rEVISIN

Clulas madre gliales y su relacin en el proceso de angiognesis tumoral

Susana Bulnes, lvaro Garca-Blanco, Harkaitz Bengoetxea, Naiara Ortuzar, Enrike G. Argandoa, Jos V. Lafuente

Introduccin. Una subpoblacin de clulas neoplsicas con caractersticas de clulas madre ha sido descrita en glioblastomas multiformes humanos. Estas clulas desempean un papel fundamental en el proceso de angiognesis y malignizacin tumoral, estando involucradas en la infiltracin del parnquima normal adyacente. Las denominadas clulas madre gliales podran ser las responsables de la recidiva tras la exresis. Esto se debe a su capacidad de supervivencia despus de tratamientos de quimio/radioterapia. Desarrollo. En este trabajo revisamos el papel de las clulas madre gliales en relacin con el proceso de angiognesis. Tambin revisamos algunos hallazgos que relacionan la aparicin de estas clulas durante la angiognesis en un modelo experimental de glioma endgeno de rata. Las clulas fueron caracterizadas utilizando anticuerpos frente a los antgenos CD133, nestina y el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF). Las clulas nestina+ se encontraron en todos los estadios de desarrollo del tumor, mientras que las CD133+ slo estaban presentes a partir de estadios intermedios correspondientes a la sobreexpresin del VEGF. Este momento se conoce como activacin de la angiognesis (angiogenic switch). Tambin observamos que algunas de las clulas nestina+ coexpresaban el antgeno CD133. Las clulas madre gliales, en nuestro modelo experimental de glioma, al igual que en glioblastomas multiformes humanos, se distribuyen formando nichos en reas perivasculares e hipxicas intratumorales. Conclusin. Numerosas evidencias corroboran la hiptesis de que las clulas madre gliales guardan una estrecha relacin con el inicio de la angiognesis, el fenmeno de hipoxia intratumoral y el entramado microvascular neoplsico. Palabras clave. Angiognesis. CD133. Clulas madre gliales. Clulas madre precursoras. Etilnitrosourea. Glioma.

Laboratorio de Neurociencias Clnicas y Experimentales, LaNCE; Departamento de Neurociencias; Universidad del Pas Vasco; Leioa, Vizcaya, Espaa (S. Bulnes, A. GarcaBlanco, H. Bengoetxea, N. Ortuzar, J.V. Lafuente). Unidad de Anatoma; Departamento de Medicina; Universidad de Friburgo; Friburgo, Suiza (E.G. Argandoa) Correspondencia: Dra. Susana Bulnes. Laboratorio de Neurociencias Clnicas y Experimentales (LaNCE). Departamento de Neurociencias. Universidad del Pas Vasco. Apdo. Correos 699. E-48080 Bilbao (Vizcaya). E-mail: susana.bulnes@ehu.es Financiacin: Este trabajo ha contado con la colaboracin de la Fundacin Gangoiti Barrera, G.I.C. 491/10, y Programa SAIOTEK del Gobierno Vasco. A.G.B. es becario de la Universidad del Pas Vasco, y N.O., becaria del Ministerio de Educacin. Agradecimientos: El anlisis de imgenes de microscopia confocal se ha realizado en el Servicio de Microscopia Analtica y de Alta Resolucin en Biomedicina del servicio SGIker de la Universidad del Pas Vasco, y las imgenes de resonancia magntica, en el Centro de Asistencia a la Investigacin de la Universidad Complutense de Madrid. Aceptado tras revisin externa: 04.01.11. Cmo citar este artculo: Bulnes S, Garca-Blanco A, Bengoetxea H, Ortuzar N, Argandoa EG, Lafuente JV. Clulas madre gliales y su relacin en el proceso de angiognesis tumoral. Rev Neurol 2011; 52: 743-50. 2011 revista de Neurologa

Introduccin
Las clulas madre se definen como clulas capaces de autorregeneracin y de diferenciacin multilineal [1]. Debido a su capacidad de divisin, se han propuesto como una herramienta importante en el campo de la terapia regenerativa. Hoy en da, las clulas madre estn siendo utilizadas como medio de regeneracin tisular en diferentes patologas, como el infarto de miocardio, las enfermedades neurodegenerativas, etc. [2]. Sin embargo, en el campo de la oncologa, y en especial en los gliomas cerebrales, su presencia se ha relacionado con un mal pronstico. Segn investigaciones recientes, a las clulas madre tumorales se les ha atribuido capacidad tumorignica, es decir, algunas de las caractersticas de malignizacin del tumor; capacidad de infiltracin del tejido normal, capacidad de inducir angiognesis y la radio/quimiorresistencia [3,4]. Se piensa que unas clulas madre neoplsicas observadas en los gliomas y posteriormente denominadas clulas ma-

dre gliales (CMG) son las responsables del proceso de infiltracin y consecuente recidiva de los glioblastomas multiformes. Durante el proceso de malignizacin e invasin de un glioma, las clulas neoplsicas incrementan sus requerimientos metablicos. Estos nuevos requerimientos metablicos son suplidos por las adaptaciones de la red microvascular tumoral. Aun as, existe un momento en el cual las clulas tumorales en proliferacin exceden la capacidad de aporte metablico de la red microvascular del tumor y se induce la generacin de nuevos vasos a partir de los preexistentes, fenmeno que se conoce como angiognesis [5]. El proceso de angiognesis es esencial para la supervivencia y crecimiento del tumor, y para la adquisicin de la capacidad invasiva. Se cree que las clulas madre gliales son las inductoras del proceso de angiognesis va factor inducido por la hipoxia (HIF-1)/factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) [6]. Adems, la proliferacin e invasin del parnquima normal adyacente al glioma se ha atribuido a estas clulas madre. Estas

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clulas utilizan la matriz extracelular de la pared de los vasos como vehculo de migracin para infiltrar el parnquima cerebral normal [7]. Las primeras CMG se identificaron en estadios avanzados del glioma, correspondiendo a glioblastomas multiformes [8]. Aun as, se desconoce tanto el momento exacto de aparicin como el papel que desempean en los estadios tempranos del desarrollo del tumor. Es importante identificar y definir el momento de aparicin de las CMG en los estadios tempranos del glioma para sentar la base de una futura terapia antitumoral encaminada a eliminar las CMG y as erradicar el crecimiento y malignizacin tumoral. En esta revisin pretendemos analizar el papel de las clulas madre tumorales en el desarrollo y malignizacin de los gliomas e identificar su relacin con el proceso de angiognesis tumoral. Asimismo, pretendemos identificar el momento de aparicin de estas clulas madre tumorales en los estadios tempranos de gliomas endgenos de ratas inducidos con etilnitrosourea (ENU).

Clulas madre
Las primeras evidencias de clulas madre en el cerebro adulto se dieron a mediados de la dcada de los sesenta. Altman y Das [9] observaron clulas madre en el hipocampo y el bulbo olfatorio de ratas, lo que supuso los primeros indicios de la aparicin de unas clulas neurales en divisin, que posteriormente denominaron clulas madre neurales. En la actualidad estn descritas tres reas en el cerebro adulto de mamferos que contienen clulas madre neurales; el giro dentado del hipocampo, la zona subventricular [10-13] y las fibras que conectan el ventrculo lateral con el bulbo olfatorio de roedores [14,15]. Las clulas madre neurales se caracterizan por ser clulas indiferenciadas, pluripotenciales, poseer capacidad de diferenciacin hacia neuronas, astrocitos y oligodendrocitos [16], tener capacidad de divisin por perodos indefinidos, de autorregeneracin [17], y por la habilidad de crecer en forma de agregados celulares llamados neuroesferas [18]. Se ha observado que, tras ser trasplantadas en el cerebro de ratones nude, pueden infiltrar y migrar hacia otras zonas cerebrales y diferenciarse a neuroblastos [19]. El concepto de clulas madre tumorales, posteriormente denominadas clulas tumorales troncales o clulas iniciadoras del tumor, fue originariamente propuesto a principios de 1990 cuando se sugiri que unas pocas clulas aisladas de la sangre

de pacientes con leucemia proliferaban y se diferenciaban in vivo [20]. Posteriormente, se identificaron clulas madre tumorales en cncer de mama [21], de pncreas [22], etc. En 2007, Fan et al describieron a las clulas tumorales como la subpoblacin celular capaz de regenerar el tumor dentro de un ambiente permisivo [23]. Investigaciones recientes han demostrado una relacin estrecha entre clulas madre y clulas madre tumorales. Ambos tipos celulares comparten las caractersticas anteriormente mencionadas, as como varios mecanismos comunes de sealizacin celular: el oncogn bcl-2, Sonic hedgehog (Shh), la cascada de sealizacin Wnt [24], y la expresin de marcadores como el CD133, el filamento intermedio nestina [25] y el factor de transcripcin Sox2 [26]. No obstante, se apreciaron diferencias en trminos de frecuencia de proliferacin, expresin de marcadores de diferenciacin, alteraciones cromosmicas y capacidad tumorignica. Segn la teora de Holland et al, las clulas madre tumorales podran proceder de clulas madre neurales con alteraciones genticas [27]. Se ha descrito que la activacin de vas metablicas como la del Notch [28], Akt [29] o el gen supresor de tumores p53 interviene en la generacin de clulas madre tumorales a partir de clulas madre. En 1992, Dahlstrand et al [25] identificaron clulas madre en tumores cerebrales de estirpe glial. Estas CMG, tras aislarse de glioblastomas humanos y trasplantarse en cerebros de ratones inmunodeprimidos, generaban tumores de estirpe glial [30]. Las CMG son una subpoblacin dentro de la masa de clulas neoplsicas, que poseen unas caractersticas adquiridas por la adaptacin al microambiente tumoral y que poseen una capacidad de tumorignesis muy superior a la de las clulas neoplsicas restantes [4].

Nuevas dianas teraputicas

Antes del descubrimiento de las CMG, el desarrollo de un tumor se explicaba por la teora aleatoria o estocstica. Esta teora postula que todas las clulas neoplsicas proceden de la clonacin de una misma clula indiferenciada del tumor con alteraciones genticas idnticas [4]. Tras la aparicin de las CMG, se ha sugerido una nueva teora denominada jerarquizacin tumoral. Esta nueva teora se basa en que slo algunas clulas tumorales, tras sufrir unas adaptaciones al ambiente de la neoplasia, son las que inician el proceso tumorignico y, posteriormente, dirigen el crecimiento tumoral [31].

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Basndose en este descubrimiento, las CMG se estn considerando en la actualidad como una posible diana teraputica. Sin embargo, tras exponerlas a radio- y quimioterapia, los resultados que se obtuvieron fueron negativos [3]. Segn recientes investigaciones, las CMG son resistentes a la radiacin ionizante gracias a un mecanismo ms eficiente de reparacin del ADN y una fosforilacin de las proteincinasas Chk1 y Chk2 [32]. La resistencia a frmacos quimioterpicos se atribuye a transportadores que bombean los quimioterpicos fuera de las clulas [33]. Estudios recientes se centran en la identificacin de las CMG. Aunque hasta hoy no existe ningn marcador especfico para este tipo celular, la expresin del marcador CD133 se ha asociado a la identificacin de CMG de glioblastomas multiformes humanos [8]. Adems del CD133, tambin conocido como prominin-1, presente en CMG, existen otros marcadores no especficos de estas clulas, como la nestina, una protena que se halla en las clulas madre neurales presentes en la zona subventricular, el GFAP, Map-2, Neural tubulin, Neurofilament, O4, Neurosphere, Noggin, etc. [34,35]. El CD133 tambin se ha encontrado expresado en clulas de cncer de prstata, de colon, etc. [36, 37]. Aun as, varios investigadores afirman que el CD133 es el marcador ms fiable para la identificacin de las clulas madre tumorales y, sobre todo, gliales [38]. La expresin de CD133 se ha asociado con el mal pronstico de los gliomas [29].

Desarrollo del glioma cerebral

Los glioblastomas multiformes son tumores de estirpe glial de grado IV muy proliferativos y con una gran capacidad invasiva, llegando a ocupar todo un lbulo cerebral [39,40]. Segn su gnesis, se diferencian en primarios y secundarios. El glioblastoma primario es el ms frecuente. Se trata de un tumor de nueva generacin despus de una corta historia clnica (tres meses), sin la evidencia de una lesin menos maligna precursora. Por otro lado, el glioblastoma secundario se desarrolla a partir del astrocitoma difuso, del astrocitoma anaplsico o del oligodendroglioma como una progresin maligna. Su tiempo medio de desarrollo es de cuatro a cinco aos. Se han propuesto al menos dos mecanismos principales de aparicin de los glioblastomas multiformes; uno de diferenciacin de progenitores especficos del linaje o astrocitos maduros [41], y otro de la transformacin de la poblacin de clulas madre neurales endgenas. Se piensa que ambos tipos de

glioblastomas multiformes podran estar generados a partir de las clulas madre tumorales [42]. En la progresin de los gliomas, la red microvascular se adecua a los nuevos requerimientos metablicos y condiciones tisulares [43]. La microvascularizacin experimenta cambios que repercuten tanto a la estructura como a la funcionalidad del endotelio vascular. Existe un momento a lo largo del crecimiento tumoral en el cual la angioarquitectura se hace aberrante, presentando una distribucin anrquica de vasos tortuosos, sinusoidales y de luz irregular. A consecuencia de las alteraciones vasculares, el flujo sanguneo se hace irregular, dificultando el intercambio de oxgeno y nutrientes entre las clulas neoplsicas y la red capilar. En el momento en el que hay un desequilibrio entre la oferta y la demanda de oxgeno, se da lugar al fenmeno de hipoxia intratumoral. Se cree que la hipoxia tiene un papel fundamental en la induccin del fenotipo de clulas neoplsicas hacia el estado indiferenciado de CMG. Segn recientes investigaciones, la hipoxia selecciona clones de clulas tumorales que se han adaptado al microambiente del tumor y han adquirido el fenotipo de clula madre tumoral, con sus capacidades de proliferacin, infiltracin etc. Heddleston et al [44] observaron cmo en cultivos de clulas neoplsicas de gliomas humanos expuestas a hipoxia, stas revertan a un estado de clulas madres tumorales. Griguer et al [45] relacionaron la aparicin de clulas CD133+ con el estrs de oxgeno que se daba en los gliomas. En cultivos de clulas tumorales de gliomas humanos, observaron cmo las clulas expresaban CD133 cuando eran sometidas a condiciones de hipoxia. Por otro lado, observaron una disminucin de la expresin de CD133 cuando se reverta a condiciones de normoxia. Adems, estudios recientes en glioblastomas multiformes humanos han descrito la relacin entre el gradiente intratumoral de oxgeno y la aparicin del fenotipo de clula madre tumoral [46]. Segn estas observaciones, la concentracin de oxgeno se considera un factor clave en la aparicin de este tipo celular [47]. Segn lo anterior, slo una agrupacin de clulas neoplsicas resisten a las condiciones de hipoxia e isquemia intratumoral. A este grupo de clulas se les ha denominado clulas madre precursoras, ya que, tras adaptarse al nuevo microambiente, son las que se transforman a CMG. Finalmente, estas CMG darn lugar a diferentes poblaciones de clulas neoplsicas dentro del glioma, con diferentes capacidades. Tambin sern las inductoras de la angiognesis tumoral y utilizarn la matriz extracelular en su migracin.

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Figura 1. Secciones coronales de resonancia magntica potenciadas en T2 y T1 tras contraste de gadolinio que muestran los diferentes estadios de desarrollo de un glioma inducido por etilnitrosourea en rata. a) Dos pequeas masas de clulas neoplsicas correspondientes al estadio inicial del desarrollo del tumor. Seal hiperintensa en T2 (arriba) que muestra un crecimiento asociado a la sustancia blanca subcortical periventricular. Ambas masas expuestas no captan el contraste de gadolinio en T1; b) Ndulos tumorales dispuestos en la corteza cerebral que constituyen el estadio intermedio del desarrollo. El glioma de la derecha muestra captacin de contraste en T1 (abajo), mientras que el de la izquierda no; c) Estadio avanzado del glioma constituido por glioblastomas multiformes (GBM) caractersticos por su heterogeneidad tisular que se muestra por la intensidad de seal heterognea tanto en T2 como en T1. En el GBM de la derecha, la captacin para el gadolinio se observa en forma de anillo, caracterstica de los GBM de humanos. Inicial Intermedio Avanzado

T2

T1

Factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF-A)

Otro papel fundamental de la hipoxia durante el desarrollo de un glioma es la activacin del proceso denominado angiognesis [5]. La angiognesis es un proceso vital para la supervivencia y malignizacin del tumor, y se le atribuye la generacin de nuevos vasos a partir de vasos preexistentes [48]. Para que la angiognesis se inicie, es necesario que se rompa el equilibrio entre factores anti y proangiognicos [49]. En condiciones patolgicas, como en el caso de las neoplasias, el momento en el que se incrementan los niveles proangiognicos se conoce como activacin angiognica. La hipoxia induce un aumento de la liberacin de factores proangiognicos y de permeabilidad, como el VEGF-A, la xido ntrico sintasa endotelial (eNOS), angiopoyetinas, efrinas, etc. El VEGF-A se induce mayoritariamente por la va del HIF-1 [50]. Tambin interviene en el proceso de vasculognesis. Es el principal regulador de la angiognesis fisiolgica [51] y patolgica [52,53], y es un factor neuroprotector [54], ya que existen unas concentraciones basales necesarias para la supervivencia de las neuronas ejerciendo un efecto neurotrfico. El VEGF-A, como factor de permeabilidad vascular [55], acta en asociacin con la eNOS, produciendo un desensamblaje de las protenas que constituyen las uniones estrechas interendoteliales. De este modo, se producen fenestraciones en el endotelio vascular del cerebro, que, normalmente, ca-

rece de ellas, alterando de este modo el sustrato morfolgico de la barrera hematoenceflica [56,57]. Esta disfuncin genera el edema cerebral, epifenmeno que es la principal causa de muerte en los pacientes con tumores cerebrales. La sobreexpresin del VEGF tiene un papel fundamental en la proliferacin endotelial y la generacin de nuevos vasos peritumorales e intratumorales a partir de los preexistentes [52]. En cultivos celulares, se ha descrito que las clulas madre tumorales sobreexpresan el factor VEGF, por lo que esta subpoblacin celular podra estar implicada en el proceso de angiognesis de los tumores [58].

Modelo de glioma endgeno

Durante el desarrollo de los gliomas, es importante hacer un estudio de la aparicin de las CMG, para as poder sentar las bases de una futura terapia encaminada a la eliminacin de estas clulas antes de su proliferacin y consiguiente malignizacin del tumor. Con este objetivo, hemos utilizado un modelo endgeno de glioma inducido en rata mediante administracin del carcingeno ENU. Zook et al [59] y Recht et al [60] postularon que los gliomas inducidos con ENU procedan de clulas madre neurales de la zona subventricular tras sufrir alteraciones genticas. Corroborando este dato, nosotros hemos observado que, mediante este carcingeno, se inducen glioblastomas multiformes primarios en ratas procedentes de la malignizacin de oligodendrogliomas.

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En nuestro modelo experimental, las ratas desarrollan gliomas similares a los humanos a partir del quinto mes de edad, que se malignizan hasta alcanzar la forma de glioblastomas multiformes a los 10 meses de edad [61]. Durante el proceso de malignizacin, pudimos observar la aparicin secuencial de la aberracin vascular, con una progresiva desestructuracin de la funcin de la barrera hematoenceflica [62]. Segn los datos de imgenes de resonancia magntica, histopatolgicos, morfologa vascular y expresin de los factores proangiognicos, VEGF165 y eNOS, identificamos tres estadios de desarrollo del ENU-glioma: inicial, intermedio y avanzado. El estadio inicial est constituido por masas de clulas neoplsicas procedentes de la sustancia blanca subcortical (Fig. 1a), dispuestas en el rea periventricular y con una vascularizacin similar a la del parnquima cerebral normal (Fig. 2a). El estadio intermedio est representado por ndulos tumorales de mayor tamao, con presencia de microhemorragias, y las primeras alteraciones morfolgicas vasculares, como dilatacin, tortuosidad y plegamiento [63]. En el estadio intermedio se observa alteracin de la barrera hematoenceflica, ya que se observa la captacin del contraste de gadolinio (Fig. 1b). Tambin en este estadio identificamos la activacin de la angiognesis con la presencia de sobreexpresin del VEGF (Fig. 2b). El estadio avanzado se corresponde con gliomas anaplsicos o glioblastomas multiformes similares a los humanos, que llegan a infiltrar todo un hemisferio cerebral y presentan una angioarquitectura aberrante y heterogeneidad tisular con rasgos histopatolgicos de malignidad, como macrohemorragias y macroquistes (Fig. 1c). La red microvascular del estadio avanzado consta de escasos vasos hiperdilatados y ovillos vasculares en la zona hipxica intratumoral, y numerosos vasos glomeruloides en el borde del tumor neoangiognico de la neoplasia (Fig. 2c). Con el objetivo de relacionar la aparicin de las clulas madre con la adquisicin de la aberracin vascular durante el desarrollo de los gliomas inducidos por ENU, estudiamos la expresin de los antgenos CD133 y nestina (Fig. 2d-f ). As, el marcaje para la nestina se observaba en todos los estadios del glioma experimental, mientras que el primer indicio de positividad para el CD133 se observaba en los estadios intermedios (Fig. 2e). La aparicin de clulas CD133+ en este modelo se corresponde con el momento de la activacin angiognica, tras el fenmeno de hipoxia intratumoral. El hecho de que en el estadio intermedio algunas clulas nestina+ coexpresen CD133 podra explicarse como la trans-

Figura 2. Microfotografias confocales de inmunofluorescencia doble que muestran las relaciones de las clulas madre, el proceso de angiognesis y la red microvascular del glioma inducido por etilnitrosourea. a-c) Relacin del marcaje del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF)165 (rojo) y la red microvascular de los gliomas (observada mediante histoqumica para la LEA, verde) durante su desarrollo; a) Estadio inicial del glioma de morfologa vascular similar a la del parnquima cerebral normal con algunas clulas VEGF165 positivas en el borde e interior del tumor; b) Estadio intermedio del glioma donde se aprecia sobreexpresin de VEGF en clulas mayormente distribuidas en la zona perifrica del tumor; c) Estadio avanzado correspondiente a gliomas anaplsicos de gran tamao constituidos por una angioarquitectura aberrante y sobreexpresin de VEGF165. d-f) Expresin de los marcadores de clulas madre durante la progresin del glioma. La nestina (verde) se observa en nichos intratumorales desde los estadios tempranos (d), mientras que existe colocalizacin de CD133-nestina (amarillo) a partir del estadio intermedio (e,f); f) Estadio avanzado donde se muestra la coexpresin de CD133-nestina en algunos nichos perivasculares de vasos aberrantes del borde del tumor. Se puede apreciar cmo numerosas clulas CD133+ (rojo) se distribuyen alrededor de los ovillos vasculares; g-i) Estadio intermedio del glioma que muestra la distribucin de las clulas nestina+ (verde) en nichos intratumoral y perivascular, circundando algunos vasos tortuosos y dilatados GluT-1+ (rojo) del interior del glioma (barra de escala: 100 m).

formacin fenotpica de unas clulas madre precursoras (nestina+) a CMG (nestina-CD133+). La distribucin de las clulas nestina+ y CD133+ sigue el mismo patrn que en gliomas humanos [64]. Se observa en dos nichos: un nicho celular en forma de agrupaciones de clulas en el interior del glioma (Fig. 2g) y un nicho perivascular alrededor de los microvasos tumorales (Fig. 2i). Segn Yang et al [65], la existencia de un nicho de CMG perivascular podra ser el mediador de las adaptacio-

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Nestina-GluT-1

Nestina-CD133

VEGF-LEA

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Figura 3. Teora de la gliomagnesis. 1) Estadio inicial del ENU-glioma: el tumor se inicia cuando las clulas madre neurales (CMN), preexistentes en el cerebro, sufren alteraciones genticas y se transforman a clulas tumorales. Dentro de este grupo de clulas neoplsicas existen unas clulas, denominadas clulas madre precursoras (CMp), que resistirn a las condiciones adversas del microambiente tumoral. A partir de las CMp se desarrolla la masa de clulas que conforman el estadio inicial del glioma; 2) Estadio intermedio: a medida que crece el tumor, el flujo sanguneo se hace anrquico y catico, producindose fenmenos de hipoxia intratumoral. Una agrupacin de CMp resiste a las condiciones de hipoxia e isquemia, adquiere nuevas capacidades, se adapta al nuevo microambiente y se transforma hacia clulas madre gliales (CMG). Las CMG poseen un estado ms indiferenciado y una mayor capacidad tumorignica, a la vez que quimio/radiorresistencia; 3) Estadio avanzado: finalmente, estas clulas madre gliales darn lugar a las diferentes poblaciones de clulas que constituyen el glioma maligno, sern las inductoras de la angiognesis tumoral y utilizarn la matriz extracelular en su migracin, liderando la invasin tisular.

Basndonos en la teora de la jerarquizacin, la hipoxia como principal factor de la transformacin de clulas madre precursoras a CMG y la teora de Holland et al [27] sobre la tumorignesis a partir de las clulas madre neurales, en la figura 3 proponemos una teora de la gnesis del ENU-glioma. En la actualidad hay diversos estudios [4,67] que respaldan esta teora. El tratamiento antitumoral podra estar encaminado contra las clulas madre precursoras, como terapia previa al desarrollo del tumor, o contra las CMG ya adaptadas al microambiente del tumor, como terapia antitumoral.

Conclusin
Gracias al modelo experimental de gliomas endgenos inducidos con ENU, hemos observado que la aparicin de las clulas madre gliales est estrechamente relacionada con la hipoxia consecuencia de la aberracin vascular. Adems, las clulas madre del glioma podran ser las causantes de la activacin angiognica, va la sntesis del VEGF.
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nes vasculares en los tumores. Segn nuestros resultados, hemos observado una clulas perivasculares CD133+ en los vasos tortuosos, glomeruloides (Fig. 2f ), ovillos vasculares, y tambin en los vasos hiperdilatados del interior hipxico del tumor. La distribucin de las clulas CD133+ se corresponde con la sobreexpresin del VEGF165 en el borde neoangiognico y el interior hipxico [66]. Ya que la proliferacin e invasin del parnquima normal adyacente al glioma se ha atribuido a las CMG, se cree que estas clulas utilizan la matriz extracelular de la pared de los vasos como camino de migracin para infiltrar el parnquima cerebral normal. Segn esto, podramos decir que las CMG se expresan en el rea perivascular de los vasos aberrantes de los gliomas anaplsicos, induciendo la angiognesis y la ruptura de la matriz de los vasos provocada por el VEGF.

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Glial stem cells and their relationship with tumour angiogenesis process
Introduction. A subpopulation of neoplastic cells with characteristics of stem cells has been described on human multiform glioblastomas. These cells play a pivotal role in tumour angiogenesis and malignancy being involved in infiltration of adjacent normal parenchyma. The named glial stem cells could be responsible for recurrences after surgery. This is due to their survival capacity after quimio/radiotherapy treatments. Development. In this work we review the role of glial stem cells in relationship with angiogenesis process. We also review some findings related to the appearance of these cells during angiogenesis in a rat endogenous experimental model of gliomas. These cells were characterized by antibodies against the antigens CD133, nestin and the vascular endothelial growth factor (VEGF). Nestin+ cells were found in every stage of tumour development, whereas CD133+ cells were only present since intermediates stages corresponding with VEGF overexpression. This moment is known as start of angiogenesis or angiogenic switch. We also found that some nestin+ cells co-expressed CD133 antigen. Glial stem cells are distributed in the experimental glioma model as well as in human multiform glioblastomas, shaping niches into perivascular or intratumoral hypoxic areas. Conclusion. Many evidences corroborate the hypothesis that glial stem cells have a close relationship with angiogenic switch, intratumor hypoxia and neoplastic microvascular network. Key words. Angiogenesis. CD133. Ethylnitrosourea. Glioma. Glioma stem cells. Stem cell precursor.

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