Las enzimas son biocatalizadores de naturaleza proteica (excepto RNA ribosomas) que disminuyen la energa entre el estado basal

y de transicin, obtenindose velocidades de reaccin elevadas al convertir determinados reactivos a productos. Las enzimas son protenas formadas por aminocidos, H3N(g amino)-CH(c, h) -R C -O O (g carboxilo); el grupo R cambia para cada AA (unin de radicales de aminocidos), obtenindose grupos AA; aminocidos con grupos r alifticos (Glycine, Alanine, Valine, Leucine); aminocidos no aromticos con gps R que contienen OH (Serine, Threonine); aminocidos con gps R que contienen S (Cysteine, Methionine); aminocidos acidicos y sus amidas (Aspartic acid, asparagine, Glutaminic acid); aminocidos bsicos (Arginine, Lysine, Histidine); aminocidos con anillos aromticos (Tyrosine, Tryptophan). Dependiendo del pH los g funcionales (amino, carboxilato, etc) van a estar disociados o no, impartindole determinada carga a cada aminocido. Interaccin entre aminocidos: enlace covalente: enlace peptdico (entre el g amino de un AA y el carboxilo de otro AA) , las protenas y pptidos estan formadas por estos enlaces; estructuras de resonancia de e peptdico: ordenacin planar rigida que permite estabilizar para cuando no sucede con las estructuras de Lewis; puente de h: 1 atomo de h se une a atomos electronegativamente N, O, S, los cuales son atrados por atomos electronegativos prximos a ellos (aminocidos con p. h: tirosina O-H, treonina H-O, histida N-H, cistenia S-H, a. glutmico; puente disulfuro: formado cuando existen residuos de cistenia prximos que proveen de estabilidad a las protenas. Enlaces coordinados X-M: se encuentran N-M (metal), O-M, S-M; donde el metal es parte de la actividad enzimtica (lacasa, peroxidasa, citocromo p450). Interacciones no covalentes en protenas: electrosttica (salina), Ion dipolo, dipolodipolo, puente de h, hidrofobica. Cadena peptdica: cadena lineal de aminocidos unidos por enlaces peptdicos Estructura primaria: secuencia de AA de una protena y presencia de enlaces disulfuro (s-s-s). Estructura secundaria: arreglos espaciales en parte de la cadena polipeptidica (lamina beta plegada, alfa hlice, vueltas beta, segmentos al azar). Vueltas beta. Estan compuestas de 4 residuos de AA, se forma un puente H primero y cuarto residuo, presentes entre dos laminas beta y laminas beta y alfa-helice, en protenas compactas ya que permiten voltear la cadena polipeptidica a travs de pocos AA. Segmentos al azar: proveen flexibilidad a la cadena polipeptidica, facilitando un cambio de conformacin, importantes en el ciclo cataltico de la enzima (unin de sustrato, transformacin cataltica y liberacin del producto). Estructuras supersecundarias: cuando hay arreglo repetitivo de estructuras tipo alfa hlice, lamina beta-alfa hlice, dentro de una protena (bulto helicoidal, barril beta). Estructura terciaria: arreglos espaciales de la cadena polipeptidica completa. Orden de doblamiento en protena: primaria secundaria terciaria estructura. Estructura cuaternaria: arreglo tridimensional de diferentes unidades o monmeros para formar dimeros, trmeros. Nomenclatura de enzimas: *tradicional (trival): nombre del sustrato+terminacin asa (amilasa, enzima que hidroliza almidon, ureasa, enzima que descompone la urea) *Sistematica EC: sustrato, accin, terminacin asa (triacilglicerol acilhidrolasa lipasa-) (el sustrato es triacilglicerol, accin hidrolizar triacilglicerol) Enzima EC (1 clase. 10 subclase. 3 subsubclase. 2 n serie).

CLASE. Oxidoreductasas. Catalizan reacciones de oxidacin y reduccin. Transferasas. Transfieren un g de un compuesto a otro. Hidrolasas. Catalizan la ruptura hidrolitica de un enlace. Liasas. Catalizan la ruptura de enlases (C-C, C-O C-N) formando dobles enlaces o anillos o de forma inversa aadiendo g a dobles enlaces. Isomerasas, catalizan los cambios estructurales o geomtricos dentro de una molecula. Ligasas. Catalizan la unin de 2 moleculas acopladas a la hidrolisis de ATP, GMP, UTP. SUBCLASE. 1. Oxidoreductasas. Indica el g que va ser oxidado. 2. Transferasas. El g que va ser transferido. 3. Hidrolasas. Tipo de enlace hidrolizado. 4. Liasas. Enlace roto. 5. Isomerasas tipo de isomerizacin 6. Ligasas tipo de enlace formado. SUB-SUBCLASE. Caracterizacin de la enzima, numero de serie: especifica la enzima en particular Ejemplo: acetilcolinesterasa (E.C.3.1.1.7). Enzima que hidroliza a la acetilcolina, liberando colina y g acetilo, clase: 3 (hidrolasa); subclase: 1 actua sobre enlaces ester; subsubclase: 1 hidrolisis de ester carboxlico; numero Ejemplo: Lacasa (E.C.1.10.3.2) (p-difenol: oxigeno oxidoreductasa) enzima que reduce O2 produciendo H2O oxidando en forma simultanea un substrato (pdifenol); 4 bencenodiol + O2 = benzosemiquinona + H2O; clase: 1 oxidoreductasa; subclase: 10 actua sobre difenoles y sustancias relacionadas, subsubclase: 3 utiliza al oxigeno como aceptor; numero de serie: 2 Ejemplo: piruvato carboxilasa (e.C.6.4.1.1) (pyruvato dixido de carbono ligasa). Enzima que carboxila al piruvato produciendo oxaloacetato, con la utilizacin de ATP. ATP+piruvato+HCO3-= ADP + fosfato + oxaloacetato; clase: 6 ligasa; subclase: 4 forma enlaces C-C; subsubclase: 1 forma enlaces C-C, pocas enzimas, 1 sola subsubclase) numero de serie: 1 piruvato carboxilasa. Cinetica Enzimatica. Actividad de enzimas (sustrato producido, producto formado). UI. De actividad enzimtica, cantidad de enzima necesaria para transformar 1 micromol de sustrato por minuto en condiciones saturadas de sustrato. 1 UI= 1 mol/min; katal (Kat). Cantidad de enzima necesaria para transformar 1 mol de sustrato por segundo ( 1 kat=1 9 mol/s; Katal Unidad muy grande; 1 kat = 1*10 nkat; 7 adems: 1 kat=6*10 UI. Actividad especifica. numero de unidades por mg de protena o ml de disolucin (UI/mg, UI/ml) numero de recambio. (turnover number Kcat) numero de molculas de sustrato convertidas por molecula de enzima por segundo Kcat=# molculas de -1 sustrato/molecula de enzima =s Ecuacion de MichaelisMenten vel inical de reaccin vs t: E+S k1 ES k2 P+E La vel inicial de formacin del producto Vo esta dada por: Vo=d[p]/dt=K2[ES] Una vez formado el complejo enzima sustrato, la concentracin de la enzima y del sustrato son: [E]=[E]o-[ES]; [S]=[S]o-[ES]; Briggs y Haldane un momento despus de que la enzima y el sustrato se mezclaban, la [ES] es constante en el estado estacionario; luego se tiene que: 0=d[ES]/dt=produccin-consumo; de acuerdo con el esquema: 0=d[ES]/dt=K1[E][S] -- K-1[ES[-K2[ES] (produccin-consumo). Vo=K2[E]o[S]/Km+[S]. mas sustrato: Vmax=kcat[E]o. Ecuacion de Michaelismenten= Vo=Vmax[S]/Km+[S]; Km: concentracin de sustrato a la cual la vel es la mitad de la vel max. Vmax: max vel qe alcanza una enzima en condiciones de sustrato (alta [S]). Ambas Km y Vmax caracterizan una enzima y con ellas se puede caracterizar la grafica de vel vs sustrato.

Determinacion de parmetros. Se obtiene experimentalmente: abs vs t (cinetica) con una [S];0 (pendiente) se saca un valor de m (vel de reaccin) para cada valor de S, obtenindose pares de valores, determinar km y vmax a partir de grafica es inexacto, se debe utilizar una o varias graficas: Linerwaver-Burk (doble reciproca) mayor grado de incertidumbre valores pequeos errores notorios altos se comprimen (1/V, 1/S, b=1/Vmax, m=Km/Vmax) Eadie-Hofstee til para ver si hay dispercion, excelentes datos para buena grafica (V, V/s, Vmax, m=-km, Vmax/Km) Hanes: grado de dispersin menor, coeficientes de determinacin mayores, grado de dispersin menor (s/v, S, b=km/Vmax, m=1/Vmax; utilizada). Datos de vel inicial de una reaccin enzimtica. [S] M; Vel M/s; determinar Vmax y Km con las graficas, el valor de la constante de recambio (Kcat); se debe conocer la concentracin de enzima; efecto de la [S] vs vel (velmicromol/s) vs [S] micromolar (Km, Vmax); Se sabe Vmax=Kcat [E]o Kcat=Vmax/[E]o; [E]o=1*10-4 M=100M; Kcat= 101M/s / 100M= 1.01 s-1 (num de rcambio Kcat) Efecto de [E]. +E = + cantidad de sustrato transformado Efecto de pH sobre actividad enzimtica. Altera el carcter ionico de los g funcionales de los aminocidos (NH3+, COO, -OH) afecta las propiedades catalticas de la enzima; a pH alto o bajo se desnaturaliza la enzima y en consecuencia ocurre su inactivacin (hay pH optimo para vel de reaccin; pepsina 1.5; tipsina 7.7; arginasa 9.7). Efecto de la temperatura. += +vel de reaccin hasta cierta temp optima. Uso de enzimas en biorremediacin salud humana, vegetal, animal, biotecnologa ambiental biorremediacin (plantas, biodegradacin bacteriana, enzimas). Enzimas utilizadas en biorremediacin +son biodegradables (protenas); + amplio espectro de substrato; + actan en amplio rango de condiciones ambientales (pH, salinidad, tem) +si se inmovilizan, incrementa su estabilidad a condiciones adversas y recuperarse despus de usarse; -no se puede recuperar la enzima despus del uso, -alto costo 1000UI Lacasa=$1500 al inmovilizar disminuye costo; - no se recuperan, se debe redosificar; -se puede inactivar en campo por agentes fsicos, qumicos o biol (se requiere monitorear) E mas utilizadas en biorremediacin enzimas de hongos ligninoliticos (basiodiomisetes, ascomicetos) involucrados en degradacin de la lignina de la madera; Lacasa, Lignino peroxidasa (LiP) Manganeso Peroxidasa (MnP); otras e: tirosinasa, cloroperoxidasa, citocromo p450 (utilizan el O2 como aceptor de e para oxidar compuestos organicos) LiP, MnP, peroxidasa, cloroperoxidasa (utilizan H2O para oxidar comp organicos) CPO (actua como halogenasa o catalasa) aplicacin de e en biorremediacin: hidrocarburos aromticos policiclicos, tnt y sus derivados (eficiencia de remocin), fenoles, colorantes y efluentes textiles; (aadiendo medidor), pesticidas organofosforados (inmovilizacin incrementa eficiencia de remocin).