http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/04capsula.htm 1 CPSULA 1.1 1.2 1.3 1.4 1.4.1 1.4.

2 2 3 4 CONCEPTOS GENERALES MTODOS DE OBSERVACION Y ESTUDIO COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA FUNCIONES PROPIEDADES O PAPELES GENERALES PROPIEDADES PARTICULARES

CAPA S (CAPA SUPERFICIAL PARACRISTALINA) VAINAS BOTONES DE ANCLAJE

BIBILIOGRAFA

1 1.1

CPSULA CONCEPTOS GENERALES

La cpsula se puede definir como una estructura superficial que presentan muchas bacterias en sus ambientes naturales, consistente en acumulacin de material mucoso o viscoso, situado externamente respecto de la pared celular (o, en su caso, respecto de la capa S y de la vaina). Las cpsulas se pueden describir en funcin de: su grado de asociacin con la superficie celular subyacente (sobre todo pared):0 Integral: ntimamente asociada con la superficie celular, a saber, con la P.C. Perifrica: asociada a la sup. celular slo en determinadas condiciones, pero finalmente se dispersa al medio exterior. su consistencia y sus lmites externos: Rgida: con suficiente consistencia estructural como para evitar la entrada de partculas como las de tinta china o nigrosina. Suele tener un lmite exterior definido. Flexible: poca consistencia, de modo que no excluye partculas. Adems, es deformable y carente de lmites precisos.

Hay una cierta confusin en la nomenclatura de las cpsulas. Nosotros usaremos los siguientes conceptos: Cpsulas en sentido estricto son aquellas de tipo rgido e integral. Capas mucilaginosas son las de tipo flexible y perifrico. Glucoclix es el conjunto de estructuras superficiales bacterianas, exteriores respecto de la pared celular, y compuestas de polisacrido. Las cpsulas son estructuras inertes, no vivas, carentes de papel activo (metablico), pero que confieren a las bacterias importantes propiedades: Adhesin a clulas hermanas, generando microcolonias y consorcios. Adhesin a sustratos inertes o vivos, lo que les permite `la colonizacin de sus nichos ecolgicos (p. ej., tejidos de organismos superiores) Proteccin contra agentes antibacterianos. 1.2 MTODOS DE OBSERVACION Y ESTUDIO

Su observacin a microscopa ptica en fresco es difcil, ya que su ndice de refraccin es similar al del medio. Al ser una estructura muy hidratada (99% de agua), su observacin con las tcnicas habituales de microscopa electrnica de transmisin (MET) y de barrido (MEB) revela una notable contraccin de su estructura. Adems, los colorantes habituales tienen poca afinidad hacia ella.

Imagen a microscopa ptica de la cpsula del neumococo (Streptococcus pneumoniae)

A microscopa ptica: Se recurre a tincin negativa por medio de nigrosina o tinta china (resaltan como un halo transparente sobre el fondo oscuro del porta). A microscopa electrnica: Hay que recurrir a la estabilizacin previa de la estructura capsular (para evitar su contraccin ulterior) por medio de anticuerpos anticapsulares o de lectinas. Tras esta operacin, se procede a la tincin por una ferritina catinica (p. ej., el rojo de rutenio), con afinidad hacia polianiones. Para investigar ms sobre la estructura de la cpsula se recurre igualmente a difraccin de rayos X del polisacrido capsular. Aislamiento del material capsular: El material de las capas mucosas (es decir, de las cpsulas flexibles y perifricas) es muy fcil

de aislar, ya que tiende a dispersarse continuamente en el medio de cultivo. Por lo tanto, se puede aislar directamente de los sobrenadantes resultantes de la centrifugacin del cultivo correspondiente. El material de las cspulas rgidas e integrales puede aislarse tratando al cultivo con agua caliente o con cidos o lcalis dbiles. 1.3 COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA

En general, el material capsular se compone de macromolculas asimtricas que, en muchos casos constan de una serie de unidades repetitivas: polisacridos o polipptidos. 1) a) cpsulas polisacardicas Heteropolisacridos aninicos, cuyas unidades repetitivas constan de azcares (osas), aminoazcares, cidos urnicos, polioles (en muchos casos con radicales fosfato, formiato, succinato, etc.). Homopolisacridos neutros, como i) ii) iii) c) levanos (polmeros de unidades de fructosa unidas por (2 dextranos celulosa 6)

b)

alginatos (p. ej., en Azotobacter, Pseudomonas), consistentes en una alternancia de distintos tipos de cidos urnicos.

2)

cpsulas polipeptdicas (slo encontradas en el gnero Bacillus). Estn formadas por glutamil-polipptidos. As p. ej., en B. anthracis el pptido es slo de D-glutmico.

Las cpsulas y capas mucilaginosas bacterianas constituyen el llamado antgeno K (capsular). Una misma especie puede constar de distintas razas, cada una de ellas con un Ag K distintivo, distinguible del de las dems por su composicin qumica y su inmunorreactividad. Por ejemplo, en Escherichia coli se encuentran unos 70 tipos diferentes de especificidades de Ag K. Las cpsulas polisacardicas estn unidas a la superficie subyacente, sobre todo a la pared celular. La estructura es a base de una matriz muy hidratada, con una ordenacin regular radial, o a veces, en lminas concntricas. 1.4 FUNCIONES

En laboratorio, muchas bacterias suelen perder la capacidad de formar cpsulas al cabo de varios subcultivos. As pues, la posesin o no de cpsula es algo que no afecta a la viabilidad de las bacterias. Pero en medios naturales, las cpsulas confieren a las bacterias una serie de propiedades, que dependen del nicho ecolgico particular donde viva cada bacteria. Estudiaremos una serie de propiedades o papeles generales, comunes a todas las cpsulas, para concluir con algunos ejemplos de papeles especficos. 1.4.1 1) PROPIEDADES O PAPELES GENERALES

Mejora en las propiedades de difusin de nutrientes hacia la clula. Los polisacridos extracelulares aninicos funcionan como una resina de intercambio. Proteccin contra la desecacin Proteccin contra la predacin por parte de protozoos. Proteccin contra agentes antibacterianos: a) b) c) d) e) contra metales pesados contra bacterifagos contra clulas fagocticas (p. ej., la cpsula del neumococo) contra detergentes contra anticuerpos Adhesin a sustratos: a) sobre sustratos inertes: propiedad importante, sobre todo en medios acuticos. La mayora de las bacterias acuticas no son planctnicas, sino que viven en interfases (superficies, sedimentos), donde los nutrientes difunden mejor. Veamos cmo se produce el proceso: i) ii) la bacteria se adhiere por la cpsula al sustrato; la cpsula supone un aumento de superficie bacteriana, lo que se traduce en una mejora en la capacidad de absorber nutrientes; la bacteria se multiplica, formndose una microcolonia donde los individuos estn ms protegidos frente a los agentes antibacterianos; se forman consorcios con otros microorganismos. Ello permite una alianza o colaboracin metablica entre distintas especies, por la que se produce la degradacin concertada de sustratos insolubles.

2) 3) 4)

5)

iii)

iv)

Esta propiedad tiene una serie de importantes secuelas econmicas: b) i) corrosin y obstruccin de caeras; formacin de placa dental y caries; formacin de biopelculas en catteres y prtesis quirrgicas

sobre sustratos vivos (tejidos de organismos superiores): En sistemas normales (efectos benficos): La flora (= microbiota) autctona que coloniza los epitelios de los animales superiores est englobada en glucoclix, estando las bacterias adheridas a la superficie tisular. Es decir, las cpsulas pueden actuar como adhesinas (molculas para la adhesin). Otro ejemplo de ello lo da la microflora autctona de la simbiosis del rumen En sistemas patolgicos: La cpsula es uno de los factores de virulencia, de los que depende el inicio de muchas infecciones por parte de bacterias patgenas. Si, adems, la flora autctona del individuo afectado est alterada o disminuida, esto supone un nicho ecolgico vaco o perturbado, que puede ser colonizado por bacterias patgenas, en parte gracias a su glucoclix, que adems las protege frente a surfactantes, clulas fagocticas, anticuerpos, etc. Muchas cpsulas polisacardicas no son reconocidas como material extrao por el sistema inmune, debido a que su estructura mimetiza estructuras del propio hospedador. Otras cpsulas sobrapasan la capacidad de respuesta del sistema inmune, o bien no activan eficientemente al sistema complemento.

ii)

Imagen animada que muestra el modo en que la cpsula bacteriana evade la accin del complemento del hospedador mamfero: El componente C3b del complemento tiende a fijarse sobre la superficie bacteriana, pero esto es ms difcil si la bacteria posee cpsula. Por otro lado, la clula fagoctica, provista del receptor para C3b no puede interacionar bien con la bacteria, de modo que se evita la fagocitosis.

1.4.2

PROPIEDADES PARTICULARES

Entre las propiedades conferidas por las cpsulas a algunas bacterias tenemos:

1) 2)

Como receptores para ciertos bacterifagos. En las bacterias tropicales fijadoras de N2 atmosfrico, de los gneros Derxia y Beijerinckia la gruesa y espesa cpsula acta como barrera frente a la difusin de O2, con lo cual evitan la inactivacin de la enzima nitrogenasa. En Rhizobium (fijador de N2 en simbiosis con las races de leguminosas) el polisacrido extracelular acta en la fase de reconocimiento entre la bacteria y la planta especfica, a travs de lectinas de esta ltima. En Acetobacter xylinum la cpsula es a base de fibrillas de celulosa que retienen burbujas de aire, lo cual hace que la bacteria flote hasta su nivel adecuado. CAPA S (CAPA SUPERFICIAL PARACRISTALINA)

3)

4)

Capa que, en muchas eubacterias (sobre todo Gram-positivas), envuelve a la pared celular, formada por el ensamblaje regular de subunidades idnticas de protenas o glucoprotenas. En Gram negativas la capa S se une a la membrana externa, mientras que el Gram positivas lo hace al peptidoglucano. En muchas Arqueas es la nica capa que rodea al protoplasto, por lo que en ellas cumple funciones de autntica pared celular. Disposicin simetra binaria: filas oblicuas paralelas simetra cuadrangular: simetra hexagonal: unidades morfolgicas dmeros tetrmeros hexmeros

La unin entre los monmeros se realiza por enlaces no covalentes: hidrfobos inicos, bien directos, o por mediacin de cationes puentes de hidrgeno Papel: En eubacterias provistas de pared celular. la capa S cumple varios papeles como tamiz molecular protector que impide la entrada de agentes antibacterianos Parece que en muchos casos tambin protege frente a fluctuaciones inicas y de pH, estrs osmtico, etc. En algunas bacterias patgenas, puede ser un factor de virulencia, al proteger a la bacteria frente al ataque del complemento y de los fagocitos. En Arqueas da forma y rigidez a muchas especies, ejerciendo papeles equivalentes al de una pared celular. En arqueas halfilas (p. ej., Halobacterium) la capa S de glucoprotena contiene

glucopptidos especiales, y est estabilizada por altas concentraciones de sodio, presentes en su nicho. En arqueas termoacidfilas (Sulfolobus) existen glucoprotenas en matrices hexagonales, ricas en aminocidos polares (Ser, Thr), estando la capa S estabilizada por los bajos pH del medio. 3 VAINAS

Son estructuras tubulares (ramificadas o no) compuestas de un heteropolmero, a base de protena, lpido y polisacrido, que engloban a conjuntos de clulas bacilares en cadenetas o filas. La vaina est en contacto con la pared celular subyacente, pero no hay enlaces entre ambas. En Sphaerotilus y Leptothrix las vainas se recubren de acmulos de xidos e hidrxidos de Fe y Mn. Conforme se dividen por fisin binaria, las clulas de los extremos del filamento van sintetizando nuevo material de la vaina que las va rodeando. Las Arqueas Methanothrix y Methanospirillum poseen vainas proteicas con subunidades dispuestas en anillos, y son las que confieren la forma. 4 BOTONES DE ANCLAJE

Son acmulos de mucopolisacridos cidos, segregados en puntos concretos de la clula, a nivel de pared celular, extremos de prostecas y pednculos o de tallos inertes en algn momento del ciclo de vida de ciertas bacterias. Facilitan la unin de las bacterias que los poseen a sus sustratos. Como ejemplo, los discos adhesivos (holdfast) en el extremo de las prostecas de Caulobacter .
BIBILIOGRAFA BEVERIDGE, J.T. (1988): The bacterial surface: general considerations towards design and function. Can. J. Microbiol. 34: 363-372. BEVERIDGE, J.T., L.L. GRAHAM (1991): Surface layers of bacteria. Microbiol. Rev. 55: 684-705. BOULNOIS, G.J., K. JANN (1989): Bacterial polysaccharide capsule synthesis, export and evolution of structural diversity. Molec. Microbiol. 3: 1819-1823. COSTERTON, J.W., G.G. GEESEY, K.-J. CHENG (1978): El mecanismo de adherencia en las bacterias. Inv. y Ciencia (marzo): 66-77. GOTTESMAN, S., V. STOUT (1991): Regulation of capsular polysaccharide synthesis in Escherichia coli K12. Molec. Microbiol. 5: 1599-1606. KOVAL, S.F. (1988): Paracrystalline protein surface arrays on bacteria. Can. J. Microbiol. 34: 407-414. LECHENER, J., F. WIELAND (1989): Structure and biosynthesis of prokaryotic glycoproteins. Annu. Rev. Biochem. 58: 173-194.