UNIVERSIDAD DE LA CINEGA DEL ESTADO DE MICHOACN DE OCAMPO

LICENCIATURA EN GENMICA ALIMENTARIA

LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR REPORTE DE LA PRCTICA NO. 2: PREPARACIN DE MEDIO NUTRITIVO LBA

ALUMNO: JESS JOS HERNNDEZ BAUTISTA 5 SEMESTRE, GRUPO A

PROFESOR: PEDRO DAMIN LOEZA LARA

INGENIERA BIOQUMICA: SARA GLVEZ

SAHUAYO, MICH., 1 DE DICIEMBRE DE 2011

INTRODUCCIN Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para eldesarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, puede ser inoculado y a continuacin incubado encondiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. (Preparacin de medios de cultivo, (s/f)). Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de

crecimientonecesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforoy sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustanciasinductoras del crecimiento. (Preparacin de medios de cultivo, (s/f)). El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriolgicos. Sedisuelve completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 40C. (Hctor valos Flores, comunicacin personal, 29 de Diciembre, 2011). Para poder usar los medios de cultivo primero hay que esterilizarlos. La esterilizacin es el proceso mediante el cual se alcanza la destruccin o eliminacin de todas las formas de vida microbiana, incluyendo las bacterias y sus estructuras. Se puede esterilizar con un autoclave de laboratorio, el cual est formado por un recipiente en el que el vapor circula a alta presin y que tiene la finalidad de la esterilizacin. El vapor saturado se condensar inmediatamente liberando su alto calor de evaporizacin (que es el agente destructivo). Para que una esterilizacin sea efectiva, el vapor debe saturarse y por consiguiente debe purgarse todo el aire del interior de la cmara antes de iniciar el proceso. (Autoclaves, (s/f)). El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua, y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121C con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos

formadores de esporas. (H. valos Flores, comunicacin personal, 29 de Diciembre, 2011). OBJETIVOS Preparar el medio nutritivo LBA (Luria-Bertani-Agar), para la siembra de Escherichia coli. MATERIALES Cajas Petri de plstico o de vidrio estriles, balanza analtica o digital, vasos de precipitado de 50 100 ml, agua destilada, probetas de 100 ml, esptulas, agitadores magnticos, matraz de 250 500 ml, torundas, cinta selladora, tijeras, masking tape, mechero, papel aluminio y guantes de asbesto. Triptona (10 g), extracto de levadura (5) cloruro de sodio (NaCl) (10), agar bacteriolgico (15), pH 7.5 ajustado con NaOH 10 M. MTODOS Descripcin de la actividad previa a la prctica: En caso de utilizar cajas Petri de vidrio, stas debern esterilizarse, previo al inicio de la prctica, en una olla de presin o autoclave, a 115 libras de presin, durante 20 minutos y almacenarse en papel de estraza. Procedimiento: a. Primero pesamos 2.5 g de Triptona y los vaciamos en un vaso de precipitado que contena 100 ml de agua destilada en agitacin. b. Luego pesamos 1.25 g de extracto de levadura y los vaciamos al vaso de precipitado. c. Pesamos 2.5 g de cloruro de sodio (NaCl) y los vaciamos al vaso de precipitado.

d. Una vez que la mezcla est homognea, ajustamos el medio con NaOH (55 microlitros) a pH 7.5 y aforamos (con agua destilada) en una probeta a 250 ml. e. Vaciamos el medio en un matraz de 500 ml, pesamos 3.75 g de agar bacteriolgico y losvaciamos en el matraz. f. Esterilizamos el medio nutritivo en una olla de presin o autoclave a 115 libras de presin durante 20 minutos. Esperamos a que la presin de la olla baje y con mucho cuidado sacamos los matraces. Realizamos el vaciado del medio en las cajas Petri, utilizando un mechero de Bunsen. g. Una vez fras las cajas, las sellamos y almacenamos a 4 C. RESULTADOS Los resultados fueron exitosos, ya que se obtuvo un medio de cultivo (LBA) bien solidificado y estril. CUESTIONARIO Cul es la funcin de los medios nutritivos en microbiologa?Cultivar con xito las bacterias deseadas (a la bacteria que se desea cultivar, se le dan los nutrientes que requiere la misma). Cul es la funcin del mechero en la preparacin de los medios de cultivo?Evitar la contaminacin del medio de cultivo (para aislar la bacteria deseada). Por qu debe esterilizarse a 115 libras de presin durante 20 minutos?Para eliminar los organismos no deseados, principalmente los formadores de esporas. Qu otros medios nutritivos conoce para siembra de bacterias? Describa al menos 5 de ellos. 1. Agar Sangre: la Base de Agar Sangre es un medio utilizado para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos, el adicionado de sangre es til para el cultivo de microorganismos fastidiosos. Este medio tambin es conocido como BAB por sus siglas en ingls.

2. Agar McConkey: este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae se desarrollan en el mismo. 3. Agar Chocolate: es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. Contiene glbulos rojos, que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae. 4. Agar Levine: es un medio de cultivo usado para el aislamiento y diferenciacin de E. coli, tiene un aspecto prpura, aunque naranja tras su esterilizacin, es semislido, y est destinado al cultivo en placa. 5. Agar Chapman: es un medio para la deteccin de Staphylococcus patgenos en muestras de alimentos y otros materiales mediante la tcnica de filtracin por membrana. CONCLUSIONES Desde mi punto de vista, se logr cumplir el objetivo, ya que se prepar con xito el medio nutritivo LBA para la futura siembra de Escherichia coli. El procedimiento fue sencillo, por lo cual no hubo problemas para la preparacin del medio. REFERENCIAS Preparacin de medios de cultivo, (s/f). Consultado el 30 de diciembre de 2011, de http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClasePr ocariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo.pdf. Autoclaves, (s/f). Consultado el 30 de diciembre de 2011, de

http://reacdiag.com/pdf/autoclaves.pdf.