Reproduction, dveloppement et environnement

Sylvaine Cordier Inserm, Rennes Prsidente du Conseil scientifique du programme de recherche Environnement & Sant

42

44

Contexte et connaissances scientifiques

De nombreux lments de preuve rassembls ces dernires dcennies permettent daffirmer que certaines substances chimiques, prsentes sous forme de mdicaments, de contaminants de lalimentation ou lors d'expositions professionnelles ont des effets toxiques sur la reproduction humaine et le dveloppement embryonnaire. Ces associations ont pu tre tablies rapidement car certains de ces effets taient extrmement spcifiques et l'augmentation du risque trs importante. Pour de nombreuses autres substances, prsentes dans l'environnement gnral, la mise en vidence d'effets toxiques sur la reproduction humaine est beaucoup plus complexe mais il est pourtant vraisemblable qu'un certain nombre d'entre elles contribuent l'apparition de ces anomalies.

Une exposition des tempratures leves, aux radiations ionisantes, des produits chimiques (plomb, certains thers de glycol, certains pesticides comme le chlordcone et le dibromochloropropane (DBCP)) sont des facteurs de risque reconnus. Des situations professionnelles comme les postes de soudage, semblent affecter galement la fonction de reproduction masculine. Chez l'homme, la diminution de la qualit du sperme depuis les cinquante dernires annes, de mme que l'augmentation de l'incidence de dsordres testiculaires constituent la base de l'hypothse voulant que des composs chimiques de l'environnement, capables de mimer les effets des hormones sexuelles endognes, soient l'origine de dsordres de la fonction reproductrice mle. De faon plus prcise, on discute surtout l'heure actuelle de la possibilit qu'une exposition in utero des substances possdant des proprits oestrogniques puisse tre l'origine d'une grande varit d'effets adverses tels que les cancers en particulier le cancer du sein, de la prostate et des testicules (voire section C, Cancer et Environnement), lendomtriose chez la femme et dans les deux sexes des problmes de fertilit, de malformation du systme reproducteur, des modifications du comportement sexuel, des retards d'apprentissage dans la petite enfance, ainsi que des effets adverses sur le systme immunitaire et la fonction thyrodienne. Ces effets seraient causs par des perturbations hormonales se produisant un moment inopportun du dveloppement intra-utrin. Cette hypothse s'appuie en partie sur les effets nfastes qu'a engendr l'administration de dithylstilbestrol (DES), un oestrogne de synthse, plusieurs millions de femmes qui prsentaient des antcdents d'avortements spontans. En thorie, un blocage de l'action des andrognes ou un stimulus oestrognique des moments inopportuns de la grossesse pourraient tous deux induire une altration du dveloppement de lappareil reproducteur mle. Ainsi, par exemple, le principal mtabolite du pesticide DDT, le o,p-DDE, est un puissant antagoniste des andrognes chez le rat. L'o,p-DDT et de nombreux autres composs pour lesquels des proprits similaires ont rcemment t dcouvertes (chlordcone, dieldrin, endosulfan, beta-hexachlorocyclohexane, p,p'-mthoxychlor, alkylphnols), pourraient perturber le dveloppement de l'appareil reproducteur mle, tel que le suggre l'exemple du DES. Cependant, des test in vitro et in vivo semblent indiquer que ces substances, except le DES, seraient beaucoup moins actives que loestradiol, hormone naturelle utilise comme rfrence. Le rle de lenvironnement sur linfertilit fminine a fait lobjet de beaucoup moins de travaux, en particulier car il est trs difficile dexplorer le bon droulement des toutes premires tapes du dveloppement embryonnaire, qui suivent la fcondation et prcdent limplantation dans lutrus. De mme, une altration de la fonction ovarienne est difficile mesurer. Certaines tudes chez des femmes professionellement exposes ont enregistr les perturbations des cycles menstruels et de la dure des menstruations, mais la multiplicit des facteurs qui affectent ces paramtres chez la femme en font des indicateurs peu spcifiques. Jusqu' prsent, bien que l'hypothse soit plausible d'un point de vue biologique, il n'existe pas de preuves solides que l'exposition environnementale aux perturbateurs endocriniens puisse tre l'origine daltration de la reproduction chez l'humain

Lanalyse des effets sur la reproduction et le dveloppement : un problme complexe

Toutes les phases de la reproduction allant de la fcondation au dveloppement de l'enfant peuvent tre perturbes par des facteurs exognes. La varit des modes daction de ces diffrents facteurs lie aux diffrentes voies et fentres dexposition conduit un grand "spectre" d'effets observables. Cette complexit est augmente par l'absence de spcificit dans les relations expositionimpacts sur la reproduction. Ainsi une mutation dans une cellule germinale (action mutagne) peut avoir pour effet une rduction de la fertilit, un avortement spontan, des cancers ou d'autres maladies dans l'enfance. A l'inverse, un avortement spontan peut rsulter d'anomalies chromosomiques, de mcanismes embryotoxiques ou ftotoxiques. Au cours du dveloppement embryonnaire et ftal, les diffrents organes et fonctions associes se dveloppent des stades diffrents, chacun de ces stades embryonnaires prsente donc des sensibilits particulires aux toxiques. C'est essentiellement au cours du premier trimestre de la grossesse que des malformations anatomiques majeures peuvent tre induites (action tratogne). Les expositions intervenant plus tard dans la grossesse peuvent ventuellement induire des malformations mineures, ou des anomalies fonctionnelles et des retards de dveloppement chez l'enfant (action embryotoxique ou foetotoxique). La dose du toxique (ou le niveau d'exposition) est galement un paramtre important : en effet, il existe un consensus pour admettre, que hors les substances mutagnes, une substance donne n'a pas de toxicit embryonnaire en dessous dun certain seuil et quau-del, la gravit de l'effet augmente avec la dose, pouvant aboutir la mort de l'embryon et entranant un avortement spontan pas toujours cliniquement dcel. Il faut signaler, enfin, que la gravit de l'effet d'un toxique sur la reproduction ou le dveloppement embryonnaire est souvent influence par d'autres facteurs environnementaux et dpend du gnotype de l'embryon sur lequel il agit. Ainsi, certains agents toxiques pour une espce ne le sont pas pour d'autres, ou pas aux mmes doses. La prsence insouponne de nombreuses interactions de facteurs de l'environnement, tendant moduler l'action toxique, est en cohrence avec la forte proportion danomalies de la reproduction qui reste encore inexplique. En rsum, la difficult de mettre en vidence la toxicit de certains produits pour le systme reproducteur chez l'homme, tient le plus souvent l'absence de spcificit du mcanisme (un produit peut tre la fois mutagne et embryotoxique), de l'effet (suivant la priode et la dose une mme exposition peut aboutir une malformation congnitale ou un avortement spontan), et aux interactions avec d'autres facteurs, gntiques ou environnementaux.

Les altrations du dveloppement ftal et du jeune enfant

Environ 10 20 % des grossesses reconnues se terminent par un avortement spontan (avant 22 semaines de gestation). 30 50 % des avortements spontans sont porteurs d'une anomalie chromosomique du produit de conception (contre seulement 6 % des morts prinatales et moins de 1 % des naissances). Les morts ftales tardives suprieur 22 semaines), les morts ns et les morts nonatales prcoces avant le 8me jour sont comptabiliss dans la mortalit prinatale. En France en 1991, elle tait de 8,2 pour 1000 naissances. La prmaturit est dfinie comme un accouchement survenant avant 37 semaines rvolues d'amnorrhe. En France, en 1998, le taux de prmaturit a t estim 6,2 % des naissances. Le retard de croissance intra-utrin est dfini par un poids la naissance infrieur une valeur seuil dpendant de l'ge gestationnel et du sexe du nouveau-n et le plus souvent, ce seuil correspond au dixime ou cinquime percentile de la distribution des poids de naissance de la population gnrale, il atteint environ 6 % des naissances. Les malformations congnitales majeures affectent environ 1 2 % des naissances. Historiquement, les facteurs de risque de malformations congnitales ont t surveills depuis longtemps, surtout pour identifier les effets secondaires des mdicaments pris pendant la grossesse. Ceci a pu se faire grce la mise en place de registres de malformations dans le monde, suite la mise en vidence des effets tratognes massifs de la thalidomide, mdicament antinauseux prescrit pendant la grossesse ds les annes 1950. Une estimation des risques attribuables diffrentes causes de malformations faite en 1983 nidentifiait des causes environnementales probables que pour une faible partie dentre elles (environ 2-3 %). Parmi les autres causes, figurent les infections maternelles, les maladies mtaboliques de la mre, les mdicaments les facteurs gntiques et les interactions gnes-environnement. Aujourd'hui, on considre encore qu'environ 60 % des malformations congnitales n'ont pas de cause identifie.

Les dterminants environnementaux des altrations de la reproduction et du dveloppement : quelques hypothses, trop peu de preuves
En France, une enqute ralise en 1988-89 a montr qu'environ 14 % des couples consulteront au moins une fois pour des difficults concevoir. Dans la majorit des situations, un facteur fminin a t mis en cause, mais une bonne proportion des problmes de fertilit pourrait rsulter de perturbations de l'appareil reproducteur mle. Outre le rle des antcdents mdicaux (maladies sexuellement transmises, varicocle, cryptorchidie), des comportements individuels (consommation de cigarettes, de cocane, d'alcool), des effets nfastes sur la fonction reproductrice mle ont galement t relis des dterminants environnementaux. Les recherches portant sur les effets dltres de contaminants de l'environnement sur la fonction reproductrice mle se sont intensifies au cours des dernires annes, et ont permis de documenter des atteintes chez les sujets mles de diffrentes espces animales.

44

45

Les premires associations entre facteurs d'environnement et malformations congnitales ont t observes lors d'expositions exceptionnelles. A Hiroshima et Nagasaki, les survivants exposs in utero aux radiations prsentaient des signes de microcphalie et de retard mental. A Minamata, au Japon nouveau, la consommation, par les mres, de poisson contamin par le mthylmercure a produit des syndromes neurologiques graves chez les enfants. A Yusho enfin et Yucheng (Tawan), l'ingestion d'huile contamine par des polychlorobiphnyles (PCBs) pendant la grossesse, a provoqu l'apparition d'hyperpigmentation chez les nouveau-ns, puis de retards du dveloppement neurocomportemental chez les enfants. Depuis, en complment des systmes de surveillance, un grand nombre d'tudes pidmiologiques ont permis didentifier des produits potentiellement associs, voire certainement, des anomalies du dveloppement comme les avortements spontans, les malformations congnitales ou les retards de dveloppement neurocomportmental de lenfant, lors dune exposition maternelle. Les radiations ionisantes, le mercure, le plomb, les PCBs et dioxines, certains solvants et pesticides, certains gaz anesthsiants sont concerns par ces associations. Ces mmes substances ont galement t associes un excs de risque davortements spontans lors dexpositions paternelles mais la relation est moins fermement tablie. Le dveloppement du systme nerveux central est un processus particulirement sensible aux expositions toxiques survenant in utero et dans lenfance compte-tenu de sa dure de dveloppement beaucoup plus longue que celle des autres systmes. Lvaluation de ses atteintes est complexe car elle doit faire appel des tests neurologiques, psychomtriques ou neurophysiologiques. Linfluence possible de facteurs de lenvironnement a rcemment t voque pour expliquer laugmentation de lincidence de pathologies telles que lautisme ou le syndrome dhyperactivit et dficit dattention (Attention Deficit Hyperactivity Disorder, ADHD). Concernant la prmaturit ou le retard de croissance intra-utrin, il ny a pas dvidence forte du rle tiologique dune exposition professionnelle ou environnementale des substances chimiques ou agents physiques. Seule lexposition au plomb semble augmenter le risque de retard de croissance intra-utrin; ce risque a t identifi pour lexposition maternelle au travers de plusieurs tudes, il a galement t rapport un cas dexposition paternelle. Par ailleurs, la littrature rcente sur les toxiques chimiques de lenvironnement voque une augmentation de la frquence de retard de croissance intra-utrin dans des populations exposes notamment aux trihalomthanes sous-produits de chloration de leau ou certains herbicides ou rsidus dinsecticides type DDT, la pollution de lair, observations qui doivent tre confirmes. Les difficults conduire des tudes pidmiologiques dans ce champ sont telles que, alors que chez l'animal plusieurs milliers de produits ont t identifis comme toxiques pour la reproduction, seuls quelques dizaines (incluant les mdicaments) sont des produits toxiques confirms pour la reproduction humaine. Pourtant parmi les tratognes connus, les doses seuil traduisent une plus grande sensibilit de l'homme ces substances (de l'ordre d'un facteur 10, jusqu' 100 pour les PCBs).

consommateur des phtalates et du bisphnol A, constituants des emballages alimentaires, sont nettement infrieurs ceux de certains produits naturels prsents dans notre alimentation comme les phyto-oestrognes (Lhuguenot JC et al., 2000). Il apparat galement que la protine de liaison humaine des strodes sexuels SHBG (Sex-Hormone-Binding Globulin) limite la diffusion du bisphnol A vers des organes cibles notamment le foie et les testicules (Pugeat et al., 1997). Limpact des perturbateurs endocriniens a t tudi dans diffrents systmes exprimentaux. De fortes concentrations de trois pesticides utiliss pour certains jusqu une date rcente dans certaines rgions franaises (lindane, mthoxychlore et dieldrine) altrent la maturation des ovocytes (ovules) et la fcondation de certaines espces dinvertbrs marins et de la souris, suggrant un impact possible de ces produits sur lcosystme marin et potentiellement chez lhomme lors de circonstances dexpositions exceptionnelles (Ciapa B et al., 1997). Outre ses effets sur le dveloppement neurologique de lenfant, le plomb est souponn davoir dautres cibles dans le systme reproducteur. Des expriences ralises chez la souris et dans des cellules humaines in vitro ont montr une atteinte de la fonction ovarienne pouvant avoir pour consquence une hypofertilit chez la femme par un mcanisme de perturbation hormonale (Machelon V et al., 1999). Le dveloppement testiculaire pendant la gestation est une des cibles potentielles des perturbateurs endocriniens. Un systme de culture de cellules testiculaires a permis didentifier le mcanisme daction du bisphnol A, plus particulirement sur les gonocytes, en mme temps qutait test sur ce modle limpact de substances activit oestrognique puissante comme loestradiol et un mdicament, le diethylstilbestrol (Jgou Bet al., 1998). Ces rsultats obtenus in vitro nont cependant pas t confirms in vivo lors de lexposition de la souris en cours de gestation des concentrations de ce mme bisphnol A couramment rencontres dans les populations humaines (Le MagueresseBattistoni B et al., 2000). Dans cette exprience, un passage transplacentaire a t mis en vidence mais aucun effet sur le dveloppement testiculaire na t dcel. Par ailleurs, le bisphnol A et latrazine (herbicide utilis en grandes quantits dans le monde) prsents dans l'eau de boisson des concentrations comprises entre 1mM et 10 mM induisent in vivo chez le rat des perturbations du processus de formation osseuse au cours du dveloppement embryonnaire. Ces donnes confirment les rsultats obtenus in vitro sur les cellules osseuses (ostoblastes et ostoclastes) isoles partir d'os de rats nouveau-ns femelle ou mle mettant en jeu les rcepteurs des oestrognes ou ceux des andrognes suivant le sexe de l'animal. Cependant, ces molcules n'ont aucun effet sur les cellules osseuses provenant de rat au sevrage ou adulte (Lieberherr M et al., 2000). Ces rsultats confirment que lvaluation du risque pour lhomme exige la confrontation de diffrentes mthodologies exprimentales. Les consquences de lutilisation agricole intensive de pesticides depuis des dcennies en culture tropicale ont t values en Guadeloupe sur la fonction de reproduction des mammifres sauvages. Les animaux capturs dans les bananeraies (o les pesticides ont surtout t utiliss) ont des organes gnitaux plus petits et des taux de testostrone plus faibles que ceux danimaux de mme ge capturs sur la cte, mettant ainsi en vidence un effet probable de cet environnement sur la fonction de reproduction mle (Multigner L et al., 1999). Actuellement, peu dtudes ont t ralises sur les consquences possibles de la perturbation endocrinienne dans les populations humaines. Une tude franaise, intgre dans un rseau Europen, a confirm lexistence de variations gographiques de la qualit du sperme dans diffrentes rgions franaises et europennes ainsi que le dclin de la qualit spermatique dans ces mmes rgions au cours des dernires dcennies (Jouannet A et al., 1996).

Rfrences bibliographiques
Cordier S, Ayotte P, De Wals P, Ducot B, Dodin S, Saurel-Cubizolles MJ and Thoneau P.(2003). Reproduction. In: Grin M, Gosselin, P, Cordier, S, Viau, C., Qunel, P, and Dewailly, E., editor. Environnement et sant publique. Fondements et pratiques. Montral, Paris: edisem inc., Tec & Doc, p. 641-667.

Effets sur le dveloppement neuro comportemental de lenfant

Bien que les effets sur le dveloppement neurocomportemental de lenfant de substances comme le plomb, le mercure ou les polychlorobiphnyles (PCBs) soient connus depuis longtemps, des incertitudes subsistent quant aux doses auxquelles elles agissent ainsi que sur leur mcanisme daction. La mise en vidence de gnes exprims lors de lexposition aux PCBs pourrait permettre de disposer dun modle prdictif de la neurotoxicit de ces substances. Des travaux de ce type ont t entrepris avec pour objectif dexaminer la possibilit didentifier des indicateurs biologiques de niveau dexposition aux PCBs (Francon J, 1999). Plusieurs gnes, dont lexpression est module par les PCBs ont t identifis. Cependant, les variations observes ne permettent pas actuellement d'tudier l'effet dose-rponse des PCBs et denvisager leur utilisation en tant que marqueur dexposition. Au cours dun suivi de prs de 20 ans dune cohorte denfants dont lexposition in utero au plomb a pu tre quantifie, des associations inverses ont t observes 6 ans avec les performances sur des tests de cognition, de mmoire et verbaux et un moindre degr les performances motrices et perceptives. A ladolescence (1 7-18 ans), des altrations de performances cognitives ou motrices ne sont plus perceptibles suggrant une rversibilit des effets antrieurs. La mmoire par contre continue dtre affecte ladolescence (Huel G et al., 1996). Les activits dorpaillage ont entran depuis des dcennies une contamination de lenvironnement et de la chane alimentaire par le mthylmercure en Guyane. Les populations grosses consommatrices de poissons, en particulier les

Prsentation des projets

Entre 1996 et 2000, sur les quinze projets relevant du champ de la reproduction et du dveloppement, neuf dentre eux ont port sur le mode daction et les effets de produits souponns dagir comme perturbateurs endocriniens, trois se sont intresss aux consquences dexpositions in utero sur le dveloppement neurocomportemental des enfants, trois autres enfin ont tudi les effets reprotoxiques du plomb, ou des solvants en particulier les thers de glycol.

q Impact et modes dactions de perturbateurs endocriniens

Le nonylphnol est un composant de lindustrie des matires plastiques et de la fabrication des dtergents ; son utilisation frquente et sa grande stabilit ont pour consquence une contamination des cours deau et des risques de bioaccumulation le long de la chane alimentaire. Il apparat cependant que chez les mammifres, ce contaminant est rapidement absorb et limin grce des systmes mtaboliques efficaces. Une bioaccumulation dans les tissus est donc peu probable, limitant ainsi la dangerosit de ce produit (Cravedi et al., 1999). On a pu montrer aussi que le pouvoir de perturbation endocrinienne (oestrognomimtique ou estrogen-like), et les niveaux dexposition pour le

46

47

populations amrindiennes dont cest la principale source de protines, sont particulirement vulnrables et, comme cela avait dj t suggr en Amazonie Brsilienne, on a pu constater que les niveaux dexposition auxquelles elles sont soumises entranent de lgers dficits de performances sur la motricit et lorganisation visuospatiale chez les enfants (Cordier S et al , 1996).

Les quipes franaises mobilises autour de ce thme sont encore peu nombreuses et contribuent insuffisamment la production de connaissances ncessaires lexpertise dans ce domaine, malgr des situations dexpositions environnementales proccupantes en France (incinration, trafic routier, pollutions agricoles, etc.). Les sources de financement dans ce domaine sont extrmement limites et le programme Environnement & Sant a contribu de faon dterminante aux travaux qui ont pu tre raliss en France. Les effets des pollutions environnementales actuellement redouts, quils concernent par exemple une dtrioration de la qualit des cellules germinales ou des retards de dveloppement intellectuel chez lenfant, portent potentiellement atteinte la qualit des espces et lespce humaine en particulier justifiant une intensification des travaux de recherche dans ce domaine, tant pour lidentification des agents toxiques que pour lvaluation de lefficacit des mesures de rduction des expositions.

Autres effets sur la reproduction

Les thers de glycol sont une classe de solvants dont lusage sest dvelopp depuis les annes 1970. Certains dentre eux parmi les plus utiliss cette poque, ont des effets dmontrs chez lanimal en particulier sur la fertilit et lembryogense. La question se pose donc dvaluer limpact du contact avec ces produits dans les populations professionnellement exposes. Une tude ralise chez les employs de la Ville de Paris na pas permis de mettre en vidence dassociation entre lexposition actuelle aux thers de glycol (telle que valide par des biomarqueurs urinaires) , les caractristiques du sperme et les niveaux dhormones. Par contre lestimation des expositions passes aux thers de glycol semble associe un dficit de certains paramtres (concentration du sperme), ces observations pouvant rsulter de lutilisation dans le pass de produits de la mme famille, beaucoup plus toxiques pour la reproduction (Multigner L et al., 1996). Le risque de malformations congnitales (fentes labiales ou palatines) lies lutilisation professionnelle de ces solvants pendant la grossesse a galement t valu. Cette tude confirme une association avec lexposition aux solvants type thers de glycol, mais lexistence de co-expositions dautres polluants, en particulier dautres solvants, rend ltablissement de la causalit difficile. La mise en vidence de susceptibilits gntiques grce ltude des polymorphismes de gnes important pour le mtabolisme (alcool-dshydrognase, CYP450) ou intervenant dans la dtoxication (glutathion-s-transfrase) de ces substances devrait permettre de dfinir des sousgroupes risque et les mcanismes daction de ces produits (Cordier S et al., 1998).

Rsums des projets

Qualit du sperme, fonction de reproduction et fertilit chez lhomme, facteurs de variation et environnement Jacques Auger et P. Jouannet et al., 1996
La responsabilit de facteurs environnementaux est rgulirement suggre pour expliquer laugmentation progressive et les variations gographiques des altrations de la fonction de reproduction. La plupart des conclusions sont formules partir danalyse rtrospective de donnes acquises dans des contextes et des mthodologies variables. Lobjectif principal de cette tude tait de dfinir les conditions selon lesquelles pouvaient tre recruts des hommes fertiles afin dtudier linfluence des facteurs environnementaux sur la fonction de reproduction : - mise en place dun recrutement de volontaires partenaires de femmes enceintes partir des consultations prnatales dun hpital parisien. Ces hommes devaient dune part remplir un questionnaire (relatif aux antcdents mdicochirurgicaux, aux conditions de vie et de travail, aux conditions dobtention de grossesse) et dautre part accepter un examen clinique des dosages hormonaux et un examen de sperme ; - tude de faisabilit de recrutement dhommes fertiles dans 6 CECOS (Centre dEtude et de Conservation des ufs et du Sperme humains), rpartis sur lensemble du territoire, pour la mise en place dun protocole multicentrique beaucoup plus vaste ; - analyses de donnes collectes par les CECOS depuis 1973 pour discuter les variations sculaires et gographiques de la qualit du sperme humain en France ; - standardisation et mise au point dun contrle de qualit des mthodes danalyse du sperme, valuation de nouvelles mthodes de mesures objectives des paramtres spermatiques utiles pour les tudes pidmiologiques. Cette tude a montr quil tait possible de recruter des hommes partenaires de femmes enceintes sans proposer dindemnit, il est cependant indispensable de sappuyer pour ce recrutement sur des personnes spcifiquement formes la communication et la formation. Le bilan de recrutement dans les CECOS a en revanche t ngatif et aurait ncessit de confier cette tche une personne spcifiquement forme. Les rsultats de ltude rtrospective confirment lexistence dune trs probable baisse de la qualit du sperme principalement lie lanne de naissance. Une diffrence significative de la qualit du sperme dhomme fcond a t par ailleurs observe dans diffrentes villes franaises. Des donnes de rfrence sur la qualit du sperme et le dlai concevoir (DNC) dune population assez homogne dhommes fconds ont pu tre obtenues. Par contre, la taille de la population dhommes recruts Paris na pas permis une analyse prcise des relations entre caractristique spermatiques, DNC et les facteurs environnementaux et de mode de vie collects par questionnaire. Cependant, grce un protocole similaire men conjointement au niveau europen, ce travail fait tat de diffrences gographiques de la qualit du sperme et du DNC. Ce projet a conduit au dveloppement dune mthode de mesure de la concentration spermatique, dont les avantages sur les mthodes classiques ont t dmontrs. Publications issues de ce projet
Auger J, Jouannet P. Evidence for regional differences of semen quality among fertile French men. Federation Francaise des Centres d'Etude et de Conservation des Oeufs et du Sperme humains. Hum Reprod 1997;12(4):740-5. Auger J, Eustache F, Ducot B, Blandin T, Daudin M, Diaz I, et al. Intra- and inter-individual variability in human sperm concentration, motility and vitality assessment during a workshop involving ten laboratories. Hum Reprod 2000;15(1 1):2360-8.

Synthse & perspectives

Ltude de limpact de lenvironnement sur la reproduction au sens large (intgrant le dveloppement intra utrin) est encore un champ de recherches en mergence. Il est particulirement complexe car trois individus, recevant des expositions diffrentes et porteurs de susceptibilit propre chacun, sont en jeu : la mre, le pre et lenfant en devenir. Un autre lment contribue cette complexit, les relations dose-effet, qui conduisent en gnral observer que la frquence dune atteinte augmente avec la dose de lexposition un toxique, sont ici souvent non linaires. Ceci est d lexistence de priodes de vulnrabilit variables, laction probable et simultane de mcanismes biologiques encore trop mal connus comme ceux induit par les perturbations endocriniennes. Ces caractristiques rendent lidentification de produits dangereux particulirement difficile. Ce champ de recherches a reu jusqu prsent un soutien limit des pouvoirs publics tant il est vrai que les travaux visant lamlioration de la prise en charge mdicale de la grossesse et du nouveau-n ont supprim des facteurs de risque majeurs dissues de grossesse dfavorables et que le dveloppement des techniques de fcondation artificielle a contribu rendre plus acceptables les difficults de procration pour la population. Concernant les besoins de connaissances on peut identifier un certains nombres de priorits : - lidentification prcoce des substances potentiellement reprotoxiques lors de leur mise sur le march. - le dveloppement in vitro de marqueurs biologiques signant des mcanismes daction nouveaux comme celui de la perturbation endocrinienne ou celui dune atteinte des cellules germinales. A moyen terme lutilisation de ces marqueurs pour lhomme serait souhaitable, - le dveloppement de tests multignrationnels permettant de mesurer limpact dagent mutagnes ou tratognes sur plusieurs gnrations. - le renforcement des connaissances sur les autres facteurs, exognes ou individuels, favorisant ou attnuant les effets reprotoxiques. Il est vraisemblable en effet que les facteurs gntiques jouent un rle prpondrant dans ce domaine. - le dveloppement de mthodologies visant amliorer la prcision des mesures dexposition individuelle aux contaminants de lenvironnement dans les tudes pidmiologiques, prise en compte des priodes cls du dveloppement. Les quelques tudes pidmiologiques rcentes qui se sont donn les moyens dintgrer des mesures dexposition prcises sur la contamination des eaux (sousproduits de la chloration par exemple), de lair (HPA), des aliments (mercure, pesticides) ou de certaines expositions professionnelles ont pu mettre en vidence des atteintes prcdemment insouponnes. Ces tudes restent encore rares et nont certainement pas encore permis dvaluer lampleur du risque pour la sant publique et encore moins de produire des outils daide la prvention.

48

49

Auger J, Eustache F, Andersen AG, Irvine DS, Jorgensen N, Skakkebaek NE, et al. Sperm morphological defects related to environment, lifestyle and medical history of 1001 male partners of pregnant women from four European cities. Hum Reprod 2001;16(12):2710-7. Eustache F, Jouannet P, Auger J. Evaluation of flow cytometric methods to measure human sperm concentration. J Androl 2001;22(4):558-67. Jensen TK, Slama R, Ducot B, Suominen J, Cawood EH, Andersen AG, et al. Regional differences in waiting time to pregnancy among fertile couples from four European cities. Hum Reprod 2001;16(12):2697-704. Jorgensen N, Andersen AG, Eustache F, Irvine DS, Suominen J, Petersen JH, et al. Regional differences in semen quality in Europe. Hum Reprod 2001;16(5):1012-9. Slama R, Eustache F, Ducot B, Jensen TK, Jorgensen N, Horte A, et al. Time to pregnancy and semen parameters: a crosssectional study among fertile couples from four European cities. Hum Reprod 2002;1 7(2):503-15.

Risques neurotoxiques chez l'enfant lis l'exposition au mthylmercure en guyane Franaise Sylvaine Cordier et al., 1996
La neurotoxicit du mthylmercure est connue depuis la catastrophe de Minamata au Japon dans les annes 1950, o plusieurs centaines de personnes ont t atteintes de dsordres neurologiques graves souvent irrversibles, suite la consommation rgulire de poisson contamin par du mthylmercure. Des enfants ayant de svres atteintes neurologiques sont ns de mres ne montrant pratiquement aucun symptme. Une autre pidmie en Irak en 19711972, due l'ingestion de farines contamines, a permis de mieux quantifier la relation entre l'exposition et les atteintes observes. On admet gnralement que des expositions rsultant en des concentrations maternelles dans le cheveu de l'ordre de 10-20 g/g sont susceptibles d'accrotre le risque d'atteinte crbrale chez le ftus, provoquant des perturbations du dveloppement moteur telles qu'un retard d'apprentissage de la marche. Plus rcemment, des tudes ont recherch des effets plus fins en mesurant le dveloppement neurocomportemental de l'enfant l'aide de tests psychologiques ou de motricit, diffrents ges, en relation avec une exposition prnatale au mthylmercure, aux Seychelles ou en Nouvelle-Zlande, dans des populations consommatrices rgulires de poisson. Les observations publies rcemment sur une cohorte d'enfants des Iles Fro semblent indiquer des effets neuropsychologiques des niveaux d'exposition infrieurs 10 g/g dans le cheveu maternel. Notre tude a t initie dans le cadre d'un programme visant valuer les consquences environnementales et sanitaires de la pollution par le mercure en Guyane Franaise lie aux activits d'orpaillage, plus particulirement dans les villages amrindiens du Haut-Maroni o l'exposition des populations est la plus forte. Un examen neurologique et neuropsychologique des enfants a t conduit entre 1997 et 1998 dans trois communauts amrindiennes de Guyane : le Haut Maroni (Cayod, Elah, Twenke, Taluhen et Antecume-Pata), Camopi et Awala. Les niveaux individuels d'exposition au mthylmercure ont t mesurs par dtermination du mercure total dans les cheveux des enfants et de leurs mres. Un questionnaire standardis rempli avec la mre a permis d'valuer les paramtres sociodmographiques et mdicaux. L'examen neurologique a t ralis par trois mdecins et neuropdiatres sur les enfants gs de 9 mois 6 ans (97 enfants dans le Haut Maroni, 69 Camopi et 82 Awala de mme ge et sexe). Des relations ont t mises en vidence entre l'exposition au mercure et la prsence de rflexes ostotendineux accrus et une moins bonne coordination des jambes. L'examen neuropsychologique conduit par trois psychologues a port sur les enfants de 5 12 ans (103 enfants dans le Haut-Maroni et 103 Awala de mme ge et mme sexe). Il a mis en vidence une association entre le niveau d'exposition au mercure et un dficit de performance dans les tests mesurant en particulier les capacits d'organisation visuospatiale. Ce dficit est plus marqu chez les garons. La prise en compte des caractristiques mdicales, sociodmographiques ou les habitudes de vie ne modifie pas les relations observes. En conclusion, il n'a pas t observ de dficiences majeures en relation avec l'exposition au mercure, mais les signes mis en vidence confirment le rle toxique probable du mthylmercure sur les fonctions neurologiques et intellectuelles dans ces populations. Ils sont en accord avec d'autres tudes en cours sur des populations semblables dans le monde. Ils soulignent la ncessit de mettre en place rapidement des mesures visant rduire l'exposition de ces populations au mercure. Publications issues de ce projet

Impact des contaminants des eaux de boissons et de surface sur la maturation et la fcondation des ovocytes Brigitte Ciapa et al., 1997
Ce projet avait pour objet ltude de limpact des pesticides sur la maturation et la fcondation des ovocytes de trois espces animales diffrentes : deux invertbrs marins (l'oursin et l'toile de mer) et un mammifre (la souris). En effet, certains de ces composs son dits "oestrogniques" car ils peuvent se comporter comme des xnooestrognes, et mimer l'action dune des principales hormones femelles, l'oestradiol. Le choix des pesticides tests tait guid par des rsultats danalyse effectues par la DDASS du Finistre dans les annes 1990 qui ont mis en vidence la prsence du lindane, largement utilis en agriculture, du mthoxylchlore (ou MXC, un dichlorodiphnylthane) et de la dieldrine (un cyclodine) dans les eaux courantes. Lanalyse de la vitesse de dgradation et dlimination de ces composs dans l'environnement ou dans les organismes a mis en vidence une bio-accumulation de ces molcules. Leurs effets peuvent donc tre persistants et l'exposition long terme, mme de faibles doses, peut conduire leur accumulation dans certains tissus animaux. En particulier, des quantits non ngligeables de certains pesticides peuvent s'accumuler dans le tissu ovarien, les embryons et ftus humains. Lindane, dieldrine et MXC ont ainsi pu tre dtects dans les ovaires, les liquides folliculaires et les tissus utrins. La maturation est une tape ncessaire dpendante de laction dhormones, dont loestradiol, et conduit la formation d'ovocytes capables d'tre fconds. Cette tude suggre que les trois composs sont capables d'altrer la maturation des ovocytes chez l'toile de mer comme chez la souris. Une altration de la fcondation a galement t montr, chez l'oursin ou l'toile de mer. L'activation (reprise du cycle de mose qui fait normalement suite la fcondation) spontane intervient pour un pourcentage lev d'ovocytes de souris traits avec ces pesticides. La contamination de l'eau de mer par les pesticides peut donc affecter diffrents stades du dveloppement embryonnaire. Les effets observs ont t obtenus de fortes concentrations de pesticides. Cependant, il reste possible que les organismes tels que l'oursin, capable de filtrer de grandes quantits d'eau, accumulent des doses non ngligeables de ces produits dans certains tissus. Enfin, l'homme pourrait tre en contact avec des fortes concentrations de ces pesticides en cas d'incidents majeurs, dans des zones pollues o ces produits ne sont pas manipuls avec toutes les prcautions ncessaires, en particulier dans les pays en voie de dveloppement. Publications issues de ce projet
Picard A, Palavan G, Robert S, Pesando D, Ciapa B. Effect of organochlorine pesticides on maturation of starfish and mouse oocytes. Toxicol Sci 2003;73(1):1 41-8. Pesando D, Robert S, Huitorel P, Gutknecht E, Pereira L, Girard JP, et al. Effects of methoxychlor, dieldrin and lindane on sea urchin fertilization and early development. Aquat Toxicol 2004;66(3):225-39.

Cordier S, Garel M, Mandereau L, Morcel H, Doineau P, Gosme-Seguret S, Josse D, White R, Amiel-Tison C. Neurodevelopemental investigations among methylmercury-exposed children in French Guiana. Environ. Res. 2002; 89 (1): 1-1 1

Exposition maternelle aux solvants, susceptibilit gntique et risque de fente orale Sylvaine Cordier et al., 1998
La prvalence des malformations congnitales la naissance est de l'ordre de 2 pour 100 naissances. Avec la rduction de la frquence des pathologies infectieuses nonatales et de la prmaturit, elles sont devenues, dans les pays occidentaux, une source majeure de mortalit et de morbidit nonatales et infantiles. Leur tiologie est complexe et le plus souvent sous la double dpendance de facteurs gntiques et environnementaux. Parmi les malformations congnitales, les fentes labiales et palatines (environ 1 pour 700 naissances) semblent particulirement sensibles aux expositions environnementales sans que des facteurs tiologiques aient t identifis avec certitude. Parmi ceux-ci, ont t voqus la consommation de tabac maternelle pendant la grossesse, la consommation dalcool et les apports en vitamines. Lors dune tude prcdente, nous avons mis en vidence le rle possible de l'exposition professionnelle maternelle aux solvants pendant la grossesse dans la survenue de malformations congnitales. Pour confirmer cette association, nous avons compar des familles denfants atteints de bec de livre et traits par chirurgie maxillo-faciale dans des

50

51

hpitaux de Lyon, Paris, Clermont-Ferrand et Grenoble, des familles denfants tmoins. A loccasion dun entretien avec la mre, des questions ont port sur le droulement de la grossesse, lalimentation, les expositions professionnelles et lenvironnement dans lequel vit la famille. Des prlvements de sang de lenfant et de ses parents ont permis de caractriser les systmes enzymatiques, variables dune personne lautre, qui peuvent modifier les ractions de lindividu son environnement. Ces variations ont t examines en regard des malformations congnitales observes. Nos rsultats confirment des augmentations de risque de bec de livre, en relation avec la consommation de tabac et la consommation dalcool au 1er trimestre de la grossesse. Parmi les professions occupes par les mres de cas et de tmoins au 1er trimestre de la grossesse, les ouvrires sont nettement plus reprsentes chez les mres de cas que de tmoins, en particulier les couturires et les prposes lemballage. Les risques relatifs associs lexposition diffrentes classes de solvants (oxygns, chlors, ptroliers) sont en gnral suprieurs 1, surtout pour la classe des solvants chlors. Parmi les autres produits on trouve en excs les composs du plomb et les expositions aux rayonnements lectromagntiques de extrmement basse frquence. Lexposition aux thers de glycol montre des relations dose-effet avec le risque de becs de livre, relations qui vont dans le mme sens que nos rsultats prcdents. La caractrisation de la susceptibilit gntique individuelle des enfants et de leurs parents la recherche dinteractions gnes-environnement est actuellement encore en cours. Les premires analyses des facteurs gntiques ont port sur le gne ADH3 (alcool dshydrognase) qui mtabolise les alcools. Elles mettent en vidence un certain degr de protection vis vis du risque de bec de livre, chez les enfants porteurs dune certaine forme du gne ADH3 (gnotype). Malgr le rle probable de lADH3 dans la mtabolisation des alcools, le caractre protecteur dun fond gntique donn (ici reprsent par les formes variables du gne ADH3) semble sexprimer indpendamment de lexposition maternelle lalcool ou aux thers de glycol. En dautres termes, il ny aurait pas dinteraction gne-environnement entre ce gnotype et lexposition aux alcools. Ainsi, lexpression des formes variables du gne ADH3 ne dpendrait pas dune exposition un environnement particulier. Les analyses gntiques ne sont pas termines et un bon nombre dhypothses gntiques et dinteractions gneenvironnement restent explorer partir de cette tude. Publications issues de ce projet
Chevrier C, Perret C, Bahuau M, Nelva A, Herman C, Francannet C, Robert Gnansia E, Cordier S. Interaction between the ADH1C polymorphism and maternal alcohol intake in the risk of nonsyndromic oral clefts : An evaluation of the contribution of child and maternal genotypes. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2004 Dec 15

q Ces processus sont-ils diffrents chez les mles et les femelles ? q Le devenir du nonylphnol dpend-il de la dose ? q Lhomme possde-t-il les mmes mcanismes de dfense que le rat vis--vis de ce compos ? Grce des travaux faisant intervenir des molcules radioactives de nonylphnol, et mettant en uvre des exprimentations sur le rat et sur des cellules hpatiques humaines, nous avons pu montrer que ce contaminant tait rapidement absorb et limin. Peu de rsidus restent prsents dans les tissus aprs la contamination. Cette limination est essentiellement due des mcanismes de transformation (mtabolisation) efficaces qui ont lieu dans le foie. Cest du reste dans cet organe que les concentrations en nonylphnol sont les plus importantes, aprs le tube digestif. Les mmes voies de mtabolisation sont utilises par le rat et lhomme pour liminer le nonylphnol, que lon retrouve en grande partie dans lurine sous forme de produits transforms. Les produits de transformation ont totalement ou partiellement perdu les proprits estrogniques du nonylphnol. Ces mcanismes dlimination sont aussi efficaces faible dose (1g/kg) qu forte dose (10mg/kg) et peu de diffrences ont t observes entre mles et femelles. Bien que le nonylphnol soit capable, dans une certaine mesure, de perturber les mcanismes de rgulation hormonale, les mammifres ont la capacit, grce leurs systmes mtaboliques, dinactiver et dliminer efficacement ce compos. Il est de ce fait peu probable de voir ce type de substance persister longtemps dans les tissus ou saccumuler dans la chane alimentaire. Publications issues de ce projet
Zalko D, Costagliola R, Dorio C, Rathahao E, Cravedi JP. In vivo metabolic fate of the xeno-estrogen 4-n-nonylphenol in Wistar rats. Drug Metab Dispos 2003;31(2):168-78.

Identification de gnes dont lexpression est altre par les biphnyls polychlors (PCBs) au cours du dveloppement du systme nerveux central Relations avec la voie de signalisation des hormones thyrodiennes Conception et dveloppement de tests de neurotoxicit Jacques Francon et al., 1999
Les biphnyls polychlors (PCBs) sont parmi les substances chimiques dont la prsence persistante dans les sols et dans les eaux - et par voie de consquence dans les aliments - est proccupante pour la sant de lHomme. Ces substances sont considres comme neurotoxiques lors du dveloppement embryofoetal des mammifres. Lobjectif du projet tait de dterminer si leffet neurotoxique des PCBs est d une modification de lexpression de certains gnes, au cours du dveloppement embryonnaire et post-natal prcoce du systme nerveux central (SNC) des mammifres. Le niveau dexpression de ces gnes pourrait servir dindicateur biologique dexposition aux PCBs, permettant de mieux cerner le risque pour le dveloppement du SNC, du nouveau-n. Ce projet visait la mise point de mthodes permettant de mesurer l'effet des PCBs sur lexpression de gnes cibles dans un modle animal, et de disposer ainsi dun modle prdictif de la neurotoxicit de ces substances. Le rat en dveloppement a servi de modle exprimental. Les mres gestantes ont reu quotidiennement diverses doses de PCBs, jusqu' quelques jours aprs la naissance. Lanalyse a port sur plusieurs tissus et organes prlevs chez le nouveau n durant cette mme priode. A laide de mthodes de biologie molculaire adaptes la mise en vidence simultane de variations dexpression, entre deux tissus, de plusieurs gnes, nous avons pu identifier un certain nombre dentre eux dont lexpression est module par les PCBs. Ces variations entre tissus traits ou non ont t trouves dans divers tissus en dveloppement, dont le cerveau. Cependant, les pourcentages de variation observs ne permettent pas d'tudier l'effet dose-rponse des PCBs sur l'expression de ces gnes par des techniques molculaires de mesure grande chelle. Cette approche a conduit lisolement de deux gnes crbraux, encore inconnus chez le rat, dont lexpression nonatale est altre par les biphnyls polychlors. Lanalyse est actuellement tendue dautres gnes cibles des PCBs.

Mtabolisme chez le rat et chez lhomme dun xnoestrogne : le nonylphnol Jean-Pierre Cravedi et al., 1997
Certains contaminants dorigine industrielle prsentent des proprits hormonales. Il peut sagir de proprits estrogniques (semblables celles des hormones femelles) ou anti-androgniques (empchant laction dhormones mles). Ces substances, appeles xno-estrognes, sont susceptibles dagir sur le systme endocrinien des animaux et de l'Homme. Parmi elles, le nonylphnol est utilis dans l'industrie des matires plastiques et dans la fabrication de dtergents. Son utilisation frquente et sa stabilit ont pour consquence une contamination des cours d'eau et des risques de bioaccumulation dans la chane trophique. Il est prsent en grandes quantits dans les boues de stations d'puration. Au cours des 8 dernires annes, les proprits estrogniques du nonylphnol ont t dcrites in vitro et in vivo chez les poissons et les mammifres. Ces proprits chimiques et biologiques peuvent faire craindre que le nonylphnol prsente un risque pour la sant de lhomme en perturbant son quilibre hormonal. Parmi les questions poses au dmarrage de ltude, certaines concernaient le mode daction de ce type de substance et dautres avaient pour objet son devenir dans lorganisme. Cest essentiellement ce second volet que nous nous sommes intresss en cherchant apporter des lments de rponses ces diffrentes questions : q Dans quelle mesure le nonylphnol peut-il tre absorb lorsquil est ingr ? q Quels sont les tissus susceptibles dtre prioritairement contamins ? q Est-ce que les mammifres, dont lhomme, sont capables dliminer le nonylphnol ? q Cette limination est-elle rapide ? q Ncessite-t-elle une transformation pralable de la substance ? q Si une transformation avait lieu, pourrait-elle entraner la formation de composs encore plus actifs que le produit dorigine ?

52

53

Effet long terme d'une exposition maternelle au plomb sur le dveloppement psychomoteur ultrieur de l'enfant et de l'adolescent Guy Huel et al., 1996
Les effets nfastes du plomb, chez l'tre humain, sont connus depuis longtemps. L'importance de la dissmination de ce mtal dans l'environnement et les graves consquences sur la sant qui en dcoulent ont entran les instances sanitaires nationales et internationales vers une politique d'radication. Les enfants semblent particulirement sensibles aux effets du plomb. Les proprits toxiques du plomb, lors d'exposition aigus ou chroniques, sont bien connues notamment sur le systme hmatopotique, sur le systme nerveux central et sur la reproduction. Lors d'exposition doses "environnementales", c'est--dire a priori modres, les tudes pidmiologiques montrent de faon quasi unanime un effet sur le cours de la grossesse, le dveloppement staturo-pondral du ftus et psychomoteur de l'enfant. Si ces effets ne font plus de doute l'chelle pidmiologique, les mcanismes par lesquels le plomb induit l'effet nocif sur le systme nerveux central du foetus et du jeune enfant sont actuellement inconnus. Parmi les nombreuses hypothses plausibles l'une concerne l'intervention du plomb sur l'inhibition dune famille denzyme (ATPase) implique dans le transport au travers de la membrane cellulaire de certains ions (Na+K+ et Ca+). Ce travail confirme que leffet dune exposition au plomb sur le dveloppement psychomoteur ultrieur de lenfant pourrait tre expliqu en partie par linhibition partielle de ces transports ioniques membranaires. Ces tapes sont fondamentales dans la transmission du potentiel daction le long de laxone qui conduit linformation entre cellules neuronales. Lintervention dune autre enzyme (ALA-D) pourrait intervenir dans ce mcanisme complexe. Plusieurs tudes exprimentales ont suggr que certains troubles comportementaux pourraient tre attribus des altrations de certains paramtres des fonctions monoaminergiques (impliquant un type de neurotransmetteurs). Peu d'observations chez l'homme ont t ralises. Nous avons montr que leffet du plomb sur la sociabilit de lenfant tait partiellement expliqu par le systme srotoninergique. Du point de vue gnral, les rsultats de cette recherche ne montrent pas de lien significatif entre lexposition au plomb la naissance et les performances cognitives et motrices 1 ans. En premire analyse nous pouvons 7 interprter ce rsultat comme la preuve dune certaine rversibilit apparente des effets neurotoxiques de lexposition in utero au plomb. Cependant les performances mnsiques paraissent continues dtre affectes aprs ladolescence. Publications issues de ce projet
Tang

Nous avons utilis un systme de culture organotypique de testicule ftal de rat afin de rechercher les cibles cellulaires, molculaires et fonctionnelles de deux hormones de synthse : le diethylstilbestrol (DES) et lstradiol (E2). Au regard des diffrents comptages cellulaires et des dosages effectus, nous avons pu noter que les 3 types cellulaires testiculaires sont des cibles potentielles des xno-strognes et que les gonocytes sont les premires cellules atteintes et les plus altres. Puis nous avons coupl ce systme de culture un logiciel de strologie qui permet deffectuer le comptage acclr des cellules du testicule ftal. Plus rapide dutilisation, ce logiciel nous a permis de valider lensemble du test FEGA en tudiant les effets cellulaires et molculaires du Bisphnol A (perturbateur endocrinien qui entre dans la composition demballages plastiques) sur les diffrentes cellules du testicule ftal de rat. Ces travaux nous ont permis de btir un test robuste dtude des effets des hormones et xno-hormones sur la gonade ftale et dobtenir des rsultats originaux concernant le mode daction de certaines de ces substances. Publications issues de ce projet
Lassurguere J, Livera G, Habert R, Jegou B. Time- and dose-related effects of estradiol and diethylstilbestrol on the morphology and function of the fetal rat testis in culture. Toxicol Sci 2003;73(1):160-9.

Incidence d'une exposition in utero au bisphnol A sur l'organogense testiculaire Brigitte Le Magueresse-Battistoni et al., 2000
En dbut de vie foetale, la gonade est dite indiffrencie. Dans les gonades mles XY, la diffrenciation testiculaire dmarre vers la mi-gestation chez les rongeurs. Trs vite, la testostrone (hormone mle) sera synthtise, permettant la masculinisation du tractus urognital et des organes sexuels secondaires. Rcemment, il a t montr que certaines molcules prsentes dans l'environnement taient dotes de proprits oestrogniques (propre aux hormones sexuelles femelles) nfastes au dveloppement de la fonction de reproduction chez le mle. Dans ce travail, nous nous sommes intresss au bisphnol A. Ce compos est largement utilis dans l'industrie du plastique (ex ttines de biberon, canettes de boisson...) et en dentisterie. Or cette molcule mime les effets des estrognes. Nous avons donc tudi l'impact d'une exposition in utero au bisphnol A sur la diffrenciation testiculaire de la descendance mle. Le travail a t ralis chez la souris et la dose teste de bisphnol A est compatible avec une exposition environnementale. Les rsultats de cette tude confirment que le bisphnol A franchit la barrire foeto-placentaire. Pour autant, le droulement de la gestation n'est pas perturb. De mme, le testicule se diffrencie correctement et les cellules germinales, qui transmettent le patrimoine gntique du pre, ne sont pas touches dans leur capacit se multiplier ou se diffrencier. Ces conclusions contredisent les publications antrieures menes par Vom Saal et al (Toxicol Ind Health 1998). En revanche, nos rsultats sont en accord avec une publication rcente de la commission europenne (avril 2002, SCF/CS/PM/3936/ opinion of the Scientific Committee on Food on bisphenol A). Publications issues de ce projet
Guyot R, Magre S, Leduque P, Le Magueresse-Battistoni B. Differential expression of tissue inhibitor of metalloproteinases type 1 (TIMP-1) during mouse gonad development. Dev Dyn 2003;227(3):357-66. Guyot R, Odet F, Leduque P, Forest MG, Magueresse-Battistoni BL. Diethylstilbestrol inhibits the expression of the steroidogenic acute regulatory protein in mouse fetal testis. Mol Cell Endocrinol 2004;220(1-2):67-75. Odet F, Guyot R, Leduque P, Le Magueresse-Battistoni B. Evidence for similar expression of protein C inhibitor and the urokinasetype plasminogen activator system during mouse testis development. Endocrinology 2004;1 45(3):1 481-9.

HW, Huel G, Campagna D, Hellier G, Boissinot C, Blot P. Neurodevelopmental evaluation of 9-month-old infants exposed to low levels of lead in utero: involvement of monoamine neurotransmitters. J Appl Toxicol 1999;19(3):167-72. Campagna D, Huel G, Girard F, Sahuquillo J, Blot P. Environmental lead exposure and activity of delta-aminolevulinic acid dehydratase (ALA-D) in maternal and cord blood. Toxicology 1999;134(2-3):1 43-52. Campagna D, Huel G, Hellier G, Girard F, Sahuquillo J, Fagot-Campagna A, et al. Negative relationships between erythrocyte Ca-pump activity and lead levels in mothers and newborns. Life Sci 2000;68(2):203-15. Takser L, Dellatolas G, Bowler R, Laplante N, Huel G. Predictive factors of manual dexterity and cognitive performance at 1 years: a 10-year longitudinal study in a rural area of France. Percept Mot Skills 2002;95(1):15-26. 7 Huel G, Yazbeck C, Burnel D, Missy P, Kloppmann W. Environmental boron exposure and activity of delta-aminolevulinic acid dehydratase (ALA-D) in a newborn population. Toxicol Sci 2004;80(2):304-9.

Conception et dveloppement dun test original, le FEGA (Ftal Gonad Assay) permettant de rvler et danalyser les effets des perturbateurs endocriniens sur le dveloppement ftal testiculaire Bernard Jgou et al., 1998
De nombreux agents prsents dans notre environnement sont connus pour tre nocifs vis--vis de la fonction de reproduction mle et il est frappant de constater que la rsurgence du dbat sur la dtrioration sculaire de plusieurs paramtres de la reproduction masculine concide avec les proccupations croissantes de la population sur la dgradation de lenvironnement. Parmi tous les agents susceptibles daffecter la fonction de reproduction chez le mle, les xnobiotiques (substances trangres lorganisme) font lobjet dune attention particulire. Cest la raison pour laquelle nous avons voulu approfondir nos connaissances sur leffet des xnobiotiques, plus particulirement leffet des perturbateurs endocriniens qui miment des effets hormonaux, sur le dveloppement du testicule ftal.

Etude des potentiels oestrognomimtiques de molcules issues demballages plastiques et comparaison avec les potentiels oestrognomimtiques de flavonodes alimentaires chez le rat mle et femelle afin dvaluer les risques lis ces diffrentes molcules Jean-Claude Lhuguenot et al., 2000
Les contaminations de nos milieux de vie et de notre alimentation ne doivent pas tre considres de manire isole, mais dans leur ensemble. Le cas des phtalates et des bis-phnols prsents dans les emballages destins au contact alimentaire et connus pour migrer dans ces aliments en est un exemple clair. Ltude a t entreprise en vue daborder une valuation du risque de ces molcules sur une base commune en terme de toxicit, qui pourra tre complte par une analyse des niveaux dexposition relatifs chacune de ces contaminations. Ce projet a tabli les potentiels oestrognomimtique du butylbenzyl phtalate, du bisphnol A (molcules issues de lemballage) et de lapignine (flavonode appartenant galement la famille des polyphnols mais provenant de notre alimentation).

54

55

Il apparat que le potentiel oestrognomimtique des phytostrognes (famille laquelle appartient lapignine) est nettement plus lev que celui observ pour les molcules issues des emballages. Par ailleurs, les niveaux dexposition du consommateur aux phytoestrognes sont beaucoup plus importants. Enfin il a t dmontr que ces potentiels oestognomimtiques font appel des mcanismes diffrents selon les molcules considres. Ces rsultats indiquent sans ambigut que le risque li ces molcules relve dune approche diffrente sur le plan rglementaire en scurit alimentaire et pour lenvironnement gnral, mme si la nature du danger semble identique. Publications issues de ce projet
Picard K, Lhuguenot JC, Lavier-Canivenc MC, Chagnon MC. Estrogenic activity and metabolism of n-butyl benzyl phthalate in vitro: identification of the active molecule(s). Toxicol Appl Pharmacol 2001;1 72(2):108-18. Lassurguere J, Livera G, Habert R, Jegou B. Time- and dose-related effects of estradiol and diethylstilbestrol on the morphology and function of the fetal rat testis in culture. Toxicol Sci 2003;73(1):160-9. Stroheker T, Chagnon MC, Pinnert MF, Berges R, Canivenc-Lavier MC. Estrogenic effects of food wrap packaging xenoestrogens and flavonoids in female Wistar rats: a comparative study. Reprod Toxicol 2003;1 7(4):421-32. Stroheker T, Cabaton N, Berges R, Lamothe V, Lhuguenot JC, Chagnon MC. Influence of dietary soy isoflavones on the accessory sex organs of the Wistar rat. Food Chem Toxicol 2003;41(8):1 75-83. 1 Stroheker T, Picard K, Lhuguenot JC, Canivenc-Lavier MC, Chagnon MC. Steroid activities comparison of natural and food wrap compounds in human breast cancer cell lines. Food Chem Toxicol 2004;42(6):887-97.

moment du recueil de l'ovocyte. Ces cellules ont t mises en culture au laboratoire en prsence et en absence de plomb. En parallle, sur des souris leves au laboratoire, nous avons tudi les effets du plomb administr par voie intrapritonale sur la folliculogense ovarienne. Les expriences ralises sur les souris ont montr que le plomb saccumule prfrentiellement dans les os, mais on observe aussi une augmentation de la concentration en plomb dans les ovaires de souris intoxiques. Les expriences ralises in vitro sur les cellules humaines montrent que le plomb peut pntrer dans les cellules ovariennes et modifier lexpression et les fonctions de protines membranaires et cytoplasmiques. Ces modifications peuvent tre lorigine dune augmentation de latrsie folliculaire, processus qui entrane la disparition des follicules ovariens avant leur stade de maturation terminale conduisant la libration dun ovocyte fcondable. Des pertubations de ce type peuvent induire une hypofertilit et des troubles des fonctions de la reproduction analogues ceux prcdemment dcrits dans la littrature chez des femmes exposes au plomb, soit de faon aigu soit de faon chronique (expositions de faibles doses mais de faon rpte). Lensemble de ces rsultats indique, comme cela avait t prcdemment montr chez le mle, que le plomb pourrait affecter la production hormonale et les effets mdis par les hormones. On peut donc le considrer comme un perturbateur endocrinien de lenvironnement. Publications issues de ce projet
Machelon V. Toxicit du plomb et fonctions ovariennes. Reproduction Humaine et Hormones 2000;XIII:552-557. Taupeau C, Poupon J, Nome F, Lefevre B. Lead accumulation in the mouse ovary after treatment-induced follicular atresia. Reprod Toxicol 2001;15(4):385-91. Taupeau C, Poupon J, Treton D, Brosse A, Richard Y, Machelon V. Lead reduces messenger RNA and protein levels of cytochrome p450 aromatase and estrogen receptor beta in human ovarian granulosa cells. Biol Reprod 2003;68(6):1982-8.

Micropolluants des eaux effet modulateur endocrinien : impact sur la formation osseuse et langiognse au cours du dveloppement Michle Lieberherr et al., 2000
Le projet tant actuellement en cours de finalisation, le rsum des travaux raliss dans le cadre de ce projet nest pas disponible. Les premiers rsultats sont nanmoins mentions dans la mise en perspective du thme Reproduction, dveloppement & environnement.

Taupeau C, Gaudin-Nome F, Lieberherr M, Machelon V. Lead (Pb2+) increases vascular endothelial growth factor -VEGF) production in human poste-LH ovarian granulosa cells and potentializes the estradiol effect on VEGF in the MCF-7 breast cancer cell line. Environ Toxicol Pharmacol 2004;(sous presse) .

Exposition aux thers de glycol et fertilit masculine Luc Multigner et al., 1997
Les thers de glycols sont des solvants oxygns prsents dans de nombreuses prparations usage professionnel ou domestique : peintures, encres, vernis, produits dentretien et de nettoyage, cosmtiques et mmes dans certaines prparations pharmaceutiques. Il existe prs dune trentaine dthers de glycols diffrents rpartis entre des drivs de lthylne glycol et des drivs du propylne glycol. De nombreuses tudes exprimentales chez lanimal ont montr que certains thers de glycol drivs de lthylne glycol tels que le mthyl glycol (EGME) ou lthyl glycol (EGEE) sont des toxiques de la reproduction chez le mle. Nous avons ralis une tude pidmiologique destine tudier les consquences ventuelles que pourraient entraner les expositions professionnelles aux thers de glycol sur la fertilit masculine. Cette tude a t ralise parmi des agents de la Ville de Paris et sest accompagne dune valuation des niveaux actuels dexposition aux thers de glycol. Les expositions aux thers de glycol sur la priode 1990 2000 ont t values par questionnaire et par lexamen dtaill de la composition de quelques 700 produits chimiques. Les dosages des mtabolites urinaires, mesurant les expositions rcentes, ont t raliss en fin de poste de travail hebdomadaire. La fertilit, capacit biologique se reproduire, a t value par lexamen des caractristiques du sperme et par la mesure de certaines hormones indispensables la reproduction. Les relations entre fertilit et expositions aux thers de glycol ont t tudies en fonction des expositions actuelles (mesures par les mtabolites urinaires) ou des expositions passes (priode 1990-2000) en tenant compte des produits employs et de la frquence et du nombre dannes dutilisation. Les rsultats obtenus montrent que les mtabolites de lEGME, de lEGEE et de lEGBE sont des concentrations 100 1000 fois infrieures celles observes en France au dbut des annes 1990 chez des salaris professionnellement exposs aux thers de glycol. Aucune association significative na t mise en vidence entre les niveaux actuels dexpositions aux thers de glycol et les caractristiques du sperme ou les niveaux dhormones. Cependant, les hommes qui ont t dans le pass en contact rgulier des produits contenant des thers de glycol, possdent certaines caractristiques du sperme de moins bonne qualit que les hommes nayant pas t en contact avec ces produits. Il sagit du nombre de spermatozodes et du pourcentage de formes normales de spermatozodes qui sont diminus alors que dautres paramtres tels que la mobilit ou la vitalit des spermatozodes restent inchangs. Concernant les hormones, et lexception dune lgre augmentation de lune dentre elle mais dans les limites de la normalit (FSH), aucune diffrence na t observe entre les hommes exposs et les non exposs.

Toxicit du plomb et fonction ovarienne Vronique Machelon et al., 1997

Le plomb est un mtal lourd dont la prsence des taux levs dans l'environnement reprsente une menace pour la sant publique. Les risques d'intoxication aigu ou chronique par ingestion ou par inhalation sont multiples : risques professionnels, risques lis l'environnement (pollution par les dchets industriels, accumulation dans les vgtaux et la viande animale), risques lis la vtust des habitations (tuyauteries, peintures au plomb). Le plomb ingr ou inhal passe dans la circulation sanguine, il peut tre fix et accumul (os et dents principalement), mais aussi tre libr et chang d'autres tissus. Le remodelage osseux, par exemple, induit une libration non contrlable de plomb dans lorganisme ce qui rend plus difficile l'apprciation des risques, en particulier des effets retards. Dans les expositions des niveaux levs, les principaux organes touchs sont le systme sanguin, le systme nerveux et le systme rnal, mais d'autres effets peuvent aussi se manifester au cours d'expositions long terme et bas niveaux. Les effets toxiques du plomb sur la reproduction et le dveloppement sont connus depuis plusieurs dizaines dannes. La plupart des travaux ont port sur le systme reproducteur mle en raison probablement des risques professionnels plus levs chez les hommes. Cependant, les risques de saturnisme concernent aussi les femmes dont les consquences peuvent se traduire par une diminution de la fertilit. Le projet conduit ici visait prciser les cibles sur lappareil reproducteur de la femme de lactivit toxique du plomb et plus particulirement sa toxicit directe sur les cellules ovariennes. Le follicule ovarien a une double fonction, gamtogne en assurant la maturation complte puis l'mission de l'ovocyte, et endocrinienne en synthtisant les hormones strodes essentielles la fonction de reproduction. Pour valuer les risques lis des contaminations par le plomb, nous avons cherch mettre en vidence les effets du plomb sur cinq protines impliques dans la maturation du follicule ovarien. Pour ce travail nous avons utilis des cellules ovariennes humaines prleves chez des femmes traites en vue d'une fcondation in vitro (FIV) au

56

57

Il est noter que les valeurs moyennes des caractristiques du sperme et des hormones, y compris chez ceux qui ont t exposs par le pass des produits contenant des thers de glycol, se situent dans les limites de la normalit. Les rsultats tmoignent, trs vraisemblablement, deffets rsiduels dexpositions une priode o les thers de glycol toxiques pour la reproduction taient frquemment prsents dans des produits chimiques. Il est admis que, sauf pour des fortes expositions, les effets testiculaires des thers de glycol sont rversibles dans le temps condition que lexposition cesse. Bien que lestimation rtrospective des expositions des produits contenant des thers de glycol ne permette pas de prendre en compte le rle ventuel des autres solvants qui les accompagnent (et dont leur toxicit est souvent mal ou pas connue), lensemble des rsultats observs est cohrent avec ce qui est connu de la toxicit exprimentale des thers de glycol toxiques pour la reproduction. Dans le cadre de ce projet, une amlioration substantielle de la sensibilit des dosages urinaires des mtabolites des thers de glycol a t obtenue. Cette mthodologie peut dornavant tre employe dans le cadre de la surveillance des expositions en milieu professionnel. Publications issues de ce projet
Ben-Brik E, Jerome L, Arnaud I, Yous S, Labat L, Haguenoer JM, et al. Exposure to glycol ethers in a population of French men evaluated by measurement of urinary alkoxycarboxylic acids. Int Arch Occup Environ Health 2004;77(5):368-72.

reproduction. Cependant, ces relations sont bien plus complexes tant donne linfluence majeure des ressources nutritionnelles sur la fonction de reproduction. Publications issues de ce projet
Bazire A, Schorvaert D, Jouannet P, Multigner L, Auger J. Caractristiques de morphologie et de mouvements de spermatozodes de Rattus rattus provenant de trois cosystmes guadeloupens : impact probable des pollutions environnementales. Andrologie 2000;12:383-384.

Interaction des xnobiotiques avec la protine de liaison des strodes sexuels (SBP/SHBG) Consquences sur leur biodisponibilit in vivo Michel Pugeat et al., 1997
Lhypothse selon laquelle la contamination de notre environnement par des produits toxiques peut gravement nuire notre sant a t vrifie loccasion daccidents dramatiques de pollution. La question dune contamination permanente de notre environnement qui dpasserait nos capacits dadaptation a fait lobjet de nombreuses hypothses non vrifies. La mise en place de moyens innovants permettant la dtection de contaminants et ltude de leur devenir dans lorganisme (accumulation dans les diffrents tissus, processus dlimination,) constitue un pralable indispensable lvaluation des risques sanitaires lis ces substances. Ce projet sest intress au bisphnol A, composant majeur du plastique trs largement utilis dans les emballages (eau et aliments). Ce produit tranger dont les effets miment ceux des hormones fminines (xnoestrogne), pourrait tre un drgulateur du systme endocrinien. Comme les estrognes naturels, aprs ingestion, il est transport dans le sang par une protine de transport des hormones strodes sexuelles ou SHBG (sex hormone-binding glubulin), qui va limiter sa diffusion dans les organes nobles et faciliter son mtabolisme avant dtre limin. Ce systme nexiste pas chez les rongeurs habituellement utiliss comme animaux de laboratoire dans les tests toxicologiques. Nous avons donc utilis le modle dune souris, qui reoit de la SHBG humaine purifie pour tudier spcifiquement linteraction de cette protine avec le bisphnol A et son rle dans le devenir de la molcule dans lorganisme. Nous avons pu montrer en utilisant du bisphnol A marqu par un traceur diode radioactive que cette protine de transport limitait la diffusion du bisphnol A dans le foie et les testicules, comme elle le fait pour les hormones strodes endognes. Dans le cadre de cette tude, nous avons dvelopp un ractif (ici un anticorps) pour le dosage du bisphnol A dans le srum de sujets normaux et de patients prsentant une anomalie du dveloppement ou des troubles de la reproduction. Ces rsultats contribuent lvaluation des risques pour la sant humaine des contaminations lies notre environnement et contribuent la prise de dcision en terme de mesures de scurit qui simposent pour la protection de la sant humaine. Publications scientifiques issues de ce projet
Dechaud H, Ravard C, Claustrat F, de la Perriere AB, Pugeat M. Xenoestrogen interaction with human sex hormone-binding globulin (hSHBG). Steroids 1999;64(5):328-34.b Bendridi N, LeJeune H, Pugeat M. La fcondit masculine serait-elle menace par l'environnement ? Rle potentiel des xnoestrognes. Rev Fran Endocrin Clin 1999;XL. Bendridi N, Mappus E, Cuilleron C, Grenot C, Pugeat M. Interaction du bisphenol A avec la sex hormone-binding globulin (SHBG) : consquences sur sa biodisponibilit in vivo. Ann Endocrin 2000;4:362. Bendridi N, LeJeune H, Pugeat M. Xnobiotiques et altration de la fonction de reproduction chez l'homme. MtabolimesHormones-Nutrition 2001;V(6):281-285. Bendridi N, Mappus E, Grenot C, Lejeune H, Yves Cuilleron C, Pugeat M. Intravenous injection of human sex steroid hormonebinding globulin in mouse decreases blood clearance rate and testicular accumulation of orally administered [2125I]iodobisphenol A. Steroids 2002;67(7):637-45

Impact des pollutions environnementales sur la reproduction de la faune sauvage Luc Multigner et al., 1999
De nombreuses observations suggrent que des facteurs environnementaux de nature chimique et gnrs par lactivit humaine ont un effet dltre sur la fonction de reproduction. Au cours des dernires dcennies, diverses modifications sculaires de la fonction de reproduction, en particulier chez le mle, ont t rapportes : atteinte de la spermatogense ou anomalies du dveloppement de lappareil gnital chez des vertbrs mles (reptiles, poissons, oiseaux, mammifres). Plusieurs hypothses pour expliquer ces phnomnes ont t voques. Lune dentre elles est que des substances chimiques gnres par lactivit humaine et rpandues dans lenvironnement pourraient se comporter comme des perturbateurs endocriniens en mimant ou en inhibant les effets de certaines hormones. Dans certaines circonstances il est possible de raliser des tudes contrles auprs de populations animales domestiques ou sauvages. Les informations ainsi obtenues peuvent apporter de la cohrence aux tudes exprimentales et mieux orienter les tudes venir. Le projet ORCHIDEE a t mis en place pour valuer limpact des pollutions environnementales sur la fonction de reproduction des mammifres sauvages. Cette tude sest droule en Guadeloupe profitant des caractristiques environnementales tout fait particulires de ce dpartement. La Guadeloupe se caractrise par une utilisation intense de pesticides lie aux activits agricoles (culture de la banane, canne sucre) entranant une pollution des milieux naturels. Par ailleurs des cosystmes vierges de toute pollution directe dorigine humaine coexistent avec des zones agricoles pollues. Lobjectif du projet tait dtudier et de comparer, chez des mammifres infods des biotopes pollus et chez des mammifres infods des biotopes dpourvus de toute pollution directe, la fonction de reproduction.
.

En collaboration avec lOffice National de la Chasse et le Parc National de la Guadeloupe, 210 mammifres (Rat noir, Rat surmulot, Souris domestique et Mangouste) ont t capturs dans 4 cosystmes : 2 agro systmes consacrs la culture bananire et la canne sucre et 2 cosystmes naturels caractriss par une fort tropicale humide en altitude et une fort sche ctire sur let. Le nombre danimaux capturs nous a oblig restreindre les analyses et seul les rats noirs mles capturs sur trois sites (culture bananire, fort tropicale humide et fort sche ctire) ont t tudis. Les animaux issus de la fort tropicale humide prsentent des caractristiques particulires. Tout en ayant un ge relatif similaire aux animaux capturs dans lagrosystme bananier ou dans la fort sche ctire, ils prsentaient un poids corporel et des caractristiques reproductives danimaux sub-adultes nayant pas atteint leur maturit sexuelle. Ceci semble sexpliquer par les faibles ressources alimentaires de la fort tropicale humide. Dans ces conditions, les animaux issus de la fort tropicale humide ne constituent pas un bon groupe tmoin lorsquon veut les comparer un groupe danimaux issus dun cosystme pollu. Les animaux capturs dans les bananeraies prsentent des poids relatifs (poids rapport au poids de lanimal), des organes gnitaux et des niveaux de testostrone plus faibles que ceux des animaux de mme ge issus de la fort sche ctire sur lot. Ces rsultats suggrent une influence dltre des facteurs environnementaux (par exemple pollution par les pesticides employs en bananeraies) sur la fonction de

58

59