Vous êtes sur la page 1sur 32

UNIVERSITE DE TUNIS

INSTITUT SUPERIEUR DE LEDUCATION ET DE LA FORMATION CONTINUE

DEPARTEMENT DES SCIENCES NATURELLES

Bioremdiation / Phytoremdiation

SN 232

Professeur : Chedly ABDELLY

Anne Universitaire 2006/07

LA BIOREMEDIATION

1. Introduction gnrale Avec lacclration du dveloppement conomique, lhomme est de plus en plus responsable de la pollution de lenvironnement. La diversit des produits dorigine industrielle conduit une augmentation considrable du nombre de substances totalement trangres au monde vivant, dites xnobiotiques. Certains de ces polluants ont contamin les sols et proviennent des dcharges, des installations industrielles, comme consquence daccidents de transport ou encore par le biais des rejets urbains et industriels ou en raison de pratiques agricoles. Les microorganismes telluriques liminent plus ou moins rapidement les polluants organiques biodgradables, mais les mtaux lourds (cadmium, cuivre, mercure, plomb et zinc) et les mtalloides (slnium et arsenic) persistent dans lenvironnement et saccumulent invitablement. Ils peuvent migrer vers les eaux de surface ou souterraines ou pntrer la chane alimentaire via les vgtaux pour se retrouver dans les animaux et ventuellement dans lhomme. Confiner les sites pollus laide de barrires physiques nlimine pas les substances toxiques et ncessite une surveillance, et un entretien permanant de ces barrires. Lorsque le risque pour les cosystmes et lhomme est trs lev, la dpollution simpose. Il existe certes des mthodes physico-chimiques permettant la dcomposition des polluants. Les plus utilises sont lincinration et les mthodes de dcomposition chimique. Elles sont trs efficaces pour certains types de contaminants prsents dans le milieu mais prsentent des inconvnients. Les interventions sont lourdes et onreuses et laissent en gnral un sol strile. Par exemple, le traitement chimique par lavage limine aussi les microorganismes telluriques et lhumus. La bioremdiation, c'est--dire lemploi de procds biologiques pour liminer les polluants industriels qui contaminent le cycle biogochimique des substances naturelles, est une option avantageuse pour diminuer la pression exerce sur lenvironnement. La bioremdiation consiste utiliser des systmes biologiques pour rduire le niveau de pollution prsents dans lair, leau ou le sol. Ce sont des microorganismes ou des plantes qui sont normalement utiliss comme systmes biologiques. Le plus souvent on choisit de mener les oprations de bioremdiation en laissant faire les biodgradations des microorganismes. Pour assurer leur croissance et/ou leurs besoins en nergie, les microorganismes peuvent utiliser, en les dgradant la plupart des substances chimiques. Ces processus de dgradation biologique peuvent exiger la prsence de lair, ou non. Dans certains cas, les voies mtaboliques que les organismes utilisent pour saccrotre ou pour obtenir de lnergie

peuvent aussi tre utilises des molcules de substances polluantes. Dans ce cas nomme comtabolisme, le microorganisme ne retire aucun bnfice direct. Les chercheurs tirent avantage de ce phnomne pour lappliquer dans le domaine de la bioremdiation. Complte, une biodgradation parvient dtoxiquer des polluants jusquau au stade du dioxyde de carbone, de leau et des sels minraux inoffensifs. Une biodgradation incomplte peut fournir des produits de dgradation moins toxiques que le polluant initial, mais pas forcment. Par exemple, la biodgradation du trichloro- ou du ttrachloro thylne peut librer du chlorure de vinyle qui est plus toxique et plus cancrogne que les composs initiaux. Le phnomne de biodgradation peut apparatre spontanment ; on utilise alors les termes de bioremdiation intrinsque ou dattnuation naturelle. Cependant, trs souvent, les conditions naturelles ne sont pas suffisamment favorables, par manque dlments nutritifs, doxygne ou de bactries appropries. On peut amliorer ce genre de situations en compltant lun ou lautre des facteurs ncessaires ou mme plusieurs. Par exemple, en 1989 lors de la mare noire due au ptrolier gant Exon Valdez, on a dispers des lments nutritifs ncessaires pour acclrer la dgradation des hydrocarbures qui avaient t rpandues sur 1000 miles le long de la cte dAlaska. Dans le domaine de la bioremdiation, on aura de plus en plus tendance observer la vitesse de la biodgradation naturelle et intervenir seulement si lactivit naturelle ne suffit pas pour liminer assez rapidement le polluant. Les mthodes biologiques faisant appel aux microorganismes dpolluants ont prouv leur efficacit pour les polluants organiques : dpollution biologique de lair, des eaux uses, des milieux mains et des sites pollus par les hydrocarbures polycycliques, les composs chlors ou les explosifs. Connue sous le nom de la phytoremdiation, lutilisation des plantes pour lextraction des produits toxiques partir du sol (plus particulirement les mtaux lourds) est passe depuis une dizaine dannes de la phase conceptuelle la phase commerciale. Des recherches ont montr que certaines plantes peuvent accumuler des mtaux lourds dans leurs parties ariennes avec des teneurs de 1,5% de la matire sche. Elles galement absorber et dgrader les produits ptroliers et les composs chlors. Les faibles cots associs la technologie de phytoremdiation, ainsi que la possibilit de recyclage de certains mtaux expliquent lintrt grandissant pour son dveloppement.

2. Les origines de la pollution Lorigine des principales substances qui contaminent latmosphre est trs varie. Lutilisation des combustibles fossiles comme source dnergie constitue sans doute une

cause primordiale de la pollution de lair. Il existe, cependant, dautres sources de contamination de la biosphre : rejet des sous produits gazeux de lindustrie chimique, de poussires de certaines installations mtallurgiques et les cimenteries industrielles. Les fermentations de matire organiques peuvent galement dgager des gaz riches en hydrogne sulfur et autres composs soufrs. La pollution atmosphrique peut rsulter soit dune augmentation de la concentration dans lair de certains de ses constituants comme par exemple le gaz carbonique ou lozone (O3), soit de lintroduction de composs trangers ce milieu (radiolments, mtaux lourds et composs organiques volatils), soit dune conjugaison de ces deux phnomnes. Les grands indicateurs de la pollution urbaine sont le dioxyde de soufre (SO2), le moxyde de carbone (CO), les oxydes dazote (NOx), lozone et les particules en suspension. Plusieurs travaux ont montr que ces substances prsentent un risque potentiel pour la sant humaine. Les composs organiques volatils sont souvent des agents toxiques dont certains sont cancrignes. Les hydrocarbures aromatiques monocycliques, les hydrocarbures aromatiques polycycliques et les aldhydes sont des composs organiques volatils qui ont des consquences nfastes sur la sant. Ils peuvent engendrer des leucmies (benzne), le cancer du poumon (hdroycarbures aromatiques polycycliques) ou lirritation des yeux et des muqueuses respiratoires (aldhydes). La pollution des sols affecte les campagnes. Elle est avant tout une consquence de lexpansion de certaines techniques agricoles modernes. Lagriculture contemporaine doit produire des quantits croissantes daliments alors que la surface de la terre cultivable disponible par habitant diminue sans cesse, cause de laccroissement dmographique, de lextension ininterrompue des villes, de lindustrialisation et dautres usages non agricoles du sol. Elle y parvient par une intensification des pratiques culturales qui conduit perturber de plus en plus le flux dnergie et le cycle de la matire dans les agro cosystmes. Les engrais chimiques sont ajouts dans le sol afin daccrotre les rendements des cultures. Le principe de leur usage est fond sur la constatation que lon emporte avec la rcolte une certaine quantit dlments nutritifs : azote, phosphore, potassium et dans une certaine mesure, soufre, calcium, magnsium et oligolments. Il faut donc restituer au sol ces substances sous forme de phosphates, nitrates, sels de potassium etc. Le nitrate dammonium, le nitrate de calcium, le sulfate dammonium, lure, les phosphates et le chlorure de potassium sont les engrais chimiques les plus utiliss. Leur consommation mondiale a t multiplie par 18 entre 1946 et 1989, annes o elle a atteint 145,7 x 106tonnes.

Les plantes utilisent le nitrate (NO3-) comme principale source dazote. Elles le prlvent dans le sol par lintermdiaire de leurs racines et lassimilent de faon former lazote organique, indispensable la synthse de toute protine. Lassimilation du nitrate par les plantes est lune des principales voies dentre de lazote dans le monde vivant. Limportance considrable de cet anion pour la croissance des plantes en fait un lment incontournable de la fertilisation des sols cultivs. Il est, par consquent, largement utilis sous forme de sels pour la quasitotalit des plantes dintrt conomique. Ainsi, ce sont chaque anne, entre 75 et 80 millions de tonnes dengrais azots qui sont rpandues dans les cultures dans le monde et qui se retrouvent en partie dans les vgtaux. Une absorption excessive de nitrate ou de ses produits drivs (nitrites et nitroamines) peut avoir des effets nfastes sur la sant et la prudence veut quon en limite le taux dans les aliments. De plus, trs facilement entrans par les eaux de pluie, les nitrates saccumulent dans les nappes phratiques. Leur prsence en quantit importante dans les eaux provoque un dveloppement anarchique de microorganismes, dalgues et de plantes qui perturbent les quilibres naturels (eutrophisation). Lutilissation massive dengrais azots saccompagne galement dun rejet important de monoxyde dazote (NO) dans latmosphre, lequel contribue la destruction de couche dozone et laggravation de leffet de serre. Pour des raisons conomiques les phosphates ne sont pas purifis. Ils renferment ainsi, ltat de traces, de nombreux mtaux et mtallodes toxiques. A cet apport de mtaux lourds par la fumure, il faut ajouter ceux qui rsultent des pulvrisations des pesticides (sels de cuivre, arsniates de plomb) et des retombes atmosphriques (plomb, cadmium, molybdne etc..) Chaque anne, plus de 4 millions de tonnes de ptrole sont rpandus accidentellement dans les ocans et sur les ctes. A ces hydrocarbures sajoutent de nombreux autres polluants dorigine urbaine, agricole et industrielle vhiculs par les rivires ou manant de retombes atmosphriques : polychlorobiphnyles, hydrocarbures aromatiques polycycliques, herbicides et insecticides, nitrates et phosphates, mtaux lourds (cadmium, mercure, plomb, nickel) radionuclides (strontium et uranium).

2. Bioremdiation par les microorganismes 2.1. Introduction La ncessit de dpolluer les sites contamins a conduit au dveloppement de nouvelles technologies de lenvironnement qui ont pour objectif de dtruire les composs xnobiotiques plutt que de les accumuler dans les dcharges. La bioremdiation est une option qui offre la possibilit de dtruire ou de rendre moins toxiques les polluant, en utilisant des activits biologiques naturelles. Les microorganismes sont utiliss depuis environ un sicle pour le traitement des eaux uses et des composts. Ce qui est nouveau cest lutilisation de ce procd microbiologique pour nettoyer les sols, les eaux souterraines, les estuaires etc. Les systmes sont diffrents en raison de la nature du polluant et du milieu o se droule la dgradation. Les sites sont frquemment contamins par un mlange de composs organiques trs complexes comme par exemples les huiles minrales ou les solvants industriels. A cela sajoutent des polluants inorganiques comme les mtaux lourds.

2.2. Principe de la bioremdiation Le procd de la bioremdiation consiste activer la capacit naturelle que possdent de nombreux organismes, la plupart des temps microscopiques (bactries, microalgues, champignons), dgrader les polluants en composs inertes, comme leau et le gaz carbonique. Ces organismes peuvent tre indignes (dj prsents dans la zone pollue), ou exognes (ajouts au milieu), ou encore tre prlevs sur le site contamin, cultives au laboratoire puis rintroduits dans le sol (bioaugmentation). La bioremdiation se droule gnralement en condition darobie, cependant lapplication de systmes de bioremdiation en condition danrobie permet la dgradation dun certain nombre de molcules rcalcitrantes. Les principales technologies utilises dans la bioremdiation sont les suivantes :

La bioaugmentation : Cette technologie consiste introduire des cultures de microrganismes la surface du milieu contamin dans lobjectif daugmenter la biodgradation des contaminants organiques. Gnralement les microorganismes sont slectionns sur la base de leur aptitude dgrader les composs organiques prsents dans le site dpolluer. La culture peut comprendre une ou plusieurs espces de microorganimes. Des lments nutritifs sont gnralement apports dans la solution contenant les microorganismes. Cette suspension de microorganisme est apport la surface du sol dans les conditions naturelles ou injecte dans le site contamin sous pression.

Cette technologie est largement utilise pour dcontaminer les sites contenant des hydrocarbures : Les microrganismes choisis sont des bactries dotes dune grande capacit de digestion de ces hydrocarbures.

La biofiltration consiste lutilisation dun biolfiltre pour traiter les missions gazeuses : Le principe consiste utiliser des microorganismes pour dgrader les polluants contenus dans lair traiter : la phase aqueuse (lair contamin) est mise en contact avec une phase aqueuse dans laquelle se dveloppe la population microbienne, connue aussi sous le nom de la biomasse. Dans une unit de biofiltration, lair purer ( dpolluer) traverse dabord un filtre et un humidificateur afin de supprimer les particules (poussires, graisses) prsentes dans le gaz et damener le niveau dhumidit 100%. Lair est ensuite introduit dans un racteur (une cuve) contenant un garnissage form de matriaux trs poreux (trs avide pour lhumidit). A la surface des particules qui constituent le garnissage se trouve un biofilm qui correspond une pellicule deau contenant des microorganismes (bactries et champignons) dont la fonction est de dgrader les polluants prsents dans lair traiter. Cette technologie est par exemple utilis pour traiter lair polluer par le xylne ou par des composs azots

La biostimulation Cette technologie consiste stimuler lactivit des populations microbiennes indignes (prsentes dans le sol ou dans les eaux souterraines) par apport de nutriments et par ajustement des conditions du milieu (potentiel doxydo-rduction, humidit).

Le compostage peut tre dfini comme un procd biologique contrl qui assure la transformation et la valorisation des matires organiques (sous produits de la biomasse, dchets organiques dorigine biologique) en un produit stabilis, hyginique, semblable un terreau riche en composs humiques le compost. Cest la fermentation des ordures mnagres organiques (rsidus alimentaires) et des dchets verts (feuillages, rsidus de jardinage) afin de produire un compost rutilisable en agriculture ou dans le jardin pour fertiliser la terre. Laration et lhumidit sont deux lments indispensables pour entretenir les conditions dune bonne fermentation. Le compostage peut se faire chez soi ou collectivement par des procds industriels.

La biolixiviation. Cest la lixiviation favorise par la voie biologique (gnralement bactrienne). Elle correspond une mthodologie de solubilisation des mtaux lourds grce des bactries acidophiles fonctionnant en prsence ou en labsence doxygne. Deux facteurs sont importants pour la biolixiviation : la temprature qui doit tre comprise entre 25 et 35 C. La taille des particules qui doivent tre trs proches de celle des bactries.

2.3. Les microorganismes utiliss en bioremdiation Ils proviennent de milieux trs varis et peuvent vivre dans des conditions extrmes : des tempratures en dessous de 0C ou au contraire, trs leves, dans des milieux inonds ou en plein dsert, en prsence dun excs doxygne ou milieu anarobie. En raison de leur pouvoir dadaptation, ces microoganismes sont utiliss pour liminer les composs xnobiotiques. Parmi les bactries arobies reconnues pour leur pouvoir de dgradation, nous pouvons citer celles appartenant aux genres Pseudomonas, Alcaligenes, Sphingomonas et Mycobacterium. Elles peuvent dgrader les pesticides, les hydrocarbures, les alcanes et les composs polyaromatiques. Souvent, elles utilisent le polluant comme source de carbone et dnergie. Les bactries anarobies sont moins frquentes que les arobies. Cependant, elles prsentent un grand intrt dans la bioremdiation des polyphnyls polychlors, du trichlorothylne et le 1,2 dichlorothane. Dans tous les cas, lopration implique le contrle non seulement de la disponibilit des dpollueurs mais aussi lajustement en permanence des conditions de leur efficacit: quantit et type de nutriments, concentration en oxygne, pH, temprature et salinit.

2.4. Exemples de biodgradation 2.4.1. Biodsulfuration des carburants Afin de minimiser limpact des oxydes de soufre librs par la combustion des sources dnergie fossile, les lgislations actuelles imposent une rduction sensible de la teneur en soufre des carburants issus du ptrole. Ainsi dans lunion europenne, la teneur maximale autorise en soufre est passe de 0.2 0.035% dans une premire phase, puis 0.005% partir de 2005. Les mthodes chimiques de dsulfuration (hydrosulfuration) sont coteuses et exigeraient des dpenses de 38 milliards de dollars dans les 10 ans venir. Ce sont en effet les composs les plus rsistants quil faudra dsulfurer comme les thiophnes condenss. Aussi, certaines compagnies ptrolires accordent actuellement un intrt particulier lutilisation de nouveaux procds tels que la dsulfuration microbiologique, applique en particulier au

gazoale, produit intermdiaire entre lessence dont la dsulfuration chimique est plus facile et les fiouls lourds riches en composs soufrs complexes souvent difficiles traiter. Le soufre tant indispensables aux microorganismes pour la synthse des acides amins soufrs et de certaines vitamines. Les chercheurs ont slectionn des souches capables dutiliser le dibenzothiophne (DBT) comme unique source de soufre. En ralit, les bactries privilgient le sulfate (SO42-), trs rpandu dans la nature pour sapprovisionner. Les souches capables doxyder le DBT ne sont donc pas trs abondantes. Elles ne peuvent exister que dans des environnements exempts de sulfate et riches en soufre organique. Depuis quelques annes, des progrs considrables ont t effectus dans les mcanismes de dgradation du DBT par la souche modle Rodococcus IGTS8. Deux tapes sont ncessaires la production de bactries actives par fermentation puis leur utilisation comme biocatalyseurs de dsulfuration temprature et pression ambiante. La firme amricaine Energy Biosystems exprimente un pilote de biosulfuration capables de traiter jusqu 800 litres par jour de produits ptroliers (http://energybiosystems.com). Le principe en est le suivant : le biocatalyseur mlang leau est transfr dans un bioracteur o il opre en prsence doxygne, leau servant extraire du bioracteur le sous produit soufr (sulfite) rsultant de la dgradation enzymatique. Le carburant, une fois dsulfur, est spar du mlange actif pour tre rcupr, tandis que le biocatalyseur est recycl. Il reste, cependant, de nombreux points matriser pour convaincre les compagnies ptrolires dimplanter un procd biologique dans leur raffinerie. Loptimisation de la production de biocatalyseur (concentration finale, productivit), la stabilit du systme et la spcificit (le DBT est lune des plus importantes molcules soufres du gazole mais il existe dautres plus complexes).

2.4.1. Biofiltration des effluents la dgradation des composs organiques volatils (COV) par les microorganismes capables de les utiliser comme source dnergie ou de carbone, abrits dans un bioracteur filtrant les effluants gazeux, reprsente une solution moins onreuse que les mthodes physicochimiques, qui peuvent dgager des composs toxiques comme les oxydes dazote. Dj largement utilis pour le traitement de leau et de certains rejets liquides industriels, le traitement biologique stend depuis quelques annes aux effluents gazeux, en particulier en hollande, en Allemagne et plus rcemment aux USA. Selon la nature des polluants liminer, la transformation biologique implique des bactries, des algues ou des champignons. De manire gnrale, de nombreuses souches microbiennes mtabolisent les alcools, les acides, les esters et les ctones. Les hydrocarbures aromatiques ncessitent une assez longue adaptation de la population microbienne dans le racteur. Il faut considrer ventuellement la toxicit de certains composs prsents dans les gaz traiter comme le dioxyde de soufre. Il est donc indispensable danalyser soigneusement leffluent et de concevoir une unit de biotraitement. Certaines institutions comme lInstitut de Pasteur (Paris) proposent des catalogues de souches pures adaptes des polluants prcis. Il est cependant plus simple densemencer le racteur avec de la boue active provenant dune station dpuration deau, dont la population microbienne sadaptera delle-mme. Quelque soit lorigine de la souche dgradant le polluant, une population microbienne extrmement varie se dveloppera dans le bioracteur. Il arrive souvent que les bactries ne dgradent pas compltement les composs organiques volatils mais les transforment en mtabolites secondaires, eux-mmes utiliss comme substrats nutritifs par dautres espces. Ainsi de proche en proche, les microorganismes finissent par dgrader totalement les COV en eau, sels et gaz carboniques (CO2). Les cellules mortes servent leur tour de substrat des espces saprophytes, si bien que le racteur peut tre considr comme un systme ferm. Exemples : Un systme de biofiltres sert liminer les oxydes dazote et de soufre au niveau des gaz schappant de la chemine des hauts fourneaux (ce systme a t dvelopp pour remplacer le procd classique au gypse). Cest laide dun biofiltre contenant des champignons quon retire le styrne (hydrocarbure benznique C6H5CH=CH2) prsent dans les dchets gazeux rsultant du traitement du polystyrne (Matire thermoplastique obtenue de la polymrisation du styrne.

2.4.2. Dpollution des eaux uses et des effluents industriels Dans les stations dpuration, ce sont des microorganismes qui retirent des eaux uses les polluants les plus courants, avant quelles ne rejoignent la rivire, le lac ou la mer. Les pollutions croissantes (dues lindustrie et lagriculture) ncessitent le dveloppement de procds capables dliminer des polluants spcifiques comme lazote, le phosphore, les mtaux lourds et les composs chlors. Selon la vieille mthode des boues actives, les eaux uses passent dans un premier bassin dit biologique, o un agitateur mcanique brasse les boues (mlange de biomasse, de polluants et de dbris) pour les maintenir en suspension et stimuler la biodgradation du substrat. Les bactries se dveloppent librement dans ce bassin o les effluents sont fournis de manire continue et les boues se dcantent. Leau est alors libre dans la nature (et utilise) alors que les boues sont maintenues dans ce bassin biologique. Plusieurs dizaines despces bactriennes, en particulier du genre Pseudomonas, peuvent dgrader les polluants organiques. Ces organismes htroptrophes se reproduisent trs vite et les boues sont renouveles au bout de 2 10 jours. En revanche les Nitrosomas, qui transforment en nitrite les fortes concentrations dammoniac des eaux rsiduaires et les Nitrobacters qui convertissent ces nitrites en nitrates ont un faible taux de croissance. Pour laisser ces bactries le temps doprer, on ne peut renouveler les boues quen 20 jours environ. A la place des cultures libres, les professionnels dveloppement depuis quelques annes des cultures de bactries sur des supports minraux fixes ou sur des supports mobiles constitus de billes de polystyrne en suspension. Le recyclage des dchets en produits utiles peut rduire les cots du traitement des eaux uses. Par exemple, grce des bactries utilisant le soufre dans leur mtabolisme, les mtaux lourds et les composs soufrs, prsents dans les eaux uses peuvent tre retirs puis rutiliss. La production daliments pour les animaux partir la biomasse de champignons qui demeure aprs lextraction de la pnicilline en est un autre exemple. Enfin la plupart des systmes de traitement des eaux uses produisent un gaz utilisable (biogaz).

2.4.3. Traitement des sols et de la terre agricole Certaines mthodes ont ts dveloppes pour dpolluer les sols et les eaux de la nappe phratique aussi bien in situ ( leur place originelle) que ex situ (ailleurs). Les traitements in situ peuvent comprendre lintroduction de microorganismes (bioaugmentation, bioaddition ou encore bioenrichissement), laration et/ou laddition de solutions nutritives (biostimulation).

Le traitement ex situ suppose quon retire leau de la nappe phratique pour les traiter en surface. Le sol peut tre trait sous forme de compost, amass en surface dans des andains, ou trait dans des bioracteurs boues spciales. Leau de la nappe phratique est traite dans des bioracteurs puis soit repompe vers le sol soit draine et connduite vers les eaux superficielles. La bioremdiation de la terre agricole (biorhabilitation) cote souvent moins cher que les mthodes physiques. Son action ncessite toutefois du temps et immobilise les capitaux et la terre. La bioremdiation in situ du sol situ sous les exploitations de ptrole est dj une pratique courante, mais la bioremdiation in situ est aussi possible pour les solvants chlors. La faisabilit de cette mthode de bioremdiation in situ dpend des paramtres physiques du sol. La bioremdiation peut utiliser des plantes: on la nomme alors phytoremdiation ou phyto-assinissement. Cette technique est dj utilise pour liminer les mtaux contaminant les sols et leau de la nappe phratique; on cherche la dvelopper dans la dcontamination biologique dautres polluants. Lutilisation combine de plantes et de bactries pourrait aussi tre possible. Des bactries vivent en troite association avec les racines de certaines plantes et dpendent de substances excrtes par les racines. Ces rhizobactries, qui dpassent en nombre les autres bactries du sol, pourraient tre gntiquement transformes de manire dgrader des substances polluantes. Des recherches sont en cours pour examiner cette voie.

2.4.4. Dpollution du milieu marin Pour lutter contre les mares noires (arrive de nappes de ptrole provenant dun navire qui a t accident ou qui a purg ses rservoirs ou de lruption accidentelle dune tte de puits sous marine), lexprience a prouv que la plupart des produits commercialiss base de microorganismes exognes ne sont pas plus efficaces que les organismes olophiles (microorganismes qui dgradent les produits ptroliers) indignes, dont la profilration est stimule par la mare noire. Le mouvement des mares apporte loxygne ncessaire, ainsi un simple ajout de fertilisants azots dans les zones contamines suffit pour liminer la pollution 3 5 fois plus vite que dans les zones non traites. Malheureusement un tel succs dans le nettoyage dune mare noire reste rare. La bioremdiation ne devient efficace que lorsque la couche de ptrole nest pas paisse, c'est--dire aprs plusieurs nettoyages mcaniques. Lorsque la couche est paisse, labsence doxygne lintrieur de la couche dhydrocarbures diminue laction des microorganismes. Un autre problme auquel est confront la dpollution est la contamination des sdiments des ocans et des estuaires. Au cours du temps, un grand nombre de polluants comme les

polychlorobiphnyles,

les

hydrocarbures

aromatiques

polycycliques,

les

pesticides

saccumulent. Leur attaque par les bactries est parfois difficile en raison de leur adsorption sur les particules sdimentaires. Des dtergents (produits permettant dliminer dun milieu solide les particules trangres qui y adhrent par leur mise en suspension ou en solution) dorigine microbienne, les bio surfactants peuvent permettre leur dsorption et faciliter leur attaque par les bactries. Les chercheurs travaillant sur les microorganismes qui utilisent des hydrocarbures comme seule source de carbone pour leur croissance, ont observ que ces microorganismes librent leurs propres agents surfactants dans le milieu. En facilitant la dsorption des nutriments dans la matrice du sol ou leur dispersion dans leau, ces biosurfactants rendent les souches microbiennes qui les scrtent plus comptitives. Au cours de ces dernires annes, la recherche sur les biosurfactants a fortement augment sous leffet des progrs de la biotechnologie. Aussi efficaces que leurs homologues chimiques, les biosurfactants prsentent lavantage dtre biodgradables et non toxiques. De plus certains qui sont scrts par des organismes extrmophiles (et sont donc trs efficaces), restent fonctionnel malgr les conditions svres de temprature, de salinit et de pH. De nombreux microorganismes producteurs de biosurfactants ont t dj isols et il est devenu maintenant possible de produire par voie biologique une grande varit de biosurfactants dont la nature chimique et les proprits dpendent des paramtres physiques de lenvironnement (pH, temprature, salinit,) et de la composition du milieu nutritif (N, P, K, Fe et Mn). Les conditions qui existent dans le futur milieu dutilisation du biosurfactant dterminent dailleurs en grande partie le choix dune souche pour une application donne. Etant donn leur diversit chimique et fonctionnelle, les biosurfactants trouveront probablement des applications aussi varies que leurs homologues de synthse.

LA PHYTOREMEDIATION

1. Introduction La phytoremdiation est dfinie comme lutilisation des plantes pour liminer ou transformer les polluants en composs moins toxiques. Bien que les plantes soient utilises depuis longtemps pour dpolluer les sols, dimportantes dcouvertes scientifiques ralises au cours de ces dix dernires annes ont contribu amliorer le processus et tendre son champ dapplication. Elle peut tre utilise aussi bien contre les polluants organiques que les polluants inorganiques prsents dans les milieux solides (sols), liquides (eaux de surface et souterraines) et gazeux. La phytoremdiation regroupe : (i) la phytoextraction : utilisation des plantes pour extraire du sol les polluants organiques et les mtaux et les concentrer dans les organes de la plante destins la rcolte, (ii) la rhizofiltration, correspond lutilisation des racines pour absorber et accumuler les polluants (mtaux) des eaux uses, (iii) la phytostabilisation ; utilisation des plantes pour limiter lrosion et immobiliser les polluants dans les couches superficielles vitant en particulier leur migration vers les eaux de surface et souterraines, (iv) la phytovolatilisation : utilisation des plantes pour extraire les polluants du sol et les transformer en composs volatils (v) la phytodgradation : utilisation de lassociation plantes/microorganismes pour dgrader les polluants organiques du sol.

2. Phytoremdiation des sols contamins par les mtaux Parmi les diffrentes mthodes de phytoremdiation, la plus utilise est la phytoextraction. Elle a t en particulier applique pour la dpollution des mtaux. La liste des lments les plus connus pour leurs effets toxiques et susceptibles de polluer les sols, est reprsente dans le tableau suivant.

Tableau. Gamme des concentrations des polluants mtalliques les plus rpandus dans lenvironnement
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Elments Gamme des teneurs Limite rglementaire -1) (mg.kg (mg.kg-1) --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Plomb 1-6900 600 Cadmium 0.1- 345 100 Arsenic 0.1-102 20 Chrome 0.005-3950 100 Mercure 0.0001-1800 270 Cuivre 0.030-550 600 Zinc 0.150-5000 1500 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

2.1. Phytoextraction Cest la voie dans laquelle les chercheurs se sont le plus investis depuis le dbut de cette dcennie. La phytoextraction utilise des plantes capables de prlever les lments traces toxiques et de les accumuler dans les parties ariennes qui seront ensuite rcoltes puis incinres (Figure 1). Les cendres seraient alors mises en dcharges ou mieux rutilises en mtallurgie. Deux stratgies sont actuellement dveloppes dans la phytoextraction. Il y a la phytoextraction assiste par des chlateurs de mtaux. Cette mthode est dsigne galement par la phytoextraction induite et dautre part la phytoextraction continue. Parmi ces deux procds la phytoextraction assiste est la plus dveloppe. Cependant, la phytoextraction continue commence tre applique pour la dpollution des mtaux lourds (Zinc, Cadmium, nickel) et des mtallodes (Slnium, Arsenic). Les deux stratgies ont fait lobjet dessais en plein champ et les rsultats, bien quencourageants, ncessitent plus defforts pour amliorer le processus.

Traitement biologique ou physicochimique, recyclage des mtaux

RECOLTE

Zn

Zn Cd Cd Ni Cd Zn Cd Zn Zn Ni Cd Ni Cd Zn

Zn Cd Ni

Mtaux lourds dans le sol

Cd Zn Zn

Cd Zn

Zn Cd Ni Cd Ni Zn Zn
Absorption racinaire

Ni

Cd

Cd Ni Zn

Absorption racinaire
Figure I : Reprsentation schmatique du processus de phytoextraction des mtaux lourds.

2.1.1. Phytoextraction assiste 2.1.1.1 Concept de la phytoextraction assiste Pour le plomb, le cadmium, larsenic, on ne connat pas de nos jours des plantes capables daccumuler naturellement de grandes quantits de ces lments. Par exemple, la vgtation qui crot sur un milieu contamin par le plomb renferme seulement 0.01 0.06 % de ce polluant dans la partie arienne. Ces teneurs sont infrieures celles requises pour une phytoextraction efficace. Des expriences ralises ont montr que lapplication dun chlateur synthtique comme lacide thylnediaminettraactique EDTA aux sols stimulait labsorption et laccumulation du plomb dans la partie arienne. Ces travaux ont montr que le taux de plomb dans la partie arienne pouvait dpasser 1% de la matire sche. Cette dcouverte a t lorigine de lamlioration du procd de la phytoextraction du plomb et a ouvert la voie au dveloppement de cette technologie dautres mtaux en utilisant des chlateurs appropris. La quantit du mtal extraite du sol est reprsente par sa teneur dans le matriel vgtal multiplie par la quantit de biomasse rcolte. Le fait que des plantes produisant une

Transport des mtaux vers les parties ariennes (Xylme)

grande quantit de biomasse, comme par exemple le colza, le mas, le tournesol puissent tre stimules pour accumuler le plomb dans leur partie arienne, reprsente un autre atout pour le dveloppement de la phytoextraction assiste par les chlateurs. Le concept de la phytoextraction induite est galement applicable dautres mtaux. Dautres expriences ralises sur des sols contamins par plusieurs mtaux, montrent une accumulation simultane du plomb, du cadmium, du cuivre, et du zinc chez des plantes de colza aprs application de lEDTA. La stimulation de laccumulation du mtal est directement relie laffinit du chlateur pour le mtal et suggre que, pour obtenir une phytoextraction, un chlateur synthtique ayant une grande affinit pour le mtal extraire doit tre utilis. Sur la base de cette information, un protocole pour la phytoextraction assiste par des chlateurs a t rcemment propos : (i) le site contamin est valu et une tude prliminaire permet de dterminer la combinaison approprie chlateur / plante, (ii) le site est prpar et les plantes sont cultives, (iii) une fois que la production de biomasse est optimale, le chlateur appropri est appliqu, (iv) aprs une priode daccumulation pouvant stendre sur une priode allant de quelques jours quelques semaines, la rcolte est ralise

Selon la saison et la frquence des rcoltes, le site peut tre cultiv de nouveau pour dautres phytoextractions. Les estimations suggrent que les plantes peuvent extraire entre 180 et 530 kg ha-1 de plomb par an et que la dpollution dun sol qui renferme plus de 2500 mg / Kg de plomb est possible sur une dizaine dannes. Aprs chaque rcolte, le matriel vgtal contamin est rduit par incinration et les cendres sont dposes en dcharge. Si le cot le permet, le mtal extrait dun sol pollu peut tre rutilis de nouveau dans les diffrentes activits industrielles.

2.1.1.2 Dveloppement de la phytoextraction assiste La dcouverte de labsorption assiste par des chlateurs chez les plantes est trs rcente. La phytoextraction assiste est base sur deux principes : (i) augmenter la concentration du mtal dans la solution du sol, (ii) augmenter labsorption et le transport de ce mtal vers la partie arienne de la plante, qui est plus facile rcolter. Laugmentation de la concentration du mtal dans la solution du sol peut sexpliquer par la forte affinit du

chlateur utilis. Ce dernier peut se lier au mtal et passer dans la solution du sol. Cependant, les mcanismes impliqus dans labsorption et la translocation, assiste par des chlateurs, ne sont pas encore connus Aprs application de lEDTA, laccumulation du plomb dans la partie arienne est directement corrle avec laccumulation de lEDTA. Ce rsultat suggre clairement que ce mtal est transport dans la plante sous la forme du complexe Pb-EDTA. La prsence dune teneur leve en EDTA dans les tissus de la plante pourrait augmenter la concentration du plomb soluble par la formation du complexe Pb-EDTA et augmenter ainsi sa migration vers la partie arienne o il saccumule. Cette migration vers la partie arienne est assure par le courant de la transpiration. Au niveau de la feuille, leau svapore et le complexe mtal-chlateur se concentre (ou saccumule).

2.1.2 Phytoextraction continue Paralllement au dveloppement de laccumulation assiste par des chlateurs, dautres auteurs se sont intresss aux processus physiologiques particuliers qui permettent aux plantes daccumuler les mtaux durant toute la priode de leur croissance. Le mode dabsorption des mtaux est optimis chez les plantes hyperaccumulatrices qui poussent sur des sols riches en mtaux lourds et capables daccumuler de grandes quantits de mtaux dans leur partie arienne o le taux de Zn, Ni, Mn est parfois suprieur 1% de la matire sche. Contrairement labsorption assiste par des chlateurs, la phytoextraction continue est base sur les capacits gntiques et physiologiques des plantes spcialises dans labsorption, la translocation et la tolrance des mtaux. Les inconvnients majeurs de lutilisation de ces plantes dans la phytoremdiation sont reprsentes par une faible production de biomasse et une croissance beaucoup trop lente. A cela sajoute linexistence de plantes hyperaccumulatrices de mtaux fortement impliqus dans la pollution de lenvironnement (plomb, cadmium, arsenic). Cependant, une recherche approfondie sur les mcanismes biologiques des plantes hyper accumulatrices pourrait contribuer au dveloppement des plantes suprieures pour la phytoremdiation des mtaux.

2.1.2.1 . Concept de la phytoextraction continue Depuis longtemps dj, les botanistes et les gologues la recherche de gisements miniers, ont rapport lexistence de plantes tolrantes aux mtaux lourds. Elles colonisent

les secteurs mtallifres o les autres espces disparaissent. Cependant, la majorit de ces plantes accumulent les mtaux dans leurs racines et seule une lgre partie des mtaux atteint les tissus ariens o les teneurs comme pour la plupart des espces vgtales, ne dpassent pas 0.005 0.5 % de la matire sche. Ces plantes prsentent donc peu dintrt pour la phytoextraction continue. Certains chercheurs ont utilis le terme hyper accumulateur pour dcrire les plantes avec une teneur en Nickel suprieure 1000 g/g MS au niveau des feuilles, ce qui correspond une valeur nettement plus leve que celle rencontre gnralement chez les plantes voisines non accumulatrices. Dautres plantes hyperaccumulatrices comme Viola calaminaria et Thlaspi caerulescens, qui poussent sur des sols naturellement riches en mtaux lourds accumulent le zinc dans les feuilles avec des taux respectifs denviron1 et 1,7 % de la matire sche. Par comparaison, les plantes qui poussent sur des sols non contamins ont un taux de zinc qui varie entre 0.001 et 0.02%. Des plantes pouvant accumuler des taux levs de cobalt, cuivre, manganse et probablement plomb ont t galement dcrites. Les premiers hyper accumulateurs caractriss appartenaient aux familles des Brassicaces et des fabaces. Actuellement environ 400 espces hyper accumulatrices ont t rpertories et ce nombre est appel changer avec lexploration de nouveaux sites contamins

Tableau. Nombre despces hyper accumulatrices ------------------------------------------------------------------------------------------------------------Mtal Critres (% MS des feuilles) nombre despces

------------------------------------------------------------------------------------------------------------Cadmium Cobalt Cuivre Plomb Manganse Nickel Zinc >0.01 >0.1 >0.1 >0.1 >1 >0.1 >1 1 28 37 14 9 317 11

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------

2.1.2.2. Dveloppement de la phytoextraction continue La capacit des plantes hyper accumulatrices concentrer les mtaux lourds au niveau de la feuille reprsente un facteur important pour leur utilisation dans le dveloppement de la phytoextraction continue. La majorit des plantes hyper accumulatrices prsentent une faible production de biomasse et une croissance lente, tandis que les plantes croissance rapide et produisant beaucoup de biomasse sont sensibles aux mtaux lourds et les accumulent gnralement au niveau des racines. Pour pallier ces inconvnients et dvelopper avec succs une phytoextraction continue, deux stratgies sont actuellement envisageables. La premire consiste prospecter dautres sites pollus avec pour objectif la dcouverte de plantes ayant une forte production de biomasse. La deuxime approche consiste comprendre et exploiter les mcanismes impliqus dans la rsistance, labsorption et laccumulation des mtaux. Les donnes bibliographiques sur la nutrition minrale sont riches en informations concernant ces mcanismes. Ceci permet didentifier des gnes utilisables pour la transformation par gnie gntique des plantes sensibles forte production de biomasse en plantes hyper accumulatrices.

2.1.2.3. Diffrentes espces hyper accumulatrices des mtaux La flore des sols riches en serpentine, une roche mtamorphique riche en mtaux, comprend un grand nombre de plantes contenant plus de 0.1% de Nickel. Ce taux peut atteindre 5% alors que chez les vgtaux ordinaires ce mtal devient toxique, ds 0.005 0.01%. Le record revient Sebertia acuminata, un arbre poussant sur les sols de serpentine de nouvelle Caldonie et dont le latex contient plus de 20% de Nickel. Ces hyper accumulateurs de nickel appartiennent diverses familles dont les Brassicaces et les Euphorbiaces. On les trouve sous les tropiques (Nouvelle Caldonie, Asie, Cuba, Zimbabwe, Zambie, ex Zaire) et dans les rgions tempres (Europe, Californie) o les genres Alyssum et Thlaspi de la famille des Brassicaces sont trs frquentes. Le nombre des hyper accumulateurs de Zinc est moins important que pour le Nickel. Une vingtaine despces peuvent accumuler plus de 1% de Zinc. Elles ont t identifies tant sur des gisements mtallifres affleurant que sur danciens sites miniers ou industriels. Thlaspi caerulescens peut accumuler jusqu 4% de la matire sche dans sa partie arienne. Lhyperaccumulation du cadmium correspond des teneurs suprieures 0.01% de matire sche reste un phnomne rare. Thlaspi caerulescens qui est un hyper

accumulateur de Zinc peut accumuler en mme temps le Cadmium dans la partie arienne avec une concentration de 1000 g / g MS. La rpublique dmocratique du Congo (Ex Zare) dtient le monopole des plantes hyper accumulatrices de cuivre. 24 hyper accumulateurs ont t rpertoris, parmi eux certains peuvent aussi accumuler le cobalt. Ces espces appartiennent pour la plupart la famille des Laminaces et des Scrophulariaces. La plus forte teneur en cuivre rencontre (13700 g / g MS) se retrouve chez Aeollanthus biformifolius (Laminaces).

2.1.2.4. Mcanismes de la rsistance aux mtaux La phytoextraction continue implique laccumulation du mtal dans la partie arienne de la plante, et ceci durant tout son cycle de dveloppement. Pour y parvenir, les plantes possdent des mcanismes performants pour la dtoxification du mtal accumul. Par exemple, des travaux ont montr que la rsistance au Nickel chez Thlaspi caerulescens est dterminante pour lhyperaccumulation du mtal. De plus la manipulation gntique peut constituer une autre voie de dveloppement de plantes performantes pour la phytoextraction. Ainsi des plantes transformes dArabidopsis thaliana pouvant exprimer une mercure rductase bactriennes sont devenues rsistantes et peuvent extraire une grande quantit de mercure partir des sols pollus, ce qui les rend apte la phytoremdiation. Pour dvelopper des plantes hypertolrantes capables de supporter de fortes concentrations dions mtalliques, il est indispensable de comprendre les mcanismes molculaires et biochimiques adopts par les plantes pour rsister aux effets toxiques des mtaux. Lhypertolrance repose sur le fait quune substance nest nfaste pour un organisme que si elle sinsre dans son mtabolisme. Les hyper accumulateurs mettent en uvre une stratgie de squestration qui rend llment biologiquement indisponible (inactif), bien que prsent dans la plante. Pour le cadmium par exemple, plusieurs mcanismes de detoxification ont t dcrit. Certains sont en troite relation avec la phytoremdiation, comme par exemple la chlation et la compartimentation (Figure 2).

Mtal Mtal Mtal

1
Gaine dEctomycorrhization

Mtal PCs Mtal MTs PC-Cd

ATP PC-Cd-S

7
Mtal [Mtal]

[Mtal] H+

Acides (orgs + amns) HSPs

8
Vacuole

Cytoplasme
Paroi cellulaire

Figure 2 : Mcanismes cellulaires impliqus dans la dtoxification des mtaux et la tolrance chez les plantes suprieures. 1. limitation du passage des mtaux dans les cellules racinaires par les mycorhizes, 2. La fixation des mtaux sur la paroi cellulaire et par les exsudats racinaires, 3. Rduction de linflux des mtaux travers la membrane plasmique, 4. Efflux actif des mtaux partir du cytoplasme, 5. La chlation cytoplasmiques par divers ligands, 6. Protection et rparation de la membrane plasmique contre les destructions induites par les mtaux, 7. Transport des complexes Cdphytochelatines dans la vacuole, 8. Compartimentation vacuolaire dautres mtaux non chlates.

Chlation La fixation des ions mtalliques par des ligands spcifiques forte affinit rduit leur concentration dans les compartiments intracellulaires et par voie de consquence leur phytotoxicit. Chez les plantes, il existe plusieurs types de ligands: acides organiques, acides amins et peptides. Les plantes photosynthtiques sont riches en acides organiques comme le malate, le malonate, loxalate, le tartrate et lisicitrate qui peuvent tablir des liaisons avec les ions mtalliques. Ainsi, il a t montr chez certaines espces que les acides maliques et malonique chlatent lessentiel du nickel absorb. Dautres auteurs ont remarqu que chez les plantes hyperaccumulatrices, le nickel est li de prfrence au citrate. Lacide malique serait galement impliqu dans le transport du zinc du compartiment cytoplasmique vers

la vacuole. Aprs dissociation du complexe Zn-malate, le Zn se lierait loxalate formant ainsi le complexe Zn-oxalate qui reprsenterait la forme du stockage du mtal et le malate serait renvoy vers le cytoplasme pour un nouveau transport. Deux classes de peptides sont capables de fixer des mtaux lourds. Dune part il y a les mtallothionines dont la composition en acide amins est riche en cystine. Leur synthse est induite par le cuivre. De plus, dautres travaux ont montr que lexpression des gnes codant ces protines est fortement corrle avec la rsistance ce mtal. Dautres part, il y a les phytochlatines. Ces peptides sont riches en cystine et prsentent une grande affinit pour le cadmium. La dcouverte des phytochlatines a eu lieu en 1986. Dans ces travaux, les chercheurs ont slectionn des cellules de tomates tolrantes au cadmium, aprs des cultures successives sur des milieux contenant des concentrations croissantes en cet lment. Ces cellules synthtisent plus de phytochlatines que les cellules non tolrantes. De mme il a t remarqu que linhibition de la synthse des PCs par des procds chimiques transforme ces cellules tolrantes en cellules sensibles. Le rle des PCs dans cette tolrance aux mtaux lourds a suscit de nombreux dbats. Pour certains auteurs, la tolrance est le rsultat dune surproduction de phytochlatines ou dune synthse plus importantes de PCs chanes peptidiques longues. Pour dautres, cest lincorporation de Soufre (S2-) dans le complexe Cd-phytochlatines qui les rend plus stable et capable de fixer une plus grande quantit de cadmium. Ces peptides sont essentiels pour la dtoxification du Cd chez A. thaliana La prcipitation du Zn sous forme de Zn-phytate et celle du plomb par des carbonates, des sulfates et des phosphates ont t proposes comme un mcanisme de dtoxication de ces mtaux.

Compartimentation Depuis 1988, diffrents travaux ont montr limportance de la formation du complexe PCs-Cd-S2- dans les mcanismes de la tolrance au Cd. La prsence des deux types de complexes, appels respectivement LMW ou PCs-Cd et HMW ou PCs-Cd-S2- a t observe en premier lieu chez la levure. Depuis le complexe HMW a t retrouv chez des plantes comme la tomate, le piment et le colza. Des travaux raliss sur le tabac ont montr que le complexe Cd-phytochlatines et la totalit du Cd prsent dans le proplaste taient localiss dans la vacuole. Pour ces auteurs, les phytochlatines ne joueraient pas un simple rle de chlateur dans le milieu cytoplasmique, mais seraient probablement impliques dans le transport du mtal vers la

vacuole. Dans ce cadre, un transporteur utilisant lATP a t localis au niveau du tonoplaste et qui est responsable du transport des PCs et des complexes PCs-Cd lintrieur de la vacuole. Dans la vacuole ces composs vont incorporer du Cd2+ et S2pour former le complexe PCS-Cd-S2- de poids molculaire plus lev.

Biotransformation La transformation chimique de certains lments (Slnium, Chromium et Arsenic) et leur incorporation dans les voies mtaboliques rendent ces lments trs toxiques pour les plantes. La toxicit du slnium est due sa transformation en slnocystine et slnomthionine qui remplaceront la cystine et la mthionine dans la synthse des protines. Cependant, certaines espces dAstragalus sont capables de rduire le slnium et peuvent ainsi laccumuler sous forme non toxique dans la partie arienne. Une enzyme responsable de la mthylation de la slnocystine a t isol et caractrise chez ces plantes. Ce rsultat constitue une premire tape dans la connaissance des bases gntiques de la rsistance des plantes cet lment.

Biodisponibilit, absorption et translocation La rsistance des plantes, bien quindispensable la phytoremdiation, nest pas suffisante pour assurer une forte accumulation des mtaux dans la partie arienne de la plante. La biodisponibilit de ces lments, leur absorption par les racines et leur translocation sont aussi essentielles pour lamlioration de cette pratique. La concentration des ions mtalliques dans la solution du sol dpend principalement du pH, la teneur en matire organique ou inorganique et du potentiel rdox. Ainsi, il est admis que les pH levs favorisent les processus dadsorption et dassociation dlments mtalliques comme Cd, Zn, Pb, Fe, Mn, Cu la matire organique ou dautres constituants de la phase solide du sol. Laddition des chlateurs pour augmenter la biodisponibilit des ions mtalliques est essentielle pour la phytoextraction. Par ailleurs, les excrtions racinaires acides peuvent contribuer labaissement du pH et par voie de consquence augmenter la biodisponibilt des mtaux au niveau de la rhizosphre. Les plantes ont dvelopp plusieurs stratgies pour augmenter la biodisponibilit des oligolments essentiels. Ceci est illustr par les mcanismes mis en uvre pour acqurir le fer et dautres lments minraux. Ces stratgies comprennent la production de chlateurs de mtaux (les phytosidrophores) comme lacide mugnique ou lacide avnique qui sont produits par la plante en rponse une dficience en fer et

probablement aussi en Zinc. Au niveau de la rhizosphre, les phytosidrophores fixent et mobilisent Fe, Cu, Zn et Mn. Le passage travers la membrane cellulaire se fait sous forme de complexe mtal-phytosidrophore grce des transporteurs spcialiss. La prsence simultane dun transport actif et dun transport passif du cadmium a t propose pour les racines de soja, du lupin et du mas. Des travaux raliss rcemment ont montr que le transport passif pourrait correspondre au dplacement du Cd par la voie apoplasmique et quil serait ngligeable aux faibles concentrations. Lautre type de transport utilise un transporteur de nature protique qui existerait au niveau de la membrane plasmique. Une fois absorbs par les racines, les ions mtalliques peuvent sy accumuler soit tre transports vers la partie arienne. Le transport ascendant des mtaux se fait essentiellement par le xylme. Le taux de Cadmium dans les organes autres que les racines, dpend de la quantit absorbe de cet lment, de la rpartition intracellulaire du mtal et de sa translocation des racines vers les parties ariennes. Chez certaines plantes, comme la tomate, le piment, le mas et lorge le Cd est prfrentiellement accumul dans les racines. Cependant, chez certaines plantes le cadmium peut saccumuler fortement en dehors des racines, cest par exemple le cas du Tabac utilis dans la fabrication des cigarettes o on peut retrouver jusqu 80% du Cd accumul dans les feuilles. Le transport du Cadmium dans la sve du xylme serait dpendant du courant de transpiration. Des donnes suggrent que le transport du Cd se ferait sous la forme dun complexe Cdcitrate. Le citrate serait impliqu galement dans la translocation vers la PA du Fer et du Zn2+ alors que pour Cu2+ ce sont des acides amins comme lhistidine ou lasparagine qui joueraient le rle de chlateur. Lisolement dun complexe Ni-citrate chez une plante hyper accumulatrice de ni renforce le rle des acides organiques dans le transport des mtaux. Dautres chlateurs pourraient galement jouer un rle important dans la mobilit de lion mtallique lintrieur de la plante. Cest le cas de lacide nicotiamine prsents chez toutes les plantes et qui peut transporter les cations divalents comme Cu2+, Ni2+, Co2+, Zn2+Fe2+ et Mn2+.

2.2. Phytostabilisation Lorsque des problmes ne permettent pas de recourir la phytoextraction (la dpollution dun site par cette mthode demande plusieurs cycles de culture), on a parfois recours dautres solutions. Par certains procds, il est possible dimmobiliser les mtaux lourds dans les sols pollus et viter ainsi la contamination des eaux de ruissellement ou souterraines, qui pourrait avoir lieu suite linfiltration des eaux de pluie. Un apport lev de composs organiques, dhydroxydes de fer ou de fertilisants phosphats comme lacide phosphorique, le phosphate de calcium, stimule la formation de composs qui modifient la forme chimique ainsi que leur biodisponibilit et contribuent ainsi limmobilisation des mtaux lourds (une forme dinactivation des contaminants). Cependant, les plantes peuvent galement stabiliser la pollution dans un terrain. La phytostabilisation (Figure 4) consiste installer des vgtaux tolrants la prsence de polluants toxiques dans le sol. Ils limitent aussi lrosion et empchent que les poussires passent dans latmosphre. Ils peuvent galement scrter des substances qui stabilisent chimiquement les mtaux lourds au niveau de la rhizosphre, vitant en particulier leur migration vers les eaux de ruissellement et souterraines. Les plantes pouvant galement accumuler les mtaux lourds dans leur systme racinaire sont intressantes pour la phytostabilisation. Couvet vgtal assurant la fixation du sol et sa protection contre les agents de lrosion

Zn Cd Zn Zn Cd Zn

Zn Cd Cd Ni Cd Zn Cd Zn Zn Ni Cd Ni Cd Zn

Zn Cd Ni

Zn Cd Ni Cd Ni Zn Zn
Absorption racinaire

Ni

Cd

Cd Ni Zn

Fixation des contaminants dans la matrice du sol

Absorption racinaire des contaminants

Rduction de linfiltration des contaminants vers les nappes et leur migration vers les zones voisines

Figure 4 : Processus de la phytostabilisation des contaminants au niveau du sol (Scott, 1995).

2.3 Phytovolatilisation des mtaux Des plantes ont naturellement laptitude dabsorber des contaminants. Puis, lors du mtabolisme, les contaminants ou leurs drivs sont associs dans des composs volatils qui sont librs in fine dans latmosphre. Un exemple est le traitement des sites contamins en Slnium (Se). La volatilisation du slnium (Figure 5) partir des tissus de la plante constitue un mcanisme de dtoxication de cet lment. La transformation du slnium en composs volatils non toxiques a t signale dans le monde animal depuis 1984. Il a fallu attendre une dcennie pour mettre en vidence pour la premire fois un mcanisme similaire chez les vgtaux. Ce rsultat a t retrouv plus tard par dautres auteurs. Le slnium est volatilis par les plantes hyperaccumulatrices, comme par exemple Astragalus racemosus, sous la forme de dimthyldislnite alors que chez la luzerne, une plante non accumulatrice de slnium, cette volatilisation se fait sous forme de dimthylslnite. Ces deux composs volatils ne sont pas toxiques et ont lodeur de lail. Cependant, on ne connat toujours pas sous quelle forme le slnium est absorb par les plantes, puis transform en une forme mthyle volatile. Cependant, certains travaux (Zayed et Terry,1944) ont montr que laddition de la pnicilline dans la solution nutritive de Brassica juncea entrane une inhibition de 90% de la volatilisation du slnium lorsque ce dernier est ajout sous forme de slnate. Ces donnes suggrent que lassociation plante-bactrie peut jouer un rle important dans la rduction et lassimilation du slnium. Cependant dautres travaux sont ncessaires pour clarifier le rle des bactries et des plantes dans le processus biochimique de la volatilisation de llment. La volatilisation de larsenic sous forme de dimthylarsenite a t galement propose comme tant un mcanisme de rsistance chez les algues marines. Les tudes ralises chez les plantes montrent que cet lment est essentiellement accumul dans les racines et quune trs faible quantit est transporte vers la partie arienne. Cependant, les plantes peuvent stimuler la biodgradation au niveau de la rhizosphre et contribuer indirectement laugmentation de la volatilisation de larsenic.

Enfin, des manipulations gntiques ont permis laugmentation de la phytovolatilisation chez les plantes. Par exemple : Par transgnse, des gnes dautres organismes, en particulier de micro-organismes ont t transfrs des vgtaux pour leur permettre de rendre volatils des contaminants (exemple : peupliers transforms volatilisant le mercure de sites contamins).

Figure 5: Schma de volatilisation du slnium chez les plantes non accumulatrices (Zayed, A. and N. Terry., 1994).

3. Phytoremdiation des sols pollus par des composs organiques Lutilisation des plantes dans la remdiation des eaux contamines par des polluants organiques ou inorganiques existe depuis plus de 100 ans. Ce procd a t la base des traitements des eaux uses. Cependant, le nettoyage des sols contamins par les composs organiques est un concept nouveau. Son dveloppement est bas sur le fait que la biodgradation des polluants organiques est plus rapide pour les sols cultivs que pour les sols nus. Par la suite, des tudes ont montr que les plantes sont capables dabsorber et de

mtaboliser un grand nombre de polluants organiques comme par exemple les explosifs (TNT) les polychlorophnols (PCB) et le trichlothylne (TCE). En plus de labsorption et du mtabolisme des composs organiques, les plantes scrtent des exsudats racinaires qui stimulent la bioremdiation microbienne au niveau de la rhizosphre, appel phytormdiation ex planta.

3.1 ; Absorption et mtabolisme des polluants organiques 3.1.1. Biodisponibilit des polluants organiques Par analogie avec la phytoextraction des mtaux lourds, la dpollution des polluants organiques dpend principalement de leur disponibilit et des mcanismes impliqus dans leur absorption. Les polluants organiques du sol peuvent se trouver ltat liquide, gazeux ou solide. Exceptionnellement pour quelques hydrocarbures plyaromatiqsues qui se trouvent sous forme de gaz, labsorption des composs organiques comme par exemple les pesticides et les herbicides, se fait partir de la phase liquide (solution du sol). Elle est influence par les caractristiques du sol (pH, matire organique, teneur en eau, texture) et de la physiologie de la plante. Contrairement aux mtaux lourds, trs peu de rsultats concernant la dpollution par les plantes des composs organiques sont actuellement disponibles. Daprs certains travaux, la phytoremdiation est troitement lie la transpiration qui, son tour, dpend du cycle de la plante, de la surface foliaire, de la nutrition minrale, des conditions du sol et de lhumidit relative de lair. Comme pour la phytoextraction des mtaux lourds, la disponibilit des composs organiques reprsente une premire restriction dans la phytoremdiation. De la mme faon que des ligands sont ajouts au sol dans le cas de la phytoextraction assiste des mtaux lourds, des dtergents synthtiques (Triton X100, SDS) ou des biosurfactants sont utiliss pour augmenter la dispersion des polluants organiques ainsi que leur dgradation par les microorganismes. A notre connaissance il nexiste pas de travaux se rapportant laddition de surfactants pour stimuler labsorption des composs organiques par les plantes. Leur application pourrait stimuler la disponibilit et labsorption des polluants. Une autre voie envisageable serait la production de biosurfactants par des plantes ou des microorganismes gntiquement modifis. Lavantage des biosurfactants est quils sont dgrads plus facilement que leurs homologues synthtiques.

3.1.2. Biotransformation et compartimentation Les composs organiques gnralement lipophiles sont facilement absorbs par la plante, qui peut les intgrer dans de nouvelles structures cellulaires via la lignification, les volatiliser, les compartimenter dans la vacuole ou les mtaboliser. Les composs xnobiotiques, qui prsentent un site electrophile, peuvent engendrer des effets toxiques suite une liaison avec des sites nuclophiles. La biotransformation implique une ou plusieurs ractions enzymatiques qui catalysent la conversion de la molcule trangre en donnant des formes drives chimiquement distinctes les unes des autres. Lintensit de la transformation chimique et le nombre de mtabolites forms dpend des espces vgtales et constitue la base de la tolrance aux polluants, de mme que la slection des herbicides dans les pratiques agricoles. Les produits de transformation sont gnralement moins toxiques et plus hydrophiles que les composs dorigine. Les ractions de transformation chimiques sont de deux types. Il y a les ractions de la phase 1 qui sont gnralement des ractions dhydrolyse ou doxydation et conduisent la forme active du polluant organique et les ractions de la phase II qui sont des ractions de conjugaison. Dans la phase I, les ractions dhydrolyse catalyses par des estrases et des amidases sont minoritaires par rapport aux ractions doxydation catalyses par le systme cytochrome P-450 localis au niveau du rticulum endoplasmique. Lexistence de plusieurs isoformes (plus de 60 gnes ont t identifis chez Arabidopsis) permet au systme dutiliser diffrents substrats et de catalyser un grand nombre de ractions. Certains, prsentant le groupement fonctionnel impliqu dans les ractions de la phase II ne ncessitent pas dactivation prliminaire Dans la phase II, les composs xnobiotiques ou les produits activs de la phase I sont inactivs par des liaisons covalentes avec des molcules endognes comme le glucose, le malonate, le glutathion, en formant des produits conjugus solubles en milieu aqueux. Contrairement la phase I qui peut donner naissance des mtabolites toxiques, les produits de la phase II ne sont pas toxiques. De ce fait, les enzymes qui catalysent les ractions de la phase II jouent un rle important dans le mcanisme de dtoxication. La compartimentation cellulaire (Phase III) des formes conjugues, produites par la phase II est assure par des transporteurs membranaires ATP dpendants. Aprs leur transfert dans la vacuole, les composs conjugus du glutathion sont soumis dautres ractions mtaboliques. Les carboxypeptidases peuvent catalyser la dgradation du glutathion et

librer la glycine. Cette premire tape est suivie par laction de la dipeptidase qui catalyse la libration de lacide glutamique. Il en rsulte la formation dun produit conjugu X-cystine. La voie mtabolique de ce compos est encore incertaine ; cependant certains travaux suggrent quaprs lefflux des composs lis la cystine, dautres ractions entrent en jeu pour les exporter au niveau de lapoplasme o ils peuvent se lier la lignine.

3.2. Phytodgradation ex-planta Les champignons et les bactries qui vivent au niveau de la rhizosphre utilisent les exsudats librs par les racines pour leur croissance et leur activit mtabolique, ce qui explique pourquoi leur nombre est deux quatre fois plus important dans cette rgion du sol. Comme les microorganismes peuvent galement dgrader les polluants, il nest pas tonnant de constater une acclration de la bioremdiation dans les sols recouverts dune vgtation par rapports aux sols dnuds. Certains composs phnoliques scrts par les racines sont utiliss en tant que co-mtabolites par les bactries dgradant des composs polychlorobenzoiques. En plus de la scrtion des composs organiques, les plantes peuvent galement librer dans le sol des enzymes capables de dgrader les polluants organiques les plus rcalcitrants. A titre dexemple, on peut citer la dgradation des explosifs (le trinitrotolune, le dinitromonoaminotolune et mononitrodiaminotolune) qui est catalyse par la nitrorductase.
Rcolte ou incorporation Squestration et Mtabolisme

Zn Cd Zn Zn Cd Zn

Zn Cd Cd Ni Cd Zn Cd Zn Zn Ni Cd Ni Cd Zn

Zn Cd Ni

Zn Cd Ni Cd Ni Zn Zn
Absorption racinaire

Ni

Cd

Cd Ni Zn

Squestration
Absorption racinaire

Dgradation au niveau de la rhizosphre

Incorporation dans lhumus

Arrive des contaminants dans le sol

Dgradation microbienne

Mtabolisme + Transport vers PA

CONCLUSION Paralllement la biodgradation, qui est un procd biologique qui fait appel aux microorganismes pour liminer les polluants organiques, lutilisation des plantes pour laccumulation des produits toxiques est une approche qui prend de limportance. En effet, une flore spontane et tolrante sinstalle toujours sur des sites miniers, des friches industrielles et des terrains contamins par des hydrocarbures que par des mtaux lourds. Pour ces derniers, il existe de nombreux bioindicateurs utiliss en prospection minire, comme les plantes hyperaccumulatrices. Ces plantes peuvent absorber des quantits leves de contaminants par leurs racines. Cest partir de ce constat que depuis quelques annes, se sont dveloppes des mthodes de dpollution utilisant les potentialits particulires vis--vis des polluants. Les plantes peuvent agir sur les composs minraux ou organiques de plusieurs faons, et ces modes vont tre lorigine de lusage que lon peut faire des plantes en fonction des objectifs atteindre et de la nature de polluant. On distingue ainsi la phytoextraction (la plante extrait le polluant du sol et le concentre dans ses tissus), la phytostabilisation (le chevelu racinaire de la plante bloque les polluants dans le sol et empche leur migration vers la nappe phratique), et la phytodgradation (les plantes et leur rhizosphre dgradent les molcules organiques prsentes dans le sol en composs plus simples. Les performances de la phytoremdiation ou plus particulirement la phytoextraction dpendent des limites des plantes utilises et plusieurs obstacles sopposent encore son dveloppement : (1) faible production de biomasse et croissance lente, (2) concentration des mtaux dans les racines au lieu de la partie arienne, (3) transfert des contaminants dans la chane alimentaire par les animaux et les insectes, et (4) temps requis pour labsorption des contaminants dun site et qui demande plusieurs cycles de culture. Il faudrait donc combiner les avantages respectifs des diffrentes plantes capable de bioremdiation. Les techniques de slection classique et la biotechnologie sont donc des outils indispensables pour amliorer des caractres comme la concentration des mtaux dans les tissus ariens, la production de biomasse, la morphologie de la plante, le dveloppement du systme racinaire et ladaptation au climat.