DIAGNSTICO LABORATORIAL DA TUBERCULOSE

Maria Alice da Silva Telles Setor de Micobactrias - INSTITUTO ADOLFO LUTZ

EXAME BACTERIOLGICO

EXAME DIRETO - MICROSCOPIA

Limite de deteco: 104 bacilos/ml Exame rpido e de alta especificidade Detecta a fonte de infeco - o bacilfero Limitaes: Baixa sensibilidade e diagnstico presuntivo

INDICAES DO MINISTRIO DA SADE

Diagnstico da tuberculose pulmonar Implantao em toda a rede de laboratrios de Sade Pblica, por ser uma tcnica simples e de baixo custo Permite ampla cobertura de diagnstico e o controle da eficcia do tratamento

CULTURA DE MICOBACTRIAS
Limite de deteco: 102 bacilos/ml Aumenta o diagnstico em 30% (detecta casos paucibacilares) Possibilita a identificao da espcie e o antibiograma Limitao: tempo de resultado de 4 a 6 semanas
Lwenstein Jensen Ogawa Kudoh

DIGESTO E DESCONTAMINAO DOS ESPCIMES BIOLGICOS

N acetil L cistena + NaOH 2% Petroff (NaOH 4%) Lauril sulfato de sdio + NaOH 1% Kudoh (swab)- NaOH 4% cido oxlico 3% Cloreto de cetilpiridneo + NaCl 2% Fosfato trisdico 13% + Cloreto de benzalcnio

MEIOS DE CULTURA

Slidos
Lwenstein - Jensen meio a base de ovos, com sais, glicerol, asparagina e verde malaquita como agente inibidor (0,025g/100ml) Ogawa: meio semelhante ao LJ com glutamato de sdio substituindo a asparagina Middlebrook 7H10 - meio a base de agar, com vitaminas, co-fatores e verde malaquita (0,0025%), cido oleico,albumina,dextrose,catalase Middlebrook 7H11- composio semelhante a do 7H10 com adio de hidrolisado de casena

Lquidos
Middlebrook 7H9 - meio com vitaminas, cofatores e verde malaquita (0,0025%), albumina, dextrose, catalase.

Bifsicos - Lquido e slido Meios com fatores de crescimento

Hemina - M. haemophilum Piruvato de sdio 0,5% - M. bovis Micobactina - M. paratuberculosis

FATORES QUE INFLUENCIAM A QUALIDADE DA CULTURA

Amostra - tipo e qualidade, coleta e transporte Tempo at o processamento. Digesto e descontaminao: agentes qumicos e tempo de exposio. Meio de cultura - slido ou lquido Qualidade do meio - tempo de validade, tamanho do tubo de ensaio x quantidade de meio, presena de gua de condensao. Temperatura e condies de incubao.

TESTE DE SENSIBILIDADE S DROGAS

MTODOS INDICADOS PELA ORGANIZAO MUNDIAL DA SADE Mtodo das propores Mtodo da razo da resistncia Mtodo das concentraes absolutas MGIT SIRE PZA pirazinamidase ou MGIT960

IDENTIFICAO DE MICOBACTRIAS

LJ adicionado de 500 g/ml de cido -nitrobenzico

TB ou no TB?

MT
Tubo controle: positivo Tubo PNB: negativo

MNT
Tubo controle: positivo Tubo PNB:positivo

Identificao presuntiva
MT
Colnias secas, rugosas, acromgenas (couve-flor) Presena de fator corda

MNT
Colnias cremosas, lisas ou rugosas, pigmentadas ou no Ausncia de fator corda

ASPECTO MACROSCPICO CULTURA DE MICOBACTRIAS NO TUBERCULOSAS

M A C

M.flavescens

MAC M.gordonae

M.marinum

M.nonchromo genicum

M.kansasii

ASPECTO MICROSCPICO - CULTURA DE MICOBACTRIAS

Bacilos longos ou curtos, ausncia de corda outras espcies de micobactrias

. Formao de corda sugestivo de M tuberculosis

IDENTIFICAO MOLECULAR DE MICOBACTRIAS Kit disponvel no comrcio AccuProbe da Gen Probe, sonda de DNA para a identificao de micobactrias. Inno Lipa 16 sp (s complexo MT) Geno Type MTBC Hain Lifescience
Separa membros do complexo

Geno Type Mycobacteria Hain Lifesc

Mais comuns Adicionais

Mtodos no comerciais

Spoligotyping girB Sequenciamento Real time PCR

DETECO DO CRESCIMENTO DE MICOBACTRIAS

BACTEC MGIT
Meio Middlebrook 7H9 em tubos com silicone impregnado com rutnio - sensor da presena de 02

positivo

negativo

BACTEC MGIT 960

Esquema de deteco

MB BacT
Meio Middlebrook 7H9 em frascos com um sensor slido que detecta a produo de CO2

VersaTREK (ESP System II)

Cultura de sangue Cultura de fluidos estreis Deteco de micobactrias Susceptibilidade de M.tuberculosis INH RF - EMB

PERSPECTIVAS DOS NOVOS MTODOS

Vantagens Reduz o tempo de deteco da micobactria em cultura de 30-40 dias para 7-10 dias. Maior positividade: A leitura das culturas no depende da visualizao do crescimento de colnias. Permite o monitoramento contnuo da cultura.

AGILIZAO DO DIAGNSTICO
CULTURA: D para agilizar? Meio lquido Pedido gil Com critrio pe cruzinha em todos os quadradinhos!!! Vamos fazer a cultura de todos os casos?

Teste de sensibilidade
Em mdia de uma semana (5 a 12 dias)

POR QUE DEMORA?

Cultura pobre repique Cultura contaminada descontaminar Identificao antes do TS

REDE DE LABORATRIOS
Estado SP GSP Bacilos 47 Cultura 36 37 73 % cultura 77% 30% 43%

INTERIOR 122 TOTAL 169