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La Respiration mitochondriale Introduction

a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Processus pendant lequel les lectrons sont transfrs dun compos fortement rducteur (le NADH et le FADH2) vers lO2 pour former de lATP. Une force lectronmotrice est convertie en une force proton-motrice puis en nergie de liaison des phosphates (ATP). Cest ce quon appelle aussi la Phosphorylation Oxydative.
Cest la principale source dATP dans les organismes arobies. Glucose 36ATP+CO2+H2O dont 34ATP de la respiration mitochondriale

Espace intermembranaire Matrice


NADH eSuccinate

e-

O2 +H2
-

H2 O
ADP +Pi ATP V

Mitochondrie

Ie

H+

II e III e IV
H+

H+

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Cellule

Mitochondries
Matrice Membrane interne

2m
0.5m

Membrane externe Espace intermembranaire

[H+]matrice < [H+]esp. intermembranaire


Cration dun gradient chimique de protons:

+++ --

pHmatrice > pHesp. intermembranaire

Cration dun gradient de charges:

Chargematrice < Chargeesp.intermembranaire

Cytoplasme

Matrice

Noyau

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice et le concept chimiosmotique d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

La force proton-motrice (fmp ou p)

[H+]

pH

+++ I --[H+]

H+

e-

H+ III

e-

+++ IV --ADP+Pi

H+

ATP

H+

fpm=p=-2.3RT/F . pH

Validation exprimentale de lextrusion des protons

Validation exprimentale du lien existant entre la diffrence de pH et la synthse dATP


Synthse dATP par des particules sub-mitochondriales soumises une transition acide-base (Stopped-flow)
8.5 5

H+ H+ H+ H+

Centrifugation

Mesure de la radioactivit

ATP

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Acides amins Cytoplasme Glycolyse Pyruvate


Cycle de lure Mito

Glycrol+Acides gras Acyl CoA -oxydation

Actyl CoA Cycle de Cycle krebs de krebs


I II

3 NADH1 NADH 1 1 FADH2 FADH2 3 NADH


1 FADH2
IV

III

ATP
V

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Un centre doxydorduction peut exister ltat rduit ou oxyd: -Le FMN, le FAD -Les centres Fer-Soufre -Les quinones membranaires -Les hmes -Les ions cuivres

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Potentiels Redox biologiques de certaines ractions


Ox + neRed O2 + 2H+ +2eH2O SO4 2- + 2H+ + 2eSO32- + H2O - +2H+ + 2eNO3 NO2- + H2O cytochrome a3(Fe2+) Cytochrome a3(Fe3+) + e+ +2eO2(g) + 2H H2 O Cytochrome a(Fe3+) + ecytochrome a(Fe2+) 3+) + eCytochrome c(Fe cytochrome c(Fe2+) 3+) + ecytochrome c1(Fe2+) Cytochrome c1(Fe Cytochrome b(Fe3+) + ecytochrome b(Fe2+) (mitoch) + + 2eUbiquinone + 2H ubiquinol Fumarate- + 2H+ + 2esuccinateFADH2 (in flavoproteins) FAD + 2H+ + eOxaloacetate- + 2H+ + 2emalate Pyruvate- + 2H+ + 2elactateAcetaldehyde + 2H+ + 2eethanol + + 2eFAD + 2H FADH2 (free coenzyme) S + 2H+ + 2eH2 S Liponic acid + 2H+ + 2edihydrolipoic acid NAD+ + H+ + 2eNADH NADPH NADP+ + H+ + 2e+ + 2eCystine + 2H 2 cystaine Acetoacetate- + 2H+ +2e-hydroxybutyrate+ + eH H2 Acetate- + 3H+ + 1eacetalhyde + H2O E0(V) +0.82 +0.48 +0.42 +0.385 +0.295 +0.29 +0.254 +0.22 +0.077 +0.045 +0.031 0. -0.166 -0.185 -0.197 -0.219 -0.23 -0.29 -0.32 -0.32 -0.340 -0.346 -0.42 -0.581

La Respiration mitochondriale Introduction


a-Dfinition b-Les mitochondries c-La force proton motrice d-La phosphorylation oxydative dans le mtabolisme e-Le transfert des lectrons

Besoin dune distance compatible avec un transfert efficace dlectrons: leffet tunnel
Probabilit de trouver une particule en un point donn

Recouvrement des ondes: Transfert possible dlectrons entre les centres 1 et 2

Centre 1

Centre 2

Distance entre 2 centres REDOX < 20

Lnergie stocke dans le gradient de protons nest pas uniquement utilise pour synthtiser de lATP
Gradient de protons p

Synthse dATP Transport actif Production de chaleur

H+ I

e- III e- IV

H+

H+

UCP
H+ H+

Gradient de protons p

Dans les adipocytes bruns: Oxydation des graisses:Thermognse

Production de chaleur

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

La Respiration mitochondriale Le complexe I

NADH + H+ + Q

NAD+ + QH2

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

Neurospora crassa
Complexe I

Complexe I de

dEscherichia coli

Matrice

Membrane Cytosol
Daprs Gunebaut et coll. JMB, 1998, 276, 105-112

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

La Respiration mitochondriale Le complexe I


NADH NAD++H+

Daprs Sazanov et Hinchliffe, Science, 2006, 311, 1430-1436

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

La Respiration mitochondriale Le complexe I


H3 C C H3 C C H C O C C N C C C NH C O H3 C C H3 C C H C

e-+H+

C C

H N

O C NH C O

C H

N CH2

C H

N R

H H H

C C C

OH OH OH

Semi-quinone intermdiaire
e-+H+
H C H N O C C C NH C O

CH2OPO32-

Flavine Mononuclotide (FMN)

H3 C C H3 C C

C C

C H

N R

N H

Flavine Mononuclotide rduit (FMNH2)

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

Centre 2Fe-2S

S FeII S

S S-II FeIII S-II

S
Centre 4Fe-4S FeIII

S-II

FeII S-II S-II FeIII S S S

FeII S-II S S
a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

FeIII S-II S-II S FeII

S-II FeIII FeII S FeIII S-II S S

FeIII S-II S-II FeII FeII

S-II S FeIII S-II S

Centre 1(Fe2+)3(Fe3+)-4S (tat 1)

Centre 2(Fe2+)2(Fe3+)-4S (tat 0)

S S-II S-II Les centres (Fe-S) acceptent et cdent un seul lectron la foi. S FeII

S-II FeII S FeII S-II S

FeIII

Centre 3(Fe2+)1(Fe3+)-4S (tat -1)

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

O H3CO CH3 H3CO


e-+H+

.
CH3 H3CO
e-+H+

OH CH3

H3CO O

H3CO OH

H3CO OH

Quinone (Q) O H3CO

SemiQuinone (Q.)

Quinol (QH2)

CH3 CH3

H3CO O

(-CH2-CH=C-CH2- )n-CH3 n=10 chez les mammifres n=8 chez les bactries 3 types de quinones: Ubi-, Mna-, Dmthylmna-

UbiQuinone ou Coenzyme Q

a-Structure du complexe I b-Le groupement prosthtique FMN c-Les centres Fe-S d-Les Quinones e-Bilan nergtique

La Respiration mitochondriale Le complexe I


NADH NAD++H+
Centres rdox NADH/NAD+ FMNH2/FMN N-1a N-1b (2Fe-2S) (2Fe-2S) (4Fe-4S) N-2 (4Fe-4S) -100 mV +110 mV Ubiquinone/ubiquinol E0 -320 mV -340 mV -370 mV -250 mV -250 mV

N-3/4/5/6a/6b

Q QH2

E0 = E0UQ - E0NADH = + 100 - (-320) = + 420 mV G0 = -nFE0= - 2 x 96.4 x 0.420 = - 81 kJ.mol-1


-1 H+m 17 kJ. mol H+c

Stoechiomtrie : 1NADH/2e-/4H+

Daprs Vinogradov, Biochemistry (Moscow), Vol. 66, No 10, 2001, 1346-1360

Le complexe II
a-Une enzyme bifonctionnelle b-Organisation du complexe II mitochondrial c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage

Succinate + Q

Fumarate + QH2

Le complexe II
a-Une enzyme bifonctionnelle b- Structure du complexe II c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage

Cycle de Krebs
Fumarate

Chane respiratoire
FADH2 Succinate dshydrognase

Succinate

Le complexe II
a-Une enzyme bifonctionnelle b-Structure du complexe II c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage

15 UQ (+65 mV)

Cell (Sun et coll, Vol 171).

a-Une enzyme bifonctionnelle b-Structure du complexe II c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage H C O C C N C C C NH C O H3 C C H3 C C H C H N

H3 C C H3 C C

e-+H+

C C

O C NH C O

C H

N CH2

C H

N R

H H H

C C C

OH OH OH

Semi-quinone intermdiaire
e-+H+
H C H N O C C C NH C O

CH2OPO32-

Flavine Mononuclotide

H3 C C H3 C C

C C

C H

N R

N H

Flavine Mononuclotide rduit

a-Une enzyme bifonctionnelle b-Structure du complexe II mitochondrial c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage

Hme vu de face :
N N Fe N N

Hme vu de profil :

His- N

Met

His-N

O2 Hme de type a3

Les cytochromes sont constitus dun ou plusieurs hmes associs une protine: cytochrome b (cplx II), c1 (cplx III); cyt c; cyt a, a3 (cplx IV).

a-Une enzyme bifonctionnelle b-Structure du complexe II mitochondrial c-Les centres doxydorduction du complexe II: Le FAD et les hmes d-Bilan nergtique: le complexe II mitochondrial NEST PAS un site de couplage

Le complexe II ou succinate dshydrognase


Centres rdox Succinate/Fumarate FADH2/FAD 2Fe-2S 4Fe-4S 3Fe-4S Cyt b(Fe+2)/Cyt b(Fe+3) Ubiquinone/ubiquinol membranaire E0 + 30 mV - 79 mV 0 mV -260 mV + 60 mV - 185 mV + 65 mV

E0 = E0UQ - E0Succinate = + 65 - (+30) = + 35 mV . G0 = -nFE0 (n=2, F = 96,4 kJ.V-1) = - 2 x 96.4 x 0.035 = - 6.7 kJ.mol-1.

Daprs Schultz et Chan, ARBBS, 30, 23-65

Le complexe bc1 ou complexe III

1-Structure du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q 3-Bilan du cycle Q 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

2QH2+2cytc3++Q+2H+(matrice)

2Q+2cytc2++QH2+4H+(cytosol)

Le complexe bc1 ou complexe III


1-Structure du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q 3-Bilan du cycle Q 4-Mobilit de la protine de Rieske 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

Daprs Xia et coll, Jul 1997, science

Le complexe bc1 ou complexe III


1-Structure des sous units catalytiques du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q 3-Bilan du cycle Q 4-Mobilit de la protine de Rieske 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

Protine de Rieske

Cytochrome c1

[2Fe-2S] Site P

bL bH

Cytochrome b

Site N
MATRICE

Le complexe bc1 ou complexe III


1-Structure du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q:1ire tape 3-Bilan du cycle Q 4-Mobilit de la protine de Rieske 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

Cyt c 2H+ 1eQH2 Q QH2


Q*e

Cytosol

eeQ* Q Q

Matrice

Le complexe bc1 ou complexe III


1-Structure du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q:2ime tape 3-Bilan du cycle Q 4-Mobilit de la protine de Rieske 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

Cyt c 4H 2H+ 1eQH2 2 x Q Q eQH2


Matrice
Q*e

Cytosol

QH2

e-

Q*

2H+

Le complexe bc1 ou complexe III


1-Structure du complexe bc1 du cur de buf 2-Le cycle Q 3-Bilan du cycle Q 4-Mobilit de la protine de Rieske 4-Transfert dlectrons entre le cyt c1 et la cytochrome oxydase par le cyt c

Protine de Rieske

Cytochrome c1

Cytochrome b
MATRICE

Daprs Schultz et Chan, ARBBS, June 2001, 30, 23-65

Le Cytochrome c

His- N

Met

Daprs Dickerson et coll., Scientific American, 1980, 242 (3), pp. 136-153.

La cytochrome oxydase ou complexe IV


1-Structure du complexe IV bovin 2-Structure des sousunits catalytiques 3-Cheminement des protons

2 cytc2++ O2+ 2H+

2 cytc3++H2O

La cytochrome oxydase ou complexe IV


1-Structure du complexe IV bovin 2-Structure des sousunits catalytiques 3-Cheminement des protons

e-

Sous-unit II

Sous-unit I

19

e5

O2

14 e-

H2O

Daprs Schultz et Chan, ARBBS, 30, 23-65

Daprs Saraste, Science, March 1999, 283

La cytochrome oxydase ou complexe IV


1-Structure du complexe IV bovin 2-Structure des sousunits catalytiques 3-Cheminement des protons

Esp. Intermb.

Sous-unit II

Sous-unit I

Matrice
Daprs Wikstrm, BBA, 2000, 514-520 Daprs Saraste, Science, March 1999, 283

NADH + H+ + Q Succinate + Q QH2+2Cytc (Fe3+) 2Cytc (Fe2+)+O2+2H+ ADP + PO4H-- + H+

NAD+ + QH2 Fumarate + QH2

-81 kJ/mol -3 kJ/mol

Q+2Cytc (Fe2+)+2H+ -37 kJ/mol 2 Cytc(Fe3+)+H2O ATP + H2O -112 kJ/mol +30,5 kJ/mol

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

ADP+Pi+H+ +nH+(esp. intermb)

ATP+H2O+nH+(matrice)

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

9-12

ESPACE INTERMEMBRANAIRE

C9-12,a1,b1 Rotor

Stator

3,3,,OSCP,

OSCP

MATRICE MITOCHONDRIALE

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

Daprs Hongyun Wang et George Oster, University of California, Berkeley ( Nature 396, 279-282 (1998)). Daprs Abrahams, Nature, 1994, 370, 621-28

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits -ATP, subunit rotation

Daprs Hongyun Wang et George Oster, University of California, Berkeley ( Nature 396, 279-282 (1998)).

LATP synthase ou complexe V


ESPACE INTERMEMBRANAIRE 1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

MATRICE MITOCHONDRIALE

Daprs Schultz et Chan, ARBBS, June 2001, 30, 23-65

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

Daprs Elston et coll., Nature, Jan 1998, 391, 510-19

LATP synthase ou complexe V


1- Prsentation gnrale 2- Le complexe F1 et le cycle catalytique 3- Le complexe Fo et le canal protons 4- Dmonstration de la rotation des sousunits

Daprs Noji et coll., Nature, March 1997, 386, 299-302

La Respiration mitochondriale Conclusion


Introduction Le complexe I Le complexe II Le complexe III Le complexe IV LATP synthase Conclusion

Daprs Brire et Coll., BBA, July 04, vol. 1659, p 172-177

Substrate channeling Squestration des intermdiaires ractifs de type ubisemiquinone

Stabilisation des complexes

Schgger (2002) BBA 1555, 154-159