INTRODUCCION La presente invencin se refiere a un proceso para la preparacin de inmunognos o reactivos de diagnstico que se asemejan a un antgeno o a un organismo patgeno

especfico para una enfermedad, caracterizado esencialmente por las siguientes operaciones: - la identificacin de al menos un anticuerpo que reacciona con el antgeno o con el organismo patgeno especfico para la enfermedad; - la construccin de genotecas de fagos que aparecen sobre la superficie de los oligopptidos de la cpside, expresados a partir de los insertos oligonucleotdicos de secuencia aleatoria, introducidos dentro de un gen que codifica para una protena de la cpside del fago, usando tcnicas de manipulacin gentica (por ejemplo usando un plsmido manipulado mediante ingeniera gentica para los fines de la invencin, el mapa gentico del cual se muestra en la figura): - la seleccin de los fagos que aparecen sobre las superficies de los oligopptidos antignicos de la cpside, reconocidos por dicho anticuerpo; - el uso opcional de los fagos seleccionados y/o los fragmentos de los mismos y/o sus derivados para la formulacin de equipos diagnstivos para el agente patgeno especfico, o en general para las enfermedades, incluyendo los desrdenes inmunolgicos tpicos de las llamadas enfermedades autoinmunes, con etiologa o patogneses conocidas o desconocidas; - el uso opcional de los fagos seleccionados y/o los fragmentos de los mismos y/o sus derivados, para la formulacin de un antagonista de las reacciones antgeno-anticuerpo para el tratamiento de la enfermedad inducida por dicho antgeno; - el uso opcional de los fagos seleccionados y/o los fragmentos de los mismos y/o sus derivados, para inducir una tolerancia de los fenmenos de hipersensibilidad y/o alergia a los compuestos y/o a las preparaciones naturales o sintticas; la inmunizacin opcional de un organismo, por medio de fagos seleccionados y/o fragmentos de los mismos y/o sus derivados, y - la verificacin opcional de la presencia, en el suero del organismo inmunizado, de anticuerpo que reconocen el antgeno anterior o el organismo especfico para la enfermedad. Los inmunogenos que se pueden obtener a partir del procedimiento de la presente invencion son utiles como vacunas o agentes inmunizantes as como ser utiles como reactivos de diagnostico. Las vacunas agentes inmunizantes se administran a un paciente que necesite tal tratamiento de acuerdo con procedimientos conocidos en la tecnica. Las vacunas o agentes inmunizantes se pueden administrar y usar bien de manera individual o en combinacion. Las vacunas e inmunogenos de la presente invencion pueden incluir el fago o protena y peptidos aislados del mismo. Reacciones de precipitacin:

Antgeno es cualquier sustancia extraa que, introducida en el interior de un organismo, provoca una respuesta inmunitaria, estimulando la produccin de anticuerpos. Los anticuerpos son protenas pertenecientes al grupo de las gammaglobulinas o inmunoglobulinas, constituidas por la asociacin de cuatro cadenas polipeptdicas unidas entre s mediante puentes disulfuro, dos cadenas se denominan pesadas y las otras dos ligeras. Cada una de las cadenas ligeras incluye una regin variable, cuya secuencia de aminocidos es peculiar de cada anticuerpo, y las pesadas, una regin constante, con la misma secuencia en todos los anticuerpos. Reciben el nombre de Ig y existen varios tipos:
o IgG: El 80% del total, se une a los microorganismos y neutraliza las

toxinas. Respuesta inmune secundaria. o IgA: 13%.: encargada de la defensa de la superficie externa del cuerpo. Respuesta inmune secundaria. o IgM: 6% de las Ig. Son los primeros anticuerpos que aparecen en la respuesta a una infeccin Responsables de la respuesta inmune primaria.

La reaccin antgeno-anticuerpo. La unin antgeno-anticuerpo es especfica, cada anticuerpo reconoce y se une a un determinado antgeno. Esta unin se realiza por medio de uniones intermoleculares entre el antgeno y la zona del anticuerpo, y da lugar al complejo antgenoanticuerpo segn el modelo llave-cerradura. Las reacciones antgeno-anticuerpo tienen diversas consecuencias y existen varios tipos de reacciones:
o Reaccin de neutralizacin.- En este caso los anticuerpos se

unen con los antgenos (toxinas bacterianas, virus, etc.) y los neutralizan, impidiendo que se unan con las membranas celulares.

o Reaccin de precipitacin.- En este caso los anticuerpos se unen

con los antgenos, que son molculas libres y solubles y forman grandes complejos tridimensionales, que son insolubles y precipitan, anulndose su actividad. o Reaccin de aglutinacin.- En este caso los anticuerpos, que se denominan aglutininas, se unen a antgenos denominados aglutingenos, que se encuentran en la superficie de clulas, bacterias, virus, etc. Como consecuencia, las clulas, bacterias o virus se aglomeran unas con otras y eso facilita su destruccin mediante los macrfagos. o Reaccin de opsonizacin.- Es el proceso en el que la unin de los anticuerpos con los antgenos facilita la eliminacin de estos por fagocitosis. Inmunodifusin radial o simple: puede utilizarse para la determinacin cuantitativa de IgA, IgM e IgG. Este mtodo se basa en la incorporacin del anticuerpo en un gel de agar y luego por la introduccin del antgeno o de los sueros de prueba en orificios producidos en el agar. El antgeno difunde de modo radial hacia el medio de gel circundante y se forma una lnea visible de precipitacin en el sitio donde reaccionan el antgeno y el anticuerpo. La determinacin cuantitativa de IgA, IgM e IgG contribuye al diagnostico y a la diferenciacin de las colagenopatas, de las infecciones crnicas y de la enfermedad heptica. Inmunoelectroforesis cruzada: es una inmunoelectroforesis realizada en dos direcciones. Primero se separan los antgenos del espcimen por electroforesis en una direccin. Despus se corta el gel, con los antgenos ya separados y se coloca en un medio de soporte que contiene una mezcla de anticuerpos contra dichos antgenos. A continuacin se realiza la segunda electroforesis en la direccin que forme un ngulo recto con la primera. Cuando se produce la reaccin antgeno-anticuerpo, los complejos que se forman precipitan y aparecen unas lneas de precipitacin en forma de arco. Esta tcnica tiene una resolucin mayor que la Inmunoelectroforesis y, al igual que en sta, el modelo de soporte que ms se utiliza es el gel de agarosa (puede mejorar la resolucin si en la primera electroforesis se sustituye el gel de agarosa por el gel de poliacrilamida). Inmunoelectroforesis rocket: esta tcnica permite cuantificar de manera sencilla y rpida la concentracin de un antgeno. Se preparar una capa de gel de agarosa en la que se ha incorporado el antisuero. Se colocan diversas soluciones del antgeno a cuantificar en diferentes pocillos adyacentes horadados en un lado de la placa. Adems, se colocan tres muestras control consistente en tres diluciones seriadas de un antgeno cuya concentracin es conocida, como referencia para el clculo

en las muestras problema. Se aplica una corriente elctrica perpendicular a la lnea de lo pocillos y tras la migracin se formara un halo de precipitacin en forma de huso (rocket) cuya altura ser proporcional a la cantidad de antgeno de la muestra. Contrainmunoelectroforesis: se coloca el antisuero en una lnea de pocillos adyacentes horadados en el gel de una placa de agarosa paralelos a una lnea de pocillos que contienen los diferentes antgenos. A continuacin se aplica una corriente elctrica en direccin perpendicular y se observa el precipitado formado en el lugar de encuentro. La concentracin se calcula por referencia a un pocillo testigo que contiene una cantidad conocida de antgeno. Inmunofijacin: consiste en separar las protenas de un espcimen por electroforesis en gel de agarosa. La muestra se coloca en varias zonas del gel de forma que se realizan simultneamente varios recorridos electroforticos de la misma. Despus se aade directamente al gel y sobre cada uno de los recorridos electroforticos, un anticuerpo contra una protena especifica (ejemplo: inmunoglobulinas A, G y M), de forma que cuando se produce la reaccin del anticuerpo con la protena de inters, se forma un precipitado que queda atrapado dentro de la matriz del gel. A continuacin se lava para eliminar las protenas no precipitadas y se tie para identificar la protena precipitada.