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SEHNINE Mohammed

Universit de Franois Rabelais de Tours

Rsum de stage Master 1 biologie de reproduction (4 mars-20 mai 2011) (UNCEIA Maisons-Alfort Paris, Service de fcondation in vitro)

Le srotype 8 (BTV-8) du virus de la fivre catarrhale ovine (FCO) a caus une pidmie dans les levages de ruminants dans lEurope centrale et du Nord en aot 2006 et surtout en France partir de lt 2007 semble diffrent des autres srotypes de la FCO par sa possibilit de se propager par voie transplacentaire, associe une incidence accrue des avortements, lis gnralement une mortalit embryonnaire prcoce, et dautres problmes de reproduction. Lobjectif de la prsente tude tait dvaluer de lefficacit du protocole de lavage prconis par lIETS, appliqu aux embryons produits in vitro et in vivo, pour matriser le risque de contamination par le BTV-8 lors du transfert embryonnaire ltat frais ou congels, largement utilis dans la filire de la slection bovine. Dans ce cadre, nous avons utilis, dune part, par une approche in vitro in vitro en contaminant exprimentalement des ovocytes immatures rcuprs partir dovaires dabattoir par le BTV-8, pendant 1 heure (10 TCID50/mL), avant maturation, fcondation puis culture in vitro pendant 7 jours jusquau stade blastocyste, et dautre part par une approche in vivo in vitro en contaminant avec la mme concentration virale pendant 1 heure, des embryons collects 7 jours aprs insmination, chez deux vaches donneuses (FCO ngatif), ayant subi un traitement hormonal de Superovulation base de FSH, suivi dune insmination artificielle par la semence dun taureau agr pour la monte publique (FCO ngatif). Les blastocystes de 7 jours, contamins exprimentalement, (produits in vitro et collects in vivo) ont t soumis aux lavages sanitaires recommands par lIETS : 10 lavages raliss par groupe de 10 embryons maximum dans 10 bains successifs de tampon phosphate (PBS) en respectant une dilution 1 :100 pour chaque bain. Une proportion des embryons produits in vitro subit dun traitement la Trypsine pendant 60 a 90 secondes aprs le 5ime bain, suivi de 5 bains de rinages contenant de PBS et 2 % de srum de veau ftal (SVF). La recherche dARN viral a t ralise par RT-qPCR spcifique. Dans cette tude, une diminution de taux de dveloppement embryonnaire aprs contamination des ovocytes immatures qui pourrait tre lie la prsence de virus dans tous les milieux de culture et les cellules du cumulus. Le virus na pas t mis en vidence dans les derniers bains des rinages sanitaires tmoins de lefficacit des dilutions en srie. Par contre il a t systmatiquement dtect sur les embryons aprs les 10 lavages sanitaires de mme quaprs traitement par la Trypsine. Ceci suggre que les particules virales restent adsorbes sur la zone pellucide des embryons et ne peuvent tre limines y compris par traitement la Trypsine.

SEHNINE Mohammed

La dtection de gnome viral par RT-qPCR (Service de biologie molculaire LNCR), Les chantillons
trouvs positifs laide du Kit TaqVet BTV8 gnotyps pour le srotype 8 et qui contient les primers et les sondes fluorescentes dans un thermocycleur (Abi-Prism 7500 fast Time PCRSystem) coupl un spectrofluorimtre.

Ct inferieur ou gal 34 Ct suprieur ou gal 34

Positifs Ngatifs

SEHNINE Mohammed

LISTES DABREVIATIONS

FIV : Fcondation in vitro FCO : Fivre catarrhale ovine BTV-8 : srotype 8 de la Fivre catarrhale ovine LF : Liquide folliculaire Ov : Ovocyte Mc : milieu de contamination Coll : milieu de collecte dovocyte Matu : milieu de maturation avant la maturation (rinage) Miv : milieu de maturation aprs 22 heures TALP : milieu de Fcondation CC : cellules de cumulus Zy : zygote aprs la Fiv Fiv : milieu de fcondation aprs 18 heures L 1, 2, 3 : Lavage1, 2 , 3 EMB : embryon lav sans traitement de Trypsine L8T : lavage aprs trypsine EMBT : embryons lav aprs traitement de trypsine

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