DNA de morango

Os morangos que consumimos so plantas da espcie Fragaria ananassa. Estas plantas so Rosceas, ou seja, so da mesma famlia das rosas que enfeitam muitos jardins. Elas se reproduzem principalmente por meio do estolo, que um ramo que cresce paralelo ao cho, gerando brotos de novas plantas. As variedades de morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies diferentes que ocorriam, naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas Amricas (Chile e Estados Unidos). Uma das razes de se trabalhar com morangos que eles se prestam muito bem extrao de DNA, porque so muito macios e fceis de homogeneizar. Morangos maduros tambm produzem pectinases e celulases, que so enzimas que degradam a pectina e a celulose (respectivamente), presentes nas paredes celulares das clulas vegetais. Alm disso, os morangos possuem muito DNA: eles possuem 8 (oito) cpias de cada conjunto de cromossomos (so octoplides!). Materiais (por grupo): 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 1 saco plstico tipo "zip loc" 1 morango (fresco ou congelado) 10 ml de soluo de extrao de DNA (veja como fazer abaixo) Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil ou 1 filtro de pano ou gaze lcool etlico gelado (pode ser lcool 70 g.l.) 1 tubo de ensaio limpo 1 basto de vidro ou 1 palito de madeira (tipo pau-de-laranjeira, para manicure, encontrado em drogarias)

Preparo das solues e outras notas sobre os materiais O saquinho tipo "zip loc" deve ser bem espesso. Quanto mais espesso mais resistente e geralmente os saquinhos utilizados para embalar comidas no freezer so apropriados. Os morangos podem ser frescos ou congelados. Se for usar morangos congelados, deixar descongelar completamente antes de realizar o experimento. Outras frutas macias como Kiwi ou banana podem ser usadas, mas no fornecem ao final tanto DNA.

Soluo de extrao de DNA (suficiente para 100 grupos) 100 ml de xampu (no contendo condicionador) 15 gramas de NaCl (sal de cozinha) = 2 colheres de ch 900 ml de gua (H2O), de preferncia mineral 50 ml de detergente podem substituir o xampu (de preferncia sem corantes)

O lcool etlico (etanol) deve ser de, no mnimo, 90 g.l. e deve estar gelado. Se for usar gaze, corte-a em quadrados e dobre em 2 camadas. Corte-a grande o suficiente para poder ficar presa no funil ou na boca do tubo. Mtodo (ou como fazer) 1. Coloque um morango, previamente lavado e sem as spalas (as folhinhas verdes) em um saco zip loc. 2. Esmague o morango com o punho por, no mnimo, 2 minutos.

3. Adicione a soluo de extrao ao contedo do saco. 4. Misture tudo, apertando com as mos, por 1 minuto. 5. Derrame o extrato no aparato filtrante e deixe filtrar diretamente dentro do tubo. No encha totalmente o tubo (encha somente at 1/8 do seu volume total). 6. Derrame devagar o lcool gelado no tubo, at que o mesmo esteja cheio pela metade. 7. Mergulhe o basto de vidro ou o pau-de-laranjeira dentro do tubo no local onde a camada de lcool faz contato com a camada de extrato. 8. Mantenha o tubo ao nvel dos olhos para ver o que est acontecendo. Resultados esperados: Assim que os participantes derramarem o etanol gelado no extrato de morango eles comearo a notar fitas brancas muito finas de ADN, que se formaro na interface entre as duas camadas. Agitando-se o ADN que se formou na camada de etanol, este formar fibras como as de algodo, que grudaro no objeto que se est usando para misturar (basto de vidro ou madeira). O que acontece quando... Colocamos o detergente? O detergente presente no xampu ajuda a dissolver a bicamada lipdica que compe a membrana plasmtica e as membranas das organelas. Colocamos o sal? O sal ajuda a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, impedindo que elas precipitem com o DNA. Colocamos o etanol? O ADN no solvel em etanol (lcool etlico).

Quando as molculas so solveis em um dado solvente, elas se dispersam neste solvente e no so, portanto, visveis. Por outro lado, quando as molculas so insolveis em um dado solvente, elas se agrupam, tornando-se visveis. Quanto mais gelado estiver o lcool, menos solvel o ADN vai estar. Por isso to importante que o etanol seja mantido no freezer ou em um banho de gelo at a hora do experimento. Bom experimento!

DNA de ervilha
Materiais necessrios Ervilhas secas (aproximadamente 100 ml) Sal gua Amaciante de carne, suco de abacaxi ou soluo limpadora de lentes de contato (fornecero as enzimas). Um liquidificador Uma peneira Recipientes apropriados (copos, bckeres, etc.) lcool 96 G.L. gelado Um cronmetro (relgio).

Objetivos Extrair o DNA (cido desoxirribonucleico) de clulas de ervilha, atravs de um mtodo simples e acessvel, demonstrando assim a materialidade desta substncia. Procedimento Coloque a quantidade de ervilhas que vai usar de molho em 100 ml de gua por, no

mnimo, 30 minutos. Coloque as ervilhas, junto com sua gua, no liqidificador. Coloque uma pitada grande de sal e mais 100 ml de gua. Bata bem, por 15 segundos, na potncia mxima. Passe sua sopa de ervilhas pela peneira, recolhendo o filtrado. Adicione em torno de 1/6 de detergente (em relao ao volume da "sopa"). Isto deve dar em torno de 2 colheres de sopa. Misture e deixe descansar por 5 a 10 minutos. Aps este perodo, coloque a sopa em recipientes, preenchendo-os at 1/3 de sua capacidade (divida em 3 ou 4 recipientes menores). Coloque uma pitada de amaciante de carne e misture devagar. Cuidado ao misturar pois o ADN pode ser quebrado facilmente. O amaciante pode ser substitudo por suco de abacaxi (filtrado) ou soluo limpadora de lentes de contato. Use o suficiente. Deixe descansar por 5 minutos. Pegue os tubos (ou copos, etc.) e incline-os, derramando lcool gelado pela parede do recipiente. Coloque aproximadamente o mesmo volume de lcool que a sopa de ervilhas. O ADN deve subir para a camada alcolica e pode ser "pescado" por um palito de madeira ou outro tipo de gancho.

DNA na Cozinha
Por: Milton Moraes

Extrao de DNA de mucosa bucal 1. Bochechar aproximadamente 10-15ml de gua com acar (3%, uma colher de ch de acar em meio copo de requeijo. Uma quantidade maior de clulas pode ser obtida fazendo um raspado da mucosa com uma esptula de madeira). 2. Acondicione em um tubo cnico com tampa o volume obtido do bochecho (apenas 5ml) e adicione uma pitada de sal de cozinha (para aprox. 1% final). 3. Adicionar algumas gotas (5-10) de detergente diludo 25% (1:4) e homogeneizar vagarosamente. 4. Aquecer a 55oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo. 5. Adicionar lcool gelado (absoluto se possvel) pelas bordas do copo lentamente, com o auxlio de uma colher de sopa, at que se alcance pelo menos 1cm de espessura. O DNA (massaroca esbranquiada) dever formar um aglomerado e subir. Extrao de DNA de cebola na cozinha 1. Pegue cebola em cubos (como no espaguetti). Pode se utilizar um liquidificador ou mixer quando disponvel. 2. Adicionar 50ml de soluo de lise (1 colher de sopa de detergente +1 colher de caf de sal de cozinha). Elevar o volume com gua da pia. 3. Aquecer a 55oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo. 4. Passar a soluo em um filtro de caf. Opcional: Ao filtrado, adicionar uma pitada de

amaciante de carne. 5. Adicionar lcool gelado (absoluto se possvel) pelas bordas do copo lentamente, com o auxlio de uma colher de sopa, at que se alcance pelo menos 1cm de espessura Ser que funciona com outra amostra: ervilha, morango, Yakult, fermento biolgico... Por que voc no tenta em casa? Quais so as dicas do "Chef"? Compare os dois mtodos. Quais so as semelhanas e diferenas? Como esse processo funciona? Como age o detergente? O detergente dissolve lipdeos e protenas rompendo a clula. E a temperatura, o sal e o lcool? A temperatura elevada (55oC) inativa as DNAses (enzimas que degradam o DNA) e auxilia a dissoluo da membrana celular. O sal (NaCl) possibilita a precipitao dos cidos nucleicos em soluo alcolica, porque ele bloqueia a eletronegatividade do esqueleto fosfato-acar e favorece a aglomerao das molculas de DNA. Como DNA no solvel em lcool, quando este adicionado mistura, todos os componentes da mistura, exceto o DNA, permanecem em soluo, enquanto o DNA precipita na camada alcolica. Ateno aos cientistas cozinheiros Os materiais utilizados podem ser perigosos se ingeridos e devem ser manuseados com extrema cautela. O lcool inflamvel e deve ser mantido longe do fogo. Desenvolvida para o evento Genes no Parque, em comemorao aos 50 anos da descoberta da estrutura do DNA, a atividade DNA na Cozinha foi coordenada por Milton O. Moraes e contou com a participao inestimvel de Alejandra N. Martinez, Cludia F. Alves, Diogo Coutinho, Guilherme Mattos, Patrcia R. Vanderborght, Rocio Saavedro-Acero, Sidra E. Vasconcellos e Viviane M. Cmara. Todos os integrantes desenvolvem atividades de pesquisa no Laboratrio de Hansenase do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz. Os procedimentos foram desenvolvidos a partir de mtodos do laboratrio ou descritos por outros autores, segundo o livro Biologia Molecular na Prtica Mdica e Biolgica, de Milton Moraes