Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 37, n. 3, set./dez.

, 2001

Doseamento do cloridrato de sertralina por cromatografia lquida de alta eficincia e volumetria em meio no-aquoso
Andra Ins Horn Adams, Ana Maria Bergold*
Departamento de Produo de Matria-prima, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul

*Correspondncia: A.M. Bergold Departamento de Produo de Matria-prima Faculdade de Farmcia UFRGS Av. Ipiranga, 2752 , CEP 90610-000 Porto Alegre/RS E-mail: bergold@farmacia.ufrgs.br

Foram desenvolvidos mtodos aplicando-se a volumetria em meio no-aquoso (VMNA) e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) para o doseamento do cloridrato de sertralina como matria-prima, cpsulas e comprimidos. O mtodo cromatogrfico foi devidamente validado e, para tanto, empregou-se fase mvel composta por acetonitrila:tampo fosfato de sdio pH 5,5 (7:3), coluna RP-8 LiChrospher 100, 5 m (125 mm x 4 mm), vazo de 1,0 mL/min e deteco no UV a 270 nm. A taxa mdia de recuperao do mtodo por CLAE aplicado s formulaes foi de 99,18% e os coeficientes de variao encontrados variaram entre 0,32 a 1,15% (volumetria) e 0,19 a 1,04% (CLAE). O mtodo volumtrico apresentou resultados semelhantes aos da CLAE na anlise do frmaco como matria-prima e em cpsulas manipuladas.

Unitermos: Cloridrato de sertralina Volumetria em meio no-aquoso CLAE Medicamentos

INTRODUO
O cloridrato de sertralina um composto pertencente classe dos denominados inibidores seletivos da recaptao da serotonina (SSRIs), que representam alternativa aos compostos tricclicos no tratamento da depresso. O cloridrato de sertralina o enantimero S-cis de um tetraidronaftaleno dissubstitudo (Figura 1).

FIGURA 1 - Cloridrato de sertralina. Em comparao imipramina, a resposta teraputica similar, porm a sertralina melhor tolerada, com menor

incidncia de descontinuidade do tratamento (Keller et al., 1998; Miller et al.,1998). Tem sido apontado como o frmaco de escolha para o tratamento da depresso em idosos, por no apresentar os efeitos adversos relacionados a outros antidepressivos e por apresentar menor risco de interaes medicamentosas mediadas pelo complexo enzimtico do citocromo P450 (Preskorn, 1993). Ao contrrio dos outros frmacos do grupo, no necessrio ajuste de dose para o tratamento de idosos (Preskorn, Lane, 1995). O frmaco tem apresentando bons resultados no tratamento de curta-durao da sndrome do pnico (Londborg et al., 1998; Pollack et al., 1998), no tratamento de distrbios obsessivo-compulsivos (Greist et al., 1995), na terapia medicinal da ejaculao precoce (Biri et al, 1998) e da tenso pr-menstrual (Freeman et al., 1996). Apesar do uso crescente, os cdigos oficiais no apresentam monografias do cloridrato de sertralina. Johnson e Chang (1996) relacionaram mtodos espectrofotomtricos, potenciomtricos e cromatogrficos aplicveis anlise do frmaco como matria-prima e em preparaes farmacuticas, bem como mtodos por CLAE e

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cromatografia gasosa para anlise do frmaco em fluidos biolgicos. O presente trabalho objetiva o desenvolvimento de mtodos facilmente exeqveis e devidamente validados para a anlise do frmaco como matria-prima e em produtos formulados.

MATERIAL E MTODOS
O teor do cloridrato de sertralina foi determinado por volumetria em meio no-aquoso (VMNA), com deteco do ponto final potenciometricamente ou com indicadores. Desenvolveu-se e validou-se um mtodo de doseamento via cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), para fins de comparao de resultados. Amostras Analisaram-se duas matrias-primas de cloridrato de sertralina provenientes de fornecedores de farmcias de manipulao (sertra1 e sertra2), dois lotes de cpsulas preparadas em farmcias de manipulao (sertralina 50 mg, excipientes q.s.p. 301,65 mg e 210,78 mg) e comprimidos disponveis comercialmente (sertralina 50 mg, excipientes q.s.p. 205,14 mg). A substncia de referncia, com pureza declarada de 100,46 % e os comprimidos foram gentilmente doados pelo Laboratrio Biosinttica (Brasil). Reagentes e solues Os reagentes usados na VMNA foram de grau analtico e as solues indicadoras e volumtrica foram preparadas conforme descrito na Farmacopia Brasileira 4 ed.(1988). Para a preparao do diluente e da fase mvel para CLAE, utilizaram-se acetonitrila grau CLAE (OMNISOLV) e gua purificada por sistema Millipore. O diluente constituiu-se por mistura de acetonitrila:gua (8:2, v/v). Como fase mvel utilizou-se soluo de acetonitrila:tampo fosfato de sdio, pH 5,5 (7:3, v/v). Para a preparao da soluo tampo foram pesados 6,9 g de fosfato de sdio monobsico e 0,15 g de fosfato de sdio dibsico. Aps dissoluo em gua q.s.p. 1 000 mL, ajustou-se o pH da soluo para 5,5 0,1. Volumetria em meio no-aquoso Matria-prima Pesaram-se exatamente quantidades de 180 a 200 mg de matria-prima (amostras sertra1 e sertra2), as quais foram dissolvidas em 50 mL de cido actico glacial.

Adicionaram-se 3 mL de acetato mercrico a 6 % em cido actico glacial. Titulou-se com cido perclrico 0,05 M e o ponto de equivalncia foi determinado potenciometricamente (eletrodo de vidro/calomelano). Para determinao do ponto final com os indicadores cloreto de metilrosanilnio SI (2 gotas) ou 1-naftolbenzena SI (5 gotas), o ponto final da reao foi indicado pela mudana de cor de violeta a verde-esmeralda e de amarelo a verde, respectivamente (1,0 mL de cido perclrico 0,05 M equivale a 17,135 mg de cloridrato de sertralina). A amostra sertra1 foi tambm analisada por outro mtodo empregando a VMNA, no qual utilizou-se como solvente 2 mL de cido frmico em 50 mL de anidrido actico e como titulante cido perclrico 0,05 M. O ponto final da titulao foi determinado potenciometricamente (eletrodo de vidro/calomelano) ou com o indicador 1-naftolbenzena. Cpsulas e comprimidos Determinou-se o peso mdio de 20 unidades. Em erlenmeyer, foram exatamente pesadas quantidades equivalentes a aproximadamente 170 mg de sertralina. Adicionaram-se 35 mL de cido actico glacial previamente neutralizado e agitou-se por 10 minutos. Filtrou-se a soluo em filtro de papel, lavando-se o erlenmeyer e o filtro com 4 pores de 5 mL do mesmo solvente ou at que sua cor no alterasse em contato com os materiais. Ao filtrado adicionaram-se 3 mL de acetato mercrico a 6 % em cido actico glacial. Titulou-se com cido perclrico 0,05 M. O ponto de equivalncia foi determinado potenciometricamente (eletrodo de vidro/calomelano) e o ponto final com o indicador 1-naftolbenzena SI (1,0 mL de cido perclrico 0,05 M equivale a 15,312 mg de sertralina). Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) Utilizou-se cromatgrafo lquido Shimadzu LC-10 AD com injetor manual Reodyne , loop de 20 mL, detector UV/Vis Shimadzu SPD-10 AV ajustado em de 270 nm e integrador eletrnico Shimadzu C-R6A para estimar a rea dos picos. A coluna usada foi RP-8 LiChrospher 100 (125 mm x 4 mm, partculas 5 m) e a vazo da fase mvel foi de 1,0 mL/min. A soluo diluente e a fase mvel foram preparadas no dia da anlise e desgaseificadas antes do uso. As amostras e a fase mvel foram filtradas atravs de filtro de nylon 0,45 m com 13 e 47 mm de dimetro (SUPELCO). Matria-prima Quantidades exatas das matrias-primas e da substncia de referncia foram pesadas e solubilizadas com o

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diluente de modo a obter uma soluo contendo 1,5 mg/mL de cloridrato de sertralina. Cpsulas e comprimidos Determinou-se o peso mdio de 20 cpsulas ou comprimidos. Amostras dos comprimidos pulverizados ou do contedo das cpsulas foram transferidas para bales de 25,0 mL. Adicionaram-se 15 mL do diluente, agitou-se mecanicamente por 10 minutos e completou-se o volume com a mesma soluo, a fim de obter soluo com concentrao de 0,75 mg/mL. Teste de recuperao Para avaliar a eficincia do procedimento de extrao do cloridrato de sertralina das amostras de comprimidos e cpsulas, quantidades conhecidas da substncia de referncia (0,6, 0,75 e 0,9 mg/mL) foram adicionadas s solues da amostras contendo 0,75 mg/mL de cloridrato de sertralina. A percentagem de recuperao foi calculada por meio da expresso descrita pela AOAC INTERNATIONAL (Association of Official Analytical Chemists International, 1990). Linearidade e preciso A linearidade do mtodo foi determinada por meio de dois experimentos em dias diferentes, sendo a curva de calibrao construda na faixa de 0,5 a 2,5 mg/mL. Os resultados foram avaliados estatisticamente por ANOVA. A preciso foi avaliada com relao aos parmetros de repetibilidade e preciso intermediria.

RESULTADOS E DISCUSSO
O cloridrato de sertralina no possui monografia nos cdigos oficiais e a literatura cientfica sobre o controle de qualidade deste frmaco reduzida. Visando a suprir esta carncia foram estudados mtodos de anlise compatveis com as caractersticas estruturais do frmaco. Halogenetos, como o cloridrato de sertralina, podem ser quantitativamente determinados com cido perclrico em meio actico; entretanto, o ponto de viragem com indicadores s pode ser observado nitidamente utilizandose acetato mercrico adicionado ao solvente cido actico. Outra alternativa a solubilizao do frmaco em soluo de anidrido actico e cido actico (The Pharmacopoeia of Japan, 1981) ou em soluo de cido frmico e anidrido actico. Os indicadores recomendados so Sudam III e IV e 1-naftolbenzena (Europisches, 2000).

Neste estudo empregaram-se dois mtodos: o que utiliza acetato de mercrio adicionado ao cido actico e o mtodo que utiliza mistura de cido frmico e anidrido actico como solvente. Porm, devido pouca quantidade de amostra, o segundo mtodo foi empregado apenas para a amostra sertra1. O mtodo por CLAE foi desenvolvido e validado (Adams, Bergold, 2001) a fim de comparar os resultados obtidos pela VMNA, pois a exatido pode ser determinada pela comparao dos resultados do mtodo que est sendo proposto com os de um segundo mtodo bem caracterizado (The United States Pharmacopeia, 2000). Com base na varredura do espectro no UV, o para deteco foi ajustado em 270 nm, a fim de evitar interferncia de excipientes e solventes na anlise. O mtodo mostrou-se linear na faixa de 0,50 a 2,50 mg/mL, com um coeficiente de correlao de 0,9999 e com a seguinte equao da reta: y = 124136 + 3491562x. Os cromatogramas mostram a ausncia da interferncia dos excipientes no mtodo analtico (Figura 2). Os resultados do teste de recuperao encontram-se descritos na Tabela I. Verifica-se que a percentagem mdia de recuperao do cloridrato de sertralina em comprimidos e cpsulas foi 99,18% (n=18), confirmando a exatido do mtodo. O sistema cromatogrfico proposto apresentou nmero de pratos tericos em torno de 2 600, fator de cauda prximo a 1,25, e o coeficiente de variao entre injees foi inferior a 1,0%, valores que cumprem as especificaes (FDA, 1994). O tempo de reteno do cloridrato de sertralina foi de aproximadamente 3,8 minutos, proporcionando anlises com tempo de durao adequado. Com base em todos os fatores abordados, considerou-se o mtodo por CLAE validado e, portanto, adequado para comparao dos resultados fornecidos pela VMNA. Os resultados obtidos no doseamento das matriasprimas por VMNA e CLAE esto representados na Tabela II. Uma vez que o ponto final do mtodo volumtrico com anidrido actico empregando indicador foi de difcil deteco, so apresentados apenas os resultados obtidos potenciometricamente. A anlise estatstica dos resultados demonstrou no haver evidncias de diferenas significativas entre os mtodos de anlise (p< 0,05) para sertra2. Para a amostra sertra1 observou-se diferena significativa entre os mtodos. Procedeu-se ao teste de Tukey, que identificou como sendo significativa a diferena entre as mdias obtidas pela VMNA com anidrido actico e pela VMNA com ponto final potenciomtrico, bem como com indicador 1naftolbenzena (p< 0,05). Porm, todos os mtodos testa-

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FIGURA 2 Cromatogramas do cloridrato de sertralina: substncia de referncia (A), cpsulas manipuladas (B) e comprimidos (C). Condies: fase mvel, acetonitrila:tampo fosfato de sdio, pH 5,5 (7:3); vazo, 1,0 mL/min; coluna, RP-8 LiChrospher 100, 5 m (125 mm x 4 mm); deteco em 270 nm; velocidade do papel 0,3 cm/min; concentrao 1,5 mg/mL. TABELA I - Recuperao de soluo padro de cloridrato de sertralina adicionada s amostras de comprimidos (Comp) e cpsulas manipuladas (Cap1, Cap2) e analisadas por CLAE Amostra Comp Quantidade adicionada (mg/mL) 0,60 0,75 0,90 0,60 0,75 0,90 0,60 0,75 0,90 Quantidade encontrada (mg/mL) 0,59 0,74 0,89 0,59 0,77 0,92 0,59 0,73 0,88 Recuperao* (%) 98,33 98,66 98,89 98,33 102,67 102,22 98,33 97,33 97,78 CV (%) 0,63 0,75 0,48 0,24 1,09 0,31 0,48 0,09 1,15

Cap1

Cap2

*Mdia de 2 determinaes dos no foram estatisticamente diferentes ao mtodo por CLAE, considerado como mtodo de referncia. Para concluses definitivas quanto a VMNA em anidrido actico, seria necessrio analisar outras matriasprimas. Pode-se observar a preciso dos mtodos pelos baixos valores dos coeficientes de variao apresentados. Convm ressaltar que a mdia expressa no doseamento por CLAE refere-se aos teores obtidos em trs dias diferentes, distribudos ao longo de um ms.

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TABELA II - Teor de cloridrato de sertralina determinado por VMNA e CLAE para matrias-primas (sertra1 e sertra2 Amostras SERTRA1 Teor (%) CV (%) SERTRA2 Teor (%) CV (%) VMNA (P) 98,36 0,44 99,86 0,41 VMNA (CV) 98,95 1,09 99,95 0,59 VMNA (NB) 98,36 1,15 99,73 0,33 VMNA (AA) 99,98 0,54 CLAE 98,92 1,04 99,64 0,88

n = 7 para VMNA e n = 9 para CLAE. (P): potenciomtrico; (CV): cristal violeta; (NB): naftol-benzena; (AA): anidrido actico. Na Tabela III so apresentados os resultados obtidos no doseamento do cloridrato de sertralina de cpsulas manipuladas e comprimidos. TABELA III - Teor de sertralina base determinado por VMNA e CLAE para comprimidos (comp) e cpsulas (cap1 e cap2) Amostras COMP Teor (%) CV (%) CAP 1 Teor (%) CV (%) CAP 2 Teor (%) CV (%) VMNA (P) 101,19 0,32 99,40 0,87 98,83 0,82 VMNA (NB) 101,53 0,59 99,65 0,49 98,91 0,88 CLAE

CONCLUSES
Os mtodos propostos demonstraram ser precisos e exatos, pelos baixos coeficientes de variao e pela porcentagem de recuperao apresentados. Para a anlise de matrias-primas e cpsulas manipuladas, tanto os mtodos volumtricos quanto o de CLAE mostraram-se adequados. Porm, por se tratar de tcnica com metodologia muito simples, rpida e vivel economicamente, a VMNA representa uma alternativa para o controle de qualidade do cloridrato de sertralina como matria-prima e cpsulas preparadas em farmcias de manipulao e laboratrios de pequeno porte, desde que as cpsulas no contenham excipientes que interfiram no doseamento. O mtodo volumtrico no se mostrou adequado para o doseamento dos comprimidos utilizados neste estudo.

99,01 0,19 100,14 0,81 99,37 0,89

ABSTRACT
Sertraline hydrochloride assay by high performance liquid chromatography and nonaqueous titrimetry Volumetric and high-performance liquid chromatographic assays for the determination of sertraline hydrochloride in pharmaceutical preparations and raw material were developed. The HPLC method was validated using: a RP8 LiChrospher 100, (125 mm x 4 mm, 5 m) column; mobile phase constituted of acetonitrile: sodium phosphate buffer, pH 5.5 (7:3, v/v); ultraviolet detection at 270 nm and flow rate of 1.0 mL/min. The average recovery of the HPLC method was 99.18% and the coefficients of variation were between 0.32 and 1.15% (volumetric assay) and 0.19 and 1.04% (HPLC assay). The volumetric assay showed to be adequate to the analysis of the sertraline hydrochloride content in raw material and capsules manufactured in pharmacies.

n = 5 para todas as amostras avaliadas. (P): potenciomtrico; (NB): naftol-benzena. A anlise estatstica dos resultados (ANOVA) demonstrou no haver evidncias de diferenas significativas entre os mtodos empregados no doseamento das cpsulas manipuladas (p< 0,05), as quais continham, como excipientes, aerosil e lactose. (F calculado: cap1 = 1,27; cap2 = 0,59. Fcrtico = 3,88). Os resultados obtidos no doseamento volumtrico da especialidade farmacutica foram superiores aos obtidos por CLAE (p< 0,05), o que pode ser atribudo interferncia dos excipientes, que provavelmente foram solubilizados pelo cido actico glacial e, assim, no foram totalmente retidos no processo de filtrao. (Fcalculado = 56,04 > Fcrtico = 3,88).

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A. I. H. Adams, A. M. Bergold

UNITERMS: Sertraline hydrochloride assay. Nonaqueous titrimetry. HPLC assay. Pharmaceutical preparations.

AGRADECIMENTOS
Ao CNPq, pelo auxlio financeiro, e ao Laboratrio Biosinttica, pela doao da substncia de referncia e comprimidos.

KELLER, M. B., GELENBERG, A. J., HIRSCHFELD, R. M., RUSH, A. J., THASE, M. E., KOCSIS, J. H., MARKOWITZ, J. C., FAWCETT, J. A., KORAN, L. M., KLEIN, D. N., RUSSEL, J. M., KORNSTEIN, S. G., MCCULLOUGH, J. P., DAVIS, S. M., HARRISON, W. M. The treatment of chronic depression, part 2: a doubleblind, randomized trial of sertraline and imipramine. J. Clin. Psychiatry, Memphis, v.59, n.11, p. 598-607, 1998. LONDBORG, P. D., WOLKOW, R., SMITH, W. T., DUBOFF, E., ENGLAND, D., FERGUSON, J., ROSENTHAL, M., WEISE, C. Sertraline in the treatment of panic disorder. A multi-site, double-blind, placebo-controlled, fixed-dose investigation. Br. J. Psychiatry, London, v. 153, p. 54-60, 1998. MILLER, I. W., KEITNER, G. I., SCHATZBERG, A. F., KLEIN, D. N., THASE, M. E., RUSH, A. J., MARKOWITZ, J. C., SCHLAGER, D. S., KORNSTEIN, S. G., DAVIS, S. M., HARRISON, W. M., KELLER, M. B. The treatment of chronic depression, part 3: psychosocial functioning before and after treatment with sertraline or imipramine. J. Clin. Psychiatry, Memphis, v.59, n.11, p.608-619, 1998. POLLACK, M. H., OTTO, M. W., WORTHINGTON, J. J., MANFRO, G. G., WOLKOW, R. Sertraline in the treatment of panic disorder: a flexible-dose multicenter trial. Arch. Gen. Psychiatry, Chicago, v. 55, n.11, p. 10101016, 1998. PRESKORN, S. H. Recent pharmacological advances in antidepressant therapy for the elderly. Am. J. Med., Newton, v. 94, n. 5A, p. 2s-12s, 1993. PRESKORN, S. H.; LANE, R. M. Sertraline 50 mg daily: the optimal dose in the treatment of depression. Int. Clin. Psychopharmacol., London, v. 10, n. 3, p.129-141, 1995. THE PHARMACOPOEIA of Japan 10.ed. Tokyo: Society of Japanese Pharmacopoeia, 1982. p. 83. THE UNITED States Pharmacopeia. 24.ed. Rockville: United States Pharmacopeial Convention, 2000. p. 2149-2152. Recebido para publicao em 18 de dezembro de 2000.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ADAMS, A. I. H., BERGOLD, A. M. Assay of sertraline in tablets and bulk drug by liquid chromatography. J. Pharm.Biomed. Anal., Oxford, v. 26, p. 505-508, 2001. AOAC INTERNATIONAL. Official Method of Analysis. 15. ed. Arlington, 1990. v.1, p. xvii. BIRI H., ISEN, K., SINIK, Z., ONARAN, M., KUPELI, B., BOZKIRLI, I. Sertraline in the treatment of premature ejaculation: a double-blind placebo controlled study. Int. Urol. Nephrol., Budapest, v.30, n.5, p.611-615, 1998. FDA. Center for Drug Evaluation and Research. Reviewer Guidance for Validation of Chromatographic Methods, november 1994. Disponvel em: http://www.fda.gov/ cder/guidance/cmc3.pdf. Acesso em: 11 set. 1999. EUROPISCHES Arzneibuch Kommentar. Stuttgart: Wissenschaftliche, 2000. Seo 4.2.2, p.16-19. FARMACOPIA Brasileira 4. ed. So Paulo: Atheneu, 1988. Parte I, cap. XII.1 e XII.2. FREEMAN, E. W., RICKELS, K., SONDHEIMER, S. J., WITTMAACK, F. M. Sertraline versus desipramine in the treatment of premenstrual syndrome: an open-label trial. J. Clin. Psychiatry, Memphis, v. 57, n. 1, p.7-11, 1996. GREIST, J. H., JEFFERSON, J. W., KOBAK, K. A., CHOUINARD, G., DUBOFF, E., HALARIS, A., KIM, S. W., KORAN, L., LIEBOWTIZ, M. R., LYDIARD, B. A 1 year double-blind placebo-controlled fixed dose study of sertraline in the treatment of obsessivecompulsive disorder. Int. Clin. Psychopharmacol., London, n. 10, v. 2, p.57-65, 1995. JOHNSON, B. M., CHANG, P. T. Sertraline Hydrochloride. In: BRITTAIN, H. G., ed. Analytical Profiles of Drug Substances and Excipients. San Diego: Academic Press, 1996. v. 24, p. 443-486.