FLUJO Y TRANSMISIN DE LA INFORMACIN GENTICA

En este tema vamos a estudiar las principales funciones de los cidos nucleicos, como portadores de toda la informacin biolgica y como esta informacin se transmite de generacin en generacin a travs del ADN, por lo que este es el portador del mensaje gentico. Su funcin es transmitir los caracteres hereditarios. Los caracteres hereditarios elementales se deben a unidades materiales: los genes localizados en los cromosomas y ligados unos a otros de manera lineal. Un gen es la unidad estructural y funcional de la herencia, que se transmite de padres a hijos a travs de los gametos y que determina la aparicin de una caracterstica observable; es decir el fenotipo. Mendel denomin a estas unidades factores hereditarios. Hoy se sabe que los genes son fragmentos de ADN Su funcin es la de llevar la informacin necesaria para realizar las funciones celulares o su regulacin, por eso se diferencian dos tipos de genes:

Los genes estructurales: son aquellos genes que codifican las protenas estructurales y las enzimticas. Los genes reguladores: son aquellos genes que codifican la sntesis de protenas cuya actividad es controlar la actividad de los genes estructurales. Las protenas codificadas por estos genes se denominan represores

Por tanto, el concepto de gen, segn la gentica molecular, es un concepto ms amplio: no solo determina el fenotipo, sino que los genes son capaces de almacenar la informacin necesaria para el desarrollo de un nuevo ser. Bajo el control de los genes (estructurales) se sintetizan en las clulas unos productos que son las protenas. Existen tambin genes reguladores que son los que regulan la actividad de otros genes

Por qu es el ADN el portador de la informacin gentica?

La cantidad de ADN en las clulas de los individuos de la misma especie es constante. Cuanto ms compleja es una especie mayor cantidad de ADN tiene.

En biologa el dogma de la biologa molecular hace referencia a cmo es el flujo de informacin gentica en los seres vivos. Son tres procesos fundamentales los que intervienen en el flujo La replicacin del ADN La transcripcin La traduccin

Replicacin del ADN

Proceso por el cual el ADN en doble hlice da lugar a dos copias con la misma informacin gentica sin perder su conformacin.

Cmo se desarrolla el proceso?

Las dos hebras se separan y quedan libres las bases nitrogenadas. Los desoxirribonucletidos libres establecen puentes de Hidrgeno con las bases libres que quedaron una vez abiertas las dos hebras. Se establecen enlaces fosfodiester entre dichos desoxirribonucletidos

Existen tres hiptesis para explicar la replicacin del ADN: la conservativa, la semiconservativa y la dispersiva.

En la conservativa, una molcula de doble cadena de ADN da lugar a una nueva molcula En la semiconservativa, la molcula de ADN se escinde en sus dos cadenas; cada una de
ellas dirige la sntesis de su complementaria, formndose dos molculas idnticas, con una cadena vieja y otra nueva. En la dispersiva, la molcula de ADN se fragmenta, replicndose cada fragmento y reunindose todos de nuevo, lo que dara una molcula con fragmentos viejos y neosintetizados. La hiptesis semiconservativa es la que se ha podido demostrar tanto en procariontes como en eucariontes por un experimento llevado a cabo por MESELSON Y STAHL utilizando un istopo del nitrgeno 15N Estos investigadores cultivaron bacterias de Echerichia coli en un medio con 15N (el istopo normal es 14N). Los istopos tienen propiedades qumicas idnticas pero no as las fsicas. El istopo 15N tiene mayor masa que el istopo normal por lo tanto los compuestos que lleven este 15N sern ms densos. La densidad del ADN de las bacterias cultivadas por Meselson y Sthal era superior al de las normales. Posteriormente pasaron el cultivo de las bacterias a un medio normal y dejaron un tiempo para que se formaran nuevas bacterias y posteriormente analizaron el ADN de estas nuevas bacterias y observaron que la densidad era intermedia entre la del ADN de bacterias cultivadas en 14N y el de las cultivadas en 15N. El emparejamiento de las bases nitrogenadas en la peculiar estructura de doble hlice del ADN, propuesta por Watson y Crick, permite comprender la replicacin. Cada cadena sirve de molde para el acoplamiento de nuevos nucletidos, con lo que se consigue sintetizar un nuevo ADN con una secuencia de bases idntica a la del ADN original. dplex de ADN, de modo que una clula recibir la molcula vieja y otra la nueva.

Enzimas necesarios para llevar a cabo este proceso

El enzima que desempea el papel principal en este proceso es la ADN-polimerasa (1000 aminocidos) est en el ncleo y en el citoplasma. Sin embargo no puede actuar solo sobre el ADN celular. La abertura de la doble hlice de ADN es facilitada por una serie de enzimas que actan con anterioridad al ADN-polimerasa. stas enzimas son las Helicasas que retardan los procesos de sntesis en la hebra 5 3. Las protenas SSB (protenas de unin a hebra sencilla), no permiten que se unan las hebras una vez separadas. Son tetrmeros. Protenas Rep actan sobre la hebra lder (3 par de bases que separe 5) gasta dos molculas de ATP por cada

La abertura de la doble hlice determina que aparezcan tensiones ms all del punto de separacin de las dos hebras y que impedirn la continuacin de la operacin. Este hecho se ve

fcilmente con un ejemplo: una cuerda formada por dos cabos enrollados uno alrededor del otro con un nudo en uno de los extremos. Para que la ADN-polimerasa pueda progresar hay que suprimir esas tensiones esto se consigue con un enzima ADN-girasa, este enzima provoca una torsin en la doble hlice en sentido contrario a la creada por la abertura de la doble cadena. As es compensada la tensin que aparece en el desenrollamiento de las dos hebras de la doble hlice.

El sistema enzimtico encargado de la replicacin del ADN debe afrontar otro problema ligado al hecho de que las dos hebras de la doble hlice no tienen la misma orientacin (son cadenas antiparalelas) y la ADN-polimerasa solo es capaz de polimerizar en un solo sentido solo puede copiar de forma continua la cadena cuya orientacin es 3` 5 `. Esa hebra que se sintetiza es la hebra conductora. Sin embargo la otra hebra molde, al ser antiparalela y estar orientada en el sentido 5 ` 3 `no puede leerse directamente por la ADN-polimerasa ;este problema se soluciona mediante la sntesis de pequeos fragmentos de ADN (llamados fragmentos de Okazaki) que crecen en el sentido 5 3 `y que ,mas tarde se unen para formar la otra rplica, que recibe el nombre de hebra retardada porque tarda mas tiempo en sintetizarse, ya que el enzima debe esperar a que la horquilla de replicacin se abra lo suficiente para comenzar su trabajo.

La unin de los fragmentos de Okazaki se realiza por medio de otro enzima que es la ADNligasa Otro hecho a tener presente en la replicacin es el que la ADN-polimerasa no es capaz de iniciar por s sola la sntesis de una nueva cadena, necesita de un cebador que es un pequeo fragmento de ARN el cual es sintetizado por otro enzima, la primasa. Este cebador de ARN no puede formar parte del producto final (cadena continua de ADN) por lo tanto es eliminado por una ribonucleasa Como vemos la replicacin del ADN que permitir a dos clulas hijas llevar la misma informacin gentica que la clula madre, es un proceso enzimtico muy complejo, en el que intervienen un nmero considerable de componentes proteicos.

Errores en la copia
Durante el proceso de la duplicacin se producen errores en las copias. Estos se evitan por medio de la ADN-polimerasa que ejerce una accin autocorrectora (Accin de exonucleasa) que consiste en que despus de la polimerizacin el ADN-polimerasa mira hacia atrs antes de incorporar el siguiente nucletido y si detecta un error en el apareamiento elimina el ltimo nucletido e introduce el adecuado. Pero a pesar de esta accin se comente errores: un error por cada 10 millones de bases colocadas. Esta proporcin no tiene importancia en una bacteria, pero en el hombre en el desarrollo embrionario a partir del cigoto implicara trescientos mil billones de errores lo cual sera incompatible con la vida. Por eso hay una maquinaria enzimtica que corrige posibles errores cometidos por la ADN-polimerasa. Esta maquinaria en primer lugar diferencia la cadena molde (parental) de la cadena rplica ya que la primera tiene las adeninas metiladas y la segunda no estn metiladas en un principio. Seguidamente descubre en la cadena rplica los posibles errores. Seguidamente se produce la eliminacin del segmento donde est mal colocada la base por medio de endonucleasas.La ADN-polimerasa rellena el hueco y una ligasa une la nueva porcin con el resto de la cadena.

* ATCG TAGC G T

* ATCG TAGC

Cadena molde

Cadena rplica

Error de apareamiento

G ATCG TAGC T Endonucleasa que corta el fragmento errneo ATCG TAGC

ATCG TAGC

G C

ATCG TAGC

Nueva cadena sintetizada por la ADN polimerasa y unida al resto por la ligasa

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Es una tcnica que permite duplicar un nmero ilimitado de veces un fragmento de ADN en un tubo de ensayo. Mediante esta tcnica pueden generarse millones de molculas idnticas, a partir de una molcula de ADN. Esto se puede conseguir en unas horas. La reaccin es muy sencilla, necesita cantidades de ADN muy pequeas y slo se precisa un tubo de ensayo, algunos reactivos, una fuente de calor y unas pequeas cadena de nucletidos que actan como cebadores. La reaccin es un proceso cclico: 1. La molcula de ADN que va a copiarse se calienta para que se desnaturalice y se separe las dos hebras.

2. Cada una de las hebras es copiada por la ADN-polimerasa. (Se utiliza la ADN-

polimerasa de una bacteria que vive en aguas termales, Thermus aquaticus, as la enzima puede trabajar a altas temperaturas).

3. Las cadenas recin formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro
nuevo ciclo de copias. Estos ciclos se repiten hasta que se obtiene el nmero de copias deseado.

Curiosidades
La potencialidad de esta tcnica es impresionante, a partir de una sola molcula de ADN, la PCR puede generar 100000 millones de molculas idnticas en una tarde. El ADN puede proceder de una muestra de tejido de un hospital, de una gota de sangre o semen en la escena de un delito, o de un cerebro momificado. La tcnica fue desarrollada por K.B. Mullis a partir de 1983. Cada ciclo dura aproximadamente 5 minutos y para conseguir una cantidad til se requieren al menos 20 ciclos de reacciones. Se realiza de forma automtica en un aparato como se ve en la fotografa, con lo que se consigue un clonaje rpido en un sistema libre de clulas.

APLICACIONES DE LA PCR 1. Secuenciacin Una de las razones mas comunes para el uso de la PCR es la formacin de suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciacin. Es mucho ms sencillo y rpido que la clonacin en clulas.

2. Estudios evolutivos

Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos, como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir rboles filogenticos. El PCR tambin se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano. La determinacin de las huellas dactilares genticas constituye una de las aplicaciones ms interesantes de la PCR. Mediante esta tcnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta tcnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de identificar individuos a partir de muestras biolgicas, como sangre, semen, piel o cabellos. Tambin se utiliza en las pruebas de paternidad.

3. Huellas dactilares del ADN.

Transcripcin del cdigo gentico: biosntesis de ARN

La transcripcin es el proceso en el que se sintetiza una molcula de ARN a partir de sus correspondientes precursores. La secuencia de ARN transcrito es complementaria a la de una de las dos cadenas del gen. Este proceso en lneas generales es similar en los organismos procariotas y en los eucariotoas y en ella pueden considerarse cuatro etapas sucesivas que son: iniciacin, elongacin, terminacin y maduracin. En procariotas solo existe un tipo de ARN-polimerasa que cataliza la sntesis de todos los ARN.

Iniciacin.- En todos los genes hay una secuencia caracterstica de nucletidos que se denomina promotor que indica donde debe empezar la sntesis del ARNm y cul de los dos hebras de ADN debe ser transcrita. Este promotor se encuentra unas diez bases antes del principio del gen. Elongacin.- Despus de unirse al promotor, el ARN-polimerasa se acopla a una de las cadenas del ADN y desenrolla aproximadamente una vuelta de hlice con lo que queda al descubierto la hebra de ADN que actuar como patrn. El enzima se desplaza por la hebra patrn en sentido 3 5 mientras que la cadena de ARNm se va formando en sentido 5 3 . A medida que el enzima se desplaza el ADN recupera su configuracin inicial de doble hlice. Terminacin.- El ARN-polimerasa continua aadiendo ribonucletidos hasta que se encuentra con la seal de terminacin (secuencia TTTT). Maduracin.- Como los genes en procariotas son continuos las copias de ARNm son copias literales de los genes por lo que no se necesita ningn tipo de transformacin.

En eucariotas los genes estn fragmentados por lo que los ARN que se forman (ARN transcrito primario) necesitan de un proceso de maduracin. Adems existen tres clases de

ARN-polimerasas cada una de las cuales cataliza la sntesis de un ARN distinto. En la sntesis del ARNm tambin se distinguen cuatro fases y esta catalizada por la ARNpolimerasa II

Iniciacin.- El promotor est formado por una secuencia rica en T y A que se encuentra localizado unos 30 nucletidos curso arriba del comienzo del gen. Elongacin.- Es igual que en procariotas salvo que cuando se han transcrito unas 30 bases del gen, al ARNm en formacin se le aade en el extremo 5 una caperuza compuesta por un resto de guanosina metalada unida a un grupo trifosfato. Esta caperuza es reconocida por los ribosomas como el lugar de inicio de la traduccin. Durante la elongacin se transcriben tanto los exones como los intrones. Terminacin.- El proceso termina cuando el ARN-polimerasa II transcribe la secuencia TTATTT. A continuacin acta otro enzima denominado Poli-A polimerasa que aade al extremo 3 del ARNm una cola poli-A formada por unos 150 o 200 ribonucletidos de adenina que al parecer interviene en el proceso de la maduracin y en el transporte del ARNm maduro fuera del ncleo.

Esta molcula de ARN que contiene caperuza y cola se llama ARNm transcripto primario

Maduracin.-Debido a que los genes en eucariotas se encuentran fragmentados, los ARNm transcritos primarios contienen secuencias intercaladas (intrones) que no codifican para la sntesis de protenas y por lo tanto, deben ser eliminadas. La supresin de estas secuencias se realiza mediante un proceso de maduracin que supone cortes entre los intrones y los exones: los primeros se enrollan en lazos y se eliminan, mientras que los segundos se empalman y forman una molcula de ARNm que contiene todos los nucletidos necesarios para la sntesis de protenas.

Los cortes en los transcritos primarios, se realizan con la ayuda de una protena enzimtica, (que se encuentra en el ncleo de todas las clulas animales) llamada ribonucleoproteina pequea nuclear (RNP pn), que consta de un grupo proteico unido a una molcula de ARN de 100-300 nucletidos, existen al menos 10 tipos distintos de esas molculas cortas de ARN. Seis de ellos son muy ricos en la base uracilo por lo que se denominan ARN-U. El posterior empalme de los fragmentos se efecta mediante el concurso de enzimas ligasas especficos.

El cdigo gentico
Es la relacin que hay entre la secuencia de nucletidos y la secuencia de aminocidos. Las clulas deben saber leer instrucciones codificadas en un lenguaje de 4 letras para fabricar productos que utilizan 20 unidades elementales. Segunda base

1 Bas e

U
UUU Phe

C
UCU Ser UCC UCA Leu UCG CCU Leu CCC CCA Leu CCG ACU Ile ACC ACA Thr Thr Pro Ser

3 Bas e U

UAU Tyr UAC UAA Stop UAG CAU Pro CAC CAA CAG AAU Asn AAC AAA Lys AAG GAU Ala GAC GAA Ala GAG Glu Asp Gln His

UGU Cys UGC UGA Stop UGG Trp CGU Arg CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG GGU Gly GGC GGA Gly GGG Arg Ser Arg

UUC UUA UUG CUU

C A G U C A G U C A G U C A G

CUC CUA CUG AUU

AUC

AUA Ile

AUG Met ACG GUU Val GCU GCC GCA Val GCG

GUC GUA GUG

El cdigo gentico fue descifrado en los aos 60-65 y puede ser resumido de la siguiente manera. Por medio de las 4 letras del alfabeto nucleico son escritas palabras de tres letras (codn) Las palabras se combinan para formar frases. Las frases son los genes. El significado de una frase es la protena. A cada palabra de 3 letras le corresponde un aminocido o una seal necesaria para empezar o terminar la lectura. Con las cuatro bases del ARN o del ADN se pueden

formar 64 tripletes o codones. Si cada triplete codifica para cada uno de los veinte aminocidos es evidente que sobran tripletes por este motivo en el alfabeto gentico esta degenerado pues a cada aminocido le puede corresponder mas de un codn, es decir existen codones sinnimos (varios tripletes distintos codifican para el mismo aminocido). Todas las frases comienzan en general por el codn AUG, llamado codn de iniciacin y terminan por uno o varios codones de terminacin UAG, UGA, UAA, los cuales sealan el fin de mensaje.

Traduccin del cdigo gentico: biosntesis de protenas

Es un proceso que se da en los ribosomas y determina la formacin de protenas. En el desciframiento de la informacin que lleva el ARNm intervienen dos tipos de ARN que no determinan protenas, son el ARNt y el ARNr. El ARNt tiene forma de hoja de trbol, en un extremo se encuentra el anticodn y en extremo opuesto se fija el aminocido correspondiente al codn que reconoce el anticodn. El complejo aminocido-ARNt se le denomina complejo de transferencia = Aminoacil-ARNt. La lectura del cdigo gentico por los ribosomas es un proceso en el que se distinguen tres etapas sucesivas:

1. Iniciacin. Se necesitan dos seales: el triplete iniciador AUG y la caperuza de metil

guanosina de ARN. Con la ayuda de los factores de iniciacin proteicos (FI) y la energa del GTP la subunidad menor del ribosoma se une al ARNm por medio de la caperuza formndose el complejo de iniciacin. La subunidad ribosmica aporta ya el ARNt iniciador con la metionina. Posteriormente se liberan los FI y llega la subunidad mayor del ribosoma formndose el ribosoma completo que ya tienen en la sede P la ARNtmetionina. La sede A est libre para recibir a un segundo ARNt cargado con su correspondiente aminocido.

2. Elongacin. Unin de sucesivos aminocidos. Se distinguen varios procesos:

a) Reconocimiento del codn por el correspondiente ARNt que se incorpora a la sede A b) Formacin del enlace peptdico entre el aminocido unido al ARNt de la sede P y el
recin incorporado a la sede A

c) Traslocacin. El ARNt vacio abandona la sede P lugar que ahora es ocupado por el

peptidil ARNt que estaba en la sede A. Simultneamente el ribosoma se desplaza tres nucletidos adelante. existen ARNt con los anticodones complementarios la sntesis se detiene por medio de los factores de liberacin que se incorporan a la sede A vaca del ribosoma y activando al enzima peptidil transferasa que hidroliza la unin del la ARNt con la cadena polipeptdica quedando libre la protena.

1. Al llegar el ribosoma a alguno de los codones de terminacin, como para estos no

Regulacin de la expresin gnica

La informacin gentica del ADN se transcribe al ARNm y se traduce para formar una protena. El gen implica una protena. Todas las clulas de un organismo tienen el mismo ADN pero no todas las clulas realizan las mismas funciones. Clulas hepticas, clulas pancreticas, glbulos rojos son tres tipos de clulas que tienen el mismo ADN pero las primeras se especializan en la fabricacin de unas protenas (enzimas) que son diferentes a las que fabrican las segundas y sin embargo los glbulos rojos solo fabrican una protena, la hemoglobina. Los mecanismos por los que una clula se especializa en la sntesis de determinadas protenas y no de otras se denomina diferenciacin celular. Este proceso implica la seleccin de determinadas secuencias de ADN que deben traducirse de forma preferente. Cuando un gen llega a traducirse de forma preferente, decimos que ese gen se ha expresado. Los mecanismos que lo controlan se denominan mecanismos de expresin gnica. Hoy se sabe que el control de la expresin gnica se realiza durante la transcripcin del ADN al ARN. Los primeros resultados sobre el control de la expresin gnica provienen de los experimentos llevados a cabo por Jacob e Monod (1965), al estudiar la actividad de los genes que codifican los enzimas de determinadas rutas metablicas en bacterias. Estos investigadores elaboraron una hiptesis que posteriormente ha sido contrastad experimentalmente en mltiples sistemas que se conoce como teora del Operon. Un opern es un conjunto de genes que codifican para protenas diferentes implicadas en procesos bioqumicos estrechamente relacionados (conjunto de enzimas que degradan un compuesto); todos estos genes se localizan en el cromosoma, unos cerca de otros, con el fin de que la regulacin de su expresin se realice de manera coordinada. En cada opern se diferencian las siguientes zonas:

Genes estructurales (E1, E2, E3,....), que codifican para la sntesis de protenas (enzimas) que intervienen en determinados procesos bioqumicos.

Gen regulador (R), que codifica para la sntesis de una protena represora (que se puede encontrar en forma activa o inactiva) y es el agente que controla materialmente la expresin. El promotor (P), prximo a los genes estructurales, que es la zona donde se une la ARN-plimerasa y decide el inicio de la transcripcin. El operador (O) que es una regin intercalada entre el promotor y los genes estructurales, posee una secuencia caracterstica reconocida por la protena represora activa: cuando se bloquea el operador con la protena represora, impide el avance del ARN-polimerasa y la transcripcin se interrumpe, con lo que se origina el proceso de la represin gnica.

Cuando la bacteria necesita sintetizar protenas debe separar el operador del represor y utiliza dos tcticas: la induccin enzimtica y la represin enzimtica.

Induccin enzimtica (Control negativo de la transcripcin) Opern de lactosa.

En primer lugar se sintetiza una protena represora que bloquea el operador y la ARN-polimerasa no se puede unir al ADN y no habr transcripcin y se impide la sntesis de los enzimas E1, E2, E3..... encargados de metabolizar la lactosa. La lactosa aportada por la dieta se comporta como un ligando capaz de unirse a la protena represora ocasionndole un cambio estructural que la convierte en inactiva quedando el operador desbloqueado y los genes se expresan (se transcriben y se traducen) y los enzimas E1, E2, E3 catalizan la transformacin de la lactosa. Cuando descienden los niveles de lactosa, el represor vuelve a activarse, se bloquea el operador y la expresin gnica vuelve a reprimirse. En resumen cuanto mayor es la cantidad de lactosa, mayor es el nivel de produccin enzimtica.

Represin enzimtica. Control positivo de la transcripcin

El ejemplo es el operon de histidina que regula la sntesis de enzimas que participan en la biosntesis de la histidina. En este caso se sintetiza un represor inactivo, por lo que los genes se expresan y es posible la sntesis de histidina. Pero, cuando comienza a haber un exceso de esta sustancia, sus molculas se comportan como un ligando activador que se une a la protena represora y la activa, se bloquea entonces el operador y se reprimen los genes, con lo que deja

de sintetizarse la histidina. Si disminuye su concentracin en el protoplasma, vuelve a inactivarse el represor, los genes se expresan de nuevo y se pone en marcha otra vez la sntesis de histidina.

Las hormonas tambin llevan a cabo procesos de regulacin gnica segn la naturaleza qumica de estas Hormonas lpidas.- Atraviesan la membrana celular y dentro del citoplasma se unen a protenas especficas formando el complejo Hormona receptor que en el ncleo se fija a zonas especficas del ADN y activa los mecanismos de la transcripcin Hormonas proteicas.- Son lipfobas y de gran tamao por lo que no pueden atravesar la membrana celular, necesitando unirse a protenas receptoras de membrana. El complejo hormona-receptor estimula el enzima adenilato ciclasa que transforma el ATP en AMPc que se une a las protenas que activarn como en el caso anterior el ADN y se transcribir.