Desvios da Lei de Lambert-Beer Fotmetros e Espectrofotmetros

Volnei Resta Amorim Filho

ESPECTROFOTOMETRIA UV/VIS

Fundamento
absoro de radiao de determinados comprimentos de onda por molculas e ons
A interao de na um analito com a radiao promove

eletromagntica

regio

UV/visvel

transies eletrnicas, excitao de eltrons de valncia por excitao mono energtica.

ESQUEMA BSICO DIAGRAMA DE BLOCOS

Fonte de radiao
lmpada de deutrio lmpada de filamento de W lmpada de W-halognio xennio (250 600 nm) lasers, LED vidro (380 2000 nm) quartzo (160 3500 nm) plstico (varivel) Filtros - absoro (30 250 nm) - interferncia (10 30 nm) Monocromadores - prismas - redes de difrao clulas fotovoltaicas fototubos tubos fotomultiplicadores fotodiodos de Si malha de diodos microcomputador registrador comum

Amostra (cubeta)

Seletor de

Detector de radiao

Processador e leitura

Estado Fundamental

Estado Excitado

M + h
E =h.c/

M*

E = Eel + Evib + Erot + Etrans

Estado excitado

Estado fundamental

Espectros de absoro

Lei fundamental da espectrofotometria

A = a.b.c = - log T = - log It/Io

Lei de LambertBeer
Validade - solues diludas - radiaes monocromticas - meio tico homogneo

I0

It

Curva analtica

ABSORBNCIA

CONCENTRAO

0,5689
1,4

3, 84

Curva analtica

1,0

BRANCO

PADRO 3
0,5

PAD

PADR O 1

RO

0
0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10 11 12

Intervalo dinmico linear: regio til para o trabalho

Espectrofotmetro

A = a.b.c
a=
-1 cm

Y = a + bx
b = cm c = mol
-1 L

-1 mol

ab = slope
AAm. CAm.

mol/L

Desvios

reais:

so

fundamentais

representam limitaes reais da Lei de Lambert-Beer >>> LEI LIMITE (lei vlida somente em certas condies) Desvios aparentes: desvios instrumentais e qumicos

Relembrando... Validade Lei Lambert-Beer - solues diludas - radiaes monocromticas - meio tico homogneo

Desvios Reais
- concentraes > 0,01 mol L-1 - solues diludas c/ alta concentrao de eletrlitos; alterao no valor de

Desvios aparentes
1.Qumicos
Espcie absorvente sofre dissociao, associao ou reao com o solvente para gerar produtos que absorvem de forma diferente do analito Ex: solues aquosas de indicadores cido-base

HIn
cor 1

H+ + Incor 2

2. Instrumentais
radiao difusa, qualidade do monocromador

HIn + H2O

H3O+ + In430 nm

Ka = 1,42 10-5

Solues preparadas em HCl 0,1 M e NaOH 0,1 M

570 nm
7,12 103 9,60 102

HIn (0,1 M HCl) In- (0,1 M NaOH)

6,30 102 2,06 104

CHIn = 2,00 10-5 a 16,00 10-5 mol L-1 Ka = [H3O+][In-]/[HIn] 1,42 10-5 = [In-]2/2,00 10-5 [In-] [In-] = 1,12 10-5 mol L-1

[H3O+] = [In-] CHIn = [HIn] + [In-]

[HIn] = 0,88 10-5 mol L-1

[In] = 1,12 10-5 mol L-1

[HIn] = 0,88 10-5 mol L-1 A430 = 0,236 A570 = 0,073 A430 0,236 0,381 0,596 0,771 0,922 A570 0,073 0,175 0,401 0,640 0,887

A430 = aHIn430.b.[HIn] + aIn430.b.[In] A570 = aHIn570.b.[HIn] + aIn570.b.[In] CHIn mol L-1 2,00 10-5 4,00 10-5 8,00 10-5 12,00 10-5 16,00 10-5 [HIn] 0,88 10-5 2,22 10-5 5,27 10-5 8,52 10-5 11,9 10-5 [In-] 1,12 10-5 1,78 10-5 2,73 10-5 3,48 10-5 4,11 10-5

D.A. Skoog et. al., Fundamentals of Analytical Chemistry, 6a. ed., Saunders College, 1992.

Grfico Abs x [HIn]

In-

HIn

Relembrando... Validade Lei Lambert-Beer - solues diludas desvios reais - radiaes monocromticas - meio tico homogneo

Na prtica... usamos
radiao monocromtica

Fonte contnua + filtros ou redes de difrao

radiao policromtica

desvio = f (qualidade do separador)

Monocromadores

Filtros

radiao policromtica

,
Po Po P P

P o

A = - log (P/Po)
P = Po 10-bc P = Po 10-bc

A = - log

P + P Po + Po

se = A = bc
relao linear

 se

Desvio!

a medida que a entre , aumenta o desvio da linearidade cresce. selecionar prximo ao mx. de absoro.

Luz espria
Radiao frequentemente resultante do espalhamento e das reflexes das superfcies das redes, lentes ou espelhos, filtros e janelas. A absorbncia observada dada pela equao:

log Po + Pe A = P + Pe

Pe/P x 100%

ESQUEMA BSICO
Fonte de radiao Seletor de
lmpada de deutrio (160-380 nm) Abs molecular no UV lmpada de W (350-2200 nm) Abs molecular no VIS/IV prximo lmpada de W-halognio 240-2500 nm UV/VIS/IV prximo Xe (250 600 nm) fluorescncia molecular lasers, LED Filtros - absoro (30 250 nm) - interferncia (10 30 nm) Monocromadores - redes de difrao - prismas vidro (380 2000 nm) quartzo (160 3500 nm) plstico (varivel) clulas fotovoltaicas fototubos tubos fotomultiplicadores fotodiodos de Si malha de diodos microcomputador registrador comum

Cubeta (amostra)

Detector de radiao

Processador e leitura

Arranjo para medidas de absorbncia

Materiais ou elementos pticos

Clulas, janelas, lentes espelhos, e elementos de seleo de devem transmitir a radiao na regio de investigada, ou seja, devem ser transparentes

Fontes Espectroscpicas
1. Fontes contnuas: fornece uma distribuio de ampla dentro de uma faixa espectral em particular 2. Fontes de linhas: emitem um nmero limitado de linhas espectrais

Fontes Espectroscpicas

Lmpada de W

Espectro da lmpada de W Lmpada de D e seu espectro 2

Seletores de comprimento de onda Monocromadores ou filtros

Dispositivo que restringe a radiao medida dentro de uma banda estreita que absorvida ou emitida pelo analito

Uso em equipamentos mais antigos

Seletores de comprimento de onda

3-10 cm UV/VIS: 1200-1400 sulcos/mm ranhuras prximas e paralelas

Largura de banda efetiva do monocromador depende do tamanho e qualidade do elemento de disperso, das larguras das fendas e da sua distncia focal. Um monocromador de alta qualidade tem largura de banda efetiva em torno de 1 a 20 nm

Seletores de comprimento de onda Filtros de Radiao 2 tipos (filtros de interferncia e absoro)

UV/VIS

VIS

Fotmetros de filtro

Seletores de comprimento de onda

Policromadores dispositivos empregados em espectroscopia de emisso e absoro atmica, que contm mltiplas fendas de sada e mltiplos detectores, permitindo assim que vrios sejam medidos simultaneamente
lmpadas Sistema dispersor (prisma + grade de difrao Echelle) detector

atomizador

Espectrmetro de absoro atmica eletrotrmica ou em forno de grafite

com

atomizao

Detectores de ftons
Os mais comuns: fototubos, tubos fotomultiplicadores, fotodiodos de Si e arranjo de fotodiodos Resposta do detector baseada no Efeito Fotoeltrico
+ Superfcie fotoemissiva

Fototubo e circuito complementar

Ctodo: revestido de um metal alcalino ou xido metlico. O nmero de fotoeltrons ejetados do fotoctodo por unidade de tempo diretamente proporcional potncia radiante do feixe que atinge sua superfcie.

Tubos Fotomultiplicadores
Seco transversal

* Significativamente mais sensvel que os fototubos * Dinodos: srie de eletrodos dispostos de tal maneira que a corrente passa a ser amplificada consideravelmente (Efeito Cascata) * A corrente mdia pode ser ainda amplificada eletronicamente e medida

Processadores de sinal e dispositivos de leitura

* Dispositivo eletrnico que amplifica o sinal eltrico proveniente de um detector * Pode efetuar operaes matemticas sobre o sinal: diferenciao, integrao ou converso logartmica * Exemplos: mostradores digitais, monitores de microcomputadores registradores e

Espectrofotmetros

Sentido da radiao

600S

Faixa espectral: 325 1100 nm Lmpada de Whalognio (Feixe nico)

Largura de banda:

Monocromador: rede de difrao 1200 linhas/mm + filtros para seleo da 2a ordem

10 nm

Dimenses: 330 x 320 x 180 mm Peso: 7,5 kg

700 Plus

195 1100 nm Lmpada de tungstniohalognio e de deutrio (Feixe nico)

5 nm

rede de difrao 1200 linhas/mm + filtros para seleo da 2a ordem

Dimenses: 330 x 320 x 180 mm Peso: 11 kg

190 1100 nm Lmpada deutrio e tungstnio (Duplo feixe)

Dimenses: 450 x 450 x 290 mm Peso: 19 kg

< 1,8 nm

Czerny Tuner com rede de difrao 1200 linhas/mm