras que posean certificados expedidos por laboratorios oficiales en los que quede demostrada la ausencia de, no slo sta sino de todas, las enfermedades de las listas A y B del cdigo Zoosanitario Internacional de la O.I.E. y de las listas I y II de la legislacin de la Unin Europea para la acuicultura. Una vez instaurada la enfermedad en la piscifactora, deben establecerse medidas de erradicacin que pasan por realizar el vaciado sanitario de la misma durante un perodo mnimo de 3 meses con desinfecciones continuas a base de clorados, cal viva y amonios cuaternarios en los estanques. Una vez
que se haya cumplido esta etapa, la reintroduccin de nuevos animales se realizar a partir de explotaciones que puedan demostrar estar exentas. 2.- Vacunal Las primeras medidas de inmunoprofilaxis que se instauraron, consistan en la inoculacin del virus a peces adultos. Posteriormente a estos se les extraa el suero, que era inoculado a peces sanos, lo que confera cierto grado de inmunidad. Posteriormente, y siempre a nivel experimental hasta el momento, se utilizaron vacunas inactivadas con formalina que producan respuesta protectora cuando eran inoculados por inyeccin, pero no por inmersin o bao hiperosmtico, lo que haca muy compleja su utilizacin. Ms tarde, se utilizaron vacunas vivas atenuadas. En este sentido se utilizaron 2 sistemas diferentes de atenuacin, pases sucesivos en cultivos celulares y aumento de la temperatura. En ambos casos la inmunidad era buena, pero mantena cierto poder patgeno que en algunas ocasiones originaba de nuevo la infeccin natural. Actualmente se est trabajando con fracciones antignicas del virus, que puedan ser inmungenas pero que evitan el trabajar con virus ntegro y vivo, lo que permite controlar su poder patgeno. No obstante estos estudios se encuentran en fases iniciales, por lo que se puede suponer que se tardar unos aos en que esas vacunas sean aplicables al campo. Todos estos acontecimientos hacen que hoy por hoy el control de esta enfermedad, as como del resto de los procesos vricos en acuicultura, se base fundamentalmente en la utilizacin de medidas higinico-sanitarias y control de los peces, as como de cualquier otro factor que produzca estrs y que se transforma en factor predisponente de cara a la aparicin de una enfermedad infecciosa. Tampoco puede olvidarse, como medida que puede reducir la transmisin vertical de la enfermedad, la desinfeccin de los huevos embrionados en las fases de incubacin.
infeccin persiste pero la enfermedad no suele manifestarse clnicamente. Por encima de los 20 - 22C el virus puede inactivarse rpidamente. Las situaciones de estrs que pueden producirse en el manejo de los animales determinan en gran medida la gravedad del proceso una vez que la infeccin est instaurada en una piscifactora. 3.- Eliminacin del Virus: La eliminacin del virus la realizan los enfermos clnicos y los portadores asintomticos, tanto de produccin intensiva como de vida salvaje, a travs de orina y productos sexuales, si bien esta ltima va est siendo discutida. Por otro lado, parece que el virus no se elimina a travs de las heces.. Los rganos diana del virus, muestras ms apropiadas para el diagnstico, son el rin, el bazo el cerebro. La eliminacin del virus se mantiene hasta 30 das despus de la desaparicin de las manifestaciones clnicas. 4.- Modos de Transmisin: La transmisin de la enfermedad parece producirse tanto por la va horizontal como por la vertical a travs de los huevos embrionados (en discusin en la actualidad). La transmisin horizontal se producir directamente por contacto a travs de las branquias de los animales sanos, la va oral presenta tambin importancia en la transmisin de la enfermedad aunque menor. El virus que penetra ha sido eliminado previamente al agua con las secreciones y excreciones. La enfermedad tambin puede transmitirse de forma indirecta por medio de fmites. CUADRO CLINICO La enfermedad se manifiesta clnicamente porque inicialmente el animal no come, est letrgico, se observa progresivamente la aparicin de edemas y hemorragias en rganos y tejido muscular, siendo mortal en la casi totalidad de la poblacin afectada. Los animales afectados tienen una natacin anormal, propia de las alteraciones motrices por la localizacin del virus en el sistema nervioso central. Externamente el animal se oscurece, aparece exoftalmos, las branquias estn plidas y se aprecian hemorragias en las rbitas y base de las aletas. En los rganos internos existen petequias, especialmente en vejiga natatoria, peritoneo y ocasionalmente en hgado y rin as como en tejido adiposo y musculatura de la cavidad abdominal. El hgado aparece plido y el bazo est ms alargado de lo normal y muy enrojecido. El virus se localiza y multiplica en los endotelios vasculares, especialmente en los capilares sanguneos, tejido hematopoytico y en el rin. En ocasiones el virus se localiza igualmente en los rganos sexuales, lo que hace que en pocas de freza pueda eliminarse el mismo con los productos sexuales. A nivel microscpico existe degeneracin y necrosis en el hgado y extravasacin de fluidos y clulas sanguneas en los vasos del msculo esqueltico.
11
TRATAMIENTO Y PROFILAXIS Las mismas pautas que se ha indicado en el caso de la Necrosis Hematopoytica Infecciosa (IHN). Profilaxis vacunal Por el momento todos los productos obtenidos se han aplicado a nivel experimental, utilizando vacunas inactivadas y vacunas vivas atenuadas. En ambos casos la inmunidad era buena, pero existan dificultades en cuanto a la va de administracin en las inactivadas y de mantenimiento de cierta virulencia en el caso de las atenuadas. Actualmente, y todava a nivel experimental, se est trabajando en el desarrollo de vacunas con fracciones antignicas del virus, que puedan ser inmungenas pero inocuas en cuanto a su actividad patgena.
12
ACTUACIONES ANTE SOSPECHA Aviso de sospecha: Una explotacin acucola ser considerada como sospechosa cuando se observe, al menos, alguna de las siguientes situaciones: - Existencia de sintomatologa clnica - Resultados positivos en los test laboratoriales preliminares - Relacin epidemiolgica con otra explotacin sospechosa o donde se haya confirmado la enfermedad. Las vas de notificacin habituales de la sospecha hacia la unidad veterinaria local correspondiente son las siguientes: - Aviso por parte del responsable de la explotacin, veterinario, etc - Deteccin del proceso por los Servicios Veterinarios Oficiales, bien por visita de inspeccin rutinaria, o como consecuencia de las investigaciones epidemiolgicas llevadas a cabo en otras explotaciones sospechosas o afectadas. - Deteccin laboratorial de resultados positivos preliminares no concluyentes Actuaciones tras el aviso de sospecha La sospecha dar lugar, en todos los casos, a la puesta en marcha de las acciones de comprobacin definidas en el Captulo II, art. 5 (AIS) y Captulo III, art. 9 y art 10. (NHI y SVH) del Real Decreto 1488/1994, de 1 de julio, por el que se establecen medidas mnimas de lucha contra determinadas enfermedades de los peces. Para ello el Inspector veterinario local acudir a la explotacin en cuestin y en especial deber poner un mayor nfasis en los siguientes aspectos, en tanto en cuanto no se confirme o desestime la sospecha: Inmovilizacin, censado e inspeccin clnica de todo el efectivo. Toma de muestras y remisin al laboratorio Realizacin de encuesta epidemiolgica Dar instrucciones para extremar las medidas de bioseguridad, higiene y desinfeccin.
Nota: la inspeccin clnica y toma de muestras se realizar siguiendo el modelo incluido en el ANEXO F (parte I) Esquema de funcionamiento de la cadena de mandos ante una sospecha: El inspector veterinario oficial mantendr puntualmente informado responsable del Centro Local de todas las actuaciones llevadas a cabo. al
13
El Jefe de Sanidad Animal, mximo responsable del Centro Local, llevar a cabo las siguientes acciones: Informar de la situacin y proponer acciones al responsable en Sanidad Animal de la Comunidad Autnoma correspondiente. Dar instrucciones a la Unidad Veterinaria Local sobre las acciones a llevar a cabo
El Comit Nacional del Sistema de Alerta Veterinaria (CNSAV) ser informado a travs del representante de la Comunidad Autnoma implicada, y una vez conocida la situacin, llevar a cabo las siguientes acciones: En colaboracin con el Centro Local, se deber estimar las necesidades de personal y material en caso de que la sospecha sea confirmada. Informar al Laboratorio Nacional de Referencia de la situacin. En caso necesario, se comunicar la sospecha a los servicios oficiales de otros Estados Miembros que pudieran estar relacionados. Informar a la Comisin de la situacin. Definir las medidas a aplicar en todo el territorio nacional en funcin de la situacin sanitaria.
Las medidas aplicadas en la explotacin sospechosa se mantendrn hasta la confirmacin o desestimacin de la sospecha. No obstante, el Centro Local en coordinacin con el CNSAV, podrn decidir el sacrificio preventivo de todo el efectivo presente, en funcin del cuadro clnico y de los riesgos epidemiolgicos de la enfermedad que se sospeche.
14
ACTUACIONES TRAS LA CONFIRMACIN Confirmacin: Para la confirmacin del foco es imprescindible la comunicacin del resultado positivo por parte del Laboratorio Nacional de Referencia. Actuaciones: En funcin de la enfermedad que se trate, se llevarn a cabo las siguientes medidas: AIS: medidas recogidas en el Captulo II, art. 6 (AIS) del Real Decreto 1488/1994, de 1 de julio, por el que se establecen medidas mnimas de lucha contra determinadas enfermedades de los peces. NHI, SVH: medidas recogidas en el art. 9 y art 10. del Captulo III del Real Decreto 1488/1994, de 1 de julio, por el que se establecen medidas mnimas de lucha contra determinadas enfermedades de los peces. Para la NHI y SVH, el Centro Local en coordinacin con el CNSAV, podrn decidir el sacrificio preventivo de todo el efectivo presente, en funcin del cuadro clnico y de los riesgos epidemiolgicos Notificacin: Los responsables en Sanidad Animal, realizarn la notificacin oficial de la enfermedad tendiendo en cuenta la clasificacin de la enfermedad por parte de Espaa, la Unin Europea y la OIE. En la actualidad, esta clasificacin es la siguiente:
OIE Otras enfermedades importantes Lista A Enfermedades de declaracin obligatoria Lista A Enfermedades de declaracin obligatoria cadena de mandos tras la
Esquema de confirmacin:
funcionamiento
de
la
15
Son los responsables directos de la ejecucin de todas las medidas en la explotacin y zona afectadas: control de sacrificio, desinfeccin, medidas de bioseguridad e higiene, encuesta epidemiolgica, etc. Centro Local de crisis: Son los responsables de dar las instrucciones pertinentes a la Unidad Veterinaria local sobre las acciones a poner en marcha. A travs de las conclusiones de los estudios epidemiolgicos realizados, debern informar a los responsables de la Comunidad Autnoma de la situacin y proponer las medidas pertinentes. Cuando las datos de las encuestas epidemiolgicas arrojen informacin sobre la posible difusin hacia otras explotaciones o zonas fuera del mbito provincial, debern informar inmediatamente de esta situacin al objeto de tomarse las medidas oportunas en estas zonas. Tambin informarn de las necesidades de personal y de medios materiales. CNSAV: Tiene la responsabilidad de evaluar y realizar el seguimiento de la situacin sanitaria a nivel nacional. Deber informar a la Comisin y al resto de Estados Miembros de la evolucin de la situacin sanitaria y de las medidas adoptadas al respecto. Para la NHI y SVH, en caso de aplicarse las medidas previstas en el punto 2 del artculo 10 del Captulo III del Real Decreto 1488/94, el Comit RASA ser el encargado de aprobar el programa de control y erradicacin as como de la supervisin de su ejecucin.
16
PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRAS Y ENVO AL LABORATORIO 1. PARA LA DETECCION Y CONFIRMACIN DE SHV Y NHI 1.1. Toma de Muestras Se tendrn preparados tubos de plstico estriles que contengan 4 ml de medio de transporte, es decir, medio de cultivo celular con 10% de suero de ternera y antibiticos. Se recomienda la combinacin de 200 UI de penicilina, 200 g de estreptomicina y 200 g de kanamicina por ml, aunque podrn utilizarse asimismo otros antibiticos de eficacia probada. Si los peces muestreados son inferiores a 6 cm. de longitud se pueden enviar enteros. Si los peces son mayores de 6 cm. de longitud se extraern con material estril partes de los rganos, abriendo el pez ventralmente desde un poco antes del ano hasta la parte anterior. Los tejidos que deben recogerse son bazo, la parte anterior del rin y, adems, bien el corazn o bien el encfalo. En algunas ocasiones, deber examinarse el fluido ovrico. Los peces enteros, el fluido ovrico o las partes de rgano de un mximo de 10 peces podrn recogerse en un solo tubo estril que contenga al menos 4 ml de medio de transporte, sto constituir una muestra conjunta. El peso del tejido de cada muestra deber ser de 0,5 gramos como mnimo.
17
1.2. Envo Los tubos con las muestras se colocarn en recipientes aislados (por ejemplo caja de poliestireno de paredes gruesas) con una cantidad suficiente de hielo o de bloques de enfriamiento para garantizar la refrigeracin de las muestras durante su traslado al laboratorio. Se evitar la congelacin. La temperatura de las muestras durante el transporte nunca deber exceder de 10C y en el momento de la recepcin todava deber haber hielo en el recipiente de transporte, o, alternativamente, uno o ms bloques de enfriamiento debern estar an helados parcial o totalmente. Las muestras debern estar en el laboratorio lo antes posible y nunca despus de que hayan transcurrido 48 horas desde la recogida de las muestras. Solo en casos excepcionales (cuando las muestras se recojan en zonas muy remotas) se podr iniciar el examen virolgico en un plazo de 72 horas desde la recogida del material, siempre que ste quede protegido con medio de transporte y se cumplan los requisitos de temperatura durante el transporte.
1.3. Identificacin Las muestras irn convenientemente identificadas y acompaadas de un informe en el que se registrarn: Nombre de la instalacin Direccin de la instalacin Propietario o Persona responsable Tipo de explotacin: de agua continental, marina,
18
Especie(s): Trucha arcoiris, trucha comn, etc. Naturaleza de la muestra: vsceras, fluido ovrico, alevines, etc. Causa de la investigacin: programa de vigilancia, diagnstico, etc. Sntomas clnicos Anlisis solicitados
2. PARA LA DETECCIN Y CONFIRMACIN DE AIS 2.1. Toma de muestras Si los signos clnicos se corresponden con la ISA o un inspector veterinario tiene cualquier otra razn para sospechar que el pez puede estar infectado, un mnimo de 10 peces tendrn que ser muestreados. Las muestras sern sobre las mortalidades recientes, ejemplares dbiles o de conducta anormal, siempre que sea posible. Si no hay nmero suficiente de ejemplares clnicamente afectados, entonces el nmero de muestras se complementar con peces sanos de las jaulas, tanques o estanques que muestren el mayor ndice de mortandad o con ms signos clnicos de enfermedad. 2.1.1. Muestras para examen histolgico Se tomarn de los peces recin muertos que presenten signos clnicos o hallazgos postmortem consecuentes con la presencia de la enfermedad. Se muestrear cualquier lesin interna o externa, y en cualquier caso, de cada pez se recogern muestras de hgado, rion medio, corazn y bazo usando un bistur y transfiriendolo a una solucin salina tampn con formol al 8-10% (vol/vol). Para asegurar la satisfactoria conservacin de los tejidos, la relacin entre el lquido fijador y el tejido debe ser de al menos 20:1. 2.1.2. Muestras para examen virolgico Se tomarn tejidos de todos los peces muestreados. Se recogern de cada pez trozos de hgado, rin anterior, corazn y bazo usando bistur esteril y se transferirn a tubos de plstico conteniendo 9 ml de medio de transporte, por ejemplo medio de cultivo celular con antibiticos. Es apropiada una combinacin de 12,5 g de fungizona, 200 UI de polymixina B y 200 g de kanamicina por ml, pero pueden utilizarse otras combinaciones de eficacia probada. Se pueden recoger tejidos de hasta 5 peces en un tubo conteniendo solucin de transporte y representar un muestra conjunta. El peso de tejido en una muestra ser de 1,00,5 gramos. 2.1.3. Muestras para exmenes de IFAT Se tomarn improntas de rin de los peces 2 horas despus de muertos. Se extraer del pez un trozo de rin medio usando pinzas y bistur estriles. El tejido ser desangrado en papel absorbente para eliminar el exceso de sangre, luego se presionar de manera repetida
19
contra un porta de cristal cubierto de poli-L-lisina. Las impresiones individuales deben de estar colocadas adyacentes, pero nunca superpuestas, para conseguir una monocapa de clulas contnua. La sangre y el tejido fluido son irrelevantes en esta prueba. Pero se debe evitar dejar la muestra de rin drenar en el papel absorbente ya que sto puede producir una coagulacin de sangre originando grandes cantidades de protenas sricas depositadas en el porta. Las improntas deben dejarse secar al aire y luego conservarlas en lugar fresco y seco si no se van a fijar inmediantemente. La fijacin de las improntas ha de realizarse dentro de las 72 horas de la toma de muestra. Alternativamente, las improntas pueden ser congeladas despues del secado y almacenadas a 20 C hasta un mes antes de la fijacin. 2.1.4. Muestras para anlisis hematolgico Los peces que muestran sntomas de anemia pueden ser anestesiados y se toman inmediatamente muestras de sangre con heparina para exmenes hematolgicos como la medida del hematocrito. 2.1.5. Muestras para anlisis de RT-PCR Se deben tomar tejidos de todos los peces muestreados. Se recoger del pez un trozo de rin anterior o medio utilizando un bistur estril e introducirlo en un microtubo de centrfuga conteniendo 1 ml de solucin conservante de RNA. El RNAlater (Ambion Inc.) es apropiado pero pueden utilizarse otras soluciones de eficacia probada. En un tubo con solucin conservante se pueden recoger muestras de hasta 5 peces constituyendo una muestra conjunta. El peso del tejido en una muestra ser aproximadamente de 0,5 g. Cuando los peces sean demasiado pequeos para obtener una muestra con el peso requerido se podrn recoger trozos de rin, corazn, bazo, hgado o ciegos pilricos , en este orden de preferencia, hasta alcanzar los 0,5 g. 2.2. Envo 2.2.1. Las muestras de sangre y tubos conteniendo tejidos para exmen virolgico o para anlisis de RT-PCR sern colocadas juntas en contenedores aislantes (por ejemplo cajas de poliestireno de paredes gruesas) con suficiente hielo o bloques refrigerantes para asegurar la refrigeracin de las muestras durante el transporte al laboratorio. Se debe evitar la congelacin y en el momento de la recepcin todava deber haber hielo en el recipiente de transporte, o, alternativamente, uno o ms bloques de enfriamiento debern estar an helados parcial o totalmente. En circunstancias excepcionales las muestras para RT-PCR y las de examen virolgico pueden ser congeladas instantneamente y transportadas al laboratorio a 20 C o por debajo. 2.2.2. Los portas para IFAT sern enviados en contenedores de portas con suficiente desecante para mantener las improntas secas y refrigeradas como arriba se describe.
20
2.2.3. Si los tejidos del pez se transportan en lquido lquido fijador para examen histolgico, debern enviarse en tubos a prueba de goteo y esos tubos dentro de contenedores a prueba de golpes como cajas de poliestireno de paredes gruesas. 2.3. dentificacin La misma que en el epgrafe de identificacin para muestras de SHV y NHI
21
DESINFECCIN ANEXO 5.2.2. (Del cdigo de la O.I.E para animales acuticos) DESINFECCIN DE PISCIFACTORAS Artculo 5.2.2.1. Recomendaciones generales Los mtodos de desinfeccin se escogen en funcin del tamao, del tipo y de las caractersticas de los materiales y lugares que hay que desinfectar. Con excepcin de la piel del personal y de los huevos, que exigen la utilizacin de productos que no sean corrosivos, las superficies que deben ser desinfectadas son por lo general de tela o tejido (ropa y redes), de material duro (plstico y cemento) o de material permeable (tierra y gravilla). La desinfeccin de las superficies permeables es ms difcil y ms larga. El Cuadro I indica los mtodos que hay que utilizar en funcin de cada uno de estos criterios. El empleo de mtodos qumicos exige medidas de proteccin del personal. La piel y los ojos es lo primero que hay que aislar de todo contacto con las sustancias peligrosas mediante el uso de ropa impermeable, botas, gafas y gorro. Las vas respiratorias deben protegerse con una mscara, y el operador no debe tocar ningn alimento antes de haberse lavado concienzudamente las manos. Finalmente, los productos deben almacenarse de modo que no presenten ningn peligro directo o indirecto para la vida de los animales/peces o de las personas. El material debe ser cuidadosamente limpiado antes de ser desinfectado. Artculo 5.2.2.2. Desinfeccin Vase el Cuadro 1. Artculo 5.2.2.3. Neutralizacin de los halgenos El cloro y el yodo son muy txicos para los animales acuticos y, para evitar accidentes graves por errores de manipulacin, se aconseja neutralizarlos con tiosulfato de sodio - cinco molculas de tiosulfato de sodio neutralizan cuatro de cloro. Las proporciones moleculares son las mismas para el yodo. Por lo tanto, para inactivar el cloro se necesitar una cantidad de tiosulfato equivalente a 2,85 veces la cantidad de cloro, expresada en gramos: Nmero de gramos de tiosulfato = 2,85 ( nmero de gramos de cloro.
22
Para el yodo, la cantidad de tiosulfato deber equivaler a 0,78 veces la cantidad de yodo, expresada en gramos: Nmero de gramos de tiosulfato = 0,78 ( nmero de gramos de yodo.
Se podr preparar tambin una solucin de tiosulfato al 1%, en cuyo caso los volmenes de neutralizacin sern los siguientes (en ml): 1. para el cloro:
2.
para el yodo:
Cuadro 1. Los desinfectantes y su modo de empleo Procedimie Indicaciones ntos Modo de empleo* Observaciones
Fsicos
El perodo de secado Secado durante 3 meses a puede ser reducido por una temperatura media de el uso de un 18C desinfectante qumico
Calor seco
Agentes patgenos de peces sobre cemento, Soplete, lanzallamas piedra, hierro y cermica
Calor hmedo
Agentes patgenos de Vapor a 100C o ms peces en tanques de los durante 5 minutos vehculos de transporte
10 mJ/cm
23
Virus de la necrosis pancretica infecciosa (NPI) y nodavirus (necrosis nerviosa 125-200 mJ/cm viral/retinopata y encefalopata virales) en el agua
Qumicos
xido de calcioa
Reponer agua y vaciar los estanques desinfectados manteniendo un pH <8,5 en las aguas residuales
Puede ser neutralizado 30 mg de cloro/litro; dejar con tiosulfato de sodio. Vase inactivar durante unos das recomendaciones especiales
Cianamida clcicaa
Formalina
24
Huevos embrionados
200 mg/litro
Ozono
Costoso
Mezcla: Hidrxido de sodio: 100 g Teepol: 10 g Hidrxido de calcio: 500 g Agua: 10 litros Pulverizar 1 litro/10 m Dejar que haga efecto durante 48 horas
El desinfectante ms activo de todos. El Ca (OH)2 colorea las superficies tratadas. El Teepol es un agente tensio-activo. Reponer agua controlando el pH
30 mg de cloro/litro. Dejar inactivar durante unos das o neutralizar con tiosulfato de sodio al cabo de 3 horas
200 mg de cloro/litro
25
Manos
Peligroso - Vase las precauciones en las recomendaciones generales. Las concentraciones indicadas son las de la sustancia activa. Nota bene: los productos qumicos deben estar aprobados para el uso prescrito y deben utilizarse de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
Estas enfermedades se transmiten a travs del agua, restos de materia orgnica, residuos de peces, mucus, sangre, aguas residuales de piscifactoras y actualmente se encuentran bajo investigacin otras vas de contaminacin como son algunos parsitos de los peces y las aves ictifagas. No obstante, la principal va de transmisin la constituye el movimiento de los peces enfermos y portadores asintomticos. Una vez confirmada la presencia de la enfermedad en la granja, se debern sacrificar todos los peces y ser retirados junto con el resto de peces muertos por la enfermedad y destruidos bajo supervisin oficial. Desinfectantes: El hipoclorito sdico (NaOCl) es un desinfectante efectivo frente al virus causante de la AIS. Como ocurre con la mayora de desinfectantes, la efectividad del hipoclorito sdico disminuye en presencia de materia orgnica, por ello la concentracin necesaria para garantizar una desinfeccin completa depender de la cantidad de materia orgnica presente, as como del mtodo de aplicacin (inmersin, aerosol,etc) Otros desinfectantes efectivos son: - Compuestos iodforos - Formaldehido - Acido Frmico - Hidrxido sdico - Calor - Ozono - Radiaciones ultravioletas Desinfeccin recomendada en piscifactoras: 1) AGUAS RESIDUALES: Calor: 60C-10 minutos; 70C-6 minutos; 80C-4 minutos Acido Frmico: pH < 3,5-8 horas; pH < 4-24 horas
26
Hidrxido sdico: pH > 12-24 horas 2) AGUAS CON RESTOS DE SANGRE O ANIMALES Hipoclorito sdico 1000 ppm-10 horas 3) EQUIPAMIENTO (Utensilios, maquinaria, vehculos, etc) Hipoclorito sdico 1000 ppm. Si se aplica en aerosol aumentar la dosis a 2000 ppm. Compuestos iodforos: 100 ppm-10 minutos. Si se aplica en aerosol aumentar la dosis a 200 ppm. Nota: los compuestos clorados y iodados son txicos para los peces y moluscos, se recomienda neutralizarlos con tiosulfato de sodio. Procedimiento de desinfeccin: 1) Antes de aplicar los productos desinfectantes, se deben eliminar todos los restos de suciedad y restos de materia orgnica mediante ceplillado y rascado. Los residuos obtenidos se deben eliminar en una zona apropiada. 2) Posteriormente se realizar un lavado previo con agua caliente y detergente 3) Finalmente, se realizar la desinfeccin con el producto elegido y en la concentracin y tiempo requeridos para garantizar la destruccin del agente. 4) El agua de los estanques contaminados debe ser retirada a una zona apropiada. NOTA: Cualquier material que sea retirado de la explotacin (residuos orgnicos, agua, material, vehculos, etc) deber ser desinfectado adecuadamente antes de su salida.
EN CUALQUIER CASO, TODOS LOS TRATAMIENTOS DE DESINFECCIN DEBEN SER REALIZADOS BAJO SUPERVISION OFICIAL Y DEBEN CONTAR CON LA AUTORIZACIN DE LOS RESPONSABLES LOCALES EN MATERIA DE MEDIO AMBIENTE.
27
NORMAS DE BIOSEGURIDAD Tal y como se ha comentado con anterioridad, el tratamiento ms eficaz para prevenir y combatir las enfermedades descritas en este Manual, es la aplicacin de unas estrictas medidas de higiene profilctica. Estas medidas deben intensificarse, si cabe, en caso de confirmarse la enfermedad, al objeto de evitar su difusin hacia otras zonas. Estas medidas debern aplicarse en las instalaciones, material de trabajo, vehculos, personal, etc. Es fundamental para garantizar el xito, que los procedimientos se realicen adecuadamente y se supervisen diariamente por personal cualificado. El principal objetivo de las medidas de bioseguridad es impedir la entrada en las instalaciones de los agentes patgenos y por supuesto, impedir su salida hacia otras zonas.
Se deber disponer de vados, pedilivios, etc, con una solucin de hipoclorito sdico, a la entrada del recinto y de cada instalacin. Todo el personal que trabaje en la granja deber disponer de indumentaria limpia y que facilite su desinfeccin al final de cada jornada. Asimismo, los visitantes que entren en el recinto debern ser equipados con indumentaria de un solo uso. El material utilizado deber ser desinfectado diariamente con alguno de los desinfectantes recomendados. El agua de los estanques deber ser tratada de acuerdo con los procedimientos establecidos en el apartado de desinfeccin. Asimismo, las aguas residuales y todos los desperdicios originados debern ser tratados para garantizar la destruccin de los agentes patgenos y sern retirados, o eliminados en una zona adecuada.
28
ENCUESTA EPIDEMIOLGICA
A. DATOS DE LA EXPLOTACIN: 1) Nombre de la explotacin: Localizacin: (si es posible, adjuntar mapa y croquis) 2) Nombre del propietario: Direccin: Telfono de contacto: 3) Nombre del veterinario de la explotacin: Telfono de contacto: 4) Nombre del responsable/encargado de la explotacin: Telfono de contacto: B. DATOS DE PRODUCCIN Y MANEJO: 5) Especie: 6) Nmero y carga total de: - Alevines: Porcentaje y viabilidad de alevines La reabsorcin del saco vitelino, ha sido correcta?: o SI - Juveniles: - Engorde: - Reproductores: Fecha del desove: La produccin de huevos, ha sido la esperada?: o SI Fecha de eclosin: Porcentaje de viabilidad de los huevos: 7) Produccin anual: C. DATOS DE LA ENFERMEDAD: 8) Indicar nmero, clase y edad de los afectados: - Alevines: - Juveniles: - Engorde: - Reproductores: Hay algn problema en la incubacin?: Existen problemas en el desove? 9) Fecha de aparicin del proceso:
o NO
o NO
29
10) Porcentaje de mortalidad habitual antes del proceso: Porcentaje de enfermos: Porcentaje de muertos: Nmero de bajas diarias: va en aumento o SI 11) Sntomas y lesiones observados en los peces enfermos:
o NO
12) Se ha diagnosticado algn otro proceso anteriormente: o SI Cul? o NO Quin?: Cundo? 13) Se ha realizado anteriormente al proceso actual, algn anlisis de laboratorio en el agua y/o en los peces?: o SI Labortatorio: Tipo de anlisis: Fecha: Resultado o NO 14) Se ha realizado algn tipo de tratamiento medicamentoso? o SI Tipo: Fecha: Dosis: Eficacia: o NO 15) Otras medidas: D. DATOS DE MOVIMIENTO PECUARIO: Entrada (Indicar datos de los ltimos tres meses) 16) Ha habido introduccin en la explotacin de: Peces o Huevos o Fecha: Procedencia: Cantidad: Posee calificacin sanitaria? o SI o NO 17) Los peces introducidos, han sido los primeros afectados?: o SI o NO
17) Conoce si ha habido algn problema sanitario en la piscifactoria origen de los huevos/peces?
30
Salida (Indicar datos de los ltimos tres meses) 18) Ha habido salida de la explotacin de: Peces o Huevos o Fecha Destino: Cantidad: E. DATOS SOBRE BIOSEGURIDAD EN LA EXPLOTACIN: 19) Explicar brevemente el mtodo de limpieza y desinfeccin. (vehculos, maquinaria, instalaciones...)
23) Que personal tiene habitualmente acceso a las instalaciones? 24) Los trabajadores, explotacin? o SI utilizan o NO indumentaria especfica dentro de la
25) Qu otro personal puede tener acceso a las instalaciones? (transportistas, veterinarios, etc)
31
F) DATOS DE INFRAESTRUCTURA: 26) Origen del agua (rio, pozo, manantial...) y distancia al punto de captacin:
27) Caudal: 28) Se hacen anlisis peridicos del agua? o SI o NO 29) se realiza reciclaje del agua? o SI : o NO Explicar brevemente el sistema: Cules? Resultados:
32) Proximidad a otras piscifactoras: (poner distancia en metros) Aguas arriba: Aguas abajo: 33) Ha sufrido la piscifactora alguna situacin anormal referente a: tormentas riadas fro excesivo calor excesivo contaminacin otros:
32
Alevines 1. Dimensiones (m ) 2. Naturaleza del fondo y paredes 3. Frecuencia de limpieza 4. Sistema de aireacin 5. N y peso medio de los peces 6. N comidas/da Cantidad alimento/da: Indice de transformacin
3
Juveniles
Engorde
Reproductores
NOTA: Este informe deber ir acompaado del esquema de la piscifactora, distribucin de los estanques y de las conducciones del agua, as como de los puntos de entrada y salida del agua y un croquis donde se seale la localizacin de los centros urbanos, explotaciones agropecuarias e industrias, con respecto a la piscifactora y al curso del ro.
33