cidos grasos poliinsaturados y receptores nucleares TAGS: cidos grasos poliinsaturados , Receptores nucleares, Expresin gnica Aunque desde

hace tiempo la nutricin ha tenido un papel predominante en el manejo de la salud, los mecanismos por los cuales ciertos nutrimentos son esenciales para la salud ptima y para la prevencin de enfermedades humanas han sido elucidados (al menos parcialmente) en aos recientes. A comienzos del siglo 20 dos cidos grasos (FAs, por sus siglas en ingls), el cido linoleico (C18:2n-6, LA, por sus siglas en ingls) y el cido -linolnico (C18:3n-3, ALA, por sus siglas en ingls) fueron reconocidos como esenciales, y ms tarde fueron claros los efectos positivos de sus derivados alargados e insaturados, los cidos grasos poliinsaturados (PUFAs, por sus siglas en ingls) -6 y -3. Antes de los 1990s, se crea comnmente que los PUFAs ejercan sus efectos a travs de cambios a nivel de fosfolpidos (PLs, por sus siglas en ingls) en la membrana o a travs de la produccin de molculas sealizadoras como los eicosanoides. En 1992 se estableci la existencia de receptores nucleares capaces de unirse a los Fas y as afectar la transcripcin gnica. Desde la descripcin inicial de los receptores activados por proliferador de peroxisoma (PPARs, por sus siglas en ingls), otros factores de transcripcin han sido identificados por objetivos para regulacin por FAs o sus metabolitos, incluyendo el receptor X retinoide (RXR), el factor nuclear heptico 4 (HNF-4 , por sus siglas en ingls), los receptores X en hgado y (LXR y LXR , por sus siglas en ingls) y la protena 1c ligadora del elemento regulador de esterol (SREBP-1c, por sus siglas en ingls). Al examinar los efectos de los FAs en la transcripcin gnica se debe considerar que, antes de ejercer sus efectos nucleares, deben ser absorbidos en el intestino y transportados a las clulas; luego deben entrar a la clula y al ncleo, en donde se unen a los factores nucleares como cidos grasos no esterificados (NEFAs, por sus siglas en ingls) o como acil-CoA. Para comprender los efectos de los FAs en la transcripcin gnica, es importante considerar lo que pasa no solamente dentro del ncleo sino tambin afuera de ste.

De la dieta al ncleo Dado que los componentes dietarios interactan primero con el tracto gastrointestinal, los mecanismos que regulan la biodisponibilidad (grado o tasa a la cual una substancia es absorbida o se vuelve disponible en el sitio de actividad fisiolgica) de una molcula nutritiva es fundamental comprender su papel bioactivo en el cuerpo. El tracto gastrointestinal es un rgano muy complejo y muchos factores tales como pH, motilidad, diferentes comunidades microbianas y la composicin dietaria pueden influenciar la biodisponibilidad de una sustancia. Aunque en condiciones fisiolgicas los lpidos poseen una buena biodisponibilidad, su absorcin es influenciada por tantos factores que la concentracin en plasma de FAs especficos luego del consumo de una comida no es fcilmente predecible.

El componente lpido ms importante desde el punto de vista cuantitativo en la dieta humana es el triacilglicerol (TAG, por sus siglas en ingls, tambin conocido como triglicrido), el cual puede constituir unos 100 g/da o ms. Los grupos acilo grasos en los TAGs dietarios pueden variar en la longitud de cadena de C2 a C24 e ir de cidos grasos saturados a cidos grasos insaturados, hasta con 6 dobles enlaces. La estructura y composicin de cidos grasos de los TAGs afectan su absorcin y la distribucin de loa cidos grasos en el cuerpo luego de la digestin y absorcin. Adicionalmente, poco se sabe sobre la influencia de polimorfismos genticos en la absorcin de nutrimentos, pero se ha sugerido una asociacin entre NEFAs plasmticos y el polimorfismo de protenas ligadoras de cidos grasos intestinales (I-FABPs, por sus siglas en ingls). Los cidos grasos de cadena larga (LCFAs, por sus siglas en ingls) se unen a I-FABPs, las cuales los transportan en el citoplasma de las clulas epiteliales absorbentes columnares del intestino delgado. La absorcin de LCFAs es influenciada por un polimorfismo en el codn 54 del gen I-FABP (Ala54Thr). Este polimorfismo resulta en un cambio de alanina a treonina y est asociado con una mayor afinidad de I-FABP por el enlace a LCFA; los indios Pima, homocigosos para el alelo Thr54 tienen una mayor concentracin plasmtica de NEFAs luego del consumo de una comida alta en grasas. Este hallazgo indica que el polimorfismo en genes que codifican los transportadores intestinales puede modular la biodisponibilidad de componentes dietarios, y la biodisponibilidad, a su vez, puede modular los efectos de los nutrimentos. Una vez absorbidos, los FAs son reensamblados en complejos de lipoprotena y entregados a las clulas. Los FAs esterificados en TAGs de quilomicrones, provienen principalmente de lpidos dietarios, mientras que aquellos esterificados en los TAGs de lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL, por sus siglas en ingls) se derivan tanto de la dieta como de la biosntesis endgena. En todos los casos, los TAGs son hidrolizados por la accin de lipoprotena lipasa y los NEFAs entran a las clulas, al igual que los NEFAs unidos a albmina en circulacin, movilizados de los depsitos de reserva. Aunque existe controversia en relacin a la contribucin de la difusin pasiva versus el transporte de FA mediado por protena, ambos procesos son ampliamente aceptados. Los FAs cruzan la membrana por un proceso puramente difusor, sin requerir mediadores protenicos; diferentes estudios han sugerido que la difusin es lo suficientemente rpida para dar cuenta de todo el transporte de FA. Por otro lado, muchos investigadores creen que el transporte de FA est mediado por protenas especficas de membrana va transportadores de FAs. Entre estas protenas se encuentran particularmente: a) la protena ligadora de cido graso de membrana plasmtica (FABPpm, por sus siglas en ingls), una protena de aproximadamente 43 kDa localizada perifricamente en la membrana plasmtica; b) la cido graso translocasa (FAT, por sus siglas en ingls)/CD36, una glicoprotena de membrana integral de 88 kDa, con dos dominios transmembrana predichos, que es idntica a la glicoprotena IV o CD36 de las plaquetas y leucocitos humanos; y c) las protenas transportadoras de cido graso 1 a 6 (FATP1-FATP6, por sus siglas en ingls), las cuales son expresadas diferencialmente en diferentes tejidos. Existen varios reportes sobre la regulacin de protenas involucradas en el transporte de FAs, pero solamente comenzamos a elucidar la forma en que clulas y tejidos pueden regular a los transportadores de FAs bajo condiciones fisiolgicas normales, as como en estrs y enfermedad. No es sorprendente

que los factores activados por lpidos o sus anlogos derivan con frecuencia en la modulacin de los transportadores de FAs. Estos modos de regulacin incluyen la regulacin transcripcional a travs de estimulacin mediada por substrato, tales como la activacin de PPAR o la translocacin de compartimentos intracelular a membrana plasmtica en el caso de FAT/CD36 y FATP1, por citar solo un ejemplo. Adems de las protenas que controlan la entrada de FAs a la clula, existen protenas intracelulares que regulan la particin a diferentes destinos metablicos, tales como la sntesis de TAGs para almacenamiento, la sntesis de PLs, oxidacin para energa, sealizacin intracelular y acilacin de protenas. Estas protenas incluyen las acil-CoA sintetasas (ACS, por sus siglas en ingls) y mltiples protenas citoslicas pequeas, llamadas colectivamente protenas ligadoras de cidos grasos (FABPs, por sus siglas en ingls). Una vez en las clulas, los NEFAs son rpidamente convertidos en tioesteres acilo graso-CoA por ACS. Al menos se han descrito 6 ACS, de ACS-1 a ACS-5 y la ACS de cadena muy larga; cada isoforma puede activar un amplio rango de FAs, aunque algunas son ms activas hacia FAs especficos (por ejemplo, ACS-4 es ms activa con 20:4n-6, 20:5n-3 y 22:6n-3). Los estudios han sugerido que ciertas ACS pueden canalizar los tioesteres acil-CoA a compartimentos metablicos especficos, como ACS-1 y ACS-4 que estn ligados a la sntesis de TAGs. La conversin de NEFAs a acil-CoA por las ACS es una etapa determinante de tasa para la entrada de FAs a la -oxidacin, elongacin/desaturacin o asimilacin en lpidos complejos tales como TAGs, steres de colesterol o PLs. El secuestro hacia rutas sintticas tales como la sntesis de lpidos, tambin est influenciada por enzimas que arrastran a los FAs hacia estas rutas. Un retraso en la asimilacin de PUFAs de 20 y 22 carbonos en lpidos neutros, se debe al hecho de que los tioesteres de CoA de los PUFAs de 20 y 22 carbonos son substratos pobres para muchas reacciones; como ejemplos, el cido eicosapentaenoico (C20:5n-3, EPA, por sus siglas en ingls), pero no el cido araquidnico (C20:4n-6, AA, por sus siglas en ingls) o el cido docosapentaenoico (C22:5n-3, DPA, por sus siglas en ingls), es un substrato pobre para la diacilglicerol aciltransferasa, la etapa terminal en la biosntesis de TAG, y los tioesteres de CoA de los PUFAs de 20 y 22 carbonos son substratos pobres para la acilcolesterol aciltransferasa I. Adicionalmente, los PUFAs iguales o mayores a 22 carbonos requieren una -oxidacin peroxismica previa para acortar el FA antes de entrar en la espiral de -oxidacin mitocondrial, causando un retraso en su oxidacin. En conjunto, estas situaciones pueden llevar a una elevacin en los niveles intracelulares de NEFA o acil-CoA de PUFAs especficos de 20 y 22 carbonos (tanto -6 como -3). La concentracin intracelular de NEFAs y tioesteres de acil-CoA es baja (<10M) y la mayora de ellos estn ligados a protenas. Las FABPs son protenas ligadoras citoslicas abundantes, con masas moleculares de 14-15 kDa, caracterizadas por su alta afinidad por molculas hidrofbicas y sus estructuras terciarias. Se conocen por lo menos 9 tipos de FABPs y cada una de ellas tiene una especificidad de sustrato que se sobrelapa pero algo diferente, y cada una de ellas es codificada por un gen especfico bajo la regulacin de la transcripcin de tipo celular. La FABP de hgado (L-FABP, por sus siglas en ingls) es principalmente expresada en al

hgado y el intestino, la FABP de intestino (I-FABP, por sus siglas en ingls) se expresa en el intestino, la FABP de corazn (H-FABP, por sus siglas en ingls) se expresa en corazn, msculo, tejido adiposo caf, prstata y trofoblasto placentario, mientras que la FABP adiposa (A-FABP, por sus siglas en ingls) se expresa en el tejido adiposo blanco. Los mRNAs de L-FABP, I-FABP y H-FABP son inducidos por agonistas de PPAR , mientras que A-FABP es inducida por agonistas de PPAR . Los NEFAs y acil-CoA no ligados se unen para afectar la actividad de factores de transcripcin especficos; entre ellos, los PPARs son considerados como los principalmente involucrados en la regulacin directa de la expresin gnica por PUFAs.

Dentro del ncleo: receptores activados por proliferador de peroxisoma En 1990 los PPARs fueron identificados como factores de transcripcin, y en 1992 se demostr que el cido linoleico y el cido araquidnico podran potencialmente activarlos. Los 3 miembros de la familia PPAR, PPAR , PPAR y PPAR , tienen una organizacin cannica de receptor nuclear. El dominio A/B N-terminal no perece estar estructurado y alberga una dbil funcin de transactivacin independiente de ligando, referida como AF-1; el dominio C contiene el dominio ligador a DNA, constituido por un motivo con 2 dedos de cinc que es caracterstico de la superfamilia de receptores nucleares. El dominio D es una regin bisagra. El dominio E es un dominio que se une a ligando y comprende 12 hlices y 5 hojas que se doblan para crear una gran cavidad hidrofbica, en donde estn sepultados los ligandos; el dominio E contiene una funcin de transactivacin dependiente de ligando llamada AF-2 y tambin ofrece las superficies principales para dimerizacin as como para interaccin con protenas reguladoras. Cada miembro de la familia PPAR es transcrito por un gen especfico. El ayuste alternativo y el uso de diferentes promotores dan lugar a diferentes variantes de ayuste; en los humanos, adems del mRNA de longitud total para PPAR , ha sido identificada una variante de ayuste carente de la regin bisagra y el dominio que se une a ligando completo, interfiriendo posiblemente con la actividad de PPAR y otros receptores nucleares al competir por los coactivadores. Las variantes de ayuste para PPAR dan lugar a un producto de traduccin primario. Estudios estructurales del gen y el transcripto mRNA de PPAR apoyan la existencia de mltiples isoformas de PPAR . El marco de lectura abierto (ORF, por sus siglas en ingls) del gen PPARG consiste de exones 1 a 6. Los exones 2 y 3 codifican el dominio ligador de DNA, mientras que los exones 5 y 6 codifican el dominio de unin a ligando. La regin terminal 52 del transcripto es la ms variable y es la determinante de la isoforma PPAR . Hasta mediados de 2005, se haban identificado 3 exones en la regin terminal 52 en muchas especies, incluyendo el mono Rhesus y el humano; estos son conocidos como exn A1, exn A2 y exn B; estn alternativamente ayustados con los exones 1-6 del ORF para generar 3 isoformas bien establecidas de PPAR . PPAR 1 consiste de un exn A1 y un exn A2 sin traducir, ayustados junto con los exones 1-6; el mRNA para PPAR 2 consiste de un exn B traducido y exones 1-6, as que en humanos la protena codificada por PPAR tiene 28 aminocidos adicionales en el trmino N. Una tercera isoforma, PPAR 3, identificada en humanos, consiste solamente del exn A2 sin traducir y su regin terminal 52, as

como los exones 1-6; PPAR 4 contiene solamente los exones 1-6, los cuales son comunes a todos los subtipos PPAR . Recientemente se identificaron 2 nuevos exones en el DNA complementario (cDNA, por sus siglas en ingls) de PPAR en macrfagos de monto, que han sido llamados exn C y exn D. Ambos exones se combinan con los exones A1-A2 o con el exn B para formar nuevas isoformas de PPAR . PPAR es expresado a niveles relativamente altos en el hgado, el intestino delgado, rin, corazn y tejido adiposo caf, y es un jugador importante en la regulacin del transporte y oxidacin de FAs, proliferacin celular y comunicacin inflamatoria. PPAR es ubicuamente expresado y est involucrado en el desarrollo, metabolismo de lpidos, proliferacin de clulas epidrmicas, mielinizacin de los nervios, sanado de heridas y respuestas adaptadoras al ejercicio en el msculo esqueltico. PPAR juega un papel en la homeostasis de glucosa, metabolismo de lpidos, ciclo celular, inflamacin y carcinognesis, y es un factor de diferenciacin de adipocito. La expresin de las varias isoformas de PPAR muestra especificidad tisular. PPAR 1 es la ms ampliamente expresada, PPAR 2 est localizada primariamente en los adipocitos, PPAR 3 es encontrada en adipocitos, epitelio colnico y macrfagos, mientras que la distribucin de PPAR es poco clara.

Entre la multitud de agentes que activan los PPARs, muchos son de origen nutricional; por esta razn se ha sugerido que los PPARs median la regulacin dietaria de la expresin gnica. Existe alguna especificidad entre los ligandos y los subtipos PPAR; diferencias estructurales y en aminocidos en el paquete ligador de la isoformas PPAR contribuyen a la selectividad para la unin a ligando. Los ligandos de PPAR pueden ser clasificados en ligandos sintticos (tales como los proliferadores de peroxisoma, compuestos hipolipidmicos, compuestos antiinflamatorios y compuestos sensibilizadores a la insulina) y en ligandos naturales (tales como cidos grasos de cadena media, cidos grasos de cadena larga y eicosanoides. Los LCFAs, particularmente los PUFAs, activan preferentemente PPAR , pero tambin son capaces de activar PPAR y PPAR . Entre los LCFAs, los FAs de 18 y 20 carbonos son ligandos preferidos para la activacin de PPAR. Por lo tanto, la activacin de PPARs por FAs de 22 carbonos requerir muy posiblemente de la retroconversin previa a PUFA de 20 carbonos, un proceso que requiere la -oxidacin peroxismica. PPAR se une a 18:1n-9 y 20:5n-3 con casi la misma afinidad, a pesar de que 20:5n3 pero no 18:1n-9 activa PPAR en hepatocitos primarios de rata. La explicacin ms simple es que la poza intracelular de NEFAs disponible para activar a PPAR est sujeta a regulacin metablica; dado que 20:5n-3CoA ha sido reportada como un substrato pobre para la sntesis de TAGs, el decremento en la asimilacin de EPA en lpidos neutros podra elevar esta concentracin intracelular a un nivel suficiente para activar PPAR . Aunque se piensa que los LCFAs son ligandos endgenos putativos de PPAR , la mayora de los estudios de unin a radioligando demostraron que PPAR se une a LCFAs insaturados solamente con afinidades dbiles (valores Kd en el rango micromolar) y los LCFAs saturados (cidos laurico y palmtico) se unen todava peor. Estas afinidades basadas en radioligando para LCFAs son varios rdenes de magnitud ms dbiles que la afinidad de PPAR por xenobiticos sintticos. Dado que

las concentraciones nucleoplsmicas de LCFAs estn en el rango de 39-68 nM, basndose en ensayos de unin a radioligando parecera improbable que los LCFAs sean ligandos endgenos fisiolgicamente significativos para PPAR . Por otro lado, los paquetes de unin de PPARs son 3-4 veces ms grandes que aquellos en otros receptores nucleares, siendo por lo tanto lo suficientemente grandes para permitir que diferentes FAs se unan en mltiples conformaciones. Los PUFAs flexibles son probablemente ligandos fisiolgicamente relevantes de los PPARs an si exhiben afinidad y actividad ms bajas, comparados con otros compuestos, y los PPARs pueden funcionar como sensores de lpidos y reconocer varios diferentes metabolitos ms que una sola hormona con alta afinidad. Ms recientemente, utilizando ensayos de unin por fluorescencia directa y desplazamiento de fluorescencia, se ha proporcionado evidencia significativa, indicando que PPAR exhibe alta afinidad (valores de Kd 15-20 nM) para los LCFAs insaturados (pero no para los saturados). Debe todava confirmarse si solamente los LCFAs insaturados representan ligandos endgenos fisiolgicamente significativos para PPAR . Los datos indican que tambin los metabolitos de LCFA, tales como LCFA-CoAs, pueden representar ligandos de PPAR de alta afinidad endgenos activos. La observacin de la alta afinidad e PPAR por LCFA-CoAs y LCFAs insaturados est en concordancia con la estructura del paquete de unin a ligando de esta protena, la cual consiste de 13 -hlices y 4 -filamentos pequeos, con un paquete de enlace formando una cavidad en forma de Y de 1400 3. Este volumen parece suficiente para acomodar LCFAs as como LCFA-CoAs, los cuales tienen volmenes tpicos de <430 3 y <700 3, respectivamente. La estructura global de la regin dominio de unin a ligando de cada subtipo PPAR es muy similar, con cambios especficos de aminocidos que determinan la especificidad de ligando entre los subtipos, sugiriendo que cada subtipo PPAR puede interactuar con acil-CoAs. Los PPARs ejercen sus efectos en la transcripcin gnica por dimerizacin con los receptores del cido 9,cis-retinoico (RXRs, por sus siglas en ingls). El heterodmero se une a una secuencia corta de DNA, el elemento de respuesta PPAR (PPRE, por sus siglas en ingls) presente en la regin promotora de los genes objetivo (target), el cual es una secuencia DR1 (repeticin directa de la secuencia AGGTCA, separada por un nucletido). Si el nucletido entre los 2 hexmeros es una adenina, la afinidad de unin del heterodmero PPAR/RXR es marcadamente mejorada. Tambin, la presencia de una secuencia AA/TCT en el lado 5 del PPRE incrementa la afinidad, dado que estas caractersticas del DNA resultan en una polaridad al heterodmero unido, el PPAR unindose al hexmero corriente arriba (extremo 5 ) mientras que RXR interacta con el hexmero ms bajo, en 3 . Los RXRs se unen al ismero 9-cis del cido retinoico (RA, por sus siglas en ingls) solamente, mientras que otros receptores nucleares, los receptores de cido retinoico (RARs, por sus siglas en ingls) se unen tanto a los ismeros 9-cis como a los todo-trans (all-trans). El RA se deriva de la vitamina A dietaria (retinol), la cual puede ser convertida en retinal dentro de las clulas. El retinal es el precursor del RA todo-trans, el cual puede ser enzimticamente isomerizado a 9-cis RA. La regulacin de esta etapa enzimtica controla la relacin 9-cis/todo-trans dentro de la clula, regulando las rutas de RAR y RXR.

Aunque los RXRs poder estar activos como homodmeros, los heterodmeros RXR son la especie molecular fisiolgicamente relevante, y dado que RXR es el socio obligado con otros receptores nucleares, entre ellos los PPARs, es el receptor clave en muchas rutas. Otra peculiaridad de RXR es su propensin a formar un homotetrmero autorreprimido en la ausencia de ligandos. RXR es tambin capaz de unirse a FAs, y se ha demostrado que el cido docosahexaenoico (DHA, por sus siglas en ingls) lo activa. La deficiencia de DHA en rata y humano resulta en anormalidades similares a aquellas observadas en ratones noqueados en RXR. La habilidad de RXR para ligar FAs subraya su involucramiento potencial en la homeostasis de lpidos a travs de complejos mecanismos de retroalimentacin, en asociacin con otros receptores nucleares tales como PPARs. Otros PUFAs estrechamente relacionados a DHA, como EPA o AA, pueden activar RXR pero con menor eficiencia, mientras que otros FAs, tales como el cido ercico (C22:1n-9) no lo hacen. El cambio conformacional que ocurre con la unin del ligando a los PPARs tambin facilita el reclutamiento de coactivadores: el coactivador 1 del receptor esteroide (SRC-1, por sus siglas en ingls), protena ligadora de CREB/p300 (CBP, por sus siglas en ingls) CREB es un factor de transcripcin que se une a ciertas secuencias de DNA llamadas elementos de respuesta cAMP, incrementando o disminuyendo la transcripcin de los genes hacia 3 -, la protena de interaccin con receptores nucleares 1 (NRIP1 o RIP140, por sus siglas en ingls), la protena asociada al factor andrognico 70 (ARA70, por sus siglas en ingls), miembros de la familia de coactivadores DRIP/TRAP (complejo multiproteinico que funciona como coactivador transcripcional, conocido tambin como protena interactuante con el receptor de vitamina D DRIP, por sus siglas en ingls- o protenas asociadas al receptor de hormona tiroidea TRAP, por sus siglas en ingls-), protena interactuante con PPAR, el coactivador 1 de PPAR y la protena ligadora de PPAR (PBP, por sus siglas en ingls). De forma similar a otros receptores de hormona esteroidea, existen tambin correpresores que se asocian con los PPARs: el correpresor de receptor nuclear (NCoR, por sus siglas en ingls) y el mediador silenciador para los receptores de hormona retinoide y tiroideo (SMRT, por sus siglas en ingls), que se disocian del receptor con la unin del ligando. La actividad de los PPARs puede ser modificada tambin por fosforilacin, nitracin, ubiquitinacin y sumoilacin. El impacto de la fosforilacin en la actividad de los PPARs depende en el residuo que es fosforilado as como en la cascada de quinasa que est siendo activada; la nitracin de residuos de tirosina en PPAR inhibe la translocacin del citosol al ncleo. La unin del ligando a PPAR induce la ubiquitinacin y por tanto la degradacin del receptor, mientras que la unin de ligando a PPAR estabiliza el receptor al disminuir su rata de ubiquitinacin. La unin del ligando tambin regula la sumoilacin de PPAR , la cual ocurre en un residuo diferente de lisina en una manera dependiente de ligando o independiente de ligando y ejerce diferentes efectos. Los ligandos estn, por lo tanto, influenciando la actividad de PPAR en una manera muy compleja. Aunque la identificacin de un PPRE en la regin promotora es algunas veces considerado suficiente para asumir que un gen es un objetivo de PPAR, estos anlisis estereotpicos no son suficientes para explicar la accin de PPAR especfica en algn tejido. La expresin basal de varios

genes es dominantemente regulada en una manera especfica al tejido y no inducida por un ligando de PPAR solamente, aun si ese tejido expresa abundantemente PPARs. Esta accin PPAR especfica a cada tejido puede ser explicada por 2 posibilidades: a) el gen sensible es general y dominantemente reprimido y PPAR/RXR solo no puede activar la transcripcin sin un factor potenciador especfico al tejido; b) el gen es bsicamente activado por PPAR/RXR solo pero las clulas expresan un represor. Los PUFAs unindose a PPAR resultan en la estimulacin rpida de los genes involucrados en la oxidacin de lpidos, mientras que los PUFAs inhiben los genes lipognicos, tales como el de la FA sintetasa. Esta inhibicin no es mediada por PPAR , ya que se ha demostrado tambin en ratones PPAR nulos, indicando que algunos efectos de los PUFAs no son mediados por PPAR . Los PPARs pueden mediar efectos represores indirectos denominados transrepresin, por inhibicin de la actividad de factores de transcripcin clave. La transrepresin puede ocurrir por inhibicin de la unin de los factores de transcripcin al DNA mediante interaccin directa protena-protena (inmovilizacin o tethering ) o mediante secuestro de los cofactores necesarios para su actividad (sofocamiento o squelching ). De cualquier forma, la unin de ligando es fundamental para los efectos represores de PPAR. Aunque los mecanismos antes mencionados podran explicar los efectos represivos mediados por PPAR de los PUFAs en la expresin gnica, otros factores de transcripcin han sido identificados como posibles mediadores para la inhibicin de diferentes genes, asociada a PUFAs.

Dentro del ncleo: PUFAs y otros receptores nucleares Receptores X del hgado (LXR y LXR ) LXR se encuentra principalmente en hgado, riones, intestino, tejido adiposo y glndulas adrenales, mientras que LXR es expresado ms ubicuamente. Ambos LXRs se unen a oxiesteroles y regulan directamente la expresin de los genes involucrados en la sntesis heptica de cidos biliares. Se ha demostrado tambin que los LXRs regulan genes involucrados en el metabolismo de lpidos tales como la lipoprotena lipasa, la cido graso sintetasa, la acetil-CoA carboxilasa y la estearoilo-CoA desaturasa 1. Adicionalmente, LXRs regulan indirectamente la expresin de genes lipognicos a travs de la regulacin de la transcripcin del gen SREBF1 (conocido tambin como SREBP-1c, entre otros alias). LXR funciona por heterodimerizacin con RXR y unindose a repeticiones DR-4 llamadas elementos de respuesta a LXR (LXREs, por sus siglas en ingls). Los FAs trabajan en diferentes formas para antagonizar los efectos de LXRs en la promocin de sntesis y almacenamiento de lpidos: a) Los FAs insaturados antagonizan la unin de oxiesterol a LXR e inhiben la activacin de LXR; la jerarqua para este efecto es 20:4n-6 > 18:2n-6 > 18:1n-9. Los FAs saturados no tienen efectos; b) Los FAs inhiben la unin de los heterodmeros LXR /RXR a los LXRE; c) se ha demostrado que los PPAR y PPAR que son activados por PUFAs se unen directamente a LXRs y antagonizan sus efectos lipognicos, probablemente debido a la competencia entre PPAR y LXR por el socio RXR. Los

activadores de PPAR inducen la transcripcin del gen NR1H3 (de LXR ), pero no del gen NR1H2 (de LXR ) a travs de elementos cis-reguladores en el promotor de NR1H3. As, los PUFAs pueden inducir potencialmente los niveles de LXR en las clulas, mientras que inhiben la unin de LXR a oxiesteroles; d) la unin de PUFAs a LXRs resulta en la inhabilidad de LXR para inducir la transcripcin de SREBF1, causando un decremento en lipognesis.

Factor nuclear heptico 4 (HNF-4 ) HNF-4 es un miembro de la familia de factores nucleares de hepatocito que incluye 6 diferentes isoformas. Se une a elementos DR1 como un homodmero y parece ser indispensable para la diferenciacin del hepatocito y funciones hepticas tales como la secrecin de colesterol y lipoprotena. Es expresado principalmente en el hgado, los riones, intestino y pncreas, siendo capaz de activar genes objetivo (tambin denominados genes blanco, genes diana o genes target) aun en la ausencia de ligando. Una amplia gama de genes hepticos es controlada directa o indirectamente por HNF-4 . Estos incluyen los genes que codifican apolipoprotenas CII, CIII, AII y AIV, enzimas involucradas en el metabolismo de hierro y carbohidratos (L-piruvato quinasa, fosfoenolpiruvato carboxiquinasa), citocromo P450, monooxigenasas y sntesis de cidos biliares. Los tioesteres acilo graso-CoA en concentraciones fisiolgicas pueden modular la actividad de HNF-4 al unirse directamente con su dominio de unin a ligando. El efecto de esta unin parece ser dependiente de factores tales como el largo de cadena y el grado de insaturacin del FA. Mientras la unin de FAs saturados (14:0-CoA o 16:0-CoA) activa a HNF-4 , la unin de 18:3n-3-CoA, 20:5n-3-CoA o 22:6n-3-CoA resulta en la represin de HNF-4 .

Protena ligadora del elemento regulador de esterol (SREBP) Los SREBP son factores de transcripcin hlice-rizo-hlice involucrados en la transcripcin de genes relacionados a la sntesis de colesterol y otros lpidos. Se han descrito por lo menos 3 SREBPs; SREBP-1a y SREBP-1c son transcritos del mismo locus gnico, pero difieren en el trmino N, siendo SREBP-1c el subtipo predominante expresado en roedores y humanos; un gen separado codifica SREBP-2. SREBP-1 ha emergido como un regulador de la sntesis de FA y TAG, mientras que SREBP-2 regula la sntesis de colesterol. Los SREBPs son traducidos como grandes precursores inmovilizados en el retculo endoplsmico, en donde SREBP est ligado al extremo C-terminal a la protena activadora de separacin de SREBP. Cuando los niveles celulares de colesterol son elevados, las

protenas INSIG se unen y atrapan la protena activadora de separacin de SREBP, retenindola en el retculo endoplsmico y evitando que acompae a los SREBPs del retculo endoplsmico al sitio de activacin proteoltica en el aparato de Golgi. Con el agotamiento de esterol, tanto SREBP como la protena activadora de la separacin de SREBP se mueven al aparato de Golgi en donde las proteasas (sitio 1 proteasa y sitio 2 proteasa) separan la protena para liberar una forma transcripcional madura (nSREBP, por sus siglas en ingls) que viaja al ncleo para unirse a elementos reguladores de esterol en los promotores de genes especficos. Los SREBPs actan en genes que contienen secuencias llamadas elementos sensibles a esterol (SREs, por sus siglas en ingls) en sus regiones promotoras. SREBP-1c se une a los SREs en los promotores de muchos genes involucrados en la lipognesis de novo y la sntesis de TAG, incluyendo ATP-citrato liasa, acetil-CoA carboxilasa, cido graso sintetasa, estearoilo-CoA desaturasa 1 y glicerol fosfato acilo transferasa; SREBP-2 estimula los genes involucrados en la sntesis de colesterol. Las ratas alimentadas con dietas ricas en grasas suplementadas con PUFAs -3 y -6 han mostrado un decremento en los niveles nucleares y expresin de genes objetivo conteniendo SER. SREBP no puede unirse a FAs o colesterol; en su lugar, su efecto en la expresin gnica est determinado por la regulacin de la abundancia nuclear de nSREBPs. Una elevacin en el colesterol intracelular inhibe la sitio 1 proteasa, reduciendo efectivamente la formacin de nSREBPs. As, el colesterol es un regulador retroalimentador que controla el nivel nuclear de SREBP. El colesterol no est distribuido de manera equitativa en las clulas; la mayora del colesterol se encuentra en la membrana plasmtica, con frecuencia asociado con esfingomielina (SM, por sus siglas en ingls). SM tpicamente contiene cadenas saturados de acilo y junto con el colesterol se encuentra asociada con balsas lipdicas (microdominios de la membrana plasmtica cuya fluidez es mucho menor a la de su entorno). El tratamiento de clulas con FAs insaturados estimula la esfingomielinasa, liberando ceramidas (un cido graso unido mediante un enlace amida a una esfingosina) as como redistribuyendo el colesterol de la membrana plasmtica al retculo endoplsmico. Estos eventos suprimen el procesamiento proteoltico del precursor de SREBP y resultan en un declive en los noveles de nSREBP y la expresin gnica mediada por SREBP. Este mecanismo no afecta a los mRNA que codifican algn SREBP. Los PUFAs reducen el contenido nuclear de SREBP-1c va u mecanismo de 2 fases. La primera fase es rpida (<60 minutos) y consiste en la inhibicin mencionada del proceso de liberacin proteoltica; la segunda fase involucra una reduccin adaptativa (unas 48 horas) en el contenido heptico de mRNA de SREBP-1, que es subsecuentemente seguida por una reduccin en la cantidad de la protena precursora de SREBP-1. Los FAs insaturados suprimen selectivamente los niveles hepticos del mRNA que codifica a SREBP-1 (tanto 1a como 1c), pero no a SREBP-2; la jerarqua para la regulacin pro FA del

mRNASREBP-1c es 20:5n-3 = 20:4n-6 > 18:2n-6 > 18:1n-9. Este efecto puede ser atribuido a la inhibicin de transcripcin del gen SREBF1 as como la mejora en la rotacin del mRNA que codifica a SREBP-1; los PUFAs reducen la vida media del mRNA de SREBP-1c de 11 horas a menos de 5 horas. Recientemente se ha demostrado que 22:6n-3 acelera la degradacin de nSREBP-1 por una ruta dependiente del proteasoma 26S, mientras que tiene un impacto pequeo en el SREBP-1 o el nSREBP-2 microsmicos. Est bien documentado que la grasa dietaria regula la expresin gnica, controlando la actividad/abundancia de factores de transcripcin claves. La regulacin de la expresin gnica por los PUFAs tambin cumple con la modulacin del procesamiento de mRNA, el deterioro de mRNA y la estimulacin de modificaciones postraduccionales de protena. Adicionalmente, existen rutas alternativas para la regulacin de la funcin de factores de transcripcin por PUFAs, a travs de la generacin de ligandos alternativos o la activacin de cascadas de sealizacin de quinasas. Por ejemplo, la incorporacin de PUFAs en los PLs de membranas afecta la fluidez de la membrana y el contenido de colesterol, adems de impactar la generacin de molculas sealizadoras. El enriquecimiento de PUFAs en los componentes de la membrana asociados con balsas lipdicas (tanto los PLs como los componentes acilados de protena) tiene un impacto significativo en los receptores asociados a protena G, Src quinasa, protena quinasas activadas por mitgeno (MAP quinasas) y la sealizacin de Ca2+. La fosforilacin por MAP quinasas de PPARs, SREBPs y HNF-4 afecta su actividad. La elevacin de PUFAs en los PLs de membrana tambin afecta los niveles de colesterol en membrana. El incremento de PUFAs en los PLs desplaza al colesterol hacia el citoplasma, en donde puede afectar el procesamiento microsmico de SREBP. Los PUFAs tambin afectan la sntesis de lpidos bioactivos generados por ciclooxigenasas (COXs, por sus siglas en ingls) 1 y 2, as como en las 5-, 12- y 15-lipoxigenasas (LPXs, por sus siglas en ingls). Tanto los productos de COXs como de LPXs se unen y afectan la actividad de PPARs, particularmente PPAR . Entre los PUFAs, EPA es no solamente un substrato pobre para COXs y LPXs, en contraste con 20:4n-6, sino que los eicosanoides que se originan del mismo exhiben una actividad dbil como activadores de PPARs. Independientemente de sus mecanismos de accin, una presuncin subyacente en relacin a los efectos de los cidos grasos en la expresin gnica es que estos son absorbidos y transportados, y que entran a las clulas. Dado que muchas variables regulan la absorcin intestinal, el transporte y la captura celular, la concentracin citoslica de FAs puede diferir significativamente entre sujetos y tejidos. Adicionalmente, el metabolismo intracelular de FAs regula la captura de FAs. A su vez, el metabolismo requiere el transporte intracelular y la activacin de FAs, lo cual aparece como una etapa clave que liga la captura con el metabolismo. La activacin del cido graso, unindose a protenas citoslicas y el metabolismo intracelular, parece ser una fuerza regidora en la regulacin de la concentracin de acilo-CoA y NEFA dentro de la clula. Se desconoce buena parte de cmo ocurre esta regulacin, pero dado que podra ser diferente en las diferentes clulas y para

diferentes FAs, podra explicar parcialmente por qu diferentes FAs no tienen el mismo efecto final en todos los tejidos. Las acciones nucleares de los PUFAs estn establecidas por lo menos en las clulas hepticas, en pncreas, el sistema inmune, el cerebro, el tejido adiposo y el corazn, y la posibilidad de contrarrestar enfermedades humanas por FAs dietarios, particularmente los PUFAs -3, ha sido investigada ampliamente, aunque los efectos teraputicos son todava materia de debate (para algunos cidos grasos y algunas rutas metablicas y de sealizacin). Es importante recordar que los efectos de los PUFAs se deben a cambios en la composicin de FAs de las membranas y las alteraciones subsecuentes en la sealizacin hormonal, as como a su influencia directa, independiente de la membrana, en eventos moleculares que gobiernan la expresin gnica. Los estudios han establecido a los PUFAs como reguladores universales del metabolismo celular, incrementando nuestra comprensin del papel que las grasas dietarias juegan a nivel celular y a nivel nuclear. Los estudios sobre el mecanismo molecular por el cual los PUFAs -3 y -6 funcionan, allanarn el camino para encontrar nuevos blancos para el tratamiento dietario y farmacolgico de varias enfermedades crnicas. En este escenario complejo, es fundamental subrayar que los efectos de los PUFAs dependen en gran medida de las concentraciones celulares de los mismos; todava deben establecerse las cantidades dietarias de PUFAs -3 y -6, as como la ptima relacin -6: -3 para un mximo beneficio metablico. Las investigaciones en proceso as como las futuras, debern explorar la efectividad real de los PUFAs en la prevencin y/o cura de enfermedades humanas, diseando estudios que representen estrechamente las condiciones fisiolgicas y tomando en cuenta todas las variables que podran influenciar la concentracin de PUFAs en las diferentes clulas. Tales estudios proveern hallazgos valiosos a nuestro entendimiento de la complejidad de los efectos de los PUFAs, y sern tiles para los educadores (clnicos incluidos) y organismos reguladores en la determinacin de recomendaciones para lograr una salud ptima a travs de una buena alimentacin.

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