Peristaltismo en el intestino delgado de rata.

Introduccin El peristaltismo es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared intestinal se estira por el contenido luminal, y ocurre en todas las secciones del tubo digestivo, desde el esfago hasta el recto. El estiramiento inicia con una contraccin circular proximal al estmulo y un rea de relajacin por delante de el. Luego, la onda de contraccin se mueve en sentido de la boca al ano, impulsa el contenido de la luz hacia delante a una velocidad que vara entre 2 y 25 cm /s. La actividad peristltica puede incrementarse o disminuirse por las seales autnomas al intestino, pero su existencia es independiente de la inervacin extrnseca. De hecho la progresin del contenido no se bloquea si el segmento se invierte antes de suturarlo otra vez en su sitio.( Ganong , 2004)

Figura 1.- Movimientos peristlticos en el intestino delgado. La perstalsis es un excelente ejemplo de la actividad integral del sistema nervioso entrico. Parece que el estiramiento local induce la liberacin de serotonina la cual activa las neuronas sensoriales que a su vez activan al plexo mienterico. Las neuronas colirgenicas que dirigen en sentido retrogrado en este plexo activan a las neuronas que liberan sustancias P ms acetilcolina, lo cual produce contraccin del musculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas colinrgicas que se dirigen en sentido antergrado activan a las neuronas que secretan gases de xido ntrico (ON), pptido vasoactivo intestinal (VIP) y ATP, lo cual induce la relajacin por delante del estmulo. (Fox ,2008) Hiptesis

y y y y y

La presencia de calcio en la solucin tyrode, provocara un aumento en la peristalsis del musculo liso del intestino delgado. La adicin de citrato de sodio sobre el intestino delgado provocara la despolarizacin de las clulas del musculo entonces aumentara la peristalsis. Si se disminuye la temperatura entonces disminuir los movimientos peristlticos del musculo liso del intestino delgado. El efecto que tendr la adicin de epinefrina sobre el musculo liso (duodeno de la rata) provocara una disminucin de los movimientos peristlticos del mismo. La adiccin de acetilcolina a la solucin que contiene al intestino delgado de la rata provocara un aumento en la perstalsis del musculo.

Objetivos y y y Realizar un registro grafico de la actividad mecnica del musculo liso intestinal de la rata. Observar la movilidad basal de intestino delgado de la rata. Observar el efecto de la acetilcolina, la epinefrina, el citrato de sodio y el calcio sobre la actividad del musculo intestinal as como el efecto de la temperatura en la peristalsis del musculo.

Material y mtodos. La prctica se realizo mediante el programa BIOPAC, se monto el equipo adecuadamente para poder utilizarlo de manera adecuada. Fotografa del equipo montado para prctica en BIOPAC.

Figura2.- El equipo utilizado para la experimentacin.

Fotografa del intestino dentro de la cmara.

Figura 3.- El fragmento del intestino delgado de la rata . A) Calibracin. Calibramos con la tecla Cal1 con ningn peso en absoluto (slo con el gancho s de colgar el anillo del transductor). Utilizamos el peso de Cal2. (Una estimacin aproximada de las fuerzas ser suficiente para este ejercicio, ya que estamos interesados principalmente en los cambios en ritmicidad y el tono en nuestras grabaciones y no en valores absolutos). Registramos los valores para Cal1 y Cal2 a continuacin. Esto nos ayudar en el improbable caso de que el sistema se bloquear. B) Lnea basal. Una vez que el msculo se estabiliz, grabamos varias contracciones que muestran la ritmicidad normal y tono para as poder tomar estos registros como base de nuestras prximas modificaciones de la prctica. C) Efectos del calcio extracelular. Volvimos a colocar la solucin Tyrode normal con Ca2 +. Registramos la respuesta del msculo dejando unos segundos antes de aadir unas gotas de 2% de CaCl2. Observamos el comportamiento de la lnea. D) Efectos de la despolarizacin qumica. Aadimos 1 ml de Citrato de Sodio 1 M al bao, de nuevo volvimos a colocar la solucin Tyrode normal antes de aadir el Citrato de Sodio. Dejamos que el Citrato de Sodio permaneciera en el bao durante 1 minuto y observamos la respuesta. Sustituimos el

bao con la Tyrode normal para permitir que la amplitud y la contraccin rtmica volviera a la normalidad antes de proceder al siguiente paso. Registramos la respuesta del msculo dejando unos segundos antes de pasar al siguiente paso. Observamos el comportamiento de la lnea. E) Efectos del cambio en la temperatura. Volvimos a colocar la solucin de Tyrode con la temperatura ambiente (21 C). A su vez calentamos la solucin del bao con Tyrode, y esperamos hasta que la preparacin se estabilizara en 37 C antes de proceder. Registramos la respuesta del msculo dejando unos segundos antes de pasar al siguiente paso. Observamos el comportamiento de la lnea. F) Efectos de la epinefrina y acetilcolina. Aplicamos 1 ml de epinefrina para el bao de los msculos y registramos la respuesta del msculo dejando unos segundos antes de pasar al siguiente paso. Observamos el comportamiento de la lnea. Vaciamos y rellenamos el bao con solucin de Tyrode normal. Una vez que las contracciones se estabilizan, aadimos 1 ml de acetilcolina de igual manera para el bao de los msculos. Registramos la respuesta del msculo dejando unos segundos antes de pasar al siguiente paso. Observamos el comportamiento de la lnea. Vaciamos y rellenamos el bao. Deje que la preparacin se estabilizara antes de proceder.

Resultados. Tabla 1.- clculo de la anestesia. Peso de la rata. 372 g. Clculo. mL de anestesia. 0.05 mL 100g XmL 372g 186 mL 0.186 mL = 186 mL Mililitros de anestesia necesarios para un rata de310 g.

Tabla 2.- Calibracin. Calibracin Cal 1 Cal 2 Valor -1.981141 -1.67937

Valores de calibracin en BIOPAC. Lnea basal: 41.71 g

Figura 4.- Condiciones estndar. Efectos del calcio extracelular: 41.78g

Figura 5.- Adicin de CaCl2a la solucin Tyrode.

Efecto de la adicin de citrato de sodio: 44.74 g

Figura 6.- Efecto provocado por la adicin de Na+

Efecto de la temperatura: 40.24 g

Figura 7.- Disminucin de la temperatura. Efecto de Epinefrina: 39.86 g

Figura 8.- Efecto de la adicin de Epinefrina

Efecto de acetilcolina: 44.98 g

Figura 9.- Efecto de la adicin de Acetilcolina. Anlisis de resultados:

Se obtuvieron las tendencias de comportamiento de peristalsis del musculo liso del intestino delgado mediante el programa de biopac, a partir de lo que se determin el efecto que induce la adicin de diferentes compuestos a la solucin Tyrode. En la figura 4 se observa un el comportamiento basal del musculo liso del intestino delgado con una media de la fuerza de movimiento de 41.71 g. En la Figura 5 se observa que mediante la adicin de CaCl2 a la solucin de Tyrode se observa un notable aumento en la actividad peristltica del intestino delgado de la rata con una fuerza de 41.78 g. En la figura 6 se observa el comportamiento del intestino delgado cuando se adiciona citrato de sodio, el cual promueve la peristalsis del duodeno con una media de fuerza de 44.74 g. En la figura 7 se muestra el comportamiento del intestino delgado cuando se modific la temperatura de 35 C en promedio a 25 C provocando una notable disminucin en la peristalsis del intestino delgado, con una media de fuerza de 40.24 g . En la figura 8 se observa el efecto que tiene la adicin de epinefrina a la solucin de Tyrode donde se aprecia claramente una disminucin en la actividad peristltica del intestino delgado con una media de fuerza 39.86g. En la figura 9 se muestra el efecto que ejerce la adicin de Acetilcolina a la solucin que contiene al intestino delgado, tyrode donde se observa un aumento en la actividad peristltica del Duodeno del sujeto de estudio.

Discusin de resultados: Estado basal En el intestino delgado podemos observar diversos movimientos arrtmicos de la actividad basal, sin variaciones significativas comparadas con el segmento de msculo intestinal en solucin Tyrode, ste est compuesto en su mayora por cloruros de Calcio y de Potasio cuyas funciones de estos iones en el intestino delgado son la despolarizacin y generar un potencial de accin en las clulas de msculo liso. Efecto del citrato de sodio El transporte de Sodio juega un papel crucial en el suministro de energa para la captacin, proporciona el mecanismo para la traduccin de energa qumica en ATP, en energa

osmtica a partir de un gradiente de concentracin. La estequiometria nos indica que 1 mol de ATP acoplado hacia el bombeo exterior de 3 moles de Na+, as mismo para producir el movimiento peristatal del intestino es indispensable un potencial elctrico de unos 60mVolts, esta contribucin se lleva a cabo mediante el movimiento de cargas cuando 3 iones de Na+ por dos iones K+ que se convierte en la fuerza dominante en el establecimiento del potencial elctrico por el movimiento de K+ a travs de los canales K+. Las clulas epiteliales del intestino delgado poseen un sistema de transporte en la membrana del borde en cepillo que cataliza un intercambio de Na+/H+ elctricamente neutro origina una concentracin e H+, dicho intercambio origina una concentracin de H+ que origina a su vez la absorcin de Cl- a travs de un intercambiador Cl-/HCO3- situada en la membrana plasmtica luminal, este intercambio intertestinal est codificado por ARN. La necesidad de dos tipos de absorcin de Na+ puede provenir de las diferentes funciones del intestino, por lo tanto podemos decir que al aumentar la concentracin de Na+, ste estimular favorablemente el peristaltismo del intestino delgado. Efecto del cloruro de calcio La cantidad e calcio absorbida en el intestino delgado depende de la vitamina D, una ausencia de esta provoca que el calcio no sea absorbido adecuadamente. El efecto del calcio sobre el intestino es la contraccin del msculo por la entrada de calcio de las fibras y la unin de ste a la calmodulina. La calmodulina es una protena que al combinarse con calcio a su entrada en el citoplasma, es estructuralmente parecido a la troponina. Al juntarse el calcio con la calmodulina forman un complejo que se combina con la quinasa de la cadena ligera de miosina y la activa, dicha enzima cataliza la fosforilacin de las cadenas ligeras de miosina, que forman parte en los puentes cruzados de miosina, dichos puentes son los que permiten la contraccin al unirse a la actina.( Fox 2008). El proceso ya mencionado no se puede observar macroscpicamente, pero se pueden obtener registros con ayuda del Biopac. El calcio es un elemento muy importante ya que del depende que se lleve a cabo la contraccin de msculos lisos, de tener agotado el calcio en el cuerpo humano es imposible la absorcin en cualquier parte del organismo. El proceso de despolarizacin le da al msculo la capacidad de contraerse lentamente pero muy sostenidamente; es decir que la fuerza con la que se contraen a pesar de ser lenta es muy fuerte, y esto se puede observar en el intestino, la vejiga y en el tero durante el parto. Efectos de la Epinefrina y de la Acetilcolina:

Las hormonas pueden llegar a afectar la contraccin del musculo liso, tales como la noradrenalina, adrenalina, acetilcolina, angiotensina, vasopresina, oxitocina y serotonina. En la prctica tilizamos la acetilcolina, esta es una hormona excitatoria que interacciona con los receptores muscarinicos, tras su estimulacin se desencadenan una serie de procesos que conducen a un incremento de Ca 2+ intracelular y esto provoca la contraccin del musculo liso. La adrenalina tambin causa una contraccin en el musculo liso. Efecto de la atropina: La antropina es un compuesto anticolinergico por lo que disminuye la motilidad ya que bloquea los receptores muscarinicos en el muscilo liso cuando lo aplicamos en el bao, y asi inhiben la ccion de la acetilcolina. Conclusin: El efecto que tienen diferentes sustancias sobre la peristalsis del musculo liso del intestino delgado, puede favorecerlo, (tal es el caso de la Acetilcolina, la adicin de iones Ca2+, Na+), o inhibirlo (Disminucin de la temperatura o la adicin de Epinefrina). Al realizar la prctica, cuando hicimos las pruebas con los neurotransmisores, en la epinefrina observamos que los movimientos peristlticos requieren seales hormonales. Cuando aadimos la epinefrina causo un incremento en la contraccin del tejido muscular liso debido a que la cantidad que le agregamos era suficiente para observar los procesos por lo cuales se lleva a cabo la digestin y los procesos de metabolismo.

Bibliografa: y y Ganong, W.F. Fisiologa Medica. Ed. El manual Moderno. Mxico. 18 edicin (2002). Fox, Ira, Fisiologa. Ed Mc Graw Hill, United States, 2004