UREA-L3K

Nmeros de catlogo: 283-30 283-17 Presentaciones: 6 x 30 mL 5 x 100 mL

USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de urea en suero. PRECAUCION Evitar la ingestin y el contacto con la piel y los ojos. Vea la Hoja de Seguridad del Producto. REACTIVOS Reactivo de Urea: solucin que contiene amortiguador (pH 8.0 a 25C), 14 mmol/L de 2-oxoglutarato, 5.0 mmol/L de ADP, > 12 KU/L de GLDH (mamfero), > 50 KU/L de ureasa (botnica), 0.2 mmol/L de anlogo de NADH, estabilizadores y un conservador. ANTECEDENTES La determinacin de urea puede ser clnicamente til en el diagnstico de disfuncin renal. La urea en suero tiene una funcin importante en la discriminacin entre la azotemia pre-renal y pos-renal (1). La determinacin de nitrgeno ureico se ha llevado a cabo tradicionalmente ya sea por la condensacin con diacetil monoxima o por la conversin de la urea a amonio por la accin de la ureasa. Fearon (2) fue el primero en proponer el mtodo de la diacetil monoxima en 1939. Este mtodo colorimtrico tiene limitaciones como una especificidad deficiente e inestabilidad de la coloracin. Marshall (3) introdujo la utilizacin de ureasa en las determinaciones de urea midiendo el amonio liberado a travs de una titulacin con cido. El amonio producido por la accin de la ureasa tambin ha sido medido a travs de las tcnicas de Nesslerizacin (4,5) y por la reaccin de Berthelot (6). Estos mtodos colorimtricos carecen de especificidad, requieren de largos periodos de incubacin y de temperaturas altas. Talke y Schubert (7) describieron el primer procedimiento totalmente enzimtico. El DCL Urea-L3K es un procedimiento enzimtico que emplea glutamato deshidrogenasa y un anlogo estabilizado de NADH (8) que es fcil de usar y aplicable a analizadores de retina. PRINCIPIO Ureasa Urea + H2O 2NH3 + CO2 GLDH NH3 + 2-oxoglutarato + Cofactor reducido L-glutamato + Cofactor II Ecuacin I Ecuacin II

En el procedimiento de Talke y Schubert, la urea es hidrolizada primeramente por la ureasa para producir amonio y bixido de carbono como se indica en la Ecuacin I. El amonio producido en la primera reaccin reacciona con el 2-oxoglutarato y con el cofactor reducido en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y el Cofactor (II). La disminucin en la concentracin de cofactor reducido se mide a 340 nm o 380 nm, y es proporcional a la concentracin de urea en la muestra. PREPARACION DEL REACTIVO El reactivo es suministrado listo para su uso.
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ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO El reactivo incluido en el equipo es estable hasta la fecha de caducidad especificada en la etiqueta a 2 a 8C. DETERIORO DEL REACTIVO Las soluciones de los reactivos deben ser claras. La turbidez indicara deterioro. INSTRUMENTOS Puede usarse cualquier analizador con control de temperatura de 0.5C que sea capaz de leer la absorbancia con exactitud, con una sensibilidad de 0.001 de absorbancia a 340 nm y 380 nm. El ancho de banda deber ser de 10 nm o menos, la desviacin de la luz de 0.5% o menos y la exactitud de longitud de onda dentro de 2 nm. RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA La muestra de eleccin es suero fresco, claro y no hemolizado. No use sueros preservados con fluoruro. El fluoruro inhibir la reaccin de la ureasa. Puesto que la urea es susceptible a la degradacin bacteriana, las muestras deben almacenarse a 4-8C hasta que sean analizadas (9). INTERFERENCIAS La ureasa es especfica para la urea. Sin embargo, la contaminacin con amonio afectar seriamente los resultados obtenidos al utilizar este sistema. No deben efectuarse estas pruebas cerca de donde se realicen uroanlisis dentro del laboratorio o en el cual se utilicen productos para limpieza que contengan amoniaco. Se evaluaron las interferencias por ictericia, lipemia y hemlisis para este mtodo de urea en un analizador Hitachi 717 utilizando un criterio de significancia de variancia >10% a partir del control. No se encontr interferencia importante por ictericia a concentraciones de bilirrubina de 0-684 mol/L (0-40 mg/dL) en una muestra con un valor de urea de 10.3 mmol/L (29 mg/dL). No se encontr interferencia importante por lipemia a concentraciones de intralpidos de 0-1000 mg/dL [0-33.87 mmol/L (0-3000 mg/dL) de triglicridos] en una muestra con un valor de urea de 9.3 mmol/L (27 mg/dL). No se encontr interferencia importante por hemoglobina a concentraciones de hemoglobina de 0-155 mol/L (0-1000 mg/dL) en una muestra con un valor de urea de 9.6 mmol/L (27 mg/dL). Consulte un resumen de la influencia de drogas en pruebas de laboratorio clnico en Young, D.S. (10). PROCEDIMIENTO Materiales Proporcionados Se incluye el reactivo necesario para la determinacin de urea. Condiciones Siga las instrucciones dadas para la adaptacin a analizadores automatizados especficos o contacte con Servicio Tcnico para informarse sobre los parmetros especficos de cada analizador. Analizador Automatizado Longitud de onda (Primaria) ...................... 340 nm o 380 nm (Secundaria) .................. 660 nm Temperatura ............................................. 37C Paso de luz ............................................... Depende del instrumento Tipo de reaccin ....................................... Cintica Tiempo de reaccin .................................. 1.5 minutos Volumen de la muestra ............................. 3 L Volumen de reactivo ................................. 300 L Volumen total ............................................ 303 L Relacin muestra/reactivo ........................ 1/100 CALIBRACION El equipo no incluye un estndar de urea. Sin embargo, deber utilizarse un estndar de acuerdo a las instrucciones dadas para calibrar el procedimiento.
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CONTROL DE CALIDAD Se debe analizar un suero control con nivel normal y anormal con cada serie de muestras y los resultados debern caer dentro de 2 desviaciones estndar del valor establecido. CALCULO Y RESULTADOS Resultados La concentracin de urea se expresa en mmol/L (mg/dL). Limitaciones Una muestra con una concentracin de urea que exceda el lmite de linealidad deber diluirse con solucin salina a 0.9% y deber reanalizarse incorporando el factor de dilucin en el clculo del resultado. VALORES ESPERADOS (11) 3.9-13.1 mmol/L (11 -37 mg/dL) Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos normales para el rea donde est localizado. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL usando procedimientos automticos, a menos que se indique lo contrario. Estudio de Recuperacin Se aadi urea a un grupo de sueros humanos para incrementar la concentracin de urea en 4.1 mmol/L (11.4 mg/dL) y 5.9 mmol/L (16.6 mg/dL).La recuperacin de la urea agregada promedi 100%. Rango Lineal (NCCLS EP6-P) La linealidad del procedimiento descrito es de 53.6 mmol/L (150 mg/dL). El lmite inferior de deteccin del procedimiento descrito esde 0.7 mmol/L (2 mg/dL). Estos datos dieron por resultado un rango reportable de 0.753.6 mmol/L (2-150 mg/dL). Estudios de Precisin Se recopilaron los resultados de dos sueros en 40 corridas durante 20 das
Nivel mmol/L 4.8 18.0 mg/dL 13.5 50.3 DE Total mmol/L 0.18 0.43 mg/dL 0.50 1.20 CV Total % 4.0 2.4 DE dentro de la corrida mmol/L 0.14 0.30 mg/dL 0.39 0.83 CV dentro de la corrida % 2.9 1.6

Exactitud Se compar el rendimiento de este mtodo con el de un mtodo de urea similar (x) en un analizador Hitachi 717. Las muestras de suero de 42 pacientes que oscilaron de 1.4-21.8 mmol/L (4-61 mg/dL) dieron un coeficiente de correlacin de 0.9951. El coeficiente de correlacin fue de 0.995. El anlisis de regresin lineal dio la siguiente ecuacin: Este mtodo = 1.00 (mtodo de referencia) - 0.04 mmol/L (0.1 mg/dL).

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REFERENCIAS 1. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., 1268, 1986. 2. Fearon, W.R., The Carbanido Diacetyl Reaction: A Test for Citrullin, Biochem. J. 33, 902 (1939). 3. Marshall, E.K., Jr., J. Biol. Chem. 151, 487 (1913). 4. Gentzkow, C.J., J. Biol. Chem. 143, 531 (1942). 5. Karr, W.B., J. Lab. Clin. Med. 9, 329 (1924). 6. Fawcett, J.K., and Scott, J.E., J. Clin. Pathol. 13, 156 (1960). 7. Talke, H., Schubert, G.E., Enzymatishche Harnstoffbestimmung in BLUT and Serum in Optishcen Test NACH Warburg, Klin. Wchnschr 43, 174 (1965). 8. U.S. Patent No. 5,801,006. 9. Kaplan, L.A. and Pesce, A.J., Clinical Chemistry - Theory, Analysis, and Correlation, Third Edition. Mosby Year-Book Inc., St. Louis, p 500 (1996) 10. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Washington, Third Edition (1990). 11. Kaplan, L.A. and Pesce, A.J., Clinical Chemistry - Theory, Analysis, and Correlation, Third Edition, Mosby Year-Book Inc., St. Louis, p. 500 (1996). IN28330-2 Octubre 29, 2001

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