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Cours de Marc le Maire marc.lemaire@cea.

fr Remarque: Sauf indication contraire, toutes les figures et tous les tableaux montrs dans les diapositives utilises dans lensemble du cours ( chapitres 1 9), sont tirs du livre Biochimie et Biophysique des Membranes d!E. Shechter, Dunod diteur ou du livre Biochimie Gnrale de JH Weil, 11me dition, chapitre 5 (E. Shechter et M. le Maire), 2009 Dunod diteur.

But du cours: bien connatre les membranes et les protines membranaires 1- les constituants des membranes 2- les transports travers les membranes 3- quelques systmes membranaires (chane de transfert d!lectrons, transports actifs)

-Lien avec le biomdical, sant humaine -Les frontires, les inconnuesactuelles -Partir des expriences pour expliquer les concepts

Chapitres 1 et 2 rappelsrappels

propos : la bicouche est-ce vident? pourquoi le chien et le mouton ont contribu nous informer ce sujet?

Gorter et Grendel J. Exp. Med. 1925!


ml de sang nbre de cellules surface d!1 surface de ttes lipides extraits dans 1mm3 cellule (m2) les cellule (m2) surf.monocouche(m2) (=A) (=B) chien mouton 40 10 8. 106 9.9. 106 98 29,8 31 2,95 62 6.2 B/A

2 2,1

conclusion:

faire passer de l!eau ou un ion travers un liposome c!est : a)! impossible b)! possible mais un vnement rare c)! possible mais demande de l!nergie (par ex.: chaleur) une rponse est fausse: laquelle? a)

ah ! voila les protines membranaires! (extrinsque)

bitopic

polytopique

(intrinsque)

amphitropique

ou

et mme: (en feuillets !)

monotopic

Souvent des protines intgrales en hlices alpha?

Oui trs souvent , mais pas toujours des hlices perpendiculaires la membrane! Notez , en bleu, l!accs de l!eau par rapport la membrane lipidique Gouaux et MacKinnon Science 310 2005

voir les membranes? 1) Coupes minces; traitements: glutaraldehyde , OsO4, dshydratation, plastic, coupe, ions lourds tels Os,Pb, U...

X 10.000 X100.000

voir les protines de membrane? 2) cryofracture ; traitements glycrol, Pt, C

Liposome x80.000

membrane cytoplasmique d!E.coli x50.000

voir les membranes? 3) cryomicroscopie ( pas de traitement)

NB: parfois ther

Voici KvAP, un canal dont l!ouverture dpend du potentiel mais aussi de la prsence de la charge ngative du phosphate dans la tte d!un phospholipide!
nb: pas lipide naturel!

(")#

Lee, Nature 2006

POPE: palmitoy oleyl DOPC: dioleyl a-d = KvAP (bon aussi avec DOPC) e = MthK (un canal sans paddle + DOTAP

Schmidt et al Nature 2006

B: A1 et A2 la fois!

Empilements

50 %

Rseaux 2D (LHC-II)

30 %

10 % Trimres (LHC-II)
Lee , AG, 2000

"#

Lee , AG, 2000

PG:-> trimer of LHCII DGDG: -> cristal 2D of LHCII MGDG: -> stacking of LHCII

Green squares: PSI Blue squares: PSII Red mushroom: ATPsynthase


Lee , AG, 2000

La sphingosine est implique dans la fusion des vsicules synaptiques CH3-(CH2)12-CH

CH3-(CH2)12-CH

CH3-(CH2)12-CH

si X = choline-> sphingomyline CH3-(CH2)12-CH ex. : ganglioside

Groupes sanguins , entre de virus

Qu!est-ce qui distingue un sphingolipide d!un phospholipide? rponse : une sphingosine et pas de glycrol comme base de construction

$6# $3#

Omga 6 et omga 3 (acides gras essentiels) doivent tre trouvs dans la nourriture

En gras: importants pour le cerveau

Poissons ou Plantes->( jaunes d!ufs, lait)-> transform. dans le foie->cellules neurales/cerveau Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

Effets des acides gras polyinsaturs (rapport omga 6 /omga 3) sur:

-!L!hibernation des mammifres -! La vitesse maximum de course des mammifres (aprs correction pour la taille)

Mais si beaucoup d!omga 6 ! grands dommages oxydatifs!

Ruf & Arnold Am.J Physiol. 2008

Le cholestrol provient du squalne mais il y a besoin d!oxygne pour sa cyclisation .doncdans l!volution? ( pas de cholestrol chez les bactries)

intraction prfrentielle cholestrol/sphingolipides

lipides bolaformes (archbactries)

Parmi les propositions suivantes, lesquelles (2) sont inexactes? 1. Les protines membranaires extrinsques ou priphriques peuvent tre associes aux membranes par des interactions lectrostatiques. 2.Une protine monotopique possde un passage transmembranaire 3. Des protines solubles peuvent tre lies de manire covalente des lipides (ancres glycosylphosphatidylinositol (GPI)) et ainsi devenir associes aux membranes. 4. Les protines membranaires intgrales ont au moins un domaine membranaire pntrant la rgion apolaire de la bicouche lipidique. 5. Les segments transmembranaires des protines membranaires intgrales sont toujours en hlice alpha.

rponse: 2 et 5

rsum: -Les lipides comme barrire pour l!H2O, les ions -!les diffrents types de protines membranaires et leurs dispositions -!voir les membranes n!apprend pas grand-chose mais connatre la structure des protines membranaires est important -!dans la famille phospholipide : PC, PE, PS, PG = -!dans la famille sphingolipide: SM = -!dans la famille glycolipide: MGDG = -!et avec les (chole)strols et les bolaformes -> 5 familles -!les lipides sont soit non chargs, soit et + (= neutres) soit (= acides) -!notamment important pour la signalisation: les 4 types de phospholipases -!certains lipides sont indispensables pour la fonction de protines -!certains acides gras sont importants

Cerveau de rat

Myline

Erythrocyte

Mitochondrie

E. coli

Chloroplaste

Lipide/Protine 3:1 (en poids) Phospholipide dont "PC PE PI PS PG 32 11 14 7

1:3 56 23 20 2 11

1:3 95 48 28 8

1:3 100 80

1:1 12

DPG cardiolipine " Glycolipide dont " MGDG DGDG SQDG Sphingolipide Strol 40 25 18 25 5

11

15 5 80

12

41 23 16

PS de globule rouge

Tableau 2.3. Composition en acides gras de membranes de foie de rat.

Acide gras (% du total) Mitochondrie Plasmique Rticulum Golgi

16:0

18:0

18:1

18#:2

20:4

20 23 22 22

15 6 11 9

14 14 16 18

23 10 17 ?

16 11 16 14

Co-volution des lipides et des protines

-L!adaptation hydrophobe -Lipides annulaires/non-annulaires + autres

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

Les microdomaines membranaires

La membrane plasmique des cellules eucaryotes est organise en une mosaque de microdomaines dont l!existence est principalement explique par la sparation de phase lipidique Co-existence Lo- Ld

Jacobson Trends Cell Biol. 9, 87, 1999! Jacobson, 1999

AFM, atomic force microscopy; parties claires: rafts

DOPC-sphingomyelin +25% cholesterol

c & d: after Triton X-100 , 4C

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

"#

Lee, AG 2005

"#

Lee, AG 2005

Lo: en bleu; Ld: en brun

molcules hydrophiles

ou molcules hydrophobes

Liposome furtif

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

Amphotricine B: antibiotique puissant Doxorubicine : molcule anticancreuse puissante Les deux: solubles et trs toxiques (doxorubicine: toxique cardiaque) ->formulation liposomiale disponible sur le march du mdicament (ex. le Doxol)

on analyse 24h aprs linjection des liposomes en partie limins par les macrophages -> RES rticulum endothlial (foie +rate) GM1 ganglioside; PEG polythylne glycol

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

effet EPR

aussi peptidase ex. PSA (kallikreine) prostate

Tir de O.G Mouritsen, Life as a mater of fat , Springer 2005

"# The Enhanced Permeability and Retention (EPR) effect is the property by which certain sizes of molecules, typically liposomes or macromolecular drugs, tend to accumulate in tumor tissue much more than they do in normal tissues The EPR effect is important for nanoparticle and liposome delivery to cancer tissue. One of many examples is the work regarding thermal ablation with gold nanoparticles

reconnaissance par: - anticorps ; exemple: rcepteur des strognes (cancer du sein) -etc

liposome avec doxorubicine

air 1 2 3 monocouche

2 g = couvre une piscine olympique! eau B. Franklin, 1770; paisseur du film 10-20 A: Lord Raleigh, 1892

dans une membrane naturelle on trouve: a)! surtout des acides gras en C16-C18 b)! beaucoup de doubles liaisons c)! des lipides chargs positivement d)! des zones Lo et Ld qui coexistent e)! les lipides longs ou courts qui sont parfois dans des endroits diffrents f) parfois un rapport Lipide/Protine de 10/1 (en poids)

deux rponses fausses la c) et la f)

du travail (indispensable) pour la prochaine fois: 1-revoir le code une lettre des acides amins 2-savoir classer les acides amins en : -acides (chargs pH 7): E,D -basiques (chargs + pH 7): R, K, H (! H est charg pH 5, pas 8) -polaires : Q,N,T,S,Y -hydrophobes: F,V,I,L,A,P,M,C - inclassables: G, W

21me acide amin?

Rsum: -comment dterminer le type de lipide ( PC,PE, SM,) -comment dterminer les acides gras -!la distribution sur les surfaces membranaires: l!adaptation hydrophobe et les rafts Ld-Lo -comment faire des liposomes ? -!comment faire des liposomes utiles ? -!comment faire des monocouches? -!comment faire des bicouches lipidiques planes?