LAMBDA.

CUESTIONES DE APLICACIN
LECCIN 1. ENZIMAS DE RESTRICCIN. UN PAR DE CUESTIONES TRABAJANDO CON LOS DATOS DE LAS BASES DE DATOS MOLECULARES. 1- Localiza las secuencias palindrmicas de corte de las enzimas EcoRI (GAATTC/CTTAAG), HindIII (AAGCTT/TTCGAA) e PstI (CTGCAG/GACGTC). Cuantos fragmentos se espera que produzcan los ataques sobre el genoma completo del fago lambda con cada uno de estos enzimas? EcoRi: producir 8 cortes Hindll: producir 13 fragmentos Pstl: producir 29 fragmentos 2- Cuantos pares de bases tienen cada uno de estos fragmentos? Si no eres capaz de resolver esta pregunta en la pgina del NCBI, puedes usar el geneboy (http://www.dnai.org/geneboy/) para resolver esta cuestin. EcoRi: Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Hindll: Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento Fragmento 1-18053 2-5078 3-2027 4-731 5-1590 6-506 7-1170 8-1246 9-3935 10-2560 11-564 12-5182 13-1500 1- 6545 2- 6078 3- 8604 4- 4878 5- 5643 6- 7421 7- 3464 8- 2342

Pstl: Fragmento 1 Fragmento 2 Fragmento 3 Fragmento 4 Fragmento 5 Fragmento 6 Fragmento 7 Fragmento 8 Fragmento 9 Fragmento10 Fragmento11 Fragmento12 Fragmento13 Fragmento14 Fragmento15 Fragmento16 Fragmento17 Fragmento18 Fragmento19 Fragmento20 Fragmento21 Fragmento22 Fragmento23 Fragmento24 Fragmento25 Fragmento26 Fragmento27 Fragmento28 Fragmento29 Fragmento30 Fragmento31 Fragmento32 Fragmento33 Fragmento34 Fragmento35 Fragmento36 Fragmento37 Fragmento38

2560 264 805 15 216 514 339 200 193 18 94 468 2838 871 222 164 1463 523 72 2459 87 590 1110 150 1159 2443 448 2140 4507 2105 2972 247 4749 3802 307 1134 3316 29

UNAS CUESTIONES SOBRE EL REALIZADO EN EL LABORATORIO.

1- Describe el aspecto macroscpico del ADN en disolucin. Es visible el ADN? (Puedes tomar como referencia para comparar lo que viste en la prctica gentica a domicilio). Si piensas que hay alguna diferencia entre las dos observaciones, a que se puede deber? El ADN s es visible macroscpicamente, ya que cuando hicimos la prctica de la extraccin casera del ADN podamos observar a simple vista unas hebras blanquecinas llamadas medusa de ADN. En cambio, en la prctica realizada en el laboratorio, al usar cantidades muy pequeas, el ADN no se poda observar a simple vista, pero s tras la electroforesis, ya que el ADN se fragmenta y se observan en forma de rayas sobre el gel de agarosa. 2- Rellena la tabla siguiente cos los volmenes usados en la prctica. Tubo P E H L Lambda 4 L 4 L 4 L 4 L Tampn 5 L 5 L 5 L 6 L PstI 1 L EcoRI 1 L 1 L Hindlll

3- En que tubo piensas que no va a haber cambios, que no se van a producir fragmentos de restriccin del ADN? En el tubo L, ya que no aadimos enzima de restriccin. Solo echamos ADN, tampn de carga y colorante. 4- Compara el tubo P y el tubo L, qu piensas que pasar en el tubo P comparado con el tubo L? Justifica la respuesta. Como mencionamos antes, en el tubo L no hay encima de restriccin, con lo cual no habr fragmentacin de restriccin de ADN, en cambio en el tubo P s observaremos fragmentacin de restriccin del ADN ya que aadimos 1 L de enzima de restriccin PstI. 5- Si el ADN apareciese fragmentado al final de la reaccin en el tubo L, que tendramos que concluir? El tubo L, al no tener enzima de restriccin, no debera aparecer fragmentado el ADN. Si esto ocurriese, podra deberse a que el ADN tendra ya incorporado enzima de restriccin.

LECCIN 2. ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA. 1- Indica cual ser el ordenamiento relativo de los fragmentos de ADN segn su tamao, dentro del gel de agarosa. Indica cual es ese orden. Los fragmentos de ADN se ordenan en el gel de agarosa segn su masa molecular, es decir, cuanto menor sea su masa mayor ser su desplazamiento y cuanto mayor sea su masa menor ser su desplazamiento. Tambin influye el tamao de la cadena ya que cuanto mayor sea este, mayor masa tiene y consecuentemente menor ser su desplazamiento. 2- Suponiendo que tendramos 500 pequeos trozos de cada uno de los cuatro fragmentos despus de un tratamiento con enzimas de restriccin, cuantas bandas apareceran en el gel de agarosa? Aparecerian cuatro bandas LECCIN 3. CMO SE HACE PARA CONVERTIR EN VISIBLE EL ADN MIGRADO EN UN GEL DE AGAROSA. 1- Indica la utilidad del tampn de carga de la tincin Fast Blast. El tampn de carga y la tincin de Fast Blast se emplea para facilitar el pinchazo en el gel de agarosa y posteriormente poder monitorizar los resultados y poder realizar la lectura.