Instituto de Gentica e Bioqumica -INGEB Exerccios de Bioenergtica e Enzimologia Aluno: Rafael Rogrio Pereira da Silva 83554 Turma:GA 8) Exemplos

s de reaes catalisadas por enzimas: Descarboxilao da Phe e desaminao do Trp. Descarboxilao da fenilalanina:

CO2

Fenilalanina

Desaminao do triptofano:

Triptofano desidrogenase

+ NH3 Triptofano 9) Sendo dada a seguinte tabela: [S] , mM 2,5 5,0 10,0 15,0 20,0 Vo, mM s-1 0,024 0,036 0,053 0,060 0,064

Pede-se calcular VO e KM. Fazer um grfico destes resultados segundo Michaelis-Menten e segundo Lineweaver-Burk. Determinar os valores de KM e de VMAX. A concentrao da enzima a mesma em todas as experincias. O que acontecer com a velocidade da reao se a concentrao da enzima for dobrada? Justificar a sua resposta usando um grfico VMAX x Tempo de reao.

Grfico de Michaelis Menten Tendo Vmx = 0,064 , calculamos Km V0 = Vmx . [S] Km + [S] 0,036 = 0, 064 . 5 Km + 5 Km = 3,889 mM

Analisando o grfico conclui-se que concentrao de enzima, [E], maior que a [S], na regio em que o grfico se encontra linear, assim, tem-se tanto enzima livre quanto enzima na forma ES. Portanto, se adicionarmos mais substrato ele reagir com a enzima para formar o complexo ES. Notamos tambm que, na regio em que a velocidade comea a ficar constante, a qual corresponde velocidade mxima, a [S] maior que a [E] e a enzima se encontra totalmente na forma ES. Assim, independentemente da adio de mais substrato a velocidade da reao no se altera j que a enzima encontra-se saturada. Caso adicione-se mais enzima, provavelmente a velocidade mxima da reao ter um valor maior, visto que haver necessidade de uma maior [S] para saturar todas as enzimas. Grfico de Lineweaver Burk: y = ax + b 1 = __Km . _1 + __1 _ V0 Vmx [S] Vmx Sabendo que y (1/V0) = 0 _1 = _-1_ Km [S] _-1_ = __1__ = 0,257 [S] 3,889 Sabendo que x (1/ [S]) = 0 1_ = __1 _ V0 Vmx 1_ = 1_ = 15,625 V0 0,064

Grfico de Lineweaver Burk 13) O estudo de uma reao enzimtica revelou os seguintes dados. Pede-se calcular o KM da enzima pelo substrato e se o tipo de inibio. [S] molaridade 1 x 10-4 5 x 10-4 1,5 x 10-3 2,5 x 10-3 5,0 x 10-3 Vo, s/I 0,026 0,092 0,136 0,150 0,165 Vo c/I 0,010 0,040 0,086 0,120 0,142 Km na presena do inibidor: Vmx = 0,142 1/ Vmx = 7,04 V0 = Vmx . [S] Km + [S] 0,086=0,142. 1,5 10-3 / Km +1,5 10-3 Km= 0,97. 10-3 1/Km = 1030 V0

Km na ausncia do inibidor: Vmx = 0,165 1/Vmx = 6,06 V0 = Vmx . [S] Km + [S] 0,092 = 0,165. 0,0005 / Km +0,0005 Km = 0,396 . 10-3 1/Km =2525

[S] Analisando o grfico, conclumos que se trata de uma inibio mista, j que ocorre uma variao na velocidade e no Km. A velocidade mxima na presena do inibidor menor do que em sua ausncia, j o Km com o inibidor maior do que sem o inibidor. Como se sabe a inibio tanto no competitiva quanto competitiva (mista). Quando inibidor competitivo, h uma semelhana estrutural entre ele e o substrato, portanto, ambos iro competir pelo mesmo stio ativo da enzima e apenas um aumento da concentrao do substrato poderia reverter tal efeito (ocorre alterao apenas no Km ). Enquanto que, na inibio no-competitiva, o inibidor se liga a um stio diferente do substrato e tal inibio s seria revertida caso houvesse a remoo do inibidor (apenas a velocidade alterada).