Apostila Introduo `a Biologia Molecular I Somos Todos Feitos de DNA!

www.odnavaiaescola. Contedo do Mdulo:

Somos todos feitos de DNA!

Todos os organismos vivos so compostos de clulas. Organismos como bactrias so formados por apenas uma clula, enquanto outros mais complexos, como seres humanos, so formados por bilhes de clulas de tipos diferentes. No interior das clulas esto os cromossomos, estruturas delgadas cujo nmero e forma dependem da espcie em questo. A espcie humana, por exemplo, possui 22 tipos de cromossomos autossmicos (1 a 22) e dois cromossomos sexuais (X e Y). Os cromossomos esto dispostos individualmente nas clulas germinativas (vulos e espermatozides possuem 23 cromossomos), ou em pares nas clulas somticas (as clulas do nosso corpo possuem 46 cromossomos). Nosso corpo possui 46 cromossomos porque somos formados pela juno de um vulo com um espermatozide e esta juno restabelece o nmero diplide (duplo) de cromossomos em cada clula de nosso corpo. Todos os cromossomos so formados de DNA, ou podemos dizer que o cromossomo nada mais do que uma longa fita dupla de DNA, toda enovelada e dobrada sobre si mesma, de vrias formas, at atingir o aspecto de cromossomo. Dizer que um cromossomo feito de DNA o mesmo que dizer que um novelo feito de linha. E gene, o que ? Um gene representa um pequeno fragmento dessa longa fita de DNA capaz de codificar uma protena. Num cromossomo existem milhares de genes diferentes, capazes de produzir um enorme nmero de protenas diferentes. Cromossomos semelhantes so chamados de cromossomos homlogos. Tambm existem nos cromossomos regies de DNA que no produzem protena, que podemos chamar de DNA no codificante. A funo destas seqncias no totalmente conhecida. Do ponto de vista estrutural, o DNA se apresenta como uma dupla fita dobrada em forma de hlice. As duas fitas so antiparalelas, ou seja, esto dispostas em direes opostas.


Cromossomos Genes Alelos Estrutura da molcula de DNA

Todos os direitos reservados DNA goes to

A espcie humana possui 22 tipos de cromossomos autossmicos (1 a 22) e dois cromossomos sexuais (X e Y). Enquanto as mulheres so XX os homens so XY. Acima est o caritipo de um homem. Todos os cromossomos esto duplicados.

A molcula de DNA formada por um acar, uma base nitrogenada e um grupo fosfato.

Somos todos feitos de DNA!

O que define a direo de cada uma das fitas o local de ligao entre o grupo fosfato com o aucar (o anel de desoxirribose). Se a ligao ocorre no carbono 3, dizemos que a fita est na direo 3-5; se a ligao ocorre no carbono 5, dizemos que a fita est na direo 5-3. Todas as informaes relativas construo e ao funcionamento de nosso organismo esto embutidas em nosso DNA. O que faz com que tenhamos diferentes caractersticas (ou seja, por que somos diferentes um do outro?) est no fato de termos diferentes formas de um mesmo gene, o que o mesmo que dizer que possumos diferentes alelos. Pense, por exemplo, na cor amarela. H diferentes tons de amarelo: amarelo canrio, amarelo-ouro, amarelo escuro. Todos so similares o suficiente para serem amarelos, mas so, no entanto, diferentes. O mesmo raciocnio pode ser feito para os alelos. Todos ns temos os mesmos genes caractersticos da espcie humana. Por exemplo, todos ns temos o gene amarelo, mas isso no significa que meu amarelo o mesmo que o seu. Deste modo, temos alelos diferentes e o que faz sermos quem somos est na combinao entre todos os nossos alelos (gentipo) mais as influncias recebidas do ambiente a nossa volta (gentipo + ambiente = fentipo). O que difere um do outro est na seqncia de DNA de cada alelo. importante tambm observar que o DNA de um indivduo o mesmo em todas as clulas do corpo. O que faz com que as clulas presentes no olho sejam diferentes dos neurnios, por exemplo, so os genes que esto ativos em cada um desses dois tipos celulares. Ou seja, dependendo do tipo celular, diferentes grupos de genes esto ativos e produzindo determinadas protenas, enquanto outros genes esto desligados. Cada indivduo possui uma combinao allica diferente exceo para os gmeos monozigticos (gmeos idnticos) e para a Dolly, clonada a partir das clulas de outro indivduo. Imagine, ento, a quantidade de informao necessria para formar um ser humano, por exemplo. Pois toda essa informao est armazenada no ncleo das clulas. Tanta informao assim, para caber dentro do ncleo de cada clula, deve estar arrumada de uma forma supercompactada. Nesta aula teremos a chance de ver que cara tem o DNA e de entender melhor sua composio, estrutura e funcionamento. Iremos tambm entender que o DNA uma molcula Todas as informaes relativas construo e ao universal, presente em praticamente todos funcionamento de nosso organismo esto embutidas em os organismos vivos.


nosso DNA, localizado no ncleo da clula.

Extrao de DNA de morango Material necessrio 1-1 pedao de morango 2-Tubo eppendorf e palito de dente para macerar 3- Pipeta de plstico 4-Tampo de Extrao 5-Etanol 95% Procedimento: 1-Picar um morango em pequenos pedaos. 2-Colocar um pedao de morango em um tubo de eppendorf (at onde o tubo marca 0,5ml). 3-Macerar bem com um palito. 4-Adicionar 500 ul de Tampo de Extrao. Agitar vigorosamente o tubo eppendorf. 5-Colocar o tubo em banho-maria a 65C por 15 minutos. 6-Colocar o tubo eppendorf no gelo por 5 minutos. 7-Centrifugar por 8 minutos. 8-Recolher o sobrenadante para novo tubo eppendorf. 9- Adicionar lentamente pelas bordas do tubo, 2 vezes a quantidade do sobrenadante de etanol 95 % gelado.

Em 1923 o ingls Frederick Griffith identificou duas linhagens de bactrias que apresentavam colnias lisas (L) e outras de colnias rugosas (R). As bactrias lisas eram virulentas, enquanto as rugosas no. Griffith observou que, quando inoculava um rato com bactrias rugosas no virulentas juntamente com bactrias lisas virulentas mortas, o rato desenvolvia pneumonia, o que no era observado quando estas bactrias eram introduzidas no rato separadamente. O que ser que fazia com que as colnias R se tornassem virulentas? Foi essa mesma pergunta que Griffith fez a si mesmo. Ele chamou de princpio transformante, essa "coisa" que fazia com que as bactrias no virulentas virassem virulentas. Vrios grupos tentaram ento descobrir o que seria este princpio transformante. At os anos 40 do sculo XX, as protenas eram as grandes candidatas ao cargo de princpio transformante. J a substncia inicialmente chamada de nuclei (e mais tarde DNA) era algo que ainda no possua uma funo definida e que parecia, a princpio, ser uma molcula montona, formada sempre pelas mesmas 4 bases nitrogenadas, adenina, timina, guanina e citosina. J as protenas pareciam muito mais dinmicas, maiores e formadas por 20 aminocidos diferentes! E tambm j se sabia que elas eram os componentes estruturais das clulas, ou seja, os tijolos de todos os organismos.

Para ver imagens de clulas se dividindo, acesse o link http://www.bio.davidson.edu/courses/movies.html



Extrao de DNA de mucosa bucal. Material (por grupo): 1. 1 copo descartvel 2. 1 esptula 3. 15 mL de soluo de sacarose a 3% 4. Pipetas plsticas 5. 1 tubo de ensaio 6. l c o o l gelado etlico 8. Estante para tubos 9. Isopor com gelo 10.Micropipeta (500 L)

7. Banho 550C

11. Detergente neutro 25%

Procedimento: 1. Higienizar a boca fazendo bochechos com gua ou, se possvel, escovando os dentes. 2- Colocar aproximadamente 15mL de gua com acar (3%, uma colher de ch de acar em meio copo descartvel). 3- Delicadamente raspar a mucosa bucal com uma esptula. 4- Bochechar vigorosamente por aproximadamente 30 segundos com a soluo utilizada no passo 2. 5- Recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartvel. Mergulhar a esptula usada na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho (Desta forma, coletaremos as clulas que ficaram na esptula). 6- Transferir 5 mL do volume obtido no passo 5 para um tubo de ensaio e adicionar uma pitada de sal de cozinha (para aproximadamente 1% final). Homogenizar invertendo o tubo. 7-Adicionar 500 L de detergente neutro diludo 25% (1:4) e homogeneizar vagarosamente. 8- Aquecer a 55oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo. 9- Adicionar lcool gelado (absoluto se possvel) lentamente, pelas bordas do tubo, com o auxlio de uma pipeta, at que se alcance pelo menos 1cm de altura. *Voc j poder observar a frao que corresponde ao seu DNA, insolvel no lcool, se formando no tubo. Se esperarmos mais um pouco, poderemos observar melhor. Responda s seguintes perguntas: 1- Por que o DNA tem o aspecto de novelo? 2- Como voc relacionaria os seguintes termos: DNA, cromossomo, alelo e gene? 3- Qual a funo da temperatura, do sal, do lcool e do detergente na extrao de DNA? 4- Compare os dois mtodos. Quais so as semelhanas e as diferenas?

Oswald Avary

Em 1944, Oswald Avary, junto com Colin MacLeod, conseguiu puricar o princpio transformante. Eles descobriram que o mesmo no se alterava quando submetido tripsina, uma enzima especializada em degradar protena. Por outro lado, quando em contato com enzimas que degradavam nuclei (DNA) o princpio transformante no era mais observado. Assim concluiu-se que o que fazia com que as bactrias de Grifth se tornassem virulentas era a transferncia do DNA das bactrias virulentas para as no virulentas, quando juntas eram utilizadas para infectar um rato. No entanto, ainda levaram mais alguns anos e experimentos para que a comunidade cientca aceitasse que o princpio transformante no cabia s protenas, mas sim ao cido nuclico.

Cracking the Human Genome Site baseado no programa da rede de televiso pblica dos EUA, PBS, com animaes sobre o sequenciamento do genoma humano. Muito bom! http://www.pbs.org/wgbh/ nova/genome/program_t_ qt.html#

Extrao de DNA de Kiwi Todo o processo de extrao de DNA de Kiwi, com todos os detalhes. Faa na sala de aula com seus alunos. http://www.biotech.iastate. edu/publications/lab_protocols/DNA_Extraction_Kiwi. html

Introduction to DNA structure Site contendo vrias imagens grficas sobre a estrutura qumica da molcula de DNA. http://www.blc.arizona. edu/Molecular_Graphics/ DNA_Structure/DNA_Tutorial.HTML

Extrao de DNA de tomate Protocolo passo a passo para a extrao de DNA de tomate http://ucbiotech.org/edu/ edu_aids/TomatoDNA.html

Gene Gateway-Exploring Genes and Genetic Disorders Esta pgina faz parte do site do Departamento de Energia (DOE) dos Estados Unidos, uma das principais agncias financiadoras do Projeto Genoma Humana. Nesta pgina voc poder clicar num dos cromossomos humanos e uma nova janela se abrir mostrando todos os genes conhecidos que esto associados doenas genticas. http://www.ornl.gov/ TechResources/Human_Genome/posters/chromosome/ chooser.html

Mas o que era esse misterioso nuclei? Como era a sua estrutura? Foi em 1953 que Watson e Crick propuseram a estrutura da molcula de DNA num pequeno artigo de duas pginas na renomada revista inglesa Nature. Para desvendar o mistrio, os dois cientistas utilizaram fotografias tiradas pela cientista Rosalind Franklin (sem a sua permisso). Uma verso em espanhol do artigo de Watson e Crick pode ser encontrada na pgina http://www.bioxeo.com/adn.htm A verso em ingls est disponvel no site da revista Nature no link http://www.nature.com/nature/dna50/watsoncrick.pdf
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