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AUTARQUIA ASSOCIADA UNIVERSIDADE DE SO PAULO

SNTESE DE HIDROXIAPATITA E SUA A P L I C A O COMO BIOMATERIAL

MAGALI DE CAMPOS V A L E N T E

T e s e apresentada como parte dos requisitos para obteno do Grau de D o u t o r e m C i n c i a s na r e a d e Tecnologia Nuclear-Aplicaes. Orientadora: Dra. A n a Helena de Almeida Bressani

So Paulo 1999

INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGTICAS E NUCLEARES Autarquia Associada Universidade de So Paulo

SNTESE DE fflDROXUiPATITA E SUA APLICAO COMO BIOMATERIAL

MAGALI DE CAMPOS VALENTE

Tese apresentada como parte dos requisitos para obteno do Grau de "Doutor em Cincias" na rea de Tecnologia Nuclear - Aplicaes

Orientadora: Dra. Ana Helena de Almeida Bressiani

SAO PAULO 1999

AGRADECIMENTOS

A Dra. Ana Helena de Almeida Bressiani, minha orientadora, pela confiana desde o inicio, pelos conhecimentos transmitidos, permanente colaborao e amizade.

Ao Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares, IPEN-CNEN/SP, fi)mentador de pesquisas, infra estrutura e cursos oferecidos.

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq, pelo apoio financeiro, atravs da bolsa de doutoramento.

A Universidade de Mogi das Cruzes pelo apoio recebido.

A Prof a Dra. Cecilia Amlia de Carvalho Zavaglia, por ter organizado cursos e palesfras de grande vaha para a comunidade cientfica, alm de ter doado o p de HAp importado, utilizado neste trabalho.

Ao Departamento de Materiais da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, pela presteza nos trabalhos de recobrimentos, em especial ao Prof. Dr. Carlos Prez Bergmann.

Dra. Pilar Seplveda, pela contribuio na execuo experimental de obteno da HAp porosa.

Aos Laboratorios de Microscopia Eletrnica de varredura, do Instituto de Geocincias/USP e do IPEN-SP, em particular ao Eng. Metalurgista Isaac Jamil Sayeg e Celso Vieira de Moraes, pelos bons resultados obtidos.

Ao Laboratrio de Caracterizao Tecnolgica, Escola Politcnica, pelas anlises de difratometria de raios X, coordenado pelo Prof. Dr. Henrique Khan.

Ao Departamento de Radiobiologa, pelos ensaios de citotoxicidade realizados, aos prestimos da Msc. Sizue Ota Rogero e Dr. a Olga Zazuco Higa.

Ao Instituto Adolfo Lutz, Seo de Culturas Celulares, pelos ensaios de citotoxicidade realizados, reazados por urea S. Cruz e Tamiko I. Ikeda.

Ao Laboratrio de AnUse Trmica do Instituto de Quimica da Universidade de So Paulo pelas anlises de espectroscopia de infravermelho, em particular ao Prof Dr. Jivaldo do Rosrio Matos.

Aos amigos e colaboradores. Valquiria de Campos, Rogrio Soares Lima, Antnio Takimi, Gehard e VoUcmar Ett, Alessandro Sapienza, Wilson Carlos da Silva, Carlos Eduardo Pinedo, Zlia Maria da Costa, Eliana C. S. Rigo, Daniel Moraes, pelas valiosas sugestes. Aos colegas da Diviso de Materiais Cermicos, pela amizade e incentivo.

Diviso de Oficinas do IPEN, em especial, ao Sr. Jos Carlos Sabino pela produo dos aparatos cientficos.

Ao pessoal da Biboteca do IPEN, pela cooperao que me permitiu navegar em busca de informaes cientficas.

Agradeo a minha super famha: Nstor, Valquiria e Isaac, Luisa, Walter e Aracy, Silvia, Walter Jorge e Sheila, pelo apoio e carinho recebido. Aos pequeninos sobrinhos, Catarine e Felipe, Paulina, Rafael, Bruno e Felipe, pelos momentos de alegria.

Aos meus pais, Luiz e Lourdes, Ao meu esposo, Wagner Companheiros em todos os momentos

tt

SNTESE DE HIDROXIAPATITA E SUA APLICAO COMO BIOMATERIAL

Magali de Campos Valente RESUMO

A HAp um biomaterial, aplicado como biocermica densa, porosa ou de revestimento, nas reas mdica e odontolgica. Este trabalho teve como objetivo contribuir na obteno da HAp na forma de um produto que possibilitasse as trs aphcaes. Foram estudados em escala de laboratrio quatro mtodos de sntese: cristalizao, sol-gel em meio aquoso, sol-gel em meio alcolico e neutralizao. Os mtodos, cristaHzao e neutralizao, que apresentaram os melhores resultados em termos de estabilidade trmica, foram reproduzidos em escala piloto. Em escala piloto, foram produzidos ps de HAp em sistema aberto e fechado, com atmosfera de nitrognio, para evitar a carbonatohidroxiapatita. Os ps foram utilizados como recobrimentos de ligas de titnio. A tcnica de deposio utizada foi a asperso trmica com chama plsmica e HVOF. Os resultados foram comparados com HAp disponvel comercialmente. Os recobrimentos obtidos apresentaram como fase

principal a HAp com boa adeso quatativa. Corpos cermicos porosos foram obtidos pelo mtodo gelcasting de espumas com a HAp obtida pelo mtodo de neutializao em atmosfera inerte. As principais tcnicas utilizadas na caracterizao dos ps, substratos metlicos, recobrimentos, corpos cermicos densos e porosos foram: espectroscopia de infravermelho, espectrometria com fonte de plasma induzido, rea superficial especfica, distribuio do tamanho de partculas, microscopia eletrnica de varredura, difratometria de raios X, medidas de rugosidade e ensaios de citotoxidade. A fase HAp foi detectada como majoritria em todas condies e os produtos obtidos no so citotxicos.

SYNTHESIS OF HYDROXYAPATITE FOR BIOMATERIAL APPLICATION

Magali de Campos Valente ABSTRACT

The HAp is a biomaterial, applied as a dense bioceramics, porous or coating, in the medical and odontological areas. This work had as main objective to be a contributions in the search for a product to four methods of syntheses were analyzed: crystallization, sol-gel in aqueous means, sol-gel in alcoholic means and neutralization. Crystallization and neutralization showed the best results for thermal spraymg stability, being thereafter reproduced in a pilot scale, in an open and closed system, with nitrogen atmosphere to avoid the formation of carbonatehydroxyapatite. The powders were used to obtain coating of titanium alloy. The technique of deposition engaged on this was one for thermal spraying with plasma and HVOF. The coatings were compared to the ones obtained with HAp available in the market. They showed as main phase the FEAp also had a good qualitative adherence. Porous ceramic bodies were obtained by gelcasting the foam with the HAp from the neutralization method in a inert atmosphere. The main techniques used m the powder characterization metalhc substrates, coatings, porous and dense ceramic bodies were: infrared absorption spectroscopy, induction coupled plasma, particle size distribution, surface roughness, scanning electron microscopy. X-ray dififractometry, infra-red specfroscopy. The HAp phase was detected as the majority in all conditions and results are no cytotoxic.

SUMARIO pagina

Agradecimentos Resumo Abstract

i i iv

I. Introduo II. Reviso bibliogrfica II. 1 Biomateriais 11.2 Tecido sseo 11.3 Implantes II.3.1 Implantes ortopdicos 11.4 Ligas de 11.5 Cermicas 11.6 Hidroxiapatita-HAp 11.6.1 Mtodos de obteno de hidroxiapatita titnio

1 6 6 7 10 13 17 18 19 23

11.6.2 Recobrimentos de implantes com HAp por asperso trmica 25 11.6.3 HVOF 11.6.4 Hidroxiapatita densa e porosa 28 29

III. Procedimento experimental III. 1 Sntese de hidroxiapatita em escala de laboratrio III. 1.1 Mtodo de cristalizao III. 1.2 Mtodo sol-gel III. 1.3 Mtodo da neutralizao 111.2 Teste de estabihdade da HAp 111.3 Obteno da hidroxiapatita em escala piloto 111.4 Obteno da hidroxiapatita porosa pelo mtodo gelcasting de espumas 111.5 Equipamentos de asperso trmica

30 31 31 32 34 35 35

37 38

111.5.1 Preparao dos substratos 111.5.2 Deposio por asperso trmica III.6 Teste de avaliao citotxica 111.6.1 Avaliao citotxica da HAp na forma de p pelo mtodo de supresso de colnias 111.6.1.1 Preparao dos extratos 111.6.1.2 Preparao das placas de cultura 111.6.2 Avaliao citotxica da HAp porosa 111.6.3 Avaliao citotxica dos substratos metlicos 111.6.4 Avaliao citotxica dos substratos pelo mtodo de difuso em gar

39 40 43

43 44 44 46 46

46

IV. Resultados e discusso

48

IV. 1 Caracterizao dos ps de HAp sintetizados em escala de laboratrio 48 IV. 2 Obteno de corpos monolticos de HAp 1V.3 Obteno da hidroxiapatita em escala piloto IV.4 Asperso trmica IV.4.1 Caracterizao dos ps destinados asperso trmica 54 58 67 67

IV.4.2 Avaliao citotxica dos ps utilizados na asperso trmica 71 IV.4.3 Caracterizao dos substratos metlicos IV.4.3.1 Avaliao citotxica dos substratos metlicos IV.4.4 Caracterizao dos recobrimentos IV.4.4.1 Avahao citotxica dos recobrimentos IV. 5 Obteno de corpos porosos de HAp 74 77 80 99 101

V. Concluses

105

Referncias bibliogrficas

107

/. Introduo

O que vida? Como responder com palavras a tal pergunta, se varias idias surgem na mente? Mas, a essa pergunta, o homem responde todos os dias, quando tenta melhorar as condies do meio em que vive. Essas condies vo desde atos mais simples como tomar banho ou organizar a mesa do escritrio, at os mais complexos, como transformar os materiais disponveis na natureza extramdo suas melhores propriedades e aplic-los em diversas fnahdades, sempre com o objetivo de gerar bem estar aos seres vivos. Um nvel ainda maior de complexidade atingido, quando certos materiais precisam ser utilizados dentro do que tem vida, para restaurar uma fimo original ou suprir uma necessidade do organismo, esses dispositivos que entram em contato com o que tem vida recebem o nome de implantes e o tecido que recebe o miplante chamado de tecido hospedeiro.

Os materiais empregados nessa rea recebem o nome de biomateriais [1]. Na utilizao dos biomateriais os principais problemas enfrentados so decorrentes s reaes de defesa do organismo aps a interao com o implante. Esses problemas esto sendo superados a partir do desenvolvimento de materiais especiais, que ao entrarem em contato com os tecidos vivos possuam caractersticas favorveis a sua aceitao pelo tecido hospedeiro [2, 3].

A diversidade de materiais e dispositivos implantveis, com aplicaes em praticamente todo corpo humano so apresentados na figura 1 [2].

I. Introduo

f o s s a orbial de silicone orelha de silicone articulao de titnio articulao de cotovelo^ titnio/plstico clipe para aneurisma (Jitnio)

lentes Irrtraoculares (polimero) nariz de silicone implantes dentarios articulacoes/ombros titinio/plstico

marcapasso

icao lem uso temporano

articulao de quadril ligas de titnio + polietileno + zircnia

brao artificial sinais eltricos

tubo de dialise enxertado pnis e testculos/silicone

fmur de ligas especiaispInosAnaterial polimrico _ abson/lvel ligamento artificial de joelho/cartjono

articulao ~ silicone/dedos

articulao de joelho titnio/)>olietileno

paraf usos metlicos fixa9ao/fraturas

ligas especiais tomozeloAlbia articulao silicone titnio para d e d o s ^ s

Figura 1. Dispositivos implantveis utilizados no corpo humano.

Os biomateriais podem ser compostos metlicos, polimricos e cermicos, desde que na condio de implante apresentem algumas das caractersticas: alta inrcia qumica; expectativa de vida longa; sistema de produo simples; resistncia a tenses mecnicas, e outras. Ao mesmo tempo os biomateriais no devem ter caractersticas como: sofrer modificaes fsico-qumicas durante esterilizao,

produzir radicais livres, ser cancergenos, incitar reaes inflamatras, sofrer desgaste superficial, fi)rmar frombos, sofrer modificaes fsicas na geometria da prtese depois de implantadas, apresentar falha por fadiga, e outras [2, 4].

Na ausncia de um nico material que supra algumas das exigncias citadas acima, toma-se necessrio combinar os materiais, explorando ao mximo o potencial fsico, qumico e biolgico de cada um.

Em fimo do tipo de resposta provocada a partir da interao do implante com o meio biolgico vivo (tecido hospedeiro) os biomateriais podem ser classificados em bioiuertes, biotolerantes e bioativos [2, 3].

Os bioinertes mantm suas propriedades fsicas e mecnicas durante a vida til do implante clnico. Esses materiais, possuem reatividade bioqumica mnima com o tecido hospedeiro sendo considerados estveis. Nessa categoria, enconframse os xidos cermicos como alumina (Al^O^), titania policristalina {ZrO^-lZP)
(TO2),

zircnia tetragonal

e os materiais carbonosos. Os materiais bioinertes so

usados tanto nas fimes de revestimento, como de sustentao mecnica, principalmente em ortopedia, como cabea de fmur em implantes de quadris. Estas aplicaes so possveis, uma vez que os materiais apresentam alta densidade e facilidade de polimento termoquimico, o que diminui o coeficiente de atrito entre a cabea de fmur cermica e o componente acetabular, normalmente de polietileno, quando comparados aos materiais metlicos [1, 3].

Os biotolerantes representados por metais e polmeros apresentam reaes bioqumicas na interao com o tecido vivo. Embora algumas dessas reaes sejam

nocivas, so toleradas pelo meio biolgico. Esses materiais so utilizados em funo das propriedades mecnicas de sustentao. Os metais mais usados so o ao inoxidvel, ligas de Vitalium (Cr-Co) e ligas de titnio. Usuahnente, emprega-se o polimetilmetacrilato (PMMA) como polmero biotolerante [1,3].

Os bioativos so aceitos pelo tecido hospedeiro e no produzem reaes txicas ou nocivas. Esses materiais so divididos em dois grupos, os reabsorvveis e os de superfcie ativa. As caractersticas dos materiais reabsorvveis possibilitam aplicaes de preenchimento de cavidades sseas, servindo como suporte e condutor sseo. Esses materiais quando implantados so absorvidos e

transformados naturalmente em novo tecido sseo. Diante destas condies, os materiais reabsorvveis possuem tempo limitado de atuao. O sulfato de clcio
(CaS04)n.H20 e o tricalciofosfato (TCP), Ca3(PO^)2 so exemplos de materiais

reabsorvveis.

Os materiais

de

superfcie

ativa no

so

absorvidos,

mas

desenvolvem ligaes qumicas com o tecido vivo. Estas ligaes auxiliam no processo de unio e fixao da prtese. Fazem parte do grupo de materiais bioativos: o biovidro, a hidroxiapatita (HAp), CajQ(P04)^(OH)2 e a fluorapatita

(FHAp), FJQ(P04)3(OH). Embora as reaes do material com o meio vivo sejam bastante conhecidas, apresentam elevada complexidade [1, 2, 4, 6].

As propriedades da HAp, entre as cermicas bioativas, conferem grandes atrativos para aplicaes cirrgicas. Entretanto, sua utilizao para fins ortopdicos limitada devido a sua baixa resistncia mecnica, especialmente sob tenso. Uma das formas encontradas para superar esta deficincia mecnica consiste no recobrimento de finas camadas de HAp sobre prteses metlicas [2, 7, 8].

O titnio, embora no sofra ataques corrosivos acentuados, possui baixa resistncia mecnica que, quando comparada as das hgas de titnio, inviabiliza sua utilizao ortopdica. Uma das propriedades interessantes desse material sua afinidade com o tecido sseo, possibilitando a fixao mecnica atravs do crescimento sseo adjacente, sem a necessidade do cimento ortopdico [9, 10].

1. Introduo

A liga T-6A1-4V destaca-se em aplicaes cirrgicas buco-maxo-faciais, ortopdicas e cardiovasculares. Em implantes de natureza ortopdica o osso poder ser substitudo ou escorado com este material metlico. A superioridade desta liga decorre das combinaes das propriedades qumicas e fsicas como: maior resistncia a corroso quando comparados a outras ligas e densidade prximos aos do tecido sseo [11, 12].

O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de metodologia de sntese de HAp e sua aplicao como cermica densa, porosa e em revestimentos de substratos metlicos. Optou-se pela hidroxiapatita por ter composio qumica similar aos ossos bem como apresentar propriedades bioativas. Como substratos methcos foram escolhidos titnio pm"o e liga T-6A1-4V. A tcnica de recobrimentos por asperso trmica uma das mais favorveis em termos de propriedades mecnicas, resistncia a corroso em meio biolgico e maior reteno entre

recobrimento/substrato. A combinao de Ti e T-6A1-4V com HAp, muito empregada em aplicaes ortopdicas e odontolgicas.

O programa de Tese foi definido para se obter a biocermica, HAp com alto teor de pureza, primeiramente em escala de laboratrio e depois, piloto. O material sintetizado foi processado na forma de cermica densa, porosa e de recobrimento. Optou-se pelo tipo de recobrimento utilizado comercialmente, asperso trmica. Os recobrimentos foram comparados aos obtidos com a HAp comercial utilizada em miplantes de natureza ortopdica.

II. 1 Biomateriais

Os materiais sempre fizeram parte do nosso cotidiano, inclusive em situaes mdicas, tem-se evidncias arqueolgicas de que h milnios o homem j os utilizava tentando substituir partes do corpo humano. O avano nessa rea foi prejudicado at 1860 principahnente por falta de tcnicas de assepsia que deveriam ser praticadas nos procedimentos cirrgicos [13].

Os dois grandes marcos recentes no desenvolvimento dos biomateriais foram as duas Grandes Guerras. A necessidade de se evitar principalmente a amputao de membros que haviam perdido as funes fez com que o homem utilizasse praticamente todos os elementos qumicos disponveis. Os danos provocados a sade dos pacientes, por muitos dos materiais utilizados nos atos cirrgicos, foram considerados catastrficos. Esses resultados fizeram com que o Comit Americano para o Tratamento de Fraturas do Colgio Americano de Cirurgies recomendasse formalmente em 1947 a utihzao de aos inoxidveis. Aps esse perodo, alm dos metais, outros materiais considerados adequados foram desenvolvidos como os polmeros, cermicos e compsitos [13, 14].

O material a ser utilizado na rea mdica e odontolgica deve desempenhar a fimo a que se destina e ser aceito pelo corpo do hospedeiro. Um biomaterial pode ser definido como um material no natural utilizado em dispositivo mdico, com inteno de interagir com sistemas biolgicos" [15]. Segundo Park [16],

"biomateriais so tudo que, de modo contnuo ou intermitente, entra em contato com fluidos corpreos, mesmo que esteja locahzado fora do corpo". Estas definies elucidam que os biomateriais interagem diretamente com o meio biolgico vivo, evidenciando que esta interao entre o material e o tecido vivo um importante fator no tratamento.

A capacidade de um material funcionar com uma resposta apropriada do hospedeiro em uma aplicao especfica chamada de biocompatibilidade. Quando

os materiais utilizados como implantes no so biocompatveis, o organismo vivo isola o dispositivo com a formao de uma camada aderente de tecido fibroso pouco vascularizado de espessura varivel; quanto maior a espessura menor a aceitao, [17, 18, 19].

As situaes mais comuns que requerem a utilizao de biomateriais vo desde problemas psicolgicos e estticos at extrao de tumores, administrao de drogas de maneira controlada, enfermidades que ocasionam danos irreversveis, defeitos congnitos com deficincias fimcionais e atrofia com perda gradual de tecidos. Casos clnicos como esses so satisfeitos com biomateriais que

desempenhem a fimo desejada e, para isto necessrio que o mesmo possua um conjunto de propriedades especficas, isto , seja biofimcional. Algumas das propriedades que asseguram a biofimcionalidade so: tiansmisso de cargas e distribuio de tenses, articulao com baixo atrito, preenchimento de cavidades, gerao e aplicao de estmulos eltricos, tiansmisso de sons, transporte e emisso de drogas, guia para regenerao de tecidos etc. [20, 21].

II.2 Tecido sseo

Na maioria dos vertebrados, o esqueleto no apenas imi conjunto de peas bem articuladas entre si, mas tambm um banco dinmico de reservas minerais no qual o organismo armazena 90% de clcio na forma de hidroxiapatita e o libera quando necessrio. O ion clcio importante para o fimcionamento de diversos sistemas enzimticos, inclusive os responsveis pela contrao muscular e pela transmisso de mipulso nervoso, coagulao do sangue e adeso celular [22, 23].

O tecido sseo uma variedade do tecido conjuntivo e constitui o esqueleto sendo um dos mais resistentes e rigidos do corpo humano. Serve de suporte para as partes moles e protege rgos vitais, como os contidos nas caixas cranianas e torcica e no canal raquidiano. Aloja e protege a medula ssea, formadora das

clulas do sangue. Alm dessas funes, proporciona o apoio aos msculos esquelticos, transformando suas traes em movimentos teis. Os ossos longos constituem sistemas de alavancas que ampliam as foras geradas na contrao muscular [24, 25].

O tecido sseo formado por clulas e um material intercelular calcificado, chamado de matriz. As clulas so os ostecitos, osteoblastos e osteoclastos. Os ostecitos situam-se em cavidades ou lacunas no interior da matriz e so essenciais para a manuteno da matriz minerahzada do osso. Sua morte seguida por reabsoro da matriz. Os osteoblastos so os produtores da parte orgnica da matriz, colgeno e glicoproteinas. Os osteoclastos, so clulas gigantes multinucleadas, relacionadas com a reabsoro do tecido sseo e que participam dos processos de remodelao dos ossos [23, 24, 26, 27].

A parte morgnica representa cerca de 50% em peso da matriz ssea que varia dependendo da funo e do tipo de osso. O osso cortical composto aproximadamente por 70% em peso de constitumtes minerais e 30% em peso de orgnicos. Os ons mais encontrados so os fosfatos e clcio. H tambm ons bicarbonatos, magnsio, potssio, sdio e citratos, em pequenas quantidades. O citrato responsvel pela captura de ons clcio formando um complexo que serve de base formao da HAp do osso [28, 29].

Clcio e fosfato formam cristais que apresentam a estrutura da hidroxiapatita pouco cristalma. Por microscopia eletinica, os cristais de HAp aparecem sob a forma de agulhas ou tabletes alongados, medindo 40x25x3nm^, que se alinham ao longo das fibras colgenas ocupando espaos pr-determinados. A rede cristalina da HAp pode sofrer adsoro ou ter seus constituintes substitudos por ons como estincio, zinco, magnsio, fluoretos, hidroxilas e, outios ons comuns. Os ons que formam a superficie dos cristais de HAp so hidratados formando uma esfera de hidratao que facilita a tioca de ons entte o cristal e o fluido intersticial [26, 30].

A parte orgnica da matriz formada

por

fibras

colgenas,

com

aproximadamente 95%, e por substncia fimdamental amorfa 5%, que contm mucopolissacaiides cidos e neutros associados a protenas. As composies e propriedades das partes orgnicas e inorgnicas sofrem diferenciao com a idade, sexo, tipo de tecido, dieta alimentar e hbitos saudveis [30, 31].

Quanto as propriedades mecnica, apesar da resistncia s tenses e da dureza do osso, o tecido sseo muito plstico, sendo capaz de remodelar sua estrutura interna em resposta a modificaes nas foras a que esto submetidos normalmente. Essas propriedades so possveis porque o osso um material compsito. A HAp ssea resistente compresso, com baixa resistncia sob trao e o mdulo de elasticidade elevado. O colgeno, por outio lado tem limite de resistncia a frao elevado, mas baixo mdulo de elasticidade. A combinao resulta em um material compsito com alta resistncia a frao e alto mdulo de elasticidade, leve e bastante flexvel. As trincas nos cristais de HAp no se propagam nas fibras adjacentes de colgeno, estas podem ser deformadas, mas no necessariamente rompidas. Os valores das propriedades mecnicas do osso so apresentados na tabela 1 [31, 32, 33].

O tecido sseo apresenta duas variedades, o osso esponjoso e o cortical (denso). Ambos existem em todos os ossos, mas a quantidade de cada um depende da sohcitao a uma determinada fimo, isto , as fraes volumtricas de cada constituinte geram propriedades mecnicas distintas [32, 33].

Tabela 1 - Propriedades mecnicas do osso cortical humano.

propriedade resistncia frao resistncia compresso resistncia ao cisalhamento mdulo de elasticidade

'>'^\^V''-~ t '

valor 133 MPa 193 MPa 68 MPa 17GPa

f~i ' o i -

As propriedades desejadas do osso so muito dependentes de sua vitalidade. O osso quando vivo sofre constante remodelamento estrutural para se adaptar s mudanas nas tenses a que submetido. O remodelamento uma importante caracteristica do tecido sseo que continuamente repara pequenas danificaes. O osso induz o remodelamento dependendo do tipo e do grau de tenso aplicado. Embora haja a presena de uma resposta adaptada, os meios mecnicos que a induzem no so totalmente claros. Uma hiptese afrativa que as mesmas cargas que defr)rmam os ossos tambm servem de estmulo, de fr)rma que a quantidade de osso presente, juntamente com sua arquitetura, so influenciados por muitas foras, que so necessrias a sua resistncia [31,34].

II.3 Implantes

A implantao de dispositivos no corpo humano uma prtica de longa data, marcada principalmente at 1875 pela utilizao de metais puros como ouro, prata e cobre. As ligas metlicas tomaram-se mais utilizadas enfre 1875 e 1925 coincidindo com avanos nas tcnicas cfrrgicas. O perodo posteror a 1925 pode ser considerado como a era modema dos biomateriais metlicos. Hoje o nmero de biomateriais utilizados cresceu muito, e como conseqncia, as reas mdicas e odontolgicas tm sua disposio inmeros dispositivos implantveis, que variam na forma, tamanho, tipo de material e preo. A grande diversidade obtida em termos de materiais implantveis s foi possvel a partir da interao e cooperao de profissionais especializados de diferentes reas. Muitos problemas j foram

superados ou esto sendo resolvidos e outios ainda no podem ser solucionados com a tecnologia disponvel [35, 36].

Os fatores que determinam o sucesso do implante e influenciam na resposta do hospedeiro, aps o ato cirrgico, esto relacionados diretamente ao material, cirurgio e paciente[2].

Em relao ao material, deve-se ter um controle rigoroso durante o processamento para que a composio qumica seja de alto teor de pineza, minimizando danos teciduais. Na utilizao de material particulado, na faixa de 1 a 4 pm, estimula-se a fagocitose e a formao de macrfagos, isto , as clulas identificam as partculas como material estranho e tentam elimin-las, incitando reaes inflamatrias independente do biomaterial [19].

A atividade celular tambm afetada pelo formato das partculas, o esfrico preferido ao pontiagudo por evitar leses no citoplasma das clulas [19, 26].

Um outio tipo de atividade celular o aparecimento de uma camada de tecido fibroso que encapsula e isola o implante do tecido adjacente. Este comportamento prejudicial ao sucesso do trabalho, pois perde-se a possibilidade de fixao do implante no tecido hospedeiro, e ocorre principalmente nas interfaces com materiais bioinertes ou biotolerantes [19, 26].

contribuio do cirurgio est relacionada, principalmente a observao e escolha de tcnicas cirrgicas de sucesso estatistico, alm da conservao do acabamento superficial do implante durante a manipulao e colocao do mesmo.

Em relao ao paciente, os fatores mais importantes e inerentes so idade, sexo e raa, outios como hbitos alimentares tambm mfluenciam. Caso o paciente seja portador de doenas crnicas ou degenerativas ser mais difcil de se obter o sucesso, tambm imprescindvel que se d o acompanhamento ps-operatrio e o seguimento na reabihtao.

Detenninados tipos de implantes proporcionam boas

respostas no tecido

hospedeiro porque tm a capacidade de interagir diretamente com o osso sem promover a formao do tecido fibroso interposto, constitudo de fibroblastos. Esse comportamento foi postulado em 1969 por Branemark e colaboradores. O termo osseointegrao foi usado pela primeira vez em 1977 em seu vro "Implantes

osseointegrados" [17]. Em 1985, o mesmo autor sugeriu a seguinte definio: "A osseointegrao definida como uma conexo fimcional e estrutural direta entre o osso vivo e organizado e a superfcie de um implante submetido a foras". Esta definio criticada por Albrektsson e Sennerby, por no definir o mVel de resoluo do contato direto e no incluir uma estimativa quantificada da proporo mnima de contato osso-implante. O termo osseointegrao pode ser defmido como o "contato estabelecido entre o osso normal e remodelado e a superfcie do implante sem a interposio de tecido conectivo no sseo, a nvel de microscopia ptica" [35]. Os implantes base de titnio e suas ligas so os que tm apresentado maior porcentagem de sucesso de casos de osseointegrao [37, 38].

A utilizao de implantes metlicos difimde-se dia a dia, por estarem cumprindo o requisito de sobrevida, proporcionando ao paciente maiores intervalos sem interveno cirrgica. Esse comportamento deve-se s propriedades fisicoqumicas, propriedades mecnicas, e compatibilidade com o ambiente biolgico. O periodo de sobrevida do implante deve ser monitorado constantemente de forma que se avaliem possveis alteraes qumicas nos tecidos e a formao de neoplasias. Novas ligas e acabamentos superficiais tm melhorado a resistncia corroso, geralmente associada s condies de solicitao mecnica, que um dos fatores responsveis pelo grande nmero de falhas mecnicas [37, 38].

Em fimo das aplicaes e dos comportamentos celulares citados, os biomateriais para implantes devem ser selecionados de acordo com a

biocompatibilidade e biofimcionalidade. Os implantes selecionados devem manter as propriedades fsicas e qumicas durante e aps a esterilizao.

A esterilizao pode ser feita principalmente pelo aumento da temperatura (estufa seca ou a vapor), por produtos qumicos (xido de etileno) e por radiao gama. Os materiais metlicos e cermicos de interesse como biomaterial no sofrem alteraes em temperaturas na faixa de 160 a 190C para a esterilizao a seco, que o mtodo mais simples e econmico. Os polmeros, mesmo na utilizao de vapor

(5SA0 KAGOK/il CE E N E R G I A N U C I E A R / S F

IPfc

II Reviso Bibliogrfica

13

em temperatm-as mais baixas, na faixa de 120 a 135C, sofrem mudanas nas suas propriedades, restando a utilizao de produtos qumicos ou radiao gama, que podem gerar ao txica ou degradante [2, 39, 40, 41, 42].

II.3.1 Implantes ortopdicos

Os implantes de natureza ortopdica utilizados em artroplastia (substituio de articulaes) tem maior complexidade geomtrica do que os implantes odontolgicos, devido a dinmica dos movimentos. A preparao do leito sseo que recebe o implante tambm mais bem instrumentado (preparado). Os objetivos da substituio articular total so de eliminar ou reduzir a dor, corrigir deformidades, restabelecer a fimo e prevenir ou melhorar os efeitos dolorosos secundrios em articulaes adjacentes [2, 4].

As cargas que atuam sobre implantes ortopdicos, de um modo geral, so bastante altas e variam em fimo do tipo de implante e da atividade fsica do paciente. Estudos demostiam que a cabea do fmur suporta em mdia 2,5 vezes o peso do corpo, podendo chegar a valores prximos de 4,9. Uma pessoa com atividade fsica normal (um no ateta) d cerca de 2,5 milhes de passos por ano. Essas sohcitaes no implante de quadril caracterizam uma situao tpica de solicitao fadiga. As propriedades mecnicas mais importantes para aplicaes ortopdicas so resistncia mecnicas tiao, compresso e flexo-compresso.

Oufra propriedade mecnica importante o mdulo de elasticidade. O interessante ter materiais que tenham mdulo de elasticidade prximos ao tecido sseo. Na tabela 2, so apresentados valores do mdulo de elasticidade para alguns materiais [2, 42].

II Remo Bibliogrfica

1^

Tabela 2 - Mdulo de elasticidade de diversos materiais utilizados em implantes e tecidos naturais. Material ao inox 316 L liga Co-Cr fimdida titnio T6A14V
AI2O3

Zr02 ZrOs-YsOs osso cortical osso esponjoso dentina esmalte dentrio Hidroxiapatita sinttica

Mdulo de Elasticidade GPa 200 248 110 124 365 200 205 3,8-25 0,7-4 18,2 82,4 110-279

O implante de quadril consiste dos componentes: acetabular, implantado dentro do quadril, e femoral, implantado dentro do fmur . H vrios modelos projetados, que variam em geometria para maximizar a transferncia de tenso para a haste femoral rodeada com osso. O implante de quadril sofre solicitao mecnica imediatamente aps a cirurgia. O osso da interface fraumatizado sofre um

remodelamento e passa a responder s foras durante o andar; no h um estgio de repouso para o osso se regenerar, como acontece nos implantes dentrios. Os requisitos necessrios para que ocorra a osseointegrao so rigorosos e durante os primeiros meses o paciente deve minimizar a subida de escadas e levantar-se de cadeira, especialmente na utilizao de implantes com haste curvada [34]. O fmur e a prtese total de quadril utilizada em artroplastia so apresentados na figura 2.

Cimento Componente AcetaDuiar Cabea do componente femoral Colo do componente femoral

Cimento Haste do componente femoral

Figura 2 - Esquema de prtese total de quadril cimentada.

Charley iniciou a nova era das artroplastias de substituio com a introduo de componente femoral metlico e o acetbulo de polietileno de alta densidade, fixados com cimento acrlico. A reao de polimerizao do cimento acrlico exotrmica, necrosando as clulas adjacentes e provocando inflamaes, como acontece com o polimetilmetacrilato (PMMA). A principal vantagem na utilizao desse material a fixao imediata do implante dentro do osso. Embora os resultados iniciais fossem animadores, com o passar dos anos, surgiram

complicaes, como a soltura do implante, criando novos desafios a serem enfi-entados. A perda da fixao dos implantes preocupante, principalmente em pacientes jovens, submetidos artroplastia total, uma vez que so candidatos em potencial a mais de uma artroplastia de reviso durante sua existncia. No final da dcada de 70, iniciou-se a utilizao de artroplastia no cimentada, visando a fixao biolgica dos implantes, que requeriam basicamente parmetros

biocermicos, alta preciso cirrgica e acurada preparao do leito sseo [36].

Em artroplastia de quadril, o nvel de solicitao mecnica que as ligas metlicas empregadas suportam no foram ainda superadas por nenhum outro material. Em contrapartida, a osseointegrao mais bem conseguida com materiais bioativos. A natureza desse tipo de implante necessita da bioatividade da cermica e
OWiSSAO
NAC;GMAL

ti: EMERGIA ?aJCLEAH/SP

iPfeA

das propriedades mecnicas do metal. A combinao dessas propriedades melhor explorada em implantes de materiais compsitos ou de metais recobertos por materiais bioativos [6, 43].

Os compsitos utilizados nessa rea so constituidos de matriz bioinerte ou biotolerante e material bioativo disperso, e os materiais recobertos so bioinertes ou biotolerantes com recobrimento de material bioativo. Para os materiais compsitos, embora sejam de fcil obteno, a falta de unio interfacial entre cada constituinte gera falhas diante das solicitaes mecnicas, e a superfcie de interface com o tecido hospedeiro apresenta resposta tecidual diferenciada para cada constituinte [8, 43, 44].

O recobrimento de materiais bioinertes ou biotolerantes com materiais bioativos permite a combinao de propriedades mecnicas e bioativas. Os principais mtodos de deposio utilizados so: on sputtering, sol-gel, As

recobrimento eletroltico, recobrimento biomimtico e asperso trmica.

principais dificuldades enfrentadas referem-se adeso da camada bioativa ao subsfrato. O mtodo de deposio por asperso trmica o nico utilizado comercialmente. A combinao desses materiais oferece resultados interessantes por possibilitar, ao mesmo tempo, a retomada parcial ou total da marcha e a recuperao mais rpida do tecido sseo localizado por meio da osseointegrao aps cirurgia [10, 45, 46, 47].

II.4 Ligas de titnio

O titnio e suas ligas so considerados materiais biocompativeis e tem sido utilizados com sucesso em implantes odontolgicos e ortopdicos. Vrios estudos tem demonsfrado que o titnio forma um contato ntimo com o tecido sseo. O titnio e suas ligas apresentam este tipo de comportamento em fimo da camada passivante que se forma em soluo aquosa. O filme xido formado estvel em ambiente fisiolgico. Este material possibilita a fixao mecnica afravs do

crescimento sseo adjacente, sem a necessidade do cimento ortopdico. Esta principal vantagem comparada utilizao de outras ligas como o ao inoxidvel 316-L e as ligas de Cr-Co [37, 42, 48, 49,].

O titnio puro tem boa resistncia corroso, porm devido baixa resistncia mecnica, sua utilizao restrita a locais onde as solicitaes mecnicas so baixas [10, 37, 42].

Na rea mdica, o titnio puro foi utilizado pela primeira vez na dcada de 50; a liga T-6A1-4V no final da dcada de 70; a liga Ti-6Al-2,5Fe em 1980 e a liga Ti-6Al-7Nb foi utilizada em 1986 em implantes totais de quadril [37, 50].

As ligas de titnio combinam as propriedades mecnicas com resistncia corroso, alm de apresentarem peso especfico prximos ao do osso. A liga mais conhecida a liga T-6A1-4V, desenvolvida inicialmente para aplicaes em aeronutica. Uma das vantagens das ligas de titnio apresentar mdulo de elasticidade inferior ao das outras ligas utizadas em implantes (tabela 2). A temperatura ambiente, a liga T-6A1-4V consiste de uma mistura de duas fases alotrpicas: a fase a, hexagonal compacta, estabilizada pelo alumnio e a fase P, cbica de corpo centrado, estabilizada pelo vanadio. Na necessidade de implantes de natureza ortopdica, o osso poder ser substitudo ou escorado com este material metlico. Os poucos casos reportados na literatura de falhas por fadiga em hastes femorais de T-6A1-4V forjado so atribudos forma do implante e defeitos na fabricao. Destaca-se em aplicaes cirrgicas buco-maxilo-faciais, ortopdicas e cardiovasculares [42, 49, 50, 51, 52, 53].

II.5 Cermicas

Materiais

cermicos

so

largamente

utilizados

em

implantes

por

apresentarem aspectos como, alta resistncia compresso, propriedades anti.tiSSA

corrosivas e por serem bioinertes. As principais cermicas utizadas em implantes ortopdicos so alumina, zircnia, biovidros e hidroxiapatita [54].

A alumina (AI2O3) oferece uma vantagem principal sobre os metais e polmeros: baixa taxa de desgaste. E com isso, h uma baixa concentrao de partculas desgastadas (fragmentos) ao redor do tecido. A alumina para ser utilizada em implantes cirrgicos deve apresentar pequeno tamanho de gro, alta densidade relativa e alto teor de pureza. Essas exigncias precisam ser observadas criteriosamente durante o processo de fabricao [2, 54].

A zircnia (Zr02) estabihzada nas fases tefragonal e cbica um material qualificado para implantes de sustentao. Apresenta vantagens, em relao alumina, por possuir maiores resistncia fratura e tenacidade. A zircnia gera um certo nvel de radiao gama proveniente de pequenos fracos de trio, que no so completamente eliminados pelas tcnicas qumicas de purificao da matria-prima. Essa radiao embora seja pequena e mofensiva proporciona desconfiana da classe mdica e dos pacientes [2, 3, 54].

Os vidros de composio prxima a 4 5 % de SO2, 24,5% de Na20, 24,5% de CaO e 6% de P2O5 so chamados de biovidros e tm a capacidade de formar ligaes qumicas estveis com o osso adjacente. Estes materiais so mais utilizados em prteses de ouvido mdio e implantes ortodnticos, por apresentarem resistncia mecnica insuficiente para prteses de natureza ortopdica [2, 4, 5].

II.6 Hidroxiapatita-HAp

A hidroxiapatita utilizada na rea mdica e odontolgica como material de revestimento de implantes methcos ou no preenchimento de cavidades sseas. As aphcaes incluem bolsas periodnticas ou fraturas onde o

preenchimento necessrio, permitindo a partir da osseointegrao a reestruturao

II Reviso Bibliogrfica

19

ssea local. Parafusos, aplicados em implantes dentrios e ortopdicos, revestidos com HAp, apresentam torque de remoo significativamente maior do que os de titnio sem revestimento. A HAp tambm pode ser utilizada em implantes de ouvido mdio, formando um selo contra bactrias [2, 6, 55, 56, 57].

Apatita um termo utilizado para designar uma famlia de compostos com estrutura similar [58]. O grupo das apatitas compreende espcies de frmula geral R5Y(X04)3 = (RY) (X04)3, onde R = Ca, Mg, Pb e Mn; Y= F, Cl, Br e OH e X= P, As e V. Apatitas: (CaF) Ca4(P04)3 - fluorapatita; (CaCl) Ca4(P04)3 -cloroapatita; (CaOH) Ca4(P04)3 -hidroxiapatita [56, 59].

Na hidroxiapatita, o fsforo cercado por quatro tomos de oxignio situados nos vrtices de um tetraedro (figura 3). A unidade monomrica ou tetraedro simples (P04)^" chamada de ortofosfato, as cadeias simples P-O-P so polifosfatos e os anis so metafosfatos [2, 59].

Apatite

yXy

Figura 3 - Estrutura cristalina da apatita [Caio(P04)6(X)2]; X = OH, F, Cl e Br.

O diagrama de fase binario apresenta as fases possveis da HAp em condio de equilbrio. A HAp representada como um composto estequiomtrico: tetracalciofosfato, com frmula qumica de tricalciofosfato, com a frmula qumica de
C4P2O9

e designada como e designada como

"C4P", "C3P".

e A

Ca3(P04)2

regio de interesse est entre os dois compostos estequiomtricos. Em presso parcial de gua zero, a hidroxiapatita no estvel. A combinao de

tetracalciofosfato e tricalciofosfato existe em alta temperatura e permanece em uma constante composio de fase em baixa temperatura. Somente a estrutura do tricalciofosfato pode mudar durante o resfriamento (figura 4) [2, 6, 56].

1700 -

1600

1500 -

1400 -

1300 -

1200 70

66

C^P

ApSCgP

50

<-CaO (%)

Figura 4 - Diagrama de fase parcial do sistema CaO/P205 em alta temperatura (C no eixo vertical). Presso de vapor de gua = 500mmHg.

A razo entre o xido catinico (CaO) e o xido aninico (P2O5) determina o tipo de fosfato de acordo com a tabela 3.

Tabela 3 - Razo estabelecida entre CaO e P2O5.

Razo entre xidos R =0 0<R<] R =1 1<R<2 R =2 2<R<3 R =3 R>3

Nomes Pentxido de fsforo ultrafosfatos metafosfatos polifosfatos Pirofosfatos Misira de piro e ortofosfatos ortofosfatos Ortofosfato e xido do metal

Quando hidrxido de clcio e cido ortofosfrico so misturados, muito difcil evitar que no fosfato de clcio resultante sejam obtidos tambm o hidrxido e cidos livres. Como o fosfato de clcio bastante msolvel, esta reao em geral se completa. possvel cristalizar os ortofosfatos de monoclcio e de diclcio, a partir de soluo aquosa, porm isso no ocorre para o ortofosfato de triclcio, j que nas condies em que seria esperado obt-lo, apenas a hidroxiapatita produzida [2].

A forma alfa do ortofosfato de clcio obtida termicamente acima de 1100C e a forma beta, abaixo desta temperatura. Como a transio entre as duas formas lenta, ambas podem ser observadas temperatura ambiente.

A hidroxiapatita

representada

pelas

frmulas:

Caio(P04)6(OH)2

Ca5(P04)30H, forma simplificada. A HAp de estrutura hexagonal apresenta clula unitria com dimenses de a o = 0,9432 nm e C o = 0,6881 nm, pertencente ao grupo espacial Ps/m. O on hidroxila pode ser substitudo pelo fluoreto aumentando a estabihdade da estrutura [2].

A razo Ca/P da hidroxiapatita estequiomtrica estabelecida por difrao de raios X e de neutrons de 1,67, no entanto as hidroxiapatitas deficientes em clcio so as de maior mteresse biolgico, porque a razo Ca/P no osso mais prxima de 1,5 [2].

A HAp ssea no estequiomtrica, sendo deficiente em clcio em at 10%. O balano eletrnico das cargas pode ser obtido pela ausncia de grupos hidroxilas (OH) ou alternativamente pela presena do anion hidrogenofi)sfato ( H P O / ) no lugar do P O / ' . O clcio pode tambm ser substitudo, principahnente por cations de magnesio, sdio e estroncio. A hidroxila pode ser substituda por anions como carbonato, ortoft)sfato, fluoreto ou cloreto. A anlise qumica do osso apresenta composio de 4 a 6% de carbonato, 0,9% de citiato, 0,5% de magnesio, 0,7% de sdio e tiaos de flor, cloro, potssio, estincio e outios ons metlicos [2].

A HAp sinttica com carbonato substitudo sofre tenso na rede, o que explica o aumento da taxa de dissoluo no sistema "/ vitr" quando o COg^' est presente. Esta rede mais representativa para ossos, que tambm tm muitos outios elementos substitudos na estrutura [54, 60, 61].

A HAp sinttica um dos materiais mais utilizados com sucesso em implantes por fi)rmar hgaes qumicas com a HAp ssea, promovendo a osseointegrao. Essas ligaes qumicas de natureza covalente possibihtam interface tecido vivo/implante suportar esforos mecnicos significativos, alm de estimular o crescimento sseo [56, 62, 63].

II.6.1 Mtodos de obteno de hidroxiapatita

A hidroxiapatita pode ser sintetizada por diferentes mtodos: aquoso, seco e hidrotermal, de acordo com as seguintes reaes [6, 64].

II.6.1.1 Mtodo aquoso

O mtodo aquoso produz HAp por duas reaes principais. Estas reaes de obteno (a e b) so conhecidas como mtodo por precipitao e neutrahzao:

Ca (N03)2 + ( N H 4 ) 2 H P 0 4 ^ Caio(P04)6 (OH)2 Ca(OH)2 + H3P04^Caio(P04)6(OH)2

(8<pH< 12) (pH^S) (b)

(a)

O mtodo de sntese por sol-gel produz partculas pequenas de HAp. A reao pode ser uma variao das reaes (a) e (b) em meio alcohco ou reaes com alcxidos do metal [6, 45, 46, 65].

A HAp obtida por precipitao utiliza sais de clcio, nitrato ou cloreto de clcio com o hidrogenofosfato de amonio em pH elevado, ajustado com hidrxido de amonio concentrado. A reao ocorre a temperatura de 90C. Este mtodo produz HAp com bom rendimento de acordo com a reao (c). O produto obtido homogneo [33, 34]:

10Ca(NO3)2

+ 6 ( N H 4 ) 2 H P 0 4 + I 4 N H 4 O H ^ C a , o ( P 0 4 ) 6 {OW^ + IONH4NO3 + 6H2O (c)

A desvantagem do mtodo est na necessidade de um grande nmero de lavagens do precipitado com gua para se eliminar o nitrato de amonio [64].

A HAp obtida por neutralizao a partir da reao do cido ortofosfrico, em soluo com uma suspenso de hidrxido de clcio. Por este mtodo, produz-se HAp com bom rendimento de acordo com a reao [64]:

10Ca(OH)2 + 6 H 3 P O 4 ^ Caio(OH)2 (P04)6

I8H2O

(d)

A principal vantagem do mtodo a formao de um produto com alto teor de pureza, j que so obtidos apenas HAp e gua. Como a reao ocorre em

temperatura ambiente, a utilizao de reatores de ao inoxidvel pode ser eliminada, utilizando-se outros materiais menos txicos como polmeros e vidros [66, 67, 68].

II.6.1.2 Mtodo seco

A reao por mtodo seco, ocorre no estado slido e produz HAp por duas reaes principais: CaPzOy +CaC03 ^ Caio (P04)6(OH)2 Ca(P04)2 +CaC03 -> Caio (P04)6(OH)2 (1200C e vapor de gua) (e) (1200C e vapor de gua) (f)

Por este mtodo, obtm-se HAp fina e com boa cristalinidade [2].

II.6.1.3 Mtodo hidrotermal

O mtodo hidrotermal apresenta basicamente duas variaes: CaH(P04) ^ Caio (POMOW^ CaH(P04).H20 ->Caio(P04)6(OH)2 (200C e 15 atm) (200C e 15 atm) (g) (h)

O mtodo hidrotermal produz cristais grandes e perfeitos de acordo com variaes na presso, tempo e temperatura [2, 6].

II.6.2 Recobrimentos de implantes com HAp por asperso trmica

Asperso trmica uma tcnica de deposio de revestimentos que no Brasil pouco difundida comparativamente aos pases mais avanados tecnologicamente. A tcnica conhecida como asperso trmica, metalizao, pulverizao ou spray trmico [19, 69].

O processo consiste basicamente em se depositar um material na forma de spray (pulverizao de pequenas gotas) sobre uma superfcie previamente

preparada. A versatilidade do processo est na utilizao de materiais como metais, cermicas, polmeros, na forma de p e fio [19, 70, 71].

O material conduzido em uma pistola de asperso (fgura 5), que possui uma fonte de calor, cuja origem pode ser plasma, combusto de gases ou arco eltrico, dependendo do tipo de equipamento. O aquecimento por chama plsmica consiste basicamente em se passar uma corrente de gases atravs de um arco eltrico de corrente contnua, aplicado entre dois eletrodos. Este arco promove a ionizao dos gases, em um estado de alta energia, o plasma. A temperatura elevada e so alcanados valores da ordem de at 30.000C, entre os eletrodos, dependendo da potncia ou equipamento [72, 73]. Regies mais afastadas dos eletrodos apresentam temperaturas menores, a distncias de aproximadamente 6 cm so encontrados valores na faixa de 1000 a 1500C. A fonte de calor tem a fimo de fundir parcial ou totalmente o material a ser depositado. A figura esquematiza o equipamento por chama plsmica. Os gases do plasma, devido s altas temperaturas atingidas, se expandem violentamente, acelerando as partculas do material contra a supeificie do substrato. As partculas, em estado altamente energtico, sofrem achatamento ao se chocarem com a superfcie, ao mesmo tempo em que sofrem resfriamento rpido, resultando em revestimentos com morfologia lamelar. Enfre as camadas lamelares so tambm observados poros ilustrados na figura 6 [74]. A espessura do recobrimento pode variar de acordo com a necessidade, de poucos micrmefros at centmefros [74, 75, 76, 77].

.WiiSSAC KAGCNAl.

Lt.wLrX.A

II Reviso Bibliogrfica

26

oliuam do ploraia ubatrato

reTestlmento nodo de cobre

oatodo de tuncelAnio

a -

Figura 5 - Esquema de uma pistola de asperso trmica por chama a plasma

Com o objetivo de melhorar a fixao entre implantes metlicos e tecido sseo, na dcada de oitenta, foram realizados os primeiros revestimentos de HAp por asperso trmica. A partir da, vrios artigos discutiram a aplicao de HAp como recobrimentos de implantes metlicos. As principais aplicaes de

revestimentos de HAp em ligas metlicas so: em implantes dentrios e componentes temurais para implante de quadril. Este tipo de recobrimento reduz a eliminao de ons do substrato metlico para o meio biolgico [10, 78, 79].

A bioatividade da HAp no revestimento diminui os efeitos inflamatrios, melhoram a fixao com o osso adjacente, proporcionando ao paciente a estabilizao do implante em curto prazo. Recobrimentos de HAp por esta tcnica so os nicos utilizados para fins comerciais [10, 19, 78, 79].

II Reviso Bibliogrfica

27

Figura 6 - Esquema tpico de camadas depositadas por asperso trmica: (a) substrato, (b) rugosidade do substrato, (c) lamelas aspergidas, (d) ocluso de impurezas, (e) poros e (f) partcula aspergida parcialmente fimdida.

A HAp, submetida tcnica de asperso trmica, sofre decomposio parcial em : xido de clcio (CaO), tetracalciofosfato (Ca4(P04)20), a e P-fosfato triclcico (Ca3(P04)2), oxiapatita (Caio(P04)60) e fase amorfa. Estes produtos, em meio fisiolgico, so mais solveis do que a HAp. Se a solubilidade ocorrer de forma lenta, os ons clcio e fosfato podem ser reprecipitados promovendo uma neoformao ssea; j a rpida dissoluo pode prejudicar a integridade do recobrimento.

A HAp utilizada em recobrimentos de implantes tem proporcionado a curto prazo a osseointegrao, induzindo a formao ssea durante o perodo inicial de cicatrizao [80, 81, 82, 83, 84].

II Remo Bibliogrfica
II.6.3 Asperso Hipersnica - HVOF

28

Por asperso hipersnica, {high velocity oxygen fuel - HVOF), obtm-se revestimentos com boa coeso e baixa porosidade de ps. A tcnica utihza a energia proveniente da combusto oxignio/combustivel. A energia hberada impele o material na forma de p contra a superfcie do substrato. A ignio promovida por uma vela apropriada. A pistola de HVOF consta basicamente de um corpo de forma alongada, sendo que em seu interior so introduzidos combustvel, oxignio e material na forma de p. Quando a ignio produzida, uma onda exploses em alta freqncia, controlada pelo operador, aquece e acelera as partculas do p, expulsando-as da pistola. A temperatura atingida pela chama no HVOF da ordem de 3000C. A velocidade de sada das partculas superior a 2000 m.s'\ A energia cintica atingida pela partcula hberada no instante do choque com o substrato. A figura 7 apresenta um esquema da pistola utihzada na asperso hipersnica [69, 85, 86, 87].

Figura 7 - Corte esquemtico de luna pistola hipersnica - HVOF. (a) e (c) = ar comprimido; (b) = combustvel; (d) = exausto dos gases; (e) =

velocidade de 1000m.s'\ (f) = banda virtual de energia na forma de diamante; (g) = jato de projeo; (h) = substrato; (i) = revestimento.

II Reviso Bibliogrfica
n.6.4 HAp densa e porosa

29

A HAp densa obtida pela compactao e sinterizao de ps obtidos por mtodos como neutralizao e cristalizao. aplicada como material de preenchimento sseo em odontologia e ortopedia. Em odontologia, uma das aphcaes a insero do material no formato de dente imediatamente aps a extrao, impedindo a reabsoro ssea. A HAp na forma de dispositivo ou material particulado tambm utilizada para corrigir o tamanho do osso alveolar para a fixao de dentaduras, reconstruo maxilo-facial. Blocos monohticos de HAp so esculpidos para obteno de implantes do ouvido mdio [2, 88].

A HAp porosa pode ser obtida por sntese hidrotermal de corais formados de carbonatos de clcio. A estrutura mantida intacta aps a reao. Outras reaes de obteno ocorrem via produo de espumas pela agitao de suspenses cermicas aquosas com tensoativos. Agentes iniciadores da polimerizao promovem a solidificao de monmeros orgnicos includos nas composies. Este mtodo permite a produo de corpos com formatos de alta complexidade. A HAp porosa possibihta o crescimento sseo dentro dos poros, promovendo melhor fixao e vascularizao [89,90, 91, 92, 93, 94].

III. Vrocedimento Experimental

30

O procedimento experimental foi dividido basicamente em trs etapas, a primeira etapa refere-se sntese da HAp, em escala de laboratrio, por quatro mtodos diferentes; cristalizao, neutralizao, sol-gel em meio aquoso e sol-gel em meio alcolico. Na segunda etapa do trabalho descrita a obteno da HAp em escala piloto utihzando-se os mtodos por cristahzao e neutrahzao, j que estes apresentaram os melhores resultados, na caracterizao fsico-qumica por

comparao entre os produtos obtidos. A terceira etapa do trabalho refere-se aplicao da HAp obtida em escala piloto na forma de corpos densos, porosos e em recobrimento de substratos metlicos. As tcnicas utilizadas para os recobrimentos foram asperso trmica por chama plsmica e hipersnica (HVOF). Os

recobrimentos obtidos com HAp sintetizada so comparados com os obtidos com hidroxiapatita comercial (HAp-i). A fgura 8 apresenta um fluxograma simplifcado do trabalho experimental desenvolvido.

sntese da HAp (escala de laboratrio) cristalizao neutralizao sol-gel/aquoso sol-gel/alcclico

sntese da HAp (escala piloto) aplicaes HAp densa HAp porosa recobrimentos por asperso trmica plasma HVOF

Figura 8 - Seqncia experimental desenvolvida.

ni.l

Sntese de hidroxiapatita em escala de laboratrio

A denoimnao "escala de laboratrio" foi dada s snteses programadas para produzir de 5 a lOg de HAp na forma de p seco e calcinado, quantidade suficiente para a caracterizao.

A partir dos mtodos de sntese de HAp encontrados em literatura, optou-se por aqueles de baixo custo operacional, e com reagentes que no formassem subprodutos de difcil eliminao do precipitado. As solues utilizadas no trabalho experimental foram preparadas a partir de reagentes de grau p.a.

Nesta primeira etapa do trabalho, os mtodo de sntese foram avaliados e algumas modifcaes foram introduzidas nos mesmos, gerando condies de produzir HAp com a mesma qualidade em escala piloto.

Os mtodos de sntese escolhidos foram por cristalizao, neutializao, solgel em meio aquoso e sol-gel em meio alcolico e so descritos a seguir.

III.1.1 Mtodo de cristalizao

A sntese por cristalizao ou precipitao foi realizada com adio controlada e simultnea de duas solues, acetato de clcio Ca(CH3COO)2 (0,20 M) e hidrogenofosfato de amonio ((NH4)2HP04) (0,11 M), sobre uma soluo de acetato de amonio (NH4CH3COO) (0,40 M), sob agitao constante. O pH foi mantido em 8,5 + 0,3 pela adio controlada de hidrxido de amonio (NH4OH). O experimento foi realizado em bquer e o sistema mantido temperatura de 90C 0,5 por meio de um banho-maria com termostato. O precipitado de colorao branca obtido foi fltrado, e submetido a lavagem com gua destilada. Posteriormente, o material foi seco em estufa a 80C por 24 horas e calcinado em fomo tipo mufla a

1000C por 3 horas. A figura 9 apresenta o fluxograma referente s condies experimentais utilizadas.

Ca(CH3COO)2 (0,20M)/0,8 m L / m i n

(NH4)2HP04 (0,11M)/0,8 m L / m i n NH40H 0,6mL/min

agitao constante Temp.=90C

NH4(CH3COO)2 0,4M I precipitao I filtrao I lavagem I secagem I calcinao

'gua

Figura 9 - Seqncia experimental desenvolvida na sntese de HAp por cristalizao

in.1.2 Mtodo sol-gel

A sntese de HAp pelo mtodo sol-gel foi realizada pela adio simultnea de duas solues, de
NH4OH

e de

H3PO4,

em soluo de Ca(CH3COO)2 em meio

alcolico. Foram realizadas duas sries de snteses, uma utilizando gua destilada ao preparar as solues, chamada de sol-gel/aq, e outra utilizando lcool no preparo das solues, denominada de sol-gel/Al.

A soluo de hidrxido de amonio foi preparada a partir do reagente concentrado, diluindo-se a 6,20 M.

A velocidade de adio dos reagentes foi de aproximadamente 0,8 mL/min. Aps a precipitao, a soluo permaneceu em repouso por 10 horas. Em intervalos de 30 minutos, foi efetuada a monitorizao dos valores da medida de pH at o trmino da reao.

Aps a etapa de filtrao, o material foi seco em estufa temperatura de 80C por 24 horas e calcinado em fomo tipo mufla a 1000C por 3 horas. O fluxograma do processo desenvolvido apresentado na figura 10.

H3P04

em
2-etilhexanol 0,8mL/min

I
Ca(CH3COO)2
1,8M 2-etilhexanol NH40H 6,2M e m nneio aquoso sol-gel/aq repouso 10h NH40H 6,2M e m melo alcolico sol-gel/al

filtrao 80C/24h

lavagem lcool isoproplico

secagem 80C/24h

I
calcinao 1000C/3h

Figura 10 - Seqncia experimental desenvolvida na obteno da HAp pelo mtodo por sol-gel.

III.1.3 Mtodo da neutralizao

A sntese por neutralizao consiste na adio de uma soluo de cido ortofosfrico agitao.
(H3PO4)

sobre uma suspenso de hidrxido de clcio (Ca(OH)2) em

O precipitado foi obtido a partir da adio de soluo de cido ortofosfrico 0,30 M numa vazo de aproximadamente 0,8 mL/min sobre a suspenso de hidrxido de clcio 0,10 M sob agitao e temperatura de 25C, constantes. A monitorao dos valores de pH foi realizada durante toda etapa de precipitao. Aps a precipitao, a soluo foi submetida a sistema de refluxo a 40C por 24 horas.

O precipitado obtido foi filtrado e lavado com gua destilada seguido de secagem em estufa temperatura de 80C, por 24 horas, e calcinao em fomo tipo mufla a 1000C por 3 horas. O fluxograma do processo desenvolvido apresentado na figura 11.
H3PO4 0,3M 0,83mL/min

I
Ca(OH)2 0,1M
~ ~ r -

agitao e T = 2 5 C

precipitao

refluxo 24h/40C
~ ~ r ~

filtrao

lavagem
~ ~ r ~

secagem

I
calcinao

Figura 11 - Seqncia experimental referente sntese por neutralizao.

111.2 Teste de estabilidade da HAp

Para verificar a densificao e estabilidade trmica da HAp obtida a partir dos experimentos por cristalizao, sol-gel/aq, sol-gel/al e neutializao, fi)ram feitas sinterizaes temperatura de 1250 C por 3horas. As amostras foram compactadas uniaxialmente com presso de 20 MPa por 30 segundos, em matriz de ao com dimetio de 12 mm. Foram utilizados em mdia 0,5g do p calcinado e desaglomerado em almofariz de gata. No foram utilizados lubrificantes para evitar possveis contaminaes. As pastilhas foram posteriormente submetidas prensagem isosttica com presso de 200 MPa por 20 minutos. A sinterizao foi realizada em fomo tipo mufla marca Lindberg com taxa de aquecimento da ordem de 5C/min at atingir a temperatura desejada. O resfiiamento ocorreu dentro do prprio fomo.

Para a determinao da densidade geomtrica, as amostras compactadas foram pesadas em balana anahtica e as dimenses das pastilhas determinadas com o auxiho de micrmetro. O volume foi calculado utilizando-se a mdia destas medidas. A densidade hidrosttica aparente das pastilhas sinterizadas foi medida pelo mtodo de Arquimedes, utilizando-se gua destilada temperatura de 21C. Para a determinao da densidade relativa considerou-se o material obtido como sendo apenas HAp e densidade terica como sendo p = 3,156 g/cm^ [2].

111.3 Obteno da hidroxiapatita em escala piloto

A avaliao dos dados obtidos aps etapa de sinterizao direcionaram os trabalhos para obteno de HAp em escala piloto pelos mtodos de cristalizao e neutrahzao.

A sntese por cristalizao foi realizada em reator de ao moxidvel com sistema de aquecimento e capacidade para 60 L. Foram realizadas tis snteses com o objetivo de se produzirem 300 g por vez. A nica condio alterada, em relao

IIL Procedimento Experimental

36

ao procedimento adotado em escala de laboratrio, foi em relao a vazo dos reagentes, de 0,8 para 120 mL/min. Esta alterao teve como objetivo a adaptao para as condies pr-existentes de um sistema de reatores j utilizados para snteses de outros materiais. O valor de pH prximo a 8,5 foi obtido com a adio gota a gota de NH4OH com determinaes a cada 15 minutos at o trmino da reao, aproximadamente 3 horas.

O slido de colorao branca obtido foi filtrado, e submetido a lavagem com gua destilada. Posteriormente, o material foi seco em estufa a 80C por 24 horas e calcinado em fomo tipo mufla a 1000C por 3 horas.

A sntese de HAp por neutializao em escala piloto teve algumas modificaes em relao ao procedimento experimental para escala de laboratrio. A primeira modificao veio em fimo da necessidade de se ter um sistema nico de refluxo com capacidade para pelo menos 60 L. Optou-se por estudar a

substituio do sistema de refluxo por periodos de digesto de O, 1, 5, 10, e 20 dias. Esses experimentos foram primeiramente realizados em escala de laboratrio e posteriormente em escala piloto. Optou-se pela utilizao de reator constitudo de material polimrico nelprene, no reciclado, com capacidade de 90 L. A melhor condio estudada em escala de laboratrio foi reproduzida em escala piloto com sistema aberto. Nesta primeira produo, foram sintetizados 500 g de HAp. O produto foi caracterizado e a partir da avahao dos resultados optou-se por se tiabalhar em sistema fechado. A utilizao do reator com tampa de nelprene, possibilitou realizar experimentos em atmosfera inerte. Primeiramente, o sistema foi submetido a vcuo e, depois a fluxo de nitrognio gasoso durante toda etapa de sntese. Todas as solues foram preparadas com gua f e m d a e resfriada. Este sistema foi mantido hermeticamente fechado por 20 dias e teve como objetivo a obteno de 1000 g de HAp.

IIL Procedimento Experimental

III.4 Obteno de hidroxiapatita porosa pelo mtodo gelcasting de espumas

37

Com o objetivo de se obter um material poroso de HAp, foi preparada uma suspenso contendo aproximadamente 58 % em peso de HAp, proveniente da sntese de neutralizao em sistema fechado. A suspenso foi preparada utilizandose cido poliacrlico como dispersante e agentes reticulantes, monmeros acrlicos, foram incorporados suspenso para promover a posterior formao do gel [89]. A figura 12 apresenta um fluxograma do processo.

O processo reahzado em cmara selada com luvas, em atmosfera de nitrognio. A espuma produzida pela agitao da suspenso e pela adio de agente espumante ( base de pohetileno glicol ter). A formao do gel efetuada pela adio do agente miciador persulfato de amonio e catahsador, uma diamina terciria. A figura 7 apresenta o desenvolvimento experimental adotado.

O material poroso foi seco a temperatura ambiente por 72 horas seguido de secagem a 100 C/24h, 300C/3h e 500 'C/2h. Smterizaes foram realizadas nas temperaturas de 1200, 1250, 1300, 1350 e 1400 C por 3 horas. A taxa de aquecunento em todas condies foi de 10C por minuto, o resfiiamento ocorreu no fomo. Foram determinados os valores de densidade geomtrica a verde e aps sinterizao.

H A p - N 2 (59,10g) + m o n m e r o s o r g n i c o s (acrilato d e a m o n i o - 32g) + dispersante (polimetaacrilato d e amonio -1,71g) + gua

suspenso de HAp agente espumante

(pol ietilenog I icol ter)

agitao

iniciador
persulfato de amonio (200HL)

catalisador
d i a m i n a terciria (100^L)

formao do gel

secagem e sinterizao

Figm^a 12 - Desenvolvimento experimental adotado na obteno da HAp porosa.

III.5 Equipamentos de asperso trmica

Os revestimentos cermicos foram depositados em substratos metlicos por asperso trmica a plasma e HVOF.

Para a deposio por asperso trmica a plasma, utilizou-se o equipamento da marca Miller, modelo 3702 com pistola de plasma Miller SG-100 com gs primrio de argnio. Foram estudados os efeitos secundrios, hidrognio e hlio. produzidos pelos gases

IIL Procedimento Experimental

39

Para a deposio por HVOF utizou-se o equipamento da marca Tafa modelo JP 5000 com uma mistura de ar/oxignio/querosene.

A deposio dos revestimentos foi realizada em sala com cabine munida de sistema de exausto forada e fihne d'gua, o que minimiza a disperso de ps e gases resultantes do processo de asperso.

III.5.1 Preparao dos substratos

Como substratos foram empregadas placas metlicas, de titnio puro e da liga T-6A1-4V, disponvel comercialmente, especificados como grau-2 e grau-5, respectivamente.

Os substratos foram submetidos a jateamento abrasivo com granalha de alumina, na faixa de 2 mm a 38^m, com presso de 3,6 KPa. Os valores de rugosidade na superficie dos substiatos foram obtidos em rugosmetio.

Aps o jateamento abrasivo, os substratos foram hmpos em ultra-som com acetona por 5 minutos.

Primeiramente, os substiatos metlicos foram pr aquecidos at 100C com os gases formadores de plasma. A temperatura foi controlada por um pirmetio ptico. Temperaturas superiores produziam a oxidao no metal, evidenciada pela colorao em tons amarelos e azuis. Para assegurar o mesmo nvel de oxidao em todos os substratos, foram rejeitados os que apresentavam variaes na colorao original do metal (figura 13).

Figura 13 - Substratos rejeitados em funo da camada de xido formada pelo aquecimento em temperatura superior a 100C. (a) Ti; (b) T2; (c) T V 3 ; (d)
T4.

III.5.2 Deposio por asperso trmica a plasma e HVOF

As tcnicas de asperso trmica a plasma e HVOF foram utilizadas para recobrir os substratos de titnio puro e na forma de liga T-6A1-4V. Foram utilizados ps de HAp obtidos em escala piloto por cristalizao (HAp-cr), por neutralizao em atmosfera ambiente (HAp-ar) e neutralizao em atmosfera de nitrognio, (HAP-N2). Os resultados foram comparados com os recobrimentos de HAp-i e
AI2O3

da Brodmann, ps utilizados comercialmente em recobrimentos por

asperso.

Os ps HAp-cr, HAp-ar e HAp-N2 foram calcinados a 1000C por 3 horas antes da asperso. Os ps HAp-i e
AI2O3

foram utilizados como recebidos.

Utilizou-se substratos de titnio grau-2 e grau-5, na forma de chapas retangulares. Tambm foram revestidas duas prteses totais de quadril de T-6A1-4V.

Hl, Procedimento Experimental

41

A AI2O3 foi utilizada nos recobrimentos como camada intermediria entre o substrato metlico e a HAp. Este procedimento foi adotado visando aumentar o valor da rugosidade superficial nos recobrimentos e isolar o metal do meio externo.

Todos os ps antes de serem aspergidos, foram mantidos em estufa a temperatura de 40C por 24 horas. Antecedendo a deposio, os substratos foram pr aquecido com a pistola de asperso com os gases iniciantes por 30 segundos at atingir valores prximos e abaixo de 100C.

A pistola foi operada manualmente com movimentos verticais. O tempo mdio de deposio foi de 2 minutos e a temperatura mxima atingida no substrato foi de aproximadamente 500C. A temperatura dos substratos foi controlada no praquecimento e durante o processo de asperso por um pirmetro ptico digital.

Durante a deposio, no foi utilizado nenhum dispositivo especial de refiigerao no sistema revestimento/substrato/suporte metlico, ou seja, o

resfriamento do sistema ocorria por perda natural de calor para o meio ambiente.

As variveis escolhidas para controle e reprodutibilidade do processo basearam-se nos seguintes parmetios: distncia entre o bico da pistola de asperso e o substrato metlico, vazo dos gases e da fluidez dos ps atiavs de suas respectivas vlvulas.

Nas tabelas 4 e 5 so apresentados os valores utilizados nos processos de asperso trmica por chama a plasma e HVOF.

IIL Procedimento Experimental

42

Tabela 4 - Parmetros utilizados no processo de asperso trmica por plasma de H2 eHe.

Plasma de H2 Parmetros I

n
29,6 kW 37 V 800 A Ar 2,4 KPa 23,21-23,50
H2

Plasma de He

Potncia utilizada Tenso Corrente Gs primrio Presso do gs primrio Fluxo do gs primrio (.10^ L/h) Gs secundrio Presso do gs secundrio Fluxo de gs secundrio (.10^ L/h) Gs carregador Presso do gs carregador Fluxo do gs carregador (. 10^ L/h) Distncia de projeo Temperatura de pr-aquecimento Temperatura durante a deposio Taxa de alimentao de p

29,6 kW 37 V 800 A Ar 2,4 kPa 23,21-23,50

H2

32 kW 40 V 800 A Ar 2,4 KPa 23,21-23,50 He 5,3 KPa 12,46 Ar 1,7 KPa 3,40 70-75 mm <100C < 500C 2,0 rpm

0,5 KPa 1,56

N2

0,7 KPa 2,41

N2

1,9 KPa 3,40 70-75 mm <100C < 500C 2,0 rpm

1,9 KPa 3,40 70-75 mm <100C < 500C 2,0 rpm

Os substratos recobertos sofreram tratamento trmico, realizado em fomo vertical temperatura de 500C por 3 horas sob fluxo de oxignio para retirar os resduos orgnicos presentes no p de HAp-i.

Tabela 5 - Parmetros utilizados no equipamento de HVOF

Parmetros Fluxo de oxignio Fluxo de querosene Fluxo de gs carregador (N2) Presso de oxignio (linha) Presso de querosene (linha) Presso da gua Temperatura de pr-aquechnento Temperatura durante a deposio Distncia de projeo Taxa de alimentao de p

HVOF 49,5.10'L/h 25,0 L/h 73,6.10^ L/h 7,2-8,6 KPa 10,1 kPa 8,1 KPa <100C <400C 350 mm 2,0 rpm

ni.6 Testes de Avaliao citotxica

No desenvolvimento deste trabalho, foram testados quanto toxicidade todos os produtos obtidos. O mtodo da supresso de colnias [96, 97] foi utilizado para avahar os ps de HAp obtidos por neutralizao e cristalizao, os ps importados, (HAp-i e AI2O3), e HAp porosa. Os recobrimentos foram testados quanto a sua citotoxicidade pelo mtodo da difiiso em gar, que permite avaliar a superfcie ou uma camada. Os substratos metlicos foram testados pelos dois mtodos a titulo de comparao dos resultados.

in.6.1 Avaliao citotxica da HAp na forma de p pelo mtodo de supresso de colmas

A hidroxiapatita importada HAp-i e os produtos obtidos pelas snteses de cristalizao e neutralizao foram submetidos a testes de citotoxicidade. Os testes foram realizados em placa de Petri (15 x 60nmi^) colocando-se solues, obtidas a

partir de diluies dos extratos dos diversos materiais em contato com uma cultura de clula de ovario de hamster chins (CHO kl), da American Type Culture CoUetion (ATCC). Utilizou-se como controle positivo uma soluo de fenol 0,02% e como controle negativo o extrato da alumina (A-16 Alcoa).

IU.6.1.1 Preparao dos extratos

Os extratos so obtidos a partir da interao de 6g do material, na forma de p, com 60 mL do meio de cultura RPMl-FCS (meio formado por RPMl 1640 contendo 10% de soro fetal bovmo e 1% de soluo de penicilina e estreptomicina), em frasco de vidro com tampa rosqueada, com capacidade para lOOmL,

esterilizados em autoclave a 121 1C por 20 minutos. A partir de cada extrato so feitas trs diluies. O mesmo procedimento adotado para o controle negativo. Como controle positivo utilizado uma soluo de fenol 0,02% (50; 25; 12,5%). Aps incubao de cada frasco em estufa a 37C por 48 horas, o extrato filtrado em membrana millipore (poro de 0,22 |am). O resduo eliminado e, a parth do filtrado so feitas diluies seriadas (100, 50, 25 e 12,5%). As solues obtidas a partir das diluies seriadas so posteriormente colocadas em contato com as clulas.

III.6.1.2 Preparao das placas de cultura

As clulas CHO fornecidas pelo Instituto de Quimica da USP foram cultivadas em garrafas plsticas em meio de cultura RPMl-FCS, em estufa com atmosfera mida com 5% de C O 2 a 37 1C, at obteno de uma camada de clulas com crescimento confluente.

O meio de cultura foi retirado e as clulas foram lavadas com tampo fosfato em soluo salina sem clcio e magnesio (PBS-CMF). Para o desprendimento de

IIL Vrocedimento Experimental

45

clulas da superfcie interna dos frascos, foi adicionado uma soluo de tripsina 0,2%.

Aps a tripsinizao as clulas so transferidas para um tubo de centrfiiga com tampa e lavadas duas vezes com PBS-CMF. As clulas so ressuspensas em RPMl-FCS ajustando-se para uma suspenso contendo 100 clulas/mL. A partir dessa suspenso, so distribudos 2 mL em cada placa de cultura e incubadas por 5 horas para a adeso das clulas placa.

Aps esse perodo, o meio de cultura removido por suco a vcuo, restando apenas as clulas aderidas no fimdo de cada placa. Nesta etapa, so adicionados 5 mL do extrato puro e 5 mL de cada diluio seriada. Na placa de controle de CHO, adicionado 5 mL do meio fresco de RPMl.

Foram feitas triphcatas de cada concentrao dos extratos testados. As placas so mcubadas em estufa mida com 5% de gs carbnico ( C O 2 ) a 37 T C por 7 dias.

Decorrido esse perodo, o meio foi removido por suco a vcuo e as colnias formadas foram fixadas em formol 10% em soluo salina 0,9% e coradas com corante de Giemsa.

As colnias visveis em cada placa so contadas e comparadas com o nmero de colnias formadas na placa controle de CHO. O potencial citotxico do materal avaliado expresso em ndice de citotoxicidade
(IC50),

que corresponde

concentrao do extrato que suprime em 50% a capacidade de formao de colnias em relao ao controle.

III.6.2 Avaliao citotxica da hidroxiapatita porosa

Foi reahzada a avahao citotxica da hidroxiapatita porosa obtida por sinterizao temperatura de 1200 C por 3 horas. O corpo slido poroso foi triturado em almofariz de gata e submetido a esterilizao em autoclave a 121 1C por 20 minutos e seco em estufa a 40C. O procedimento adotado seguiu como descrito anteriormente.

in.6.3 Avaliao citotxica dos substratos metlicos

Os substratos methcos, limpos em ultra-som com gua destilada e lcool isoproplico, foram esterilizados em autoclave a 121 1C por 20 minutos e secos em estufa a 40C.

Os substratos metlicos foram avahados "/>/ v/7ra" quanto citotoxicidade por dois mtodos distmtos. O primeiro referente ao mtodo da supresso de colnias descrito no item I1I.6.1 e o segundo, pelo mtodo da difuso em gar, descrito a seguk. As superfcies dos substratos recobertos por asperso trmica tambm foram avaliadas pelo mtodo da difuso em gar.

Ul.6.4 Teste de avaliao citotxica pelo mtodo da difuso em gar

O mtodo da difuso em gar realizado com dois tipos de cultura de clulas a linhagem NTC-C clone L-929-(CCLl-ATCC) de tecido conectivo de camundongo e RC-IAL clulas fibroblsticas de rim de coelho, isoladas no Instituto Adolfo Lutz.

As clulas foram semeadas em placa de Petri (15x 60mm^), na concentrao de 1,5 .lO^clulas/mL em Meio Mmimo de Eagle (MEM) com 10 % de soro fetal

IIL Procedimento Experimental

47

bovino (FCS) no volume de 5 mL. A incubao ocorreu em estufa por 24 horas temperatura de 37C com 5% de C O 2 e atmosfera mida.

Aps esse periodo, com a monocamada de clulas j formada, o meio de cultura foi desprezado, sendo ento adicionado 5 mL do meio de cultivo "over/ay". Este meio composto de partes iguais meio de MEM, duas vezes concentrado, e gar a 1,8% em peso contendo 0,01% em peso de vermelho neutro como corante vital preparado no momento do uso, o gar fundido e misturado na mesma proporo com o MEM duas vezes concentrado, ambos a uma temperatura de 44 C e adicionado sobre a monocamada de clulas. Os substratos a serem testados so cortados em placas com 10 mm de lado e colocadas sobre a camada de gar antes da solidificao completa. As placas de Petri foram incubadas novamente em estufa a 37C com 5% de de C O 2 e atmosfera mida por 24 horas.

Foram utilizadas como contiole positivo, cilindros de ltex e como controle negativo papel de filtio atxico, ambos com 5 mm de dimetio. As amostras so avaliadas em cada linhagem celular.

As leituras nas placas so feitas macroscopicamente onde a presena de citotoxicidade constatada por halo claro ao redor do material em teste, o que corresponde regio de clulas mortas.

IV. 1 Caracterizao dos ps de HAp sintetizados - escala de laboratorio

A primeira etapa do trabalho foi obter HAp em escala de laboratrio pelas smteses: cristahzao, neutrahzao, sol-gel em meio aquoso e sol-gel em meio alcolico. Os ps obtidos foram caracterizados por difratometria de raios X (DRX), espectroscopia por infravermelho (IV), microscopa elefrnica de varredura (MEV), rea superficial especfica (B.E.T.), determinao da distribuio de tamanho mdio de partculas e densidade geomtrica das pastilhas sinterizadas. Os mtodos de srtese que apresentaram os melhores resultados foram escolhidos para serem reproduzidos em escala piloto.

As snteses realizadas em escala de laboratrio foram calculadas para fornecerem de 5 a 10 g de HAp. O rendunento foi de 98,2 % por cristahzao, 96,7 % por neutralizao, 95,2 % por sol-gel/aq e 94,3 % por sol-gel/al.

O precipitado de aspecto cristalino, obtido na smtese por cristalizao, favoreceu as etapas de fransferncia, lavagem e filtrao, proporcionando melhor rendimento. Os menores rendimentos foram obtidos nas snteses por sol-gel, que formaram precipitados de aspecto gelatinoso, e que por serem mais volumosos, arrastam quantidades considerveis de gua oferecendo dificuldades filtiao e lavagem. Na neutializao, o precipitado formado apresentou aspecto gelatinoso, mas com flocos mais dispersos, quando comparados s sntese por sol-gel.

A tcnica de espectioscopia de infravermelho foi utizada para identificar bandas de absoro correspondentes aos grupos fimcionais como P-0, H - 0 , C-0 e outros. As amostras calcinadas foram desaglomeradas em almofariz de gata e dispersas em Nujol (leo mineral). Uma gota da suspenso foi colocada em porta amostra de KBr. A leitura foi realizada na faixa de comprimento de onda de 400 a 4000 cm'^ No foram observadas diferenas significativas entre as amostias preparadas por cristalizao, neufralizao e sol-gel, em meio aquoso. As figuras 14

IV. Resultados e Discusso

49

e 15 apresentam as bandas caractersticas do fosfato (P-0) e hidroxila (0-H) indicando a presena da fase hidroxiapatita.

O espectro de transmitancia da amostra sol-gel em meio alcolico (figura 15) apresenta diferena considervel em relao a amostra em meio aquoso,

principalmente na regio de 500 a 1300 c m ' , que so as bandas de absoro caractersticas do tetiacalciofosfato [2, 6]. Esse perfil decorre provavelmente da ausncia de gua no mtodo de sntese, que fomecera os grupos 0-H, necessrios para a formao da HAp.

Em todas as condies foram identificadas, alm das bandas de fosfatos e hidroxilas, bandas de C-0 presentes na forma de carbonatos. O carbonato incorporado na apatita formando a carbonatohidroxiapatita e est relacionado concentrao de CO^' na soluo. Esses ons tm sua origem a parth do gs carbnico, presente no ar, e na utilizao de solues que contenham ons carbonatos. Para minimizar a presena dos ons CO^', toda gua utilizada foi

fervida. A presena do carbonato na apatita promove maior solubilidade em meio aquoso. Sabe-se, a partir da literatura, que a mxima absoro de carbonato pela HAp est limitada em 22% em peso [6].

As bandas de absoro do Nujol podem ser observadas em todas as condies de anhse por IR na regio de 2700 a 3000, 1450 a 1500 e 700 a 730 cm'' [6].

7K Resultados e Discusso

50

a
cs

banda P-O tbanda C - O banda H-O banda nujol 4000 3000 2000 1000 (cm"*)

Comprimento de onda

Figura 14 - Espectro de infravermelho das amostras de HAp na forma de p calcinado a 1000C/3h. (a) sntese por cristalizao (b) sntese por neutralizao.

banda P-O u H banda C-O banda H-O banda nujol

4000

3000

2000

lOOO

Comprimento de onda (cm*) Figura 15 - Espectro de infravermelho das amostras de HAp na forma de p calcinado a 1000C/3h. (a) sntese por sol-gel em meio aquoso (b) sntese por sol-gel em meio alcolico.

IK. Resultados e Discusso

31

Determinou-se a rea de superfcie especfica dos ps das amostras calcinadas a 1000C por 3 horas referentes aos experimentos de sntese. Os resultados encontram-se na tabela 6. Os maiores valores de rea superficial especfica foram encontrados para os ps provenientes de sntese por sol-gel. A sntese por cristalizao apresentou o menor valor de rea superficial indicando a presena de partculas grandes.

Tabela 6 - rea superficial especfica (S) por B.E.T. e tamanho mdio dos aglomerados (D) por espalhamento a laser das amostras calcinadas a 1000 C/3h

D (fxm) 15 15 3 6

Sntese Cristalizao Neutralizao Sol-gel/aq Sol-gel/al

(mVg) 2,4 3,0 6,0 7,0

Determinou-se pelo mtodo de espalhamento a laser a distribuio do tamanho de partcula e ou aglomerados dos ps de HAp, aps calcinao a 1000C por 3 horas. As curvas de distribuio de tamanho de partcula so apresentadas na figura 16 e tambm diferem entre si. Os maiores valores so encontrados para os ps provenientes da sntese por cristalizao e neutralizao com respectivamente (tabela 6). 15)im,

IV. Resultados e Discusso

52

100
(O

HAp crstalizito /

HAp neutralizao

i5
E
3
U (O

50

(O (O (A CD

OL 00

1=:
HAp sol-gel-aq / HAp sol-gel-al /

E
O

10

50

"E
O)

0,1

10

100

0,1

10

100

Dimetro esfrico equivalente ()IM)

Figura 16 - Curvas de distribuio do tamanho de partcula dos ps calcinados a 1000C/3h.

Micrografias representativas das amostras na forma de ps calcinados so apresentadas na figura 17. Pela anlise do p obtido por cristalizao observa-se aglomerados da ordem de 10 )iun com geometria arredondada formados pela juno de pequenos cristais de forma acicular. A micrografia do p obtido por neutralizao revela a presena de fragmentos angulares e heterogneos, com forma e tamanho, bastante variados. As micrografias dos ps obtidos por sol-gel so semelhantes, apresentando aglomerados de formas irregulares com tamanhos inferiores s amostras citadas anteriormente.

IV. Resultados e Discusso

53

Figura 17 - Micrografias das amostras de ps calcinados a 1000C por 3 horas. Sntese por cristalizao (a); neutralizao (b); sol-gel/aq (c); sol-gel/al (d).

As amostras de HAp, na ft)rma de p, a partir dos experimentos de sntese fijram analisadas por DRX aps serem submetidas as temperaturas de secagem a 80C por 24 horas e calcinao a 1000C por 3 horas. Nessas condies, todas as amostras apresentaram como fase principal a HAp.

IV. Resultados e Discusso

IV.2 Obteno de corpos monolticos

54

Aps a caracterizao dos ps calcinados, estes foram sinterizados temperatura de 1250C por 3 horas com objetivo de se verificar o comportamento das fases cristalinas em tratamentos trmicos e densificao. Os valores de densidade a verde e aps sinterizao das pastilhas obtidas referentes aos mtodos de sntese so apresentados na tabela 7.

As pastilhas que apresentaram maiores valores de densidade, 90% da densidade terica da hidroxiapatita (3,156 g.cm'^), so as obtidas a partir dos experimentos de cristalizao e neufrahzao, sendo estes os melhores mtodos para obteno de HAp para a produo de corpos smterizados de alta densidade. No p HAp obtido por cristalizao, este fato se deve morfologia das partculas arredondadas apresentadas na figura 17 associado distribuio praticamente monomodal do tamanho de aglomerados como observado na figura 16. O p de HAp obtido por neutiahzao embora apresente partculas de formas angulares a curva de distribuio de tamanho multimodal auxihando na formao de compactos mais densos. As pastilhas obtidas por sol gel so filveis e quebradias impossibilitando a determinao da densidade

IV. Resultados e Discusso

Tabela 7 -

55

Densidade dos ps calcinados a 1000C por 3 horas e pastilhas smterizadas a 1250C por 3 horas. T

smtese cristalizao neutralizao Sol-gel (aq.) Sol-gel (al.)

Pl (g/cm^) 1,8 2,2 2,0 2,0

P2

P3

Pt (%DT) 89,3 93,7

(C/3h) 1250 1250 1250 1250

(g/cm') 2,9 3,0 2,1 2,3

(g/cm^) 2,8 3,0

T = temperatura de sinterizao Pl = densidade a verde das pastilhas P2 = densidade geomtrica das pastilhas sinterizadas P3 = densidade hidrosttica das pastilhas sinterizadas Pt = densidade relativa aps sinterizao DT = densidade terica As pastilhas aps sinterizao (1250C/3h), foram analisadas por

difratometria de raios X.

Por neutralizao, as pastilhas apresentam apenas a fase HAp como pode ser observado no difratograma da figura 18-b. As pastilhas obtidas por cristahzao (figura 18-a) e sol-gel/aq (figura 18-c) apresentam como fase principal HAp, e em pequena quantidade o P-TCP. Por sol-gel/al, a fase HAp no aparece como principal e sim como uma nstura entre o |3-TCP e o TTCP, sendo que a identificao das fases cristalinas toma-se difcil visto que h sobreposio dos principais picos (fgura 18-d).

es

>

p x c p

. " 2
s

2^ 0
s

2() e^ PC TP TP TC

40O

C
0>
o

s
20O

40 o
26(0)

60

Figura 18 - Difratogramas de raios X de pastilhas sinterizadas a 1250C por 3horas. (a) sntese por cristalizao; (b) sntese por neutralizao; (c) sntese por solgel/aq e (d) sntese por sol-gel/al. Os picos no assinalados so da fase HAp.

7K Resultados e Discusso

57

As pastilhas sinterizadas foram fraturadas e observadas por MEV, algumas micrografias representativas so apresentadas nas figura 19 e 20.

A partir das micrografias pode-se constatar a maior porosidade nas pastilhas obtidas pelo processo sol-gel/al (figura 20-b).

Figura 19 - Superfcies de fraturas de amostras sinterizadas a 1250C por 3 horas, (a) sntese por cristalizao e (b) sntese por neutralizao, (SE).

Figura 20 - Superfcies de fraturas de amostras sinterizadas a 1250C por 3 horas, (a) smtese por sol-gel/aq e (b) sntese por sol-gel/al, (SE).

IV.3 Obteno de HAp em escala piloto

A partir dos dados de estabilidade das fases cristalmas na temperatura de 1250C e maiores valores de densidade relativa optou-se por produzir HAp por cristalizao e neutralizao em escala piloto.

Na sntese de HAp por cristalizao em escala piloto, foi alterado apenas a vazo dos reagentes de 0,8mL/mm, em escala de laboratrio, para 120 mL/min em escala piloto. Foram realizados trs experimentos, e por batelada produzidos 300 g

IV. Resultados e Discusso

59

de HAp, com rendimento de 97,9 0,4. No foram observadas mudanas no valor do pH, mantido praticamente em 8,5 durante todo o experimento. Os produtos obtidos foram secos em estufa a 80C por 24 horas, e calcinado a 1000C por 3 horas. Os ps obtidos em escala piloto por cristalizao foram analisados por IR e DRX, figuras 21 e 22. No foram observadas diferenas significativas entre o material produzido em escala piloto e em laboratrio.

banda P-O

Tbanda C-O

^bandaH-0 banda nujol

4000

3000

2000

1000 (cm^)

Comprimento de onda

Figura 21 - Espectro de infravermelho da amostra HAp obtida por cristalizao em escala piloto calcinada a 1000C por 3 horas.

IV. Resudados e Discusso

60

I I
-a e s "9

^ P -TCP 1 CaO

UCf
20 40 20',(0) 60

Figura 22 - Difratograma do p obtido por cristalizao em escala piloto , calcinado calcinada a 1000C por 3 horas, os picos no identificados correspondem a HAp.

O procedimento de sntese de HAp por neutralizao em escala piloto foi modificado com a substituio do sistema de refluxo por perodo de envelhecimento de 20 das, em contato com a soluo me. Foram estudados, em escala de laboratrio, os periodos de envelhecimento de O, 5, 10, 15 e 20 dias.

As anlises por DRX dos produtos obtidos indicam a presena da fase HAp como majoritria em todas as condies, isto , praticamente no h decomposio de fase durante a calcinao a 1000C por 3 horas, exceto para o periodo de envelhecimento de O dia, foi identificada a fase P-TCP, como assinalado na fgura 21. Um pequeno pico da fase CaO foi identifcado em 37,3.

IV. Resultados e Discusso

61

Os valores de rea superficial especfica obtidos fi)ram de 4 m^/g para perodo de digesto de 10 das e 2,5 m^/g para 20 dias.

Optou-se por se tiabalhar com perodo de envelhecimento por 20 das, por favorecer a formao de partculas e/ou aglomerados maiores, visando uthzao desse material por asperso trmica. Partculas pequenas quando atravessam a regio do plasma so completamente fimdidas sofrendo mudana na estrutura cristalina. Tamanhos maiores de partculas mantm o interior mtacto e

proporcionam que apenas a camada extema da partcula sofra fiiso melhorando a adeso ao substrato.

Foram realizados dois experimentos em escala piloto com periodo de envelhecimento de 20 dias. Um dos experimentos foi executado em ar, denominando-se o produto obtido de HAp-ar, e outio em atmosfera de nitrognio, denominando de KLAp-N2. Nos dois experimentos toda gua utilizada foi fervida e resfiiada para eliminao do gs carbnico, minimizando a formao da

carbonatohidroxiapatita que mais solvel do que a hidroxiapatita em meio fisiolgico.

Por batelada foram produzidos 500g de HAp-ar com rendimento de 95,7 % e 1000 g de HAp-N2 com rendimento de 94,6 %.

Os ps provenientes das snteses, HAp-ar e HAp-N2 obtidos em escala piloto foram caracterizados por espectioscopia por infravermelho e comparados ao p HAp-i.

IV. Resultados e Discusso

62

i HAp CO \ P-TCP

10 dias

5 dias
V__JL

uL

Idia Odia
40 60 80
100

Al
20

20

(o)

Figura 23 - Difratogramas dos ps obtidos por neutralizao com periodo de envelhecimento em dias, calcinados a 1000C por 3 horas. Os picos no identificados nas condies de O, 1, 5 e 10 dias correspondem a HAp.

IV. Resultados e Discusso

63

As amostras obtidas em escala piloto foram caracterizadas por IR no intervalo de 400 a 4000 cm"'. Para a leitura, foram utilizadas pastilhas de KBr com os ps calcinados, misturados em uma concentrao de 0,03% em peso. Na figura 24 so apresentados os resuhados obtidos, para os trs ps. Verifica-se a que o mtodo utilizado na sntese HAp-N2 foi eficiente para se obter ps livres de carbonato, j que a banda de absoro desse composto foi eliminada comparando-se com a HAp-ar. As demais bandas P-O so pertencentes hidroxiapatita; no foram observadas bandas indicando a decomposio desse material em p-TCP.

e5

4000

3000

2000

1000

Comprimento de onda (cm~^

Figura 24 - Espectros de infravermelho das amostras HAp-ar, HAp-N2 e HAp-i calcinadas a 1000C por
3

horas.

IV. Resultados e Discusso

64

Os ps de HAp-N2, HAp-ar e HAp-i e AI2O3 foram caracterizados por difratometria de raios X. As amostras obtidas nas condies HAp-N2 e HAp-ar apresentaram picos bem definidos correspondentes a hidroxiapatita (figura 25). HAp-ar apresenta alm da fase principal hidroxiapatita, traos da fase do xido de clcio. A HAp-i tambm apresenta como fase principal a hidroxiapatita, no entanto os picos so mais largos, o que dificulta a identificao de outras possveis fases cristalinas. A alumina apresenta como fase principal alumina alfa e traos de impurezas, identificada como NaAuOn (figura 26).

iHAp CaO

HAp-ar
o

HAp-i
j

1-

20

40
29(0)

60

80

100

Figura 25 - Difratogramas de raios X das amostras de HAp na forma de p calcinado a 1000C por 3 horas, HAp-ar e HAp-N2 A amostra HAp-i foi analisada como recebida.

IV. Resultados e Discusso

65

a-A1^03
cs

I
o

20

40

60

80

100

29

Figura 26 - Difratograma de raios X da AI2O3 como recebida.

A anlise quimica dos ps, HAp-cr, HAp-ar, HAp-N2, obtidos em escala piloto e HAp-i como recebida, foi realizada por espectrometra de emisso com fonte de plasma induzido (ICP). Os resultados so apresentados na tabela 8. Nota-se que todos os ps apresentam composio qumica semelhante. As amostras HAp-cr e HAp-N2 apresentaram menores teores de impurezas. A razo molar Ca/P foi de 1,82 para HAp-i e HAp-cr, 1,81 para HAp-N2. A razo molar superior a 1,67 indica que o material rico em clcio, com tendencia a formar CaO. A HAp-ar apresentou a razo molar de 2,05 para Ca/P. Este resultado no pde ser explicado.

IV. Resultados e Discusso

Tabela 8 -

66

Anlise qumica obtida por espectiometiia com fonte de plasma induzido dos ps HAp-cr, HAp-ar e HAp-Na calcinados a 1000C por 3 horas e HAp-i como recebido.

xidos (%)
SO2
AI2O3

HAp-cr 0,25 0,04 0,04 <0,01 0,29 58,36 0,02 0,02 <0,01 40,62 0,06 99,69

HAp-ar 0,15 0,13 0,02 <0,01 0,24 59,68 <0,01 <0,01 <0,01 36,78 0,97 97,99

HAp-Nj 0,11 0,19 0,02 <0,01 0,18 57,47 <0,01 0,03 <0,01 40,15 0,42 98,58

HAp-i 0,20 0,22 0,04 0,01 0,43 57,28 0,21 <0,01 0,63 39,88 0,29 99,20

FejOs MnO MgO CaO NazO

K2O
TO2
P2O5

Perda ao fogo Total

Elementos (ppm) HAp-cr HAp-ar

HAP-N2

Ba 14 35 35 9

Sr 1826 1784 1723 173

Y 3 4 1 17

Sc < 1 < 1 <1 <1

Zr 16 166 27 65

Be < 1 < 1 < 1 <1

V <5 <5 <5 <5

HAp-i

IV.4 Asperso trmica

Nesta etapa do trabalho so caracterizados os ps utilizados na asperso trmica a plasma e HVOF, substratos methcos e recobrimentos.

IV.4.1 Caracterizao dos ps destinados asperso trmica

Os ps destinados aos recobrimentos foram caracterizados quanto a distribuio dos tamanhos de partculas/aglomerados e morfologia por microscopia eletrnica de varredura. Os valores mdios dos tamanhos de partculas so apresentados na tabela 9 e as curvas de distribuio so apresentadas na figura 27. As curvas de distribuio diferem entre si. Os valores mdios maiores foram encontrados para a HAp-ar e HAp-cr com tamanhos mdios de 41,3 |am e 37 pm, respectivamente. O mtodo da cristalizao produziu ps com distribuio monomodal, o mesmo comportamento foi observado em escala de laboratrio (figura 15). A HAp-i apresenta tamanho mdio de 25 pm e 31,8 fim para a HApNa- A
AI2O3

com 46,5 pm apresenta o maior valor mdio e distribuio

monomodal.

Tabela 9 - Tamanho mdio dos aglomerados (D) das amostias obtidas em escala piloto, HAp-cr, HAp-ar e HAp-Na calcinadas a 1000 C/3h e ps comerciais como recebidos, HAp-i e AlaOa.

D Sntese HAp-cr HAp-ar HAp-Na HAp-i AlaOs (^m) 37,0 41,3 31,8 2,5 46,5

IV. Resultados e Discusso

68

0.1

10

100

0.1

10

100

0.1

10

100

1001

50

0,1

1 10 100 0.1 1 10 100 D i a m i r o esfrico equivaloite ( / o n )

Figura 27 - Curvas de distribuio dos tamanhos de partculas/aglomerados dos ps obtidos em escala piloto, HAp-cr, HAp-ar e HAp-Na calcinadas a 1000 C/3h e ps comerciais como recebidos, HAp-i e
AI2O3.

A avaliao por MEV mostra a presena de morfologia irregular para o p HAp-ar e com tamanho mdio superior a HAp-i de partculas arredondadas. A alumina utilizada apresenta partculas angulares de tamanho homognea (figura 28). e morfologia

/ K Resultados e Discusso

69

Figura 28 - Micrografias dos ps utilizados nos recobrimentos por asperso trmica. HAp-ar e HAp-N2 calcinados a 1000C/3h. HAp-i e AI2O3 como recebido, (SE).

Micrografia do p de HAp-Na observado em MEV com maior aumento apresentada na figura 29. Os aglomerados so constitudos de pequenas partculas com tamanho mdio mferior a 0,2 pm. Os ps sintetizados provenientes por esse processo so finos e a aglomerao provavelmente ocorre no momento da secagem. A morfologia dos aglomerados do p de HAp-cr so constitudos de estruturas com vrios cristais de formato aciculares e concntricos, observados em MEV, figura 30.

if
,

-3='-

'P -

'

Ari

Figura 29 - Micrografia de aglomerado HAp-Na calcinado a 1000C por 3 horas, (SE).

Figura 30 -

Micrografia de aglomerados de HAp-cr calcinado a 1000C por 3 horas, (SE).

IV. Resultados e Discusso

IV.4.2 Avaliao citotxica dos ps utilizados na asperso

71

A avaliao citotxica dos ps de HAp-ar, HAp-Na e HAp-i, utilizados nas deposies, foi realizada pelo mtodo de supresso de colonias. As porcentagens do nmero de colonias formadas nas placas de Petri, CHO nas diferentes concentraes dos extratos dos materiais analisados so apresentadas na tabela 10.

Os valores obtidos nos ensaios so projetados em grfico (figura 31). A partir dos grficos pode-se calcular quantitativamente o potencial citotxico, uma unidade de bioatividade.
IC50 IC50,

que

expressa a concentrao de extrato do material

analisado que provoca a morte ou inibe metade da populao celular. O controle negativo, no deve produzir resposta citotxica, como observado com a alumina de alto teor de pureza utilizada. O controle positivo deve levar a uma resposta citotxica positiva, como o caso da soluo de fenol 0,02 %, que apresenta igual a 30% (figura 31). A HAp-ar e HAp-Na apresentam indicando ausncia de citotoxicidade.
IC50 IC50

maiores que 100

A HAp-i apresentou

IC50

menor que

100, inferindo

comportamento

citotxico bastante acentuado. A figura 32 apresenta uma comparao entre as diversas placas de cultura das amostias txicas e no txicas. O comportamento citotxico da HAp se deve provavelmente a aditivos orgnicos utilizados no p comercial.

A HAp-cr apresentou

IC50

> 100 indicando ausncia de citotoxicidade e

portanto caracteristicas biocompatveis (tabela 11).

Tabela 10 - Teste de citotoxicidade pela supresso de colnias dos ps de HAp utilizados nas deposies por asperso trmica, em relao placa controle.

Colnias visveis nas placas de CHO Concentrao do Extrato (%) Amostras

6,25 12,5 25 50 100

Controle Negativo Controle Positivo HAp-ar (1000C/3h) HAp-N2(1000C/3h) HAp-i (sem calcinao) HAp-i (500C/3h) HAp-i (1000C/3h)

93
77 73 78 57 91 0

93
70 92 85 32 83 1

88
55 84 78 17 70 0

97
26 77 83 0 17 0

97
0 65 72 0 1 0

X D r

20

4)

60

a)

Conntrao do Extrato ("/<) I I H controle negativo controle positivo HAp-Ar HAp-N I H HAp-i sem calcmao HAp-i 500 C HAp-i 1000 C

Figura 31 - Curva de supresso de colnias para os ps de HAp utilizados nas deposies por asperso trmica.

Figura 32 - Placas de cultura utilizadas nos ensaios de supresso de colonias, (a) placa controle CHO; (b) placa com extrato de HAp-ar; (c) placa com extrato de HAp-Na; (d) placa com extrato de HAp-i como recebida; (e) placa com extrato de HAp-i calcinada a 500C/3h; (f) placa com extrato de FLAp-i calcinada a 1000C/3h.

Tabela 11 - Teste de citotoxicidade da HAp-cr: percentual do nmero de colonias visveis nas placas de CHO, em relao a placa controle.

Colonias visveis nas placas de CHO Concentrao do Extrato (%) 12,5 Controle Negativo Controle Positivo HAp-cr (1000C/3h) 103 85 99 25 86 93 92 50 95 65 85 100 100 24 86

IV.4.3 Caracterizao dos substratos metlicos

Utilizou-se a tcnica de espectrometria de fluorescencia de raios X para a caracterizao qumica dos substratos metlicos a partir dos resultados apresentados na tabela 12. Foi detectada a presena de ferro em todos os substratos analisados. Verifica-se que os teores de ferro encontrados nos substratos 1 e 4 esto de acordo com as especificaes da norma ASTM B265-GR2. O substrato 2 est fora da especificao em funo do alto teor de Fe, que diminui a resistncia a corroso. No substrato 3, o valor de 3,55% para V difere do valor nominal de 4%, mas est dentro das especificaes, j o teor de Al deveria ser de no mximo 6,75%.

Tabela 12 - Resultados das anlises qumicas por FRX das ligas metlicas.

Determinao dos elementos (%) substratos Tt T2 TV3 T4 Ti 99,80 99,57 88,68 99,79 Al 7,41 V 3,55 Fe" 00 2" 0,43 0,36 02 ,1

Utilizou-se difratometria de raios X para identificao das fases cristalinas presentes nos substratos metlicos. Os resultados so apresentados na figura 33. Os difratogramas referentes aos substratos 1, 2 e 4 foram identificados como sendo de titanio metlico pertencente ao sistema hexagonal de acordo com a identificao pela microficha 44-1294 (JCPDS).

As amostras metlicas foram submetidas a tcnica de spining

(rotao) para

diminuir o efeito da textura o que poderia inviabilizar os resultados. Apesar disso, houve inverso na intensidade do pico de 100% indicado pela seta de cor lils.

IV. Resultados e Discusso

75

enquanto a seta vermelha mdica a presena de um pequeno pico de difrao no identificado.

substrato^

substrato-3

substiato-2

substrato-1

2D

40
26 ("I

60

80

100

Figura 33 - Difratogramas dos substratos metlicos 1, 2, 3 e 4.

Aps jateamento abrasivo com granalha de alumina, fi)ram medidas as rugosidades dos substratos. Os valores so apresentados na tabela 13 juntamente com as suas dimenses.

As micrografias da figura 34 referem-se aos substratos metlicos com morfi)logia similar aps jateamento abrasivo. Por microanlise qualitativa, realizada com EDS em MEV, no fi)ram encontradas impurezas nos substiatos jateados.

Tabela 13 - Dimenses dos substratos metlicos na forma de chapas retangulares e rugosidade mdia obtida aps jateamento abrasivo com granalha de alumina.

substrato Dimenses (mm) rugosidade (pm)

Tl 37x10x0,91 4,3

Ta 33x10x0,9 5,0

TV3

T4

20x10x0,5

27x10x2,0 4,3

41

Figura 34 - Micrografias dos substratos metlicos: (a) T l , (b) T2, (c) TV3 e (d) T4 aps receberem jato abrasivo com granalha de alumina.

JK Resultados e Discusso
rV.4.3.1 Avaliao citotxica dos substratos metlicos

77

A avaliao citotxica dos substratos metlicos foi efetuada pelo mtodo de supresso de colmas e difuso em gar. Os metais testados apresentaram 100 indicando ausncia de citotoxicidade.
IC50 >

A avaliao citotxica pelo mtodo da difiiso em gar foi realizada em duplicata. Neste mtodo, a monocamada de clulas vivas apresenta colorao vermelha enquanto que a colorao amarelada mdica que as clulas morreram. Este mtodo possibihtou avaliar a toxicidade pela formao de halo amarelo indicando a morte celular. O gar atua como uma camada amortecedora impedindo que ocorra agresso mecnica na monocamada celular e possibilitando a difiiso de compostos citotxicos quando existentes.

A figura 35 apresenta fotografias de placas de cultura representativas dos ensaios. Em (a), tem-se a formao do halo mais amarelado referente resposta positiva, isto , a partir da interao com o material citotxico no centio da placa (controle positivo). Em (b), a fotografia refere-se ao substiato Ti que como pode ser observado no apresenta halo. Todos os substratos foram testados, observando-se a no formao de halos, resposta no citotxica. A ttulo de comparao, em (c) temse um pedao de papel de filtio que no citotxico (controle negativo).

I v. Resultados e Discusso

78

Figura 35 - Fotografa do ensaio de toxicidade realizado com o substrato metlico Ti pelo mtodo da difuso em gar. (a) controle positivo com ltex; (b) substrato metlico (Ti); (c) controle negativo com papel de filtro.

A interface entre as duas regies, clulas mortas e sadias, ilustrada na figura 36 com fotografias obtidas em ensaios com um cilindro de ltex, controle positivo.

JK. Resultados e Discusso

79

clulas ^dvas conti

clulas

mortas

Figura 36 - Fotografias obtidas por microscopia ptica da placa de controle positivo (a); regio com clulas vivas (b); regio de interface entre o halo com clulas mortas e as clulas vivas (c).

IV.4.4 Caracterizao dos recobrimentos

Para a asperso trmica foram utilizados ps de HAp obtidos em escala piloto, HAp-cr, HAp-ar e Hp-Na e os resultados foram comparados com os ps obtidos nos recobrimentos com HAp-i e
AI2O3

da Brodmann, ps utilizados

comercialmente. As diferentes condies experimentais realizada por asperso trmica a plasma e HVOF so apresentadas na tabela 14.

Tabela 14 - Cdigos utilizados para descrever as diferentes condies experimentais para recobrimento por plasma e HVOF.

Material aspergido

Plasma-Ha I H A-T1-P-H2-II A-T2-P-H2-n A-TV3-P-H2-II A-T4-P-H2-n A-TV3-P-He HAp-i-T,-P-He HAp-i-TV3-P-He A-HAp-i-Ti-P-He A-HAp-i-TVj-P-He HAp-ar-T,-P-He HAp-ar-TV3-P-He A-HAp-ar-T,-P-He A-HAp-ar-TV3-P-He HAp-i-Ti-HV HAp-i-T2-HV HAP--TV3-HV HAP--T4- HV Plasma-He A-T,-P-He HVOF

AI2O3

HAp-i

HAp-i-T,-P-H2-I HAP--T2-P-H2-I HAP--TV3-P-H2-I HAP--T4-P-H2-I -

AI2O3 -1HAp-i HAp-ar AI2O3 + HAp-ar HAp-Nz A2O3 + HAP-N2 Onde: [A=
AI2O3],

HAP--T1-P-H2-II HAP--T2-P-H2-II HAP--TV3-P-H2-II HAP--T4-P-H2-II A-HAp-i-T,-P-H2-II A-HAP--T2-P-H2-II A-HAP--TV3-P-H2-II A-HAP--T4-P-H2-II -

HAp-N2-T,-P-He HAP-N2-T1-HV HAp-N2-TV3-P-He A-HAp-N2-T,-P-He A-HAp-N2-TV3-P-He

[P= plasma], [1= plasma com fluxo de H2=5,5],[n= plasma com fluxo

de H2=8,5], [ar = ar], [N2= nitrognio], [HAp-i = HAp importada], [T= Ti (1,2 ou 4)], [TV3 =Ti-6Al-4V]

Os ps obtidos por HAp-cr no puderam ser aspergidos sobre os substratos por provocarem entupimento do sistema de alimentao dos ps. Este fato pode estar relacionado a morfologia acicular (figura 30) dificultando a escoabilidade.

Por difratometria de raios X dos substratos recobertos com HAp-i por plasma de hidrognio na condio 1 (figura 37), observa-se a presena das fases hidroxiapatita, como majoritria e, xido de clcio e P-TCP, em menores propores, em todos os tipos de substratos. Essa condio de recobrimento no apresentou, visualmente e por tato, bons resultados. Por isso foram utilizadas condies mais energticas e com maior fluxo de hidrognio. Os difratogramas dos recobrimentos referentes a essa nova condio so apresentados na figura 38.

CAO I P-TCP

03

HAp-i-TV^-H

HAp-i-T^-P-HjI
20 40
20 (O)

60

80

100

Figura 37 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com HAp-i na condio de plasma de hidrognio (1) e calcinados a 500C/3h. Os picos no assinalados pertencem a HAp.

IV. Resultados e Discusso

82

1 P-TCP

CO a
ll.l
JA-I'

1 HAp-i-T^-Pi^
^iiiiiU

HAp-i-T^-P-H^-II

20 40 60 100

2e(o)

Figura 38 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com HAp-i na condio de plasma de hidrognio (II) e calcinados a 500C/3h. Os picos no assinalados so da fase HAp.

Nos recobrimentos com alumina, houve transformao parcial da fase aalumina para y-alumina, independentemente do tipo de substrato ou plasma utilizado, H2 ou He (figuras 39 e 40). Essa transformao decorre do resfiiamento rpido que sofre o material no estado fundido ao atingir o substrato frio. A deteco da alumina-a nos recobrimentos pode ser atribuda a partculas isoladas que permaneceram slidas ou sofreram fiiso parcial durante a deposio.

IV. Resultados e Discusso

83

Aip3-a

I A-Tj-P-H-J

A-T2-P-H -J

A-TV^-P-H -II

20
20 (01

60

80

100

Figura 39 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com AI2O3 na condio de plasma de hidrognio (II) calcinados a 500C/3h.

A Figura 40 apresenta difratogramas de substratos recobertos primeiramente com alumina e depois por HAp-i, na condio de plasma de hidrognio 11. So observados alm da fase majoritria de HAp, picos de alumina gama, de xido de clcio e P-TCP. Um pico no pode ser identificado para a condio A-HAp-i-TaPH2-II. Em funo da fina camada de recobrimento na condio A-HAp-i-TVs-PHaII foram observados picos pertencentes a liga do substrato. T-6A1-4V.

IV. Resultados e Discusso

84

\ CaO A ^ O j y
[T-6A1-4V

tno identificado p-TCP

\ Mi
ni

13

1
1 ^

A-HAp-i-TjP-H^-II

[ A-HAP-1-TV3-P-H j l l

jgJ

ao

4)
2e(")

60

80

100

Figura 40 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com AI2O3 e HAp-i na condio de plasma de hidrognio (11), calcinados a 500C/3h.

A figura 41 apresenta os difratogramas referentes as deposies de asperso trmica com He para AI2O3 e HAp-i sobre substrato Ti. Nos substratos revestidos com alumina, foram identificadas as fases de alumina alfa e gama, alm de picos de um xido misto de sdio e aluminio. Este xido formado no processo de obteno da alumina.

A HAp-i aspergida por plasma de He apresentou como fase principal a HAp com decomposio parcial para CaO e P-TCP.

IV. Resultados e Discusso

IP-TCP
CaO
Al203-a
AI2OJY

83

JNaAljP ,7

A-Tj-P-He

HAp-i-T^-He

A-HAp-i-T-P-He

2D

40

60

80

29 (o) Figura 41 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com AI2O3 e HAp-i na condio de plasma de He calcinados a 500C/3h. Os picos no assinalados pertencem fase HAp.

Os difratogramas referentes s deposies de HAp-ar e HAp-N2 por plasma de He so apresentados na figura 42. Os substratos recobertos com HAp-N2 ou HAp-ar apresentaram comportamento semelhante, com presena da fase principal de HAp, picos de mistura das fases provenientes da decomposio da HAp, p-TCP e CaO.

CO i p-TCP

HAp-N^-T -P-He

)H

1I ,

A-HAp-N T-T -P-He

)-ar-T ,-P-He
20

40
2G
(o)

60

80

Figura 42 - Difratogramas de raios X de substratos recobertos com HAp-ar e HApN 2 na condio de plasma de He calcinados a 500C/3h.

Por DRX o\ observado que os revestimentos mais cristalinos foram obtidos com plasma de He. O plasma de H2 diminui a cristalinidade dos recobrimentos. Este resultado pode ser explicado devido a maior reatividade do gs hidrognio, que ao interagir com o p, alm de fimdir o material, reage quimicamente. Como conseqncia da reatividade quimica e trmicas a fase P-TCP aparece mais intensamente na condio de plasma de H2.

Os revestimentos de HAp-i nas diferentes condies de asperso sofreram decomposio de fase em CaO. A fase CaO surge da decomposio de

hidroxiapatitas ricas em clcio [2, 6]. Este fato foi observado em todos revestimentos com os ps de HAp, independente da condio de asperso. Estes resultados esto de acordo com os valores superiores a 1,67 para a relao Ca/P, tabela 8.

IV. Resultados e Discusso

87

Por DRX, foi possvel constatar que os revestimentos com ps de HAp-i so aparentemente mais cristalinos apresentando picos de difrao mais bem definidos e estreitos, quando comparados aos revestimentos com HAp-ar e HAp-N2, independe do tipo de plasma utilizado.

As figuras 43 e 44 apresentam os difratogramas referentes as deposies por HVOF. Estas camadas so mais finas comparativamente aos recobrimentos por plasma, sendo observado nos difratogramas, os principais picos do metal (Ti).

p-TCP

1
l
1

iTi
1^1 HAp-i-Ti-HV

V
55

I ^ ! >/!

i. !
I

' ! l|HAp-i-T2-HV
l I 1 HAP-1-TV3-HV 1

,4l l i lj|
1
2D

IIHAP--T-HV

40

60

80

20(0)

Figura 43 -

Difratogramas de raios X de substratos recobertos com HAp-i na

condio de HVOF e calcmados a 500C/3h. Os picos no assinalados pertencem a fase HAp.

IV. Resultados e Discusso

88

A deposio por HVOF apresenta condies altamente oxidantes que acabam por decompor a hidroxiapatita nas fases alfa e beta tricalciofosfato. Essa condio, visando sua aplicao em implantes metlicos, favoreceria a dissoluo do recobrimento. Um estudo "in vivo" poderia comprovar se este revestimento possui propriedades osseoindutoras.

,a-p-TCP

HAp-N jTfHV

20

40

eo
26

80

Figura 44 - Difratograma de raios X de substrato de TI recoberto por HAp-Na por HVOF e calcinados a 500C/3h. Os picos no assinalados pertencem a fase HAp.

Os valores mdios de rugosidade das superfcies dos recobrimentos so apresentados na fgura 45 em Ra ()J.m). As colunas vermelhas referem-se as

deposies por plasma de hidrognio e HVOF e as azuis, por plasma de hlio. Os maiores valores de rugosidade so observados para os ps HAp-ar e HAp-Na, aspergidos com plasma de He com camada intermediria de alumina. No foram observadas diferenas em relao ao tipo de substrato metlico. HAp-i, com ou sem a camada de alumina, apresentou os menores valores em termos de rugosidade mdia. Maiores valores de rugosidade proporcionam o crescimento celular dentro das cavidades auxiliando na fixao do implante.

80

E ra

70 60

n 50 E
12

40

o 30 ra i 20 o Ol 3 10

te.

5
r

7 =

^
^ < < X
X

<

s o.
H
I

-L

nI, s
I

M
pl. H
I

H
I

< < <

I

<

Figura 45 - Rugosidade mdia. Ra (|im), dos substratos recobertos por plasma de H 2 , He e HVOF.

Menores

valores

de rugosidade

so

observados

nas

amostras

com

recobrimento de HAp-i (50|im), quando comparados aos valores das HAp-ar (69|am) e HAp-Na (66fam).

IV. Resultados e Discusso

90

Isto est de acordo com o tamanho mdio de particulas/aglomerados dos ps HAp-i, HAp-Na e HAp-ar medidos 2,5; 31,8 e 41,3 pm, respectivamente. Assim, quanto maior o tamanho mdio de particulas/aglomerados dos ps, maiores os valores de rugosidade na superfcie do recobrimento.

Os menores valores de rugosidade foram encontrados nas condies de plasma de hidrognio para a HAp-i (6,8p,m) e alumina (6,2pm).

A anlise microestrutural em MEV, das amostras preparadas de acordo com as condies apresentadas na tabela 5, foi realizada com o objetivo de se verificar a distribuio de porosidade, o grau de uniformidade microestrutural trincas e a adeso da camada revestida (figuras 46, 47(a e b) e 48(a e b)). Foram escolhidas micrografias representativas para cada srie, no tendo sido observadas mudanas significativas em funo do tipo de liga utilizada como substiato. Mudanas morfolgicas ocorrem de uma srie para outra.

No so observadas diferenas significativas em fimo da alterao nas condies de plasma de hidrognio 1 e II, como pode ser observado nas micrografias. As diferenas surgem quando so comparados os ps de alumina e de hidroxiapatita. Os recobrimentos com alumina apresentam um relevo mais suave, enquanto com a hidroxiapatita bastante irregular (figura 46).

IV. Resudados e Discusso

91

Figura 46 - Micrografias dos recobrimentos referentes tabela 5. (a) HAp-i por plasma de H2-I; (b) HAp-i por plasma de H2-II; (c) deposio de AI2O3 por H2-II, (d) HAp-i por H2-II, aps deposio de AI2O3, SE.

IV. Resultados e Discusso

92

A srie obtida por plasma de H2, apresentou trincas na regio da interface cermica/metal trincas dificultando o preparo do material para observao em MEV. As deposies com AI2O3 e HAp-i/ AI2O3 so apresentadas na figura 47. Em (b) observa-se trincas na regio de interface HAp-i/ AI2O3.

lesin-

lOLun

Figura 47 - Micrografias dos recobrimentos por plasma de H2-II referentes a tabela 5. (a) regio da interface AlaOs/substrato; (b) regio da interface da HAp-i e Al203/substrato de Ti, (BSE, SE).

Na condio de plasma de He, utilizando-se HAp-ar e HAp-Na observa-se qualitativamente a boa adeso da camada cermica ao substrato, isto , porque no so observadas trincas na proximidade da regio interface metal/cermica figuras 48 e 49. As micrografias tambm apresentam o preenchimento das cavidades metlicas pela cermica demonstrando que a cermica, realmente passou por um estado de fuso moldando-se superficie do substrato.

IV. Resultados e Discusso

93

^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^

ti-'-;*'.

20jxm

''^^^^^

Figura 48 - Micrografias dos recobrimentos referentes tabela 5. (a) HAp-ar por plasma de He; (b) HAp-Na por plasma de He; (a-1 e a-2) regio da interface da HApar/substrato de Ti; (b-1 e b-2) regio da interface da HAp-Na/substrato de Ti (SE, BSE).

IV. Resultados e Discusso

94

./iK'^adi-

1 0 0 ^
1-

Figura 49 - Micrografias dos recobrimentos referentes tabela 5. (a) HAp-ar por plasma de He, aps recobrimento de recobrimento de
AI2O3; AI2O3;

(b) HAp-Na por plasma de He, aps

(a-1 e a-2) regio da interface da HAp-ar e

Al203/substrato de Ti; (b-1 e b-2) regio da interface da HAp-N2 e Al203/substrato de T,. BSE, SE.

IV. Resultados e Discusso

95

As micrografias por plasma de He com HAp-i so apresentadas na figura 50. A regio da interface entre a HAp-i e alumina apresenta trincas, independente do substrato (figura 50 c-1).

Mgura 50 - Micrografias dos recobrimentos referentes as deposies por plasma de He, tabela 5. (a) HAp-i; (b) AI2O3 (c) HAp-i, aps recobrimento de AI2O3; (a-1, b-1 e c-1) regio das interfaces. BSE, SE.

7K. Resultados e Discusso

96

As micrografias dos recobrimentos obtidos por HVOF apresentam superfcie irregular (fgura 51).

,1,

3/j.in

Figura 51 - Micrografias dos recobrimentos obtidos por HVOF de acordo com a tabela 5. (a) HAp-Na; (b) HAp-i.

Em (a), com maior aumento observa-se pequenos gros, semelhantes a morft)logia apresentada na fgura 29 indicando que a HAp neste caso no sofreu fuso.

Com o objetivo de se avaliar o sistema de deposio, foram aspergidos dois tipos de prteses de implante de quadril com a HAp-i na condio de plasma de Hall. As prtese foram colocadas em tomos com rotao constante e submetidas ao jato de asperso trmica. Essas prteses por serem de geometria mais complexas foram indicativos valiosos quanto ao sistema de deposio adotado. Pela anlise visual das prteses, no foram encontradas trincas ou escamaes na superfcie, (fgura 52), indicando que o sistema adotado quanto a distncia de projeo, e demais parmetros so adequados.

Figura 52 - Fotografia de prteses de quadril submetidas ao jato de asperso trmica com HAp-i na condio de plasma de H2-II.

IV. Resultados e Discusso

IV.4.4.1 Avaliao citotxica dos recobrimentos

98

Todas as superfcies recobertas, segundo as condies da tabela 5, foram testadas em relao citotoxicidade pelo mtodo da difiiso em gar. A superficie dos recobrimentos foi colocada em contato direto com o gar.

Este ensaio possibilitou avaliar a superfcie do recobrimento cermico de forma seletiva, pois o substrato metlico no entra em contato com o gar, no interferindo nos resultados.

Nenhuma das superfcies testadas apresentou citotoxicidade (figura 53 (c) e (d)). Os resultados dos testes foram negativos, isto , no h formao de halo amarelo. Em todas as condies testadas, os substratos revestidos foram retirados do gar. Por microscopia ptica, no foi observado nenhum tipo de anomaha nas clulas ou na colorao das placas (figura 53, (c-1) e (d-1)). A figura representativa das demais condies avaliadas. Este resultado indica que o processo de asperso trmica utilizado no introduziu no material estudado, modificaes que fossem nocivas s clulas, assim como a limpeza da sala de deposio e equipamentos utilizados.

O p de HAp-i, citotxico no mtodo de supresso de colmas aps ser submetido as tcnicas de plasma ou HVOF, no apresentou nenhum grau de citotoxicidade. As altas temperaturas envolvidas nestas tcnicas eliminou por combusto os compostos orgnicos citotxicos.

IV. Resultados e Discusso

99

controles

avaliao dos recobrimentos

Figura 53 - Fotografas dos ensaios de citotoxicidade realizados com os substratos recobertos referentes a tabela 5. (a) controle positivo (cilindro de ltex); (b) controle negativo (papel de filtro); (c) N2-HAp-T|-PHe; (c-1) sob a chapa aspergida N2-HAp-TrPHe; (d) ar-HAp-Ti-PHe ; (d-1) sob a chapa aspergida ar-HAp-Ti-Phe.

IV. Resultados e Discusso

IV.5 Obteno de corpos porosos de HAp

100

O p HAp-N2 foi utilizado para testar o processamento de biocermica porosa pelo mtodo gelcasting de espumas. Amostras de densidade a verde de 0,44g/cm^ foram sinterizadas em diferentes temperaturas, apresentando densidades de 0,72 a 0,77g/cm^ (tabela 15).

Tabela 15 - Densidade das cermicas porosas aps sinterizao por 3 horas.

Temperatura de amostra Sinterizao (C) 1 2 3 4 5 1200 1250 1300 1350 1400

Densidade geomtrica a verde (g/cm^) 0,42 0,44 0,43 0,44 0,44

Densidade geomtrica (g/cm') 0,73 0,72 0,73 0,74 0,77

Aps sinterizao, as amostras foram analisadas por DRX (figura 54). Nas amostras sinterizadas nas temperaturas de 1250, 1350 e 1400C, observa-se a presena da fase hidroxiapatita e, em menores quantidades, a fase P-TCP, na condio de 1250C e a-pTCP, para a condio acuna de 1300C.

IV. Resultados e Discusso

101

a p-TCP 1200^

(O

1250OC 1300C
ju... i . . _ . . J U j

1
(O

-g co

1350OC

jLI
20 40 60 80

1400C 10 0

29(0)

Figura 54 - Difratogramas de raios X das amostras de HAp-Na porosa sinterizadas por 3 horas, nas temperaturas indicadas. Os picos no assinalados so da fase HAp.

IV. Resultados e Discusso

Micrografias das amostras de HAp-Na porosa obtidas nas

102
diferentes

temperaturas de sinterizao so apresentadas na figura 55. A porosidade se encontra distribuda na forma de poros esfricos interconectados.

A figura 56 apresenta micrografias dos corpos cermicos, sem trincas e empenamento aps a etapa de sinterizao, indicando que a eliminao da matria orgnica utilizada no processamento no acarretou problemas macroestrutura. O aumento na temperatura de 1200 a 1400C proporcionou um aumento no tamanho mdio dos gros (figura 56 (e)).

Os resultados obtidos nos ensaios de citotoxicidade pelo mtodo de supresso de colnias para a HAp-Na porosa sinterizada a 1200C por 3 horas revelam que a HAp-Na porosa apresenta ICsoc/.) maior que 100%, mdicando portanto ausncia de citotoxicidade. Esses resultados indicam que todas as substncias orgicas utilizadas, como dispersantes, monmeros e agentes

espumantes so eliminadas durante a etapa de siterizaao.

Este tipo de estrutura quando implantado permite o crescimento de tecido sseo a partir desses canais para seu interior com a posterior passagem de nutrientes para a manuteno e renovao dos tecidos.

500 fim

Figura-55 Micrografias de fraturas de amostras de HAp-Na porosa sinterizada em diferentes temperaftu-as. (a) 1200C, (b) 1250C, (c) 1300C, (d) 1350C e (e) 1400C, por 3 horas.

20|mi

Figura 56 - Fraturas de amostras de HAp-Na porosa sinterizadas por 3 horas a (a) 1200C, (b) 1250C, (c) 1300C, (d) 1350C e (e) 1400C.

Os resultados obtidos neste trabalho permitem as seguintes concluses:

HAp obtida por neutralizao, com sistema de refluxo ou perodo de envelhecimento de 20 dias estvel a 1250''C. O sistema utilizado permite a produo de HAp em escala de laboratrio ou piloto com rendimento superior a 95% e alto teor de pureza.

A HAp obtida por neutralizao em sistema fechado com fluxo de nitrognio e utilizao de gua fervida no preparo das solues, permite a eliminao de carbonatos no produto final. Os carbonatos (CO so absorvidos do ar.

A sntese de HAp por neutralizao com envelhecimento de 20 dias produziu partculas/aglomerados maiores e mais cristalinos.

A partir dos mtodos cristalizao e neutralizao foi possvel obter corpos monolticos com densidade superiores a 90% da densidade terica da HAp, ressaltando que tais ps foram utilizados sem qualquer trabalho de beneficiamento.

As snteses de HAp por cristalizao e sol-gel/aquoso produziu como fase principal a HAp e como secundria, o P-TCP, a 1250C. Por sol-gel/alcolico a fase majoritria foi o TTCP. O meio alcolico no disponibilizou os grupos OH' necessrios a formao da HAp durante a precipitao.

Nas

snteses

da

HAp

foram

utilizados

reagentes

em

quantidade

estequiomtrica e as razes Ca/P em todas as condies foram superiores a 1,67.

integridade

da

interface

dos recobrimentos

obtidos

por

plasma

apresentaram melhores resultados em termos de adeso/coeso e estabihdade das fases cristalinas, quando comparados ao HVOF, observado quahtativamente em MEV. O HVOF provocou a decomposio da fase HAp nos recobrimentos devido ao poder oxidante da chama

V. Concluses

106

A utilizao de gs secundrio He, produziu recobrimentos mais cristalinos e com menor decomposio da fase HAp, em relao aos recobrimentos obtidos com gs secundrio H2, evidenciado nos difratogramas. Este resultado se deve a maior reatividade qumica do H2 associada aos efeitos trmicos gerados no plasma, que tambm diminuram os valores da rugosidade mdia, comparados aos maiores valores de rugosidade obtidos por He.

O p de HAp obtido por neutralizao ao importado produziu recobrimentos com maiores valores de rugosidade em todas condies testadas. Os recobrimentos com as camadas intermedirias de alumina forneceram os maiores valores de rugosidade mdia em todas condies testadas.

A morfologia acicular das partculas dos ps de HAp obtidos por cristalizao devido a baixa escoabilidade inviabilizaram a asperso por obstruir o sistema de trajeto do p.

O mtodo gelcasting'' de espuma foi utilizado com eficincia na obteno da HAp porosa. Os corpos porosos no sofreram trincas ou empenamento durante a sinterizao e mantiveram como fase principal a HAp e secundria o P-TCP at 1400C.

Atravs dos ensaios "in vitro" constatou-se a no citotoxicidade dos subsfratos metlicos, das HAp sinttica, recobrimentos aspergidos, amostias de HAp sinterizadas porosas e densas.

A partir da sntese da HAp por neutralizao foi possvel aplicar o material na forma de corpo cermico denso, poroso e na forma de recobrimentos.

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