Inclusiones

Las inclusiones citoplasmticas son acumulaciones temporales de sustancias diversas: sustancias de reserva, de secrecin celular y pigmentos; pero a diferencia de las vacuolas carecen de membrana. Entre las ms conocidas: grnulos de glucgeno, de grasa, etc. En bacterias existen dos tipos de inclusiones las nitrogenadas y las no nitrogenadas. -Las inclusiones nitrogenadas son:
GRNULOS DE CIANOFICINA

Es el nico material de reserva conocido de nitrgeno, los grnulos de cianoficina son acmulos de una protena formada por un polmero de arginina y cido -asprtico: consta de un ncleo de poliasprtico, en el que todos los carboxilos de las cadenas laterales estn unidos con L-arginina. La formacin de cianoficina no se produce a travs del mecanismo normal de sntesis de protenas, como demuestra el hecho de que se acumula en las clulas cuando la sntesis proteica ha sido detenida por tratamiento con cloranfenicol. Las bacterias que contienen este tipo de inclusiones son las cianobacterias, que cuando se acerca su fase estacionaria de crecimiento acumulan grandes grnulos de reservas nitrogenadas. . -Las inclusiones no nitrogenadas son:
GRNULOS DE POLIFOSFATOS (GRNULOS DE VOLUTINA, O GRNULOS METACROMTICOS)

Los grnulos de polifosfato reciben el nombre de "metacromticos" porque cuando se tien con los colorantes bsicos azul de toluidina o azul de metileno envejecido, se colorean de rojo. Se acumulan cuando algn otro nutriente distinto del fosfato se hace escaso, sobre todo cuando va desapareciendo el sulfato. En estas condiciones se acumula polifosfato de una forma masiva, cuando la clula se alimenta con sulfato las reservas de polifosfato desaparecen rpidamente. Adems de su funcin energtica se le han atribuido otras como sustituto del ATP en la fosforilacin de la glucosa y de algunas protenas, reserva de fosfato, etc. Son acmulos de polifosfato, polmeros lineales formados por decenas y centenas de residuos de ortofosfato unidos por enlaces fosfoanhdrido ricos en energa. Parece ser que la parte central de estos grnulos constituye un ncleo formado por lpidos y protenas. En algunos casos pueden constituir una fuente de energa, en sustitucin del ATP. Su sntesis se produce por adicin secuencial de restos de P a PP, actuando el ATP como donador: P-P + ATP ------> P-P-P + ADP; (-P-)n + ATP -----> (-P-)n+1 + ADP. Las primeras descripciones de polifosfato dan cuenta de la presencia de grnulos metacromticos en los microorganismos. Estas partculas teidas de rosa con colorantes bsicos fueron llamadas volutina y se los confunda con cidos nucleicos. Gracias a la microscopa electrnica los polifosfato se observaron como grnulos densos a los electrones que desaparecan rpidamente bajo el haz electrones, diferencindose as de la cromatina.

La degradacin de polifosfato, si ocurriera por la reaccin inversa, tambin sera una fuente de ATP para la clula, aunque esta funcin no ha sido establecida hasta el momento. Estos grnulos son principalmente citoplasmticos, aunque se han encontrado asociados a otras estructuras celulares. Tambin existen pequeas cantidades de poliP en las membranas plasmticas en complejo con poli-b-hidroxibutirato (PHB) y calcio. En eucariontes, los poliP se encuentran en distintos compartimentos celulares como vacuolas, pared celular y ncleo. Actualmente los polifosfato se han encontrado en todos los seres vivos en los que se ha buscado: bacterias, hongos, protistas, plantas y animales y tambin en arqueas. Los grnulos de polifosfatos tienen un interesante aspecto aplicado en la eliminacin de fosfatos en las aguas residuales de la cual se encarga Acinetobacter, que puede llegar a acumular el 24% de su biomasa bajo la forma de polifosfatos. Durante los periodos de aerobiosis, esta bacteria se asegura la energa a partir de sustratros extracelulares, y mientras tanto acumula grnulos de polifosfatos; en anaerobiosis, los niveles de ATP los mantienen a expensas de usar esos grnulos de polifosfato, por lo que el lodo libera fosfatos. Esto se aprovecha para eliminar concentraciones problemticas de fosfatos en aguas residuales, derivadas del uso de fertilizantes y detergentes (proceso "Renpho"). Otro ejemplo de bacteria sera Corynebacierium diphtheriae la bacteria que causa la difteria.
GLBULOS DE AZUFRE

Las inclusiones de azufre son acumulaciones de sulfuro de hidrgeno que es oxidado a azufre elemental (S0). En el citoplasma se acumula como glbulos muy refringentes y rodeados de envuelta protenica. Estos glbulos son transitorios, ya que el S0 se reutiliza y puede ser oxidado nuevamente para producir in sulfato, por tanto, las inclusiones desaparecen. Las inclusiones de azufre aparecen en dos grupos de bacterias que usan sulfuro de hidrgeno (SH2): las bacterias purpreas o rojas del azufre (que usan el SH2 como donador de electrones para la fotosntesis). bacterias filamentosas no fotosintticas como Beggiatoa o Thiothrix, que lo usan como donador de electrones para sus oxidaciones. Estas bacterias pueden depositar grnulos de azufre en el interior de la clula, donde le sirven como reserva de energa.
GRNULOS PHB Los granulos de PHB o poli--hidroxibutrico son acumulos de polister del cido -hidroxibutrico, estn rodeados de una envuelta proteica. Las bacterias producen estos grnulos como reserva osmtica de carbono cuando las condiciones de nitrgeno son escasas. Adems estos orgnulos suponen una ventaja ya que neutralizan un metabolito cido (el grupo carboxilo de cada unidad de -hidroxibutrico desaparece como tal, al intervenir en el enlace ster con la siguiente unidad). Una clulas puede tener de 8 a 12 grnulos y estos miden entre 0.2-0.7 mm de dimetro, estn compuestos por una la envuelta proteica cuyo grosor es de 3-4nm. Puede representar el 80% del peso de la clula. Estos grnulos son visibles a microoscopio ptico en fresco, debido a su elevado ndice de refringencia; pueden teirse mediante negro-sudn. El Azotobacter chroococcum y Rhodospirillum son especies capaces de producir PHB a diferentes pesos moleculares, al igual que es posible la produccin de PHB en zonas localizadas dentro de la planta.

SINTESIS DE PHB EN AZOTOBACTER. Se produce por una rama lateral de la ruta de sntesis de los cidos grasos, a travs de -hidroxibutiril-CoA. En los grnulos, el polmero queda asociado a un sistema complejo que ser utilizado en la degradacin, pero este sistema habr de activarse antes. En esta bacteria el polmero se sintetiza mediante un camino metablico, en el que intervienen tres enzimas: -cetotiolasa, que condensa dos molculas de acetil- CoA para formar acetoacetil-CoA, acetoacetil-CoA reductasa que convierte el compuesto en 3-hidroxibutiril-CoA, y una polimerasa (polimerizacin de monmeros). Este camino metablico es el que utilizan la mayora de bacterias (R.eutropha). En azotobacter estas enzimas estan codificadas por los genes phaB, phaA y phaC. Adems hay otras protenas involucradas en la regulacin de la biosisntesis del polmero y la formacin de los grnulos, una de ellas es fasinas (grnulos de PHA).

DEGRADACION DE PHB. 1. La degradacin comienza con la actuacin de un enzima proteoltico que desorganiza la envuelta proteica de los grnulos; 2. Los grnulos as "activados" sufren ahora la accin de una despolimerasa, que va generando dmeros de hidroxibutrico. 3. Actuacin de una dimerasa especfica, que genera -hidroxibutrico a partir de los steres dimricos. Por ejemplo: En las especies de Bacillus constituye la fuente de carbono y energa al inicio de la esporulacin.
Ciertas cepas de Ralstonia eutropha, cuando crecen en glucosa y propinico producen polmeros aleatorios de unidades de b-hidroxibutrico y b-hidroxivalrico (=3-hidroxipentanoico). Existen interesantes perspectivas de aprovechamiento econmico de estos polmeros, ya que los PHA se comportan como excelentes termoplsticos biodegradables. Por ejemplo, la empresa britnica ICI tiene patentados procesos industriales para fabricar PHA donde casi el 90% de las unidades son de hidroxivalrico, que da un polmero flexible comercializado con el nombre de Biopol . Los polmeros a base de 4- o 5-hidroxibutrico y 3-hidroxibutrico son ms largos, ms elsticos y ms biodegradables (se han empleado en la fabricacin de envases). Sintesis de PHB en Azotobacter.

Grnulos de polisacridos.
Son acumulaciones de glucanos 14, con ramificaciones en 16, se trata principalmente almidn o glucgeno (segn especies). Los granulos de glucgeno estn rodeados por una capa externa, donde se encuentran enzimas que intervienen en la sntesis y degradacin. Los grnulos de glucgeno que se encuentran aislados se les denominan partculas . Se depositan de modo ms o menos uniforme por todo el citoplasma. Cuando las bacterias crecen en medios con limitacin de fuente de nitrgeno y abundantes fuentes de carbono, se detiene prcticamente la sntesis de protenas y cidos nucleicos; la mayor parte de carbono es asimilado y se convierte en material de reserva.

En caso contrario al pasar las clulas a un medio rico en N, pero carente de fuente de C, estas inclusiones se usan como fuente interna de C para la sntesis de cidos nucleicos y protenas. Estas inclusiones actan, pues, como sistemas de almacenamiento de carbono osmticamente inertes (la clula puede albergar grandes cantidades de glucosa que, si estuvieran como molculas libres dentro del citoplasma, podran tener efectos osmticos muy negativos). Sntesis de los grnulos de glucgeno. El carbono necesario para la sntesis de estos grnulos se obtiene de la glucosa, que esta es fosforilada a glucosa 6-fosfato por la enzima hexoquinasa o glucoquinasa (hepatocitos). Esta reaccin consume ATP. Esta glucosa -6P se convierte en glucosa-1P por la accin de la fosfoglucomutasa. El producto de esta reaccin se convierte en UDP-glucosa por la accin de la UDP-glucosa pirofosforilasa. La UDP- glucosa es el dador de residuos de glucosa en la reaccin catalizada por la glucgeno sintetasa, esta ser la encargada de transferir del residuo glucosilo desde la UDP-glucosa a un extremo no reductor de la molcula ramificada de glucgeno. La glucgeno sintetasa no puede formar los enlaces de las ramificaciones 16, la encargada de formas estos enlaces es el enzima ramificador de glucgeno. Degradacin de los grnulos de glucgeno. Intervienen tres enzimas: Glucgeno fosforilasa Enzima desramificador del glucgeno Fosfoglucomutasa La glucgeno fosforilasa cataliza la reaccin en la que el enlace glucosdico 14 que une dos glucosas en un extremo no reductor del glucgeno es atacado por un fosfato inorgnico (Pi), eliminado el residuo de glucosa terminal en forma de -D- glucosa 1- fosfato.

El glucgeno fosforilasa acta repetitivamente sobre los extremos no reductores de las ramas de glucgeno hasta que se halla a 4 residuos de glucosa del punto de ramificacin, all detiene su accin. La posterior degradacin slo continuar despus de que la accin de la enzima desramificante (oligo 14 a 16 glucantransferasa).

Para observarlas se recurre a la tincin con una solucin de I2 + IK (como el lugol) glucgeno: aparece de color pardo-rojizo; almidn (amilopectina): color azul

Clorosomas
Los clorosomas son estructuras caractersticas de las bacterias verdes del azufre, y algunas bacterias fottrofas anoxignicas. Viven en ambientes acuticos en ausencia de oxgeno (son anaerobias estrictas, salvo en alguna excepcin) donde abunda el sulfuro (SH2) Morfologa: son cuerpos alargados constituidos por agregados de bacterioclorofilas rodeados por una fina membrana sin estructura de unidad de membrana (composicn galactolipdica, con protenas unidas a ella). Asimismo, est unido a la membrana citoplasmtica en la periferia celular. La longitud es de 100-200 nm, el ancho de 50-100 nm. Funcin: actan como una estructura captadora de luz muy eficiente (complejo de antena fotosinttico), pues necesitan muy poca luz para mantener las actividades fotosintticas, lo que permite que proliferen a mucha profundidad. Las bacterioclorofilas presentes en estos orgnulos son siempre las bacterioclorofilas c, d o e, que actan solo en reacciones de captacin de luz. Los estudios sobre transferencia de energa han demostrado que la energa luminosa absorbida en el clorosoma por las bacterioclorofilas c, d o e se canaliza hacia la bacterioclorofila a, que se encuentra localizada en la membrana citoplasmtica. En ella la energa fotosinttica es transformada en ATP. Ciertas bacterias del azufre pueden formar estrechas asociaciones en pareja con bacterias quimioorganotrofas, denominadas consorcios. En estas asociaciones ambos organismos resultan beneficiados. El fototrofo, llamado epibionte, se une fsicamente a la clula no fototrfica , pero no est claro cul es el mecanismo de adhesin. Algunas bacterias verdes del azufre son: Chlorobacterium tepidum, Chloracidobacterium thermophilum(estas ltimas son bacterias aerobias fotosintticas, constituyen una excepcin entre las bacterias que presentan clorosomas. Hay tambin bacterias del azufre de color marrn, debido a la presencia de bacterioclorofila e y carotenoides que hacen que las clulas en suspensin se vean de color marrn. CARBOXISOMAS Los carboxisomas constituyen cuerpos polidricos rodeados por un envuelta proteica. Se encuentran en bacterias fotoauttrofas, y quimiolitoauttrofas. Funcionan como reservas de energa, acumulan la enzima ribulosa bifosfato-carboxilasa, necesaria para realizar el ciclo de calvin. MAGNETOSOMAS Presentes en bacterias acuticas aerobias flageladas, y en bacterias microaerfilas. Todas las bacterias con magnetosomas son gram-negativas, poseen fimbrias o un glucoclix de polisacrido para adherirse y pueden ser bacilos o cocos. Estas bacterias se encuentran en sedimentos en todo el mundo. Morfologa: En el interior de estos orgnulos hay partculas de cristales del material frrico magnetita (Fe3O4) con forma de cubo o de octaedro, que se disponen de forma paralela al eje longitudinal de la clula (tamao de 50- 90 nm). Rodeados por una membrana no unitaria. Esta membrana contiene fosfolpidos, protenas y glicoprotenas. Lo ms probable es que la membrana tenga como funcin precipitar el hierro (introducido en la clula en forma soluble por agentes quelantes) en forma de Fe3O2 cuando tiene lugar la formacin del orgnulo. La morfologa de los magnetosomas es especfica para cada especie. Funcin: Las clulas con magnetosomas funcionan como un dipolo magntico permanente sometido a cualquier influencia de campo magntico y permiten la orientacin y el desplazamiento segn el campo magntico de terrestre, fenmeno conocido como magnetotaxis. Hay que resaltar

que no utilizan los sistemas sensores propios de las bacterias quimiotcticas o fototcticas. El alineamiento de los magnetosomas en la clula es lo que confiere propiedades magnticas a la clula que permiten su orientacin en una direccin concreta. Se especula que en muchas bacterias con magnetosomas el crecimiento es ptimo a poca cantidad de O2, por lo que especula que pueden servir para guiar a las clulas al fondo de ambientes acuticos, donde el O2 es ms escaso.Adems, se ha visto In vitro los magnetosomas pueden descomponer perxido de hidrgeno, que se forma en la clula en presencia de oxigeno y suele ser degradado por la enzima catalasa antes de que alcance concentraciones txicas. Los investigadores especulan sobre la posibilidad de que los magnetosomas protejan in vivo a la clula de la acumulacin de perxido de hidrgeno. Algunas bacterias que presentan magnetosomas: Magnetospirillum magnetotacticum 1-Ribosomas: Los ribosomas son complejos macromoleculares de protenas y cido ribonucleico (ARN) que se encuentran en el citoplasma, de las bacterias. Son un complejo molecular encargado de sintetizar protenas a partir de la informacin gentica que les llega del ADN transcrita en forma de ARN mensajero (ARNm). En las clulas eucariotas los ribosomas son sintetizados en los nucleolos, En un experimento: En procariotas los estudios se realizaron sobre E.Coli, a la cual se la haca crecer en un medio rico en uracilo rico en carbono 14. Se comprob que el material que formaba parte de los ribosomas aparecen dos tipos de partculas de coeficientes 8 S y 20 S. Al poco tiempo desaparecan y aparecan otras de 26 S y 40 S, estudiandolas se vio que de 26 S tenan un ARN de 16 S y 20 S respectivamente. Al poco tiempo desaparecan y aparecan las subunidades mayor y menor de los ribosomas de clulas procariotas. Las molculas de ARNr forman el 65% del ribosoma y las protenas representan el 35%. Las molculas de ARN ribosmico son ricas en adenina y guanina y forman una hlice alrededor de las protenas Los ribosomas de las clulas procariotas son los ms estudiados. Son de 70 S y su masa molecular es de 2.500 kilodalton. Las molculas de ARNr forman el 65% del ribosoma y las protenas representan el 35%. Las molculas de ARN ribosmico son ricas en adenina y guanina y forman una hlice alrededor de las protenas. Los ribosomas estn formados por dos subunidades: * Subunidad mayor: es 50 S. Est formada por dos molculas de ARN * Subunidad menor: es de 30 S y tiene una molcula de ARNr de 16 S adems de 21 protenas. En cambio, en las clulas eucariotas, los ribosomas son 80 S. Su peso molecular es de 4.200 Kd. Contienen un 40% de ARNr y 60% de protenas. Al igual que los procariotas se dividen en dos subunidades de distinto tamao: * Subunidad mayor: es 60 S. Tiene tres tipos de ARNr y tiene 49 protenas. * Subunidad menor: es 40 S. Tiene una sola molcula de ARNr 18 S y contiene 33 protenas. 2-Tilacoides: Lo poseen algunas clulas procariotas,quimiosintticas fotosintticas anaerobias y fotosintticas aerobias, pueden conectar con la membrana plasmtica mediante una especie de tubos como en las bacterias purpreas, o en otros casos son membranas internas independientes como en las cianobacterias. Las membranas de los tilacoides contienen sustancias como los pigmentos fotosintticos (clorofila, carotenoides, xantfilas)

Su funcin es la de llevar al cabo la fotosntesis en las bacterias, su biognesis mediante una invaginacin de la membrana citoplasmtica, se cree que su formacin pueden estar relacionadas con los mesosomas. 3-Vesicula de gas: Aparecen en bacterias inmviles (sin flagelos) de medios acuticos tanto dulces como marinos pero en aguas no corrientes. La funcin se relaciona con la flotabilidad que les permite un movimiento hacia arriba o abajo, lo que les permite buscar el lugar idneo dentro de la columna de agua. Son estructuras huecas, proteicas, que pueden aparecer en n variable. Son impermeables a los solutos y permeables a los gases. La presin dentro de estas vesculas est en torno a 1 atm. mientras que la que hace el citoplasma es de 5 atm. Esto explica que la membrana sea proteica, rgida y dura para aguantar. Estas vesculas, al estar cargadas de gas consiguen bajar en un porcentaje notable la densidad de la clula, por lo tanto sta se eleva. Si las vesculas suben de densidad, la clula baja. Las vesculas ni se hinchan ni se deshinchan. Hay o no hay. Son sensibles a la P. hidrosttica. No se regeneran. Las vesculas de gas estn constituidas por dos tipos de protena: la mayoritaria GvpA es una pequea protena rgida y muy hidrfoba. Su rigidez est en la base del hecho de que las vesculas y vacuolas de gas aguanten presiones externas. La protena minoritaria GvpC tiene como funcin reforzar las vesculas de gas.

BiBliografia
Roger Y. Stanier; John L. Ingraham; Mark L. Wheelis; Page R. Painter. 1992. Microbiologa 2 edicin. Espaa. Editorial Revert. ISBN 84 -291- 1898 3.

BIOLOGIA.EDU.AR http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro6.htm http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/07citoplasma.htm#_Toc55636985 http://www.bioblogia.com/polifosfatos/