TEMA 26 MTODOS DE ESTUDIO DE LA CLULA. CLULAS PROCARIONTAS Y EUCARIONTAS. LA CLULA ANIMAL Y VEGETAL. 1. Introduccin. 2. Mtodos de estudio de las clulas.

1. Microscopio ptico. 2. Microscopio electrnico. 3. Anlisis citolgico. 1. Examen vital. 2. Fijacin. 3. Cortes. 4. Tincin. 5. Citoqumica. 3. Clulas procariontas y eucariontas. 1. Cls procariontas. 1. Cianobacterias. 2. Bacterias. 2. Cls eucariontas. 1. Estructuras propias de las cls animales y vegetales. 2. Estructuras propias de las cls animales. 3. Estructuras propias de las cls vegetales. 4. Formas acelulares.

1. INTRODUCCIN a) ORGANIZACIN CELULAR DE LOS SERES VIVOS TEORA CELULAR En 1665, Robert Hooke, al observar al microscopio, muy rudimentario en aquella poca, un fragmento de corcho, descubre que est compuesto por una serie de estructuras parecidas a las celdas de los panales de las abejas, por lo que las llam clulas. El posterior desarrollo de la microscopa permiti que en 1838 Scheleiden y en 1839 Schwan, uno para los vegetales y el otro para los animales, y que Virchow complet con su clebre principio omnis cellula ex cellula, es decir, toda clula proviene de otra clula. la teora celular que, resumidamente, indica: 1- Todos los organismos son clulas o estn constituidos por clulas. 2- Las unidades reproductoras, los gametos y esporas, son tambin clulas. 3- Las clulas no se crean de nuevo, toda clula proviene siempre de otra clula. 4- Existen seres unicelulares y seres pluricelulares. En pocas palabras, segn la TEORA CELULAR, la clula es la unidad estructural, fisiolgica y reproductora de los seres vivos; pues todo ser vivo est constituido por clulas:UNIDAD ANATMICA, En ellas se realizan todas las reacciones bioqumicas que le permiten vivir y perpetuarse:UNIDAD FISIOLGICA Toda celula proviene de otra celula: UNIDAD REPRODUCTORA. En las celulas se encuentra el material genetico hereditario que se va a transmitir a las celulas hijas: UNIDAD GENETICA 2. Metodos de estudio de la celulas a) EL MICROSCOPIO PTICO. Su poder de resolucin es de 0,2 micrmetros (este lmite lo marca la longitud de onda de los fotones de luz que se utilizan como radiacin). La preparacin de las muestras a observar lleva los siguientes tratamientos: Observacin de clulas vivas: Se pueden observar clulas vivas sin someterlas a ningn tipo de manipulacin, mantenindolas durante su estudio en un medio adecuado. Ms frecuentemente se requiere el empleo de colorantes vitales que no daan a las clulas y permiten visualizar algunas de sus estructuras; entre dichos colorantes estn el azul de metileno, el verde Jano, el rojo neutro,

Observacin de clulas muertas Fijacin: es inmovilizar las muestras por que no se distorsiones por los tratamientos posteriores, con el fin de parar en el tiempo el estado y estructuras del tejido a observar. Se puede hacer por mtodos qumicos (etanol, aldehdos, tetrxido de osmio, etc.. ) o fsicos (congelacin). Obtencin de cortes finos (microtoma): como la muestra debe ser atravesada por rayos de luz, esta debe ser lo ms fina posible para esto y adems que no se superpongan distintos planos. Estos cortes se hacen con un microtomo. Para realizar el corte se debe endurecer el material biolgico a fin de realizar el mismo en un mismo plano, para lo cual se introduce en sustancias como la parafina o la resina. Tinciones: se introducen colorantes (con mayor o menor afinidad por las estructuras celulares) para diferenciar formas. Los colorantes cidos tien las partes bsicas de la clula y los colorantes bsicos tien las partes de carcter cido. azul de metileno (bsico), violeta de genciana, hematoxilina (bsico), eosina (cido), verde brillante, fuchsina bsica, solucin de lugol microscopios de contraste de fases permiten visualizar estructuras en clulas vivas sin necesidad de ningn tipo de manipulacin. microscopio es el de fluorescencia que permite localizar molculas especficas en las clulas utilizando para ello colorantes fluorescentes.

b) EL MICROSCOPIO ELECTRNICO. La fuente de radiacin utilizada son los electrones y el poder de resolucin alcanza los 0,2-0,5 nm. El tratamiento de las muestras es muy parecido al del ptico pero cabe resear las siguientes diferencias: a) La muestra debe ser deshidratada. b) Los cortes son muy finos para que pasen los electrones (50-100 nm). c) No se utilizan tintes, sino tomos pesados (Uranio, Plomo, ...) para resaltar las zonas sobre las que se depositan. Tenemos dos microscopios electrnicos: Microscopio electrnico de transmisin (M.E.T.) El microscopio electrnico de transmisin es, en rasgos generales, similar al microscopio ptico pero de mayor tamao e invertido. el haz electrnico pasa a travs de la muestra y a continuacin dos electroimanes que funcionan como lentes dan una imagen agrandada del objeto, que se proyecta para su observacin sobre una pantalla fluorescente(como un monitor de televisin) o una placa fotogrfica

Microscopio electrnico de barrido (M.E.B.) En el microscopio electrnico tridimensional o

de barridolos electrones no atraviesan la muestra, que est recubierta por una finsima capa de un metal pesado. En este caso, un haz de electrones muy estrecho es dirigido hacia la superficie de la muestra y sta emite unos electrones secundarios que son los que se detectan en la pantalla. Las mgenes as obtenidas permiten visualizar la superficie tridimensional del material observado
c.- EL ESTUDIO BIOQUMICO DE LA CLULA. Su finalidad es conocer los componentes qumicos de la clula, completndose as los estudios morfolgicos. Para ello es necesario separar las diferentes estructuras de la clula y despus se estudian mediante mtodos bioqumicos y mtodos mixtos, microscpico-bioqumicos. -- Fraccionamiento celular Se trata de un mtodo de aislamiento y separacin de los orgnulos celulares, con objeto de estudiarlos despus independientemente. Para ello se siguen los siguientes pasos homogeneizado del tejido a estudiar mediante tratamientos qumicos o fsicos que rompan las clulas, como por ejemplo, choque osmtico o trituracin. Este proceso debe hacerse con la mayor suavidad posible con el fin de que se rompa la membrana plasmtica pero queden intactos orgnulos tales como el ncleo, la mitocondrias, los lisosomas, los peroxisomas y el complejo de Golgi. El homogeneizado se disuelve en una solucin salina o de azcar (normalmente sacarosa). Para separ los diferentes componentes del homogeneizado, mediante un instrumento llamado ultracentrfuga, que puede hacer girar los tubos de ensayo a diferentes velocidades . La fuerza centrfuga separa los componentes celulares en funcin de su densidad, su forma y su tamao. Variando la velocidad se obtienen una serie de fracciones en los diversos precipitados, que contienen los distintos orgnulos celulares (f. Para saber que orgnulos tiene cada precipitado, se utiliza el microscopio electrnico. -- Autorradiografa Cualquier molcula puede marcarse incorporndole uno o ms istopos radiactivos. La radiacin que emiten los ncleos de dichos tomos permite detectar la molcula marcada y seguir sus movimientos. As, si se introduce en una clula un compuesto orgnico que contenga tomos radiactivos, se puede seguir su paso a travs de los orgnulos celulares y estudiar sus funciones. Entre los istopos radiactivos usados en biologa estn: 14C, 3H, 32P y 35S. La tcnica, denominada autorradiografa, se utiliza para localizar las sustancias marcadas radiactivamente en secciones de clulas enteras o de tejidos, aunque ms que la localizacin esttica de un compuesto lo que interesa son sus desplazamientos a nivel intracelular y tisular.

El proceso consiste en lo siguiente: las clulas vivas se exponen a un compuesto radiactivo parte del cual es absorbido y fijado por ellos. Transcurrido un tiempo, generalmente breve, el compuesto radiactivo sobrante se elimina del medio. Las clulas as marcadas se fijan sobre un porta, se recubren con una fina capa de una emulsin fotogrfica y se dejan en la oscuridad durante unos das, tras los cuales se revela la emulsin y se observa al microscopio. La radiactividad emitida impresiona la placa fotogrfica, por lo que al revelar la pelcula aparecen manchas oscuras que determinan la posicin de la sustancia marcada. -- Cultivo celular La mayora de las clulas, tanto animales como vegetales, sobreviven, se dividen e incluso se diferencian en un medio de cultivo en condiciones adecuadas. Luego, las clulas se pueden utilizar para visualizarlas al microscopio o para analizarlas bioqumicamente. El inters por el cultivo de clulas y tejidos es extraordinario debido a sus aplicaciones en el campo de la Biologa experimental, en Medicina, en Veterinaria, en Agricultura, etc. Los cultivos de clulas y tejidos han permitido conocer el proceso de la mitosis, los movimientos celulares; la respuesta de la clula frente a sustancias txicas, bacterias, virus, parsitos celulares, etc. Tambin se pueden estudiar los efectos de la adicin o eliminacin al medio de cultivo de molculas especficas tales como hormonas o factores de crecimiento. El cultivo de muchas clulas de vertebrados est limitado por un determinado nmero de divisiones celulares, as por ejemplo los fibroblastos humanos slo se dividen en cultivo unas 25-40 veces. Las clulas que pueden dividirse indefinidamente y formar lneas celulares inmortales son las clulas cancerosas y las clulas madre. La importancia del cultivo de las clulas madre se debe a que son clulas indiferenciadas que con un tratamiento adecuado pueden dar lugar a cualquier tejido corporal. 3.Clulas procariotas y eucariotas a) clulas procariotas Entre los seres vivos existen dos tipos de organizacin celular claramente diferenciados: Procariota (pro = antes de, y carin = ncleo): Organizacin tpica de las clulas ms sencillas y primitivas. Poseen una membrana plasmtica y por encima de ella, la mayora, tienen una pared celular de composicin variable, distinta a la de las clulas vegetales. Su principal caracterstica es la de poseer el material gentico (DNA bacteriano) en una regin del citoplasma llamada nucleoide, sin estar

rodeado de una membrana, es decir, estn desprovistas de ncleo. Asimismo carecen de la mayora de los orgnulos celulares, slo Poseen ribosomas. Sus enzimas respiratorios se localizan en unas invaginaciones de la membrana plasmtica denominadas mesosomas. Su tamao medio es de 1 a 10 m. Son organismos unicelulares que pertenecen al Reino Moneras, tales como las arqueobacterias y las eubacterias. Eucariota (eu = verdadero, y carin = ncleo): Estas clulas son mucho mayores y ms complejas que las procariotas. Su material gentico est dentro de un ncleo, rodeado por una envoltura. Tambin poseen diversos orgnulos limitados por membrana que dividen al citoplasma en compartimentos y un citoesqueleto. Su tamao medio se sita entre 10 y 100 m. Es propia de los organismos pluricelulares y de muchos unicelulares. b) Clula eucariota

En una clula eucaritica podemos distinguir tres partes fundamentales: membrana, citoplasma y ncleo. La membrana plasmtica es una capa continua que rodea a la clula y le confiere su individualidad al separarla de su entorno. Algunas clulas animales poseen por encima de la membrana plasmtica una cubierta de hidratos de carbono denominada glicocliz y las clulas vegetales tienen una gruesa pared de celulosa que cubre y protege a la membrana plasmtica. El citoplasma es la parte de la clula que est comprendida entre la membrana plasmtica y la membrana nuclear. Los orgnulos citoplasmticos son los siguientes: ribosomas, retculo endoplasmtico, complejo de Golgi, lisosomas, vacuolas, peroxisomas, mitocondrias, cloroplastos y centrolos. El ncleo es el orgnulo ms voluminoso de la clula y contiene la mayora del DNA celular. Suele ocupar una posicin central en la clula, aunque muchas de ellas lo tienen desplazado hacia un lado del citoplasma. Se pueden distinguir dos tipos de clulas eucariticas: animales y vegetales. DIFERENCIAS ENTRE LAS CLULAS VEGETALES Y ANIMALES Por lo general las clulas vegetales son de mayor tamao que las animales, tienen plastos y estn envueltas en una gruesa pared celular, tambin llamada pared celulsica o membrana de secrecin. Sus vacuolas son de gran tamao y no tienen centriolos.

CLULA VEGETAL 1 Membrana plasmtica 2 Retculo endoplasmtico granular 3 Retculo endoplasmtico liso 4 Aparato de Golgi 5 Mitocondria 6 Ncleo 7 Ribosomas 8 Cloroplasto 9 Pared celulsica 10 Vacuola

CLULA ANIMAL 1 Membrana plasmtica 2 Retculo endoplasmtico granular 3 Retculo endoplasmtico liso 4 Aparato de Golgi 5 Mitocondria 6 Ncleo 7 Ribosomas 8 Centrosoma (Centriolos) 9 Lisosomas 10 Microtbulos (citoesqueleto)

4. Formas acelulares Virus Un virus es un agente gentico que posee un cido nuclico que puede ser ADN o ARN, rodeado de una envuelta de protena. Los virus contienen toda la informacin necesaria para su ciclo reproductor; pero necesitan para conseguirlo a otras clulas vivas de las que utilizan orgnulos y molculas. Los virus pueden actuar de dos formas distintas: Reproducindose en el interior de la clula infectada, utilizando todo el material y la maquinaria de la clula hospedante. Unindose al material gentico de la clula en la que se aloja, produciendo cambios genticos en ella. Por eso se pueden considerar los virus como agentes infecciosos productores de enfermedades o como agentes genticos que alteran el material el material hereditario de la clula husped. Viroides Son molculas de ARN circular que carecen de cualquier proteccin Priones. Son agentes patgenos formados por una protena ( protena del prin o PPr ) Producen entre otras, la enfermedad de las "vacas locas" o encefalopata bovina espongiforme. Esta protena se acumula en el cerebro de animales enfermos , dando lugar a la estructura esponjosa de la corteza cerebral que da nombre a la enfermedad. Los priones, o las enfermedades producidas por priones, tienen un comportamiento sorprendente, por un lado se transmiten verticalmente , como cualquier enfermedad hereditaria tpica, mientras que por otro lado se comportan de manera infectiva, transmitindose horizontalmente, mediante contagios que pueden darse entre individuos de distintas especies. La protena del prin (PrP) normal, tiene una secuencia de aminocidos, (estructura primaria) idntica a la protena del prin patgena. La diferencia entre las dos recae en la estructuras secundaria y terciaria , La protena normal es muy rica en hlices alfa, la protena patgena lo es en lminas beta. Este cambio de configuracin es crucial, ya que las protenas con lminas beta son muy resistentes a las enzimas proteolticas, al calor y no se disuelven en agua. Pero sobre todo, la protena alterada tiene una caracterstica nica: interacciona con una molecula de protena normal, le

10

cambia la conformacin y la hace capaz de convertir las estructuras de ms protenas normales. Ah radica al parecer, el poder infectivo de los priones Puede ocurrir que la protena patgena infecte individuos que producen protena normal (a), como ha ocurrido por ejemplo al consumir las vacas piensos elaborados a partir de de ovejas enfermas. En este caso la protena patgena origina un cambio conformacional de la protena normal (b), transformando las hlices alfa de su estructura proteca en lminas beta. Las nuevas protenas patgenas inducen el cambio en otras normales, lo cual produce un efecto de "cascada".

11