Conceitos-chave

em Biocel 1
Robert Hooke: pioneiro no desenvolvimento de microscpios, criou o primeiro microscpio composto, e em suas observaes, cunhou o termo clula ao observar inmeros espaos ocos ampliados de fina lmina de cortia. Limite de resoluo: o limite da ampliao dos microscpios aonde dois objetos ainda podem ser vistos como duas coisas distintas. O simples aumento de imagem no traz informaes adicionais, pois isso depende apenas da resoluo. A resoluo por sua vez depende da lente e da qualidade da luz. Os microscpios de maior resoluo atualmente so os microscpios eletrnicos, que conseguem visualizar objetos de at 0,2nm. Unidades de medida: 1 micrmetro (m) o milsimo de 1 milmetro (mm). E 1 nanmetro (nm) o milsimo de um micrmetro. Bactrias costumam ter 1m, enquanto clulas costumam ter entre 10 e 100m.

Aula 1 - Microscopia ptica

Preparo de amostras
Alm de pequena, clulas so difceis de serem observadas por serem transparentes, serem muito hidratadas e frgeis e quando dentro de orgos ou tecidos, precisam ser cortadas em lminas finas pelas quais a luz consiga passar. Por isso, h todo um processo de preparao de amostras, visando maior resistncia e contraste das mesmas, e para que possam ser preservadas por mais tempo: 1. Fixao: o tratamento que preserva as clulas da decomposio, e elimina qualquer reao bioqumica em andamento. Visa preservar a amostra o mais prximo possvel do seu estado natural. 2. Desidratao: a substituio, em etapas, da gua presente no interior da clula por um solvente orgnico, como etanol ou metanol. O mesmo pode ser removido deixando a lmina secar como pode ser substitudo por parafina ou outra resina que o torne rgido, permitindo que seja fatiado. 3. Microtomia: o corte preciso de fatias finssimas que permitam a passagem da luz. 4. Colorao: como a maioria das clulas e seus componentes so transparentes, so usados diversos corantes com afinidade qumica por determinados componentes celulares, ajudando na identificao dos mesmos.

Tipos de microscpios
Microscpio simples (ou de campo claro): o microscpio mais comum. Em geral requer que a amostra seja fixada e corada antes da observao, mas com o ajuste certo da luz na lente condensadora possvel observar clulas vivas ou a fresco, sem colorao. Microscpio de contraste de fase: dispensa o uso de corantes, permitindo a observao de clulas vivas. Vrios filtros (anis de fase) interferem no caminho da luz, criando um contraste claro/escuro forte nas estruturas celulares. No entanto, com muitas clulas juntas, a imagem pode ficar um pouco confusa.

Microscpio de contraste interferencial: tambm cria contraste usando filtros para alterar o caminho da luz. A imagem final mais agradvel, mas o equipamento mais caro que o contraste de fase. Quando as clulas esto em camadas, possvel focar num plano especfico, obtendo-se assim cortes pticos sem que o tecido seja cortado. Microscpio de fluorescncia: utiliza luz ultravioleta e requer o uso de corantes fluorescentes. Esses corantes absorvem a luz ultavioleta e a emitem num comprimento onda do espectro visvel. Permitem ver estruturas normalmente muito finas para serem vistas na luz visvel. Microscpio confocal de varredura a laser: alm da luz visvel, possui uma fonte de luz ultravioleta e outra de raio laser. O laser incide sobre a amostra, e um sistema de filtros e aberturas capturam sucessivamente a fluorescncia emitida de diversos planos focais. Esse conjunto de imagens processado digitalmente por um software, e imagens 3D so geradas em computador.

Aula 2 Princpios do Funcionamento dos Microscpios Eletrnicos

Principais diferenas entre o microscpio ptico e o eletrnico de transmisso

A fonte: luz vsivel no microscpio ptico e feixes de eltrons no microscpio eletrnico de transmisso. O feixe de eltrons gerado por um filamento de tungstnio aquecido. O comprimento de onda dos eltrons muito menor do que o da luz visvel, por isso a resoluo dos microscpios eletrnicos bem maior. O vcuo no coluna do microscpio eletrnico de transmisso. Serve pra impedir a combusto do filamento e para impedir a coliso dos eltrons com outros tomos no ar. Por outro lado, impossibilita a observao de clulas vivas. As lentes: vidro no microscpio ptico e eletromagnetos no microscpio eletrnico de transmisso. As lentes magnticas desviam e orientam os eltrons da mesma forma que as lentes de vidro desviam e orientam o feixe de luz. A espessura da amostra: da ordem de micrometros (m) no microscpio ptico, e nanometros (nm) no microscpio eletrnico de transmisso. Pra ser atravessada por eltrons, a fatia da amostra precisa ser muito fina.

Preparo de amostras para o microscpio eletrnico de transmisso

Devido ao vcuo no interior da coluna do microscpio eletrnico de transmisso que destri facilmente toda a estrutura celular -, as amostras precisam ser especialmente preparadas para observao: 1. Fixao: mergulha-se a clula em soluces que estabilizam as estruturas celulares, em geral o formol e o glutaraldedo (mais forte). Essas substncias so diludas em tampes, que ajudam a manter o pH e a osmolaridade da soluo fixadora o mais prximas possvel das condies vitais. Assim evita-se a defromao/rompimento das estruturas celulares. 2. Ps-fixao e contrastao: como os seres vivos so basicamente compostos de tomos leves que pouco impedem a passagem de eltrons, para se ter o contraste so utilizadas solues de sais de metais pesados, que ainda ajudam a preservar a clula. Esses sais se acumulam nas

membranas (smio e chumbo), no DNA (urnio) e em outras estruturas, facilitando sua visualizao. 3. Desidratao, incluso e microtomia: a hidratao das clulas um fator que dificulta a passagem dos eltrons. Para resolver isso, toda a gua substituda por um solvente orgnico (como etanol, metanol ou acetona) diludo em concentraes cada vez maiores. Depois, aplicada uma resina lquida (polimerizao), que endurece ao ser aquecida, permitindo que a amostra seja cortada em fatias finas (ultramicrotomia) o suficiente para que os eltrons possam atravessar as reas livres do acmulo dos metais pesados.

O Microscpio Eletrnico de Varredura

No microscpio eletrnico de varredura, o tungstnio aquecido gera um feixe de eltrons que incide sobre a amostra, mas ao invs de atravess-la, eles varrem a amostra extraindo deste outros eltrons (chamados eltrons secundrios) que so convertidos em imagem por um software de computador, gerando uma sensao de relevo e profundidade.

Preparo de amostras para o microscpio eletrnico de varredura

Como em geral o microscpio eletrnico de varredura utilizado para gerar imagens da superfcie externa das amostras, estas no so fatiadas. O processo de preparo envolve, depois da fixao, a secagem da amostra (para remover toda gua, devido ao vcuo) e seu revestimento com um elemento condutor, para gerao do sinal. Tcnica usada principalmente para a visualizao da estrutura das membranas celulares. Uma das limitaes do microscpio eletrnico de transmisso sempre foi o fato de que as imagens observadas eram cortes ultranos das amostras, isto , imagens bidimensionais de estruturas (clulas) tridimensionais. Isto pde ser contornado com a observao de cortes seriados, uma tcnica bastante trabalhosa, e tambm com a microscopia de varredura. Entretanto, a resoluo do microscpio eletrnico de varredura menor que a do microscpio de transmisso, no permitindo a visualizao de vrios detalhes, principalmente do interior da clula. Em cortes ultrafinos, a membrana plasmtica aparece sempre como uma faixa clara entre duas mais escuras. H muito tempo sabe-se que a membrana celular composta por protenas e lipideos, entretanto essa observao ao microscpio levou concluso errada que que a membrana celular seria um sanduche de protenas, com os pes sendo os lipdeos. Uma membrana assim seria muito rgida, e alm disso, as substncias hidroflicas seriam barradas pela camada de lipdeos, da mesma forma que as hidrofbicas seriam barradas pela camada de protenas, e portanto, essa idia no aparentava estar correta. Com o passar do tempo, o desenvolvimento da criofratura trouxe um novo entendimento sobre a dinmica e o funcionamento das membranas celulares. Essa tcnica (criofratura) surgiu na dcada de 60, e consiste em parar instanteneamente a atividade celular congelando-a em nitrognio lquido (o que ajudava a reduzir os resduos decorrentes das fixaes qumicas por aldedos, e impedia o processo de decomposio celular) e ento fratur-las para separar a bicamada lipdica, expondo a face interior da membrana celular. O processo consiste em quatro etapas: 1. Congelamento das clulas em nitrognio lquido

Aula 3 Criofratura

2. Fratura das clulas 3. Evaporao da superfcie fraturada com platina e aplicao de carbono, formando um molde 4. Destruio dos restos celulares, de modo que apenas a rplica metlica obervada no MET.

A fratura tem grande chance de ocorrer entre as duas camadas lipdicas da membrana (chamadas face E, em contato com o meio extracelular, e P, em contato com o protoplasma) expondo uma superfcie homognea (os lipdeos) com particulas de diversos tamanhos nela inseridas. Essas partculas que atravessam as camadas lipdicas (as vezes uma delas, as vezes as duas, uma ou inmeras vezes) so as proteinas. Essa metodologia foi importante para a sustentao do modelo de mosaico fludo, proposto de Singer e Nicholson.

Aula 4 Cultura de Clulas

A cultura de clulas consiste em manter vivas clulas retiradas de um organismo, em pequenos recipientes. Elas podem ser preparadas diretamente de tecidos retirados do animal: nesse caso, so chamadas culturas primrias. Grupos de clulas descendentes das culturas primrias, tranferidos para novos meios de cultura, so chamados culturas secundrias. Para que as clulas sobrevivam in vitro (fora de um organismo), devem ser reproduzidos diversas condies presentes no organismo do qual elas se originaram, tais como temperatura, umidade, osmoralidade e pH. Alm disso, preciso garantir que a cultura no seja contaminada por bactrias ou outros organismos invasores, como fungos. No menos importante, preciso que o meio de cultura contenha todos os nutrientes necessrios para o metabolismo das clulas cultivadas, e que as substncias excretadas (que podem modificar a acidez do meio e intoxicar ou matar as prprias clulas) sejam removidas, seja pela substituio peridica do meio de cultura ou pela transferncia das clulas para recipientes com novos meios. O meio de cultura um espcie de sopa onde se encontram disponveis todos os nutrientes necessrios para o desenvolvimento das clulas em questo, como aminocidos, aucares, vitaminas e sais minerais. Podem entrar na mistura tambm protenas do soro de animais, antibiticos e fungicidas. Osmoralidade e pH tambm devem estar adequados. Num organismo, cada tipo celular tem suas funes e fisiologia distinta, sendo programado para um determinado nmero de divises e tempo de vida. As clulas da pele, por exemplo, se renovam constantemente, enquanto as clulas nervosas demoram muito mais. A cultura de cada tipo celular mantm in vitro as mesmas caractersticas que possuiam nos seus organismos de origem; assim, os fibroplastos (clulas do tecido conjuntivo) secretam colgeno, clulas cardacas se contraem, e as clulas epiteliais aderem entre si formando uma camada sobre a placa de cultivo. Poder contar com uma populao celular homognea ideal para testar os efeitos de diversas condies experimentais, pois elas possuem as mesmas condies de seus tecidos de origem. Geralmente, as culturas celulares s podem ser mantidas por um numero limitado de geraes. Mas eventualmente, alguns tipos celulares sofrem mutaes que tornam ilimitada sua capacidade de proliferao. Ao contrrio das clulas de cncer que tambm se multiplicam sem parar, essas clulas mantm diversas caractersticas de suas clulas de origem. Alm das mutaes naturais, estas podem ser induzidas por mtodos qumicos ou infeces virais. Algumas dessas linhagens transformadas, se introduzidas em animais, podem originar tumores, assim como algumas linhagens

transformadas tiveram origem em tumores malignos. Atravs das linhagens celulares possvel se obter uma grande quantidade de clulas homogneas para experimentos. Estas podem inclusive ser congeladas em nitrognio lquido e armazenadas para uso posterior. As clulas de uma linhagem no so clones das clulas extradas de um organismo, pois embora sejam muito semelhantes, no so idnticas. No entanto, uma cultura proveniente de uma nica clula um clone, portanto, vrios clones podem ser obtidos de linhagens celulares j estabelecidas. possvel combinar duas clulas de origens diferentes, levando a uma nica clula que carrega o DNA das duas. Quando as clulas resultantes contm dois ncleos, so chamadas heterocrions (hetero=diferente, crion=ncleo), e quando os dois ncleos se fundem num s, temos uma clula hbrida (ou hibridoma). Essas ltima so teis em casos como, por exemplo, quando uma clula hbrida rene a capacidade de se multiplicar rapidamente (de uma clula cancerosa) aliada capacidade de secretar linfcitos, sendo utilizada para produzir grandes quantidades de anticorpos. Clulas-tronco. So aquelas capazes de se multiplicar e dar origem a qualquer tipo celular. O que induz essa diferenciao a prpria programao gentica da clula, assim como os fatores qumicos do meio extra-celular. chamada de pluripotente quando pode dar origem qualquer tipo celular, e de multipotente quando se diferencia mais ainda assim, pode dar origem a diversos tipos celulares numa mesma categoria. Atravs das tcnicas de cultivo celular, os pesquisadores tentam obter clulas-tronco e induzir sua diferenciao, in vitro. Com o sucesso dessas pesquisas possvel alcanar a cura para diversos tipos de leucemia (pois as clulas cancerosas so de um tipo mais diferenciado), fabricar sangue a partir das clulas-tronco do prprio paciente para utilizao em tranfuses e cirurgias. Num futuro ainda mais promissor, existe a possibilidade de regenerar rgos inteiros, e at mesmo recompor nervos lesados recuperando pessoas paraplgicas ou tetraplgicas.

Aula 5 Mtodos Bioqumicos para o Estudo da Clula

Fracionamento Celular
Para obter amostras de organelas, preciso primeiro romper as clulas. Mas para evitar confuso quanto de qual tipo celular veio determinada organela, preciso que a amostra seja homognea, ou seja, contendo apenas um tipo celular. Essa tarefa ser diferente para cada tipo de material. Alguns exemplos: 1. 2. 3. Rompimento Celular No fracionamento celular, o objetivo romper a membrana plasmtica sem romper a membrana das organelas. difcil fazer isso, mas para cada tipo celular existem tcnicas especficas. Dentro os mtodos mais usados esto: Choque osmtico: as clulas so colocadas em meio hiposmtico (com maior concentrao de solutos no exterior do que no interior da clula) at arrebentar. muito utilizados para romper hemcias. preciso restaurar a osmolaridade rapidamente para que as membrana das organelas no se rompam tambm.

 Depois do rompimento, os fragmentos de membrana logo se fecham em si mesmos novamente, escondendo da gua a poro hidrofbica da bicamada lipdica, formando pequenas vesculas. Com o rompimento adequado, o resultado uma soluo em que a maioria das clulas est rompida e as organelas esto livres, e o contedo solvel do citoplasma est misturado no lquido onde as clulas foram rompidas. Centrifugao diferencial Uma maneira de separar o contedo celular em vrias fraes usando a fora centrfuga, que utiliza- se das diferenas de densidade para separar os componentes celulares. Centrifugando o homogeneizado a baixa velocidade possvel precipitar os componentes mais densos, como as clulas no rompidas e os ncleos. A uma velocidade maior, conseguiremos precipitar mitocndrias, lisossomos e cloroplastos, por exemplo. A uma velocida ainda maior, podemos precipitar a chamada frao mitocossomal, formada por vesculas variadas, como a membrana plasmtica, o retculo endoplasmtico, o complexo de Golgi e os endossomos. Para ter acesso a macromolculas como o DNA, ribossomos, partculas virais e complexos enzimticos, so necessrias altssimas velocidades durante muitas horas. Depois disso, o que resta so os componentes solveis do citoplasma. Com esse tcnica de centrifugao diferencial, no podemos obter organelas totalmente separadas das demais, devido algumas delas terem densidades muito parecidas. Alm disso, organelas do mesmo tipo tambm podem ter densidades diferentes. Para resolver isso, h um tipo de centrifugao que alm da velocidade e do tempo, pode variar tambm a densidade do meio em que as organelas so centrifugadas. Depois da centrifugao diferencial, e depois recolocamos o produto resultante em solues gradientes de densidade conhecida, como sacarose para separar organelas, sem exercer efeito osmtico. Nesse ltimo tipo de centrifugao, a medida que a velocidade aumenta o material que est a caminho do fundo encontra densidades cada vez maiores do lquido, tendo mais dificuldade de prosseguir. Quando uma organela encontrar uma regio onde a densidade seja igual sua, entrar em equilbrio, se estabelecendo ali, podendo ser ento recolhida por uma pipeta ou seringa, e dessa forma temos uma poro homognea de uma determinada organela. O sucesso de todo o processo de fracionamento celular pode ser avaliado de duas maneiras:

Choque trmico: as clulas so congeladas e descongeladas rapidamente, alternando-se, por exemplo, nitrognio lquido e gua quente. O congelamento da gua dentro das clulas as fazem inchar, e ao serem sbmersas em gua quente voltam ao tamanho normal o repetimento desse processo que rompe as clulas. Macerao: pode ser feita com homogeneizadores parecidos com um liquidificador, de modo mais delicado com homogeneizadores de vidro, atravs do atrito. Pode-se utilizar pequenas prolas de vidro misturadas preparao, que ao se chocarem, rompem as clulas. Sonificao: todas as estruturas, biolgicas ou no, possuem uma frequncia de ressonncia caracterstica. Uma vibrao nessa frequncia, com grande intensidade, pode romper a estrutura. Teoricamente possvel usar o ultra-som com uma frequncia de vibrao e intensidade adequadas ao rompimento da membrana celular, deixando as organelas intactas. Na prtica, os aparelhos de ultra-som no possuem controle de intensidade e frequncia que permita esses ajustes. Tratamento com detergente no-inico: como suas molculas so anfipticas (parte hidroflicas, parte hidrofbicas), elas conseguem substituir as molculas de fosfolipdeo na membrana plasmtica, causando o rompimento. Os detergentes so usados em baixa concentrao e por pouco tempo.

 Por microscopia eletrnica, observando em vrios momentos quais compentes da clula esto presentes naquela frao, e se eles esto em bom estado ou danificados; Pela dosagem de enzimas marcadoras em todas as fraes. Para uma enzima ser marcadora de uma organela, preciso que ela esteja presente apenas nesta e em nenhum outro lugar da clula, e que essa organela seja encontrada em todos os tipos celulares.

A partir dessas fraes menores das clulas contendo organelas purificadas, ou at mesmo de clulas inteiras, podemos purificar as macromolculas que desejamos estudar. Existem tcnicas adaptadas para protenas, lipdeos, acidos nucleicos e aucares. Para exemplificar, a seguir esto os princpios das metodologias bioqumicas mais utilizadas em biologia celular: cromatografias e eletroforese. Cromatografia Cromatografia de partio: adequada para separao de molculas pequenas, como lipdeos e aminocidos. Pode ser feita em papel, com a aplicao da amostra perto de uma das pontas. Mergulhamos essa ponta (mas no a parte em que a amostra est) em um solvente orgnico. Esse solvente vai sendo absorvido pelo papel, e a medida que sobe, dependendo da polaridade (afinidade ou no por gua) as molculas so separadas, de acordo com a facilidade em se diluir no solvente (ou mais de um) utilizado. Quando ao invs do papel se utiliza uma placa coberta por uma fina camada de slica, chamamos de cromatografia em camada simples, cujo processo praticamente o mesmo. Cromatografia em coluna: preenche-se uma coluna (geralmente de vidro) com resina, e aplica-se a amostra sobre a mesma. A medida que a resina recolhida no final da coluna e adicionada sobre a amostra, e a medida que esta obrigada a percorrer toda a coluna, algumas molculas vo ficando presas na resina. Esse processo chamado eluio, e pode levar de minutos dias, dependendo do tamanho da coluna. Diferentes tipos de separao dependem do tipo da resina, que podem ser trs: 1. Filtrao em gel: a resina formada por microesferas, perfuradas por poros de tamanho definido (dependendo da molcula que se pretende separar). Conforme a amostra vai descendo pelo tubo, as molculas maiores que esses poros passam direto e logo saem da coluna, enquanto as menores se encaixam nos poros e demoram mais a sair. Assim, separa-se as molculas pelo tamanho, como por exemplo protenas de diferentes pesos moleculares. 2. Troca inica: a amostra percorrem uma resina formada por microesferas eletricamente carregadas, e as molculas com carga oposta dessas microesferas ficam presas nas mesmas. 3. Afinidade: as microesferas da resina so cobertas por molculas especficas, que se encaixam com as molculas que se deseja separar na amostra. Em geral, essas microesferas so revestidas com anticorpos, que se encaixam com molculas especficas. Eletrofosere uma tcnica importante para o estudo de macromolculas como protenas e cidos nucleicos, e se baseia no estudo do comportamento das mesmas num campo eltrico. Serve para medir molculas pela seu tamanho (massa molecular) e comumente usado para testar a pureza de uma amostra.

Geralmente as macromolculas so eletricamente carregadas: os cidos nucleicos so negativos e as protenas podem ser positivas ou negativas (dependendo do pH onde esto). Portanto, quando colocados num campo eltrico, os cidos nucleicos sempre vo pro lado positivo, enquanto as protenas podem ir para qualquer um dos dois, dependendo do pH. Na eletroforese usado um suporte slido, geralmente uma gelatina, ou apenas o gel, que contm poros com o tamanho definido de acordo com as molculas que passaro em direo ao plo com a carga oposta sua. Alm disso, as molculas mais mesadas demoram mais pra passar pela malha do gel. Portanto, cidos nucleicos ou protenas so separados pelo seu peso molecular. Dependendo da macromolcula, protenas ou cidos nucleicos, a composio do gel diferente. Para separar o DNA usamos gel de agarose (derivado de amido), para separar protenas usamos poliacrilamida. No caso dos cidos nucleicos, como eles so muito grandes, o gel de agarose possui poros grandes o suficientes para permitir a passagem dos mesmos. No caso das protenas, adicionado ainda o detergente SDS: ele faz com que a protena fique quase linear (o que ajuda na passagem pelos poros, e permite considerar apenas sua carga eltrica e massa), e ainda d a ela carga negativa (nas ligaes peptdicas), o que faz com que seja atrada para o plo positivo durante a eletroforese. O processo ocorre da seguinte maneira: 1. Entre duas placas de vidro, colocado o gel ainda lquido, que endurece com o tempo temperatura ambiente. Enquanto ainda est lquido, encaixada no topo entre as duas placas uma pea chamada pente, que ao ser retirada depois do gel se solidificar, deixa no mesmo os espaos nos quais sero colocadas as amostras. 2. Para que a corrente eltrica possa fluir pelo gel, colocada uma soluo tampo. Em seguida so colocadas as amostras. Um delas uma amostra padro, de protenas de pesos moleculares conhecidos, para servir de comparao. 3. O aparelho ligado, e a corrente eltrica passa pelas amostras separando as molculas. As molculas maiores corremmenos pela trama, enquanto as menores correm mais. 4. Aps isso, o gel retirado e utilizado um corante especial para a molcula em questo. Os resultados so entao analizados. Eletrotransferncia s vezes necessrio testar se algum protena presente no gel reconhecida por um anticorpo especfico. Como os anticorpos so molculas grandes demais para entrar no gel (e no se pode desnatur-las, pois assim no funcionam), precisamos tirar as protenas do gel sem mistur-las novamente e transfer-las para um papel chamado nitrocelulose. Colocamos a membrana de nitrocelulose sobre a placa de gel, mergulhados numa soluo tampo, e uma corrente eltrica passa no sentido perpendicular, tranferindo as protenas do gel para o papel, estando ento expostas para os testes com anticorpos. Esse mtodo se chama eletrotransferncia, ou Western blottin. DUVIDA: Western blottin direto e indireto, bandavisvel etc Eletroforese bidimensional Citometria de fluxo (ver ultimo exercicio da aula 5)

Aula 6 O Uso de Anticorpos na Pesquisa

Anticorpos (ou imunoglobulinas) so protenas que marcam substncias ou partculas estranhas (antgenos), identificando-as para os fagcitos, que por sua vez destroem o antgeno, defendendo nosso organismo. Eles so produzidos por um tipo de leuccito, que clula sangunea (assim como as hemcias e as plaquetas) mais conhecida como glbulo branco. Ele se subdivide em vrios tipos: os granulcitos (neutrfilos, eosinfilos e basfilos), moncitos e linfcitos, que no momento so os que interessam aqui. Dentre os linfcitos, existem os do tipo T e B; ambos so produzidos na medula ssea, porm o tipo T amadurece num rgo chamado timo (eis o porque da sigla), um rgo linftico envolvido na defesa do organismo (sistema imunolgico). J o tipo B amadurecem na prpria medula ssea (em ingls bone marrow, eis o porque da sigla). So eles, os linfcitos B, que quando se tornam ativos (e ento chamados plasmcitos), produzem os anticorpos em resposta presena de um antgeno. Depois de produzidos, os anticorpos so lanados na corrente sangunea ou ficam aderidos superfcie do plasmcito. Os anticorpos possuem a forma de Y, com os braos ligando-se aos antgenos em questo e marcando-os para serem destrudos, atravs da cauda que reconhecida por clulas encarregadas de fagocitar o organismo ou molcula invasora. Na sua estrutura h duas cadeias leves e duas cadeias pesadas idnticas. Nas extremidades dos braos esto as regies variveis, que so especficas para cada antgeno. A regio constante o distingue em uma das cinco classes de anticorpos. Imunoglobulina G, M, A, etc. Ponte dissulfeto etc O uso de anticorpos uma maneira bastante prtica de localizar molculas especficas dentro das clulas. Quando uma molcula estranha introduzida num animal (por exemplo, uma protena que ele no produz), os linfcitos B (plasmcitos) produziro grande quantidade de anticorpos para se ligar molcula invasora. O soro desse animal, agora rico nesses anticorpos especficos, pode ento ser usado para detectar essa molcula especfica em outras clulas ou animais. O soro geralmente extrado do bao do animal, rgo onde os linfcitos so produzidos. Dvida: os anticorpos dentro do corpo no olham para os novos anticorpos introduzidos como invasores? No caso das vacinas, so injetados anticorpos ou linfcitos B produtores desses anticorpos? Nesse ponto, surgem duas questes: primeira; na extrao do soro, muitas vezes o animal sacrificado, e naqueles que sobrevivem, a concentrao daquele anticorpo diminui bastante depois de algum tempo, no sendo teis para uma nova extrao. E segunda; um antgeno ser reconhecido, atravs de partes diferentes de si mesmo, por vrios linfcitos B (plasmcitos) que a partir da, vo se dividir e secretar anticorpos capazes de reconhecer determinadas regies (chamadas eptopos) daquele antgeno. Cada um desses linfcitos estimulados a se dividir estaro gerando clones de si mesmos, mas como todos os anticorpos produzidos sero capazes de reconhecer o mesmo antgeno (mesmo que atravs de eptopos diferentes), so chamados de policlonais (conjunto de diferentes tipos de clones, voltados para o mesmo antgeno). J a produo de anticorpos de um nico tipo, especficos para determinada regio do antgeno, possvel a partir do cultivo de hibridomas, que so culturas celulares resultantes de clulas hbridas que possuem caractersticas interessantes de duas espcies originais. Como esses anticorpos so clones produzidos a partir de um tipo de linfcito apenas, so chamados monoclonais. Alm de serem muito especficos, outra vantagem dos anticorpos monoclonais que, como provm de culturas celulares, sua produo pode ser contantemente mantida (se nada der errado e compormeter o cultivo). Duvida: pode-se gerar anticorpos policlonais a partir de cultura de clulas? J a desvantagem que nem todos os hibridomas secretam anticorpos interessantes, e a seleo dos que interessam muito trabalhosa.

Como j vimos, para a produo de anticorpos so aplicados antgenos em animais, que depois possuem seu soro extrado rico nos linfcitos B especficos. No entanto, para conseguir linhagens monoclonais, preciso separar linfcito por linfcito, cada uma isolada num poo diferente de uma placa. Clulas de mielomas (com rpida e constante capacidade de multiplicao) so misturadas junto com polietilenoglicol (PEG, que promove a fuso de membranas), e so formadas hibridomas, que produzem os anticorpos indefinidamente. Apenas algumas fuses sero bem sucedidas, porm, ao serem cultivadas em meio HAT, s as clulas hbridas conseguiro prosperar, pois as mielomas no sobrevivem nesse meio, e os linfcitos morrem naturalmente em poucas semanas. Aps analisados e descobertos os poos onde os anticorpos esto sendo produzidos, um nico linfcito isolado e a partir dele clones so gerados. Como j se sabe, os anticorpos so umas ferramentas muito til e prtica na identificao de molculas. Alm de tambm identificar sua funo celular, eles mostram a distribuio das molculas fora e dentro da clula, servindo como marcadores moleculares. Devido aos seus dois braos, os anticorpos tendem a aglutinar as molculas antgenas, concentrando- as e facilitando sua identificao pelas clulas fagocitadoras. Eptopo linear e conformacional H muitas situaes em que anticorpos so teis em pesquisas e anlises clnicas. Eles podem detectar antgenos nas clulas, se ligando elas e sendo depois utilizado um corante ou fluocromo para identific-los. Fluocromos so marcadores fluorescentes que se ligam s molculas que se ligam especificamente a certos compostos celulares, no caso, os anticorpos. Nesse caso dos fluocromos, utilizado o microscpio de fluorescncia. Os anticorpos podem ser utilizados tambm para purificar amostras, de maneira muito semelhante ao processo de cromatografia por afinidade. S que a invs de uma coluna, as microesferas cobertas de anticorpos so misturadas amostra, e a mistura centrifugada a uma velocidade baixa, apenas para precipitar as microesferas com as protenas pescadas no processo. Por ser muito difcil marcar os anticorpos com uma enzima, ou corante, ou fluocromo, so utilizados anticorpos secundrios, que reconhecem outros anticorpos, estes ditos primrios. (quando o fluocromo utilizado no anticorpo primrio, o mtodo chamado de imunofluorescncia direta; se estiver ligado ao secundrio, mtodo mais comum, chama-se imunofluorescncia indireta). Por exemplo, se injetarmos anticorpos humanos numa cabra, ela produzir seus prprios anticorpos contra os anticorpos invasores; os anticorpos da cabra seriam anticorpos secundrios, que por sua vez sero acoplados fluocromos, ou enzimas, ou ouro coloidal, e usados como ferramentas para reconhecer onde esto os anticorpos primrios, que por sua vez estaro ligados nos antgenos que eles reconhecem. Dvida: porque os anticorpos primrios no tratam os secundrios como antgenos? ELISA (no entendi bulhufas) uma tcnica que se baseia no reconhecimento de um antgeno por um anticorpo. O ELISA direto utilizado para identificar um antgeno presente na amostra, colocando-se um anticorpo primrio contra esse antgeno, que ir ou no aderir este. A identificao feita com um anticorpo secundrio marcado com peroxidase. O ELISA indireto utilizado para identificar um anticorpo em determinado soro, utilizando-se um antgeno. Se houver um anticorpo compatvel, ele ir aderir ao antgeno, e a identificao se d com um anticorpo secundrio marcado por peroxidase.

Aula 7 Estrutura da Membrana Plasmtica

A membrana celular a base da vida como a conhecemos. Ela delimita o meio intracelular do extracelular, e por ser fluda, capaz de controlar tudo o que entra (nutrientes) e tudo o que sai (excrees e secrees) da clula, tendo o objetivo de criar um ambiente diferenciado do

meio exterior. composta por uma bicamada lipdica, protenas e carboidratos (tambm chamados glicdeos). Dentro das clulas, as organelas tambm possuem membrana (neste caso, ela chamada endomembrana). Composio qumica Lipdios: esto subdivididos em Fosfolipdios: compem a maior parte da membrana celular. Seu nome significa que possuem um grupo fosfato (hidroflico, voltado para o exterior) junto a duas cadeias de cido graxo (hidrofbicas, voltadas para o interior da bicamada). Uma dessas cadeias saturada (sem ligaes duplas entre os tomos de carbono), e a outra pode ser tanto saturada quanto insaturada. A estrutura da membrana se deve a essa camada dupla de fosfolipdios, que so responsveis por sua fluidez e permeabilidade. Por serem ao mesmo tempo polares e apolares, so consideradas molculas anfipticas, ou seja, enquanto a parte hidroflica interage bem com a gua, a hidrofbica busca esconder-se da mesma. H tambm outros tipos de lipdios na membrana, e so eles: os esteris e os glicolipdios. Glicolipdios: quando lipdios em contato com o meio extracelular se ligam carboidratos, formam-se os glicolipdios. Estes resultam da associao entre um glicdio (hidroflico) e duas cadeias de cidos graxos (hidrofbicos). Esto presente apenas no lado da membrana voltado para o meio extracelular. Se comportam de maneira semelhante aos fosfolipdios em meio aquoso, e so um componente fundamental do glicoclix, que por sua vez atua no reconhecimento celular. Esteris: o colesterol o esterol mais importante nas membranas celulares dos animais. Suas molculas alm de rgidas so tambm anfipticas, e se dispem entre as molculas dos fosfolipdios, conferindo maior rigidez membrana e aumentando sua resistncia deformao. Assim, quanto mais ricas em colesterol, mais rgidas so as membranas. No entanto elas dificultam a cristalizao da membrana em baixas temperaturas, por no permitir que os fosfolipdios se aproximem muito, impedindo que se formem os cristais. Isso ajuda muitos organismos sujeitos a grandes variaes de temperatura. Membranas de fungos, plantas e alguns protozorios podem conter outros tipos de esterol. Protenas: so os principais componentes funcionais da membrana; conferem individualidade clula, e portanto, delas dependem as atividades especficas de cada tipo celular. Podem se ligar carboidratos no lado extracelular da membrana, dando origem a glicoprotenas. So como ilhas deriva num mar de lipdios, que navegam lateralmente, podendo at girar em seu prprio eixo alis, esse conceito chamado de Modelo do mosaico fludo. Mais detalhes sobre as protenas esto na prxima aula. Carboidratos: tambm conhecidos como glicdios, sacardeos ou aucares, esto sempre voltados para o meio extracelular, e formam uma camada chamada glicoclix (juntos com as glicoprotenas). Este formado pela associao dos carboidratos com as protenas e os lipdios, formando as glicoprotenas e os glicolipdios, que tem por funo o reconhecimento qumico da clula em relao ao exterior. Tambm a lubrifica e aprotege de cidos e enzimas, evita que alguns tipos de vrus e bactrias ne anexem a membrana, e lhe confere carga negativa. As enzimas que acrescentam os acares aos lipdios e s protenas so produzidas no interior do retculo endoplasmtico e do complexo de Golgi, e quando so inseridos na membrana celular o contedo interno das vesculas, contendo os aucares produzidos, a atravessam chegando ao meio extracelular.

 Os espaos entre as clulas frequentemente so preenchidos com acares especiais, como por exemplo a celulose (formada pela polimerizao da glicose), que forma a parede celular dos vegetais. O tecido conjuntivo e o cartilaginoso tambm so formados em grande parte por carboidratos, formando as proteoglicanas: molculas muito longas e ramificadas que funcionam como esponjas, ajudando na reteno da gua por esses tecidos.

A fluidez da bicamada lipdica

Nas membranas naturais, importante que elas no sejam nem muito fludas nem muito rgidas para desempenharem suas funoes de maneira eficiente. Os lipdios podem se mover livremente no plano lateral da membrana, assim como rodar em seu prprio eixo, e esses movimentos que do fluidez membrana. Alm disso, as cadeias carbnicas do cidos graxo tambm podem flexionar-se. No entanto muito raro que um lipdio mude de plano na bicamada (da de cima para a de baixo, ou vice-versa), movimento chamado flip-flop, que requer enzimas especficas e gasto de energia. Existem quatro tipos diferentes de fosfolipdios, cada um com uma temperatura diferente de cristalizao. Por isso, mesmo em temperatura variadas, por ser formada de vrios lipdios diferentes, a membrana no se cristaliza. Essa mistura de fosfolipdios essencial principalmente para clulas expostas a ambientes com temperatura muito varivel. A fluidez da membrana varia de acordo com o nmero de duplas ligaes (insaturadas) dos cidos graxos, pois isso infuencia na distncia mnima entre os fosfolipdios. Portanto, quanto maior o nmero de lipdios com cadeias insaturadas (a perninha torta), maior ser a fluidez da membrana. Entretanto, quanto mais compridas forem essas cadeias menos fluda a membrana, pois ao se emaranharem, uma limita o movimento da outra. Animais exotrmicos, incapazes de regular a prpria temperatura, possuem um metabolismo capaz de alterar a composio de cidos graxos de sua membrana de acordo com a variao de temperatura, concentrando mais cadeias insaturadas (instveis, mais fludas) em baixa temperatura e mais cadeias saturadas em temperaturas elevadas (estveis, mais rgidas), aumentando ou diminuindo a fluidez da membrana, compensando as mudanas de temperatura. Nos animais homeotrmicos a fluidez controlada apenas pelo colesterol presente entre os fosfolipdios, que impede as cadeias de cidos graxos de se movimentarem livremente em relao a temperatura. Domnios de membrana Uma questo que intrigou os pesquisadores por muito tempo foi o porque de algumas partes da membrana possurem caractersticas diferentes do todo - por exemplo, os neurnios, que recebem estmulos por toda a mebrana celular, mas s os transmitem pela extremidade do axnio. O motivo disso que algumas regies da membrana possuem fluidez menor do que o resto da bicamada lipdica. Essa menor fluidez resultado do acmulo de fosfolipdios com cadeias longas de cidos graxos, e a maior concentrao de colesterol nessas regies (o que tambm aumenta a espessura da bicamada). Essas regies so denominadas lipid rafts, ou plataformas lipdicas, e ocorrem em todos os tipos celulares, possuindo funes especficas dependendo do tipo celular. Elas reunem perto de si um mesmo conjunto de elementos da membrana, como protenas de uma mesma reao, e devido a espessura dessas reas ser maior, apenas algumas protenas conseguem se encaixar nessas regies. A importncia da assimetria da bicamada lipdica

Os dois folhetos lipdicos da bicamadas, ao contrrio de suas muitas representaes em desenhos didticos, no so simtricos e uniformes, pois a composio das faces extracelular e intracelular so diferentes em relao s protenas, carboidratos e lipdios. Alm das plataformas lipdicas (domnios de membrana), a presena de diferentes tipos de lipdios, como glicolipdios apenas na parte superior da membrana e um outro tipo especfico de lipdio na parte inferior, so responsveis pela assimetria. Quando essa disposio perturbada, no caso das hemcias e do leuccitos, o aparecimento na bicamada exterior de um fosfolipdio que deveria estar na camada interior, sinaliza que a clula est morrendo e um dos fatores reconhecidos pelas clulas fagocitadoras.

Aula 8 Protenas de Membrana

Apesar de todas as membranas serem bicamadas lipdicas, as protenas de cada tipo celular so nicas. So elas, junto aos carboidratos, que do identidade clulas. Elas desempenham funes importantes: o transporte de substncias que no conseguem atravessar a membrana, a adeso e o reconhecimento celular. Nos tecidos, as a interao entre as protenas de membrana que permitem que as clulas se unam umas s outras ou a matriz celular. As protenas da membrana so classificadas em dois grupos: transmembrana (ou integrais), quando atravessam (total ou parcialmente) a bicamada lipdica, e perifricas quando esto totalmente fora da membrana, associadas outras protenas integrais ou aos lpidios por ligaes fracas (no- covalentes). As protenas transmembrana podem ser classificadas em protenas unipasso (quando atravessam a bicamada lipdica apenas uma vez) ou multipasso (quando a atravessam repetidas vezes). As protenas unipasso atuam como receptores, enquanto as multipasso criam dentro de si um ambiente hidroflico que permite a passagem de gua e outras molculas pela membrana. Algumas protenas se prendem bicamada apenas por uma ligao covalente a um dos lipdios da membrana, e so chamada protenas ancoradas. So consideradas integrais, e no perifricas, por no estarem associadas outras protenas, mas sim diretemente ancoradas na membrana. Para serem separadas dos lipdios da bicamada, no caso das transmembranas, so utilizados detergentes que solubilizam a bicamada lipdica. J as protenas perifricas se soltam facilmente, bastando alterar o pH/fora inica do meio. As ancoradas s podem ser removidas com o uso de enzimas especficas da famila das fosfolipases, que cortam as ncoras. Atravessando a bicamada As partes da protenas voltadas para fora da bicamada so naturalmente hidroflicas. Mas o que acontece com a parte da protena que atravessa a parte interior hidrofbica da membrana? Essa parte da protena composta principalmente por aminocidos cujas cadeias laterais so hidrofbicas, podendo ento ficar voltados para a parte interior apolar da membrana. No entanto as ligaes peptdicas so hidroflicas, e estando voltadas pra dentro formam pontes de hidrognio, o que lhes d um formato espiralado de alfa-hlice. A parte hidrofbica da protena chamada de domnio apolar, enquanto a hidroflica chamada de domnio polar.

Complexos de protenas

Alm das protenas multipasso, que criam um ambiente hidroflico, muitas protenas formam complexos na membrana, podendo ser composto apenas de protenas iguais ou no. Esses complexos

tambm formam uma rea hidroflica pela qual passam molculas como ons ou acares, que normalmente so barrados pela membrana.

A mobilidade das protenas

J vimos que as protenas movem-se livremente pela membrana (no plano lateral) e que podem girar em seu prprio eixo. Porm existem restries quanto esses movimentos, de acordo com regies chamadas domnios de membrana, os quais podem estar separados por barreiras. Essas restries existem por vrios motivos, como por exemplo no caso do espermatozide, que possui protenas especficas na regio da cabea que far contato com o vulo, que no esto presentes na cauda e vice- versa. Os mecanismos responsveis por essas restries so os seguintes: 1. Formao de complexos: vrias protenas se associam formando complexos, que s podem se deslocar como um todo. 2. Associao ao citoesqueleto ou matriz extracelular: algumas protenas tem sua mobilidade lateral limitada por estarem associadas a macromolculas do meio intra ou extracelular, como elementos do citoesqueleto os da matriz extracelular. 3. Ligao entre protenas: as protenas de duas clulas podem ligar-se, limitando a mobilidade de ambas. As protenas de uma clula podem se ligar tambm molculas do meio extracelular. Muitos domnios so consequncia da existncia de barreiras. Estas so formadas por arranjos de protenas que impedem a livre movimentao de outras protenas ou lipdeos entre elas. As protenas se movimentam livremente dentro de um determinado domnio, mas no conseguem passar para os domnios vizinhos. As protenas que ligam um conjunto de clulas tambm podem constituir barreiras.

Aula 9 Permeabilidade da Membrana

Sabemos que a membrana celular funciona como uma barreira, separando o meio extracelular do intracelular. Entretanto a clula interage com o meio exterior de diversas maneiras, seja na respirao (absorvendo oxignio e liberando gs carbnico) ou na absoro de nutrientes. Para permitir essa interao com o meio extracelular, a membrana dotada de permeabilidade seletiva, o que no significa que a clula seleciona tudo aquilo que precisa, mas sim que a passagem das molculas depende apenas de suas caractersticas fisico-qumicas. Essa permeabilidade est diretamente relacionada a natureza lipdica da membrana, e a seleo das molculas que a atravessam feita em funo de seu tamanho, polaridade e carga. Tamanho: quanto menor a molcula, mais facilmente atravessar a membrana. Polaridade: como a bicamada apolar, as molculas apolares tem muito mais faclidade em atravess-la do que as molculas polares. DUVIDA IMPORTANTE: No o lado hidroflico da membrana que fica voltado pra fora e pra dentro (afinal, as prprias protenas tem aminocidos com cadeias laterais hidrofbicas quando passam no interior hidrofbico da membrana)? Ou seja, ela hidrofilica em ambos os lados, e hidrofbica no meio, certo? Como as moleculas apolares passam pela parte hidrofilica da membrana?

 Com esses trs fatores atuando, as molculas que passam pela membrana com mais facilidade so aquelas bem pequenas, apolares e sem carga; exemplos de molculas assim so o O2 e o CO2, no entanto vrios solventes orgnicos tambm se enquadram nesses quesitos e so prejudiciais s clulas. Os ons Ca, K e Cl, embora sejam molculas muito pequenas, so hidroflicos, prendendo em volta de si muitas molculas de gua, o que aumenta muito seu tamanho e os impede de atravessar a bicamada. Duvida: mas s de ser hidroflico no seria o suficiente pra impedi-los de passar? Duvida: Os lipdios so molculas apolares (?). Porm os lipidios da membrana, no lado exterior, so hidrofilicos, sendo hidrofobicos s no espao entre a bicamada, certo?

Carga: molculas dotadas de carga, como os ons, mesmo sendo muito pequenas, no atravessam a membrana.

Difuso simples

Alm desses trs fatores principais, h um quarto fator, a concentrao. Assim, as molculas de oxignio s passaro ao interior da clula se no meio extracelular houver uma concentrao maior do que no meio intracelular. Isso explica porque as plantas liberam oxignio, afinal, elas o produzem dentro de suas clulas. Todo esse processo se d sem o gasto de energia, e chamado difuso simples (que um tipo de transporte passivo). Osmose o nome dado quando o processo de difuso simples acontece com a gua, que apesar de ser polar, no possui carga e pequena o suficiente pra passar pela membrana. A gua sempre ir do meio com menor concentrao de soluto em direo ao meio com maior concentrao de soluto. Mas a difuso simples no d conta de suprir todas as necessidades da clula. H muitas molculas necessrias para o bom funcionamento do funcionamento da mesma, que no passam pela bicamada lipdica. Nesses casos, entram em ao as protenas transportadoras.

Aula 10 As Protenas Transportadoras

Dentre as protenas presentes na membrana celular, so de especial importncia aquelas que possibilitam a passagem das molculas que no so capazes de atravessar a bicamada lipdica. Todas as protenas transportadoras: 1. So protenas transmembrana, ou seja, atravessam a bicamada de um lado ao outro; 2. So do tipo multipasso, isto , sua sequncia de aminocidos atravessa a bicamada repetidas vezes. Muitas protenas transportadoras so complexos formados por duas ou mais protenas, que formam uma regio hidroflica na membrana, permitindo a passagem de molculas polares. 3. So especficas para cada tipo de molcula, ou seja, uma protena transportadora de glicose no transportar frutose.

Como atuam as protenas transportadoras

Elas so divididas em duas categorias, de acordo com sua funo:

Carregadoras: se ligam molcula a ser transportada em um dos lados e a liberam do outro. Quando transporta apenas um tipo especfico de molcula, chamada uniporte. Quando transporta duas molculas diferentes, chamada simporte. E quando duas molculas diferentes so transportadas em sentidos opostos, chamada antiporte. Uma protena transportadora carrega apenas poucas molculas por vez, continuamente, portanto se a clula precisa de uma maior concentrao de determinado soluto, ela aumenta o nmero de protenas transportadoras para aquele soluto na membrana. Canais: funcionam como comportas; ao se abrirem (por uma frao de segundo), um grande nmero de molculas passa rapidamente atravs delas. Como a maior parte desse tipo de protena transporta apenas ons, tambm so chamadas canais inicos. Como as protenas carregadoras, as protenas canais so, cada uma, especficas para um determinado on. Aquaporinas: so protenas especficas para a passagem de gua presente em muitos tipos celulares. Ao contrrio das protenas carregadoras e canais, as aquaporinas permanecem abertas o tempo todo, permitindo a passagem do meio mais diludo para o mais concentrado (osmose), dando uma acelerada na passagem da gua em relao difuso simples. Aquaporinas podem ser armazenadas dentro da clula, e direcionadas a se inserir na membrana ao serem estimuladas por hormnios, acelerando a passagem de gua. Muitos tipos celulares, como ovos de peixes e anfbios, permanecem na gua de rios ou do mar sem ganhar ou perder quantidades significativas de gua. Isso se deve ausncia de aquaporinas em suas membranas celulares, que nesses ambientes, poderiam arrebentar ou desidratar suas clulas.

Aula 11 Transporte Passivo

Transporte passivo quando no h gasto de energia envolvido no processo, como acontece no caso da protenas transportadoras do tipo canal, e se d atravs do equilbrio entre os meios com maior e menor concentrao do soluto em questo (gradiente de concentrao). o caso dos canais inicos.

Mas o que leva os canais inicos a abrirem?

Cada um deles responde a um tipo de estmulo. Pode ser uma molcula que se liga ele, uma sensibilidade a uma alterao de voltagem ou um estmulo mecnico. Nos canais inicos ativados por um ligante, uma molcula se liga ao canal e induz uma mudana no formato da protena que abre a comporta. Um exemplo a adrenalina, que ao ser liberada na corrente sangunea e encontrar canais inicos ativados por ela, dispara processos qumicos em vrias clulas. Isso resulta na acelerao do batimento cardaco, no suor frio etc. Para alguns canais, o ligante que o abre vem de fora da clula (caso da adrenalina); em outros casos, o canal aberto por um ligante presente no interior da prpria clula. H canais inicos que so abertos por voltagem (estmulos eltricos), que esto muito presentes por exemplo nas clulas musculares (que possuem canais abertos por ligantes tambm, claro). E h tambm os canais inicos abertos por estmulos mecnicos, como no caso das plantas insetvoras que possuem plos que ao serem pressionados pela presa disparam a abertura de canais inicos, desencadeando processos que levam ao fechamento da folha.

E o que leva os canais inicos a fecharem?

Os canais inicos naturalmente ficam abertos apenas por fraes de segundo. No caso de canais ativados por ligantes, essa ligao rapidamente se desfaz, e nesse perodo logo aps o fechamento o canal passa a um estado de inatividade chamado perodo refratrio, durante o qual ele no se abrir nem mesmo com o estmulo correto. Esse perodo refratrio obsevado em todos os canais inicos, inclusive os de voltagem. importante lembrar que o transporte passivo no ocorre apenas com os canais inicos. Desde que haja a passagem de qualquer substncia de um meio mais concetrado para um menos concentrado sem o gasto de energia, apenas em funo do equilbrio do soluto nos dois lados da membrana, podemos chamar de transporte passivo. Quando h protenas transportadoras envolvidas, podemos chamar de difuso facilitada. Transporte passivo de glicose por protenas carregadoras.

Aula 12 Transporte Ativo

Acontece quando a clula precisa fazer o transporte de molculas contra o gradiente de concentrao, ou seja, do meio menos concentrado em direo ao meio mais concentrado. Para isso, h o gasto de energia, pois o equilbrio com o meio no interessante para a clula. Esse transporte feito pelas protenas carregadoras. Mas se a clulas no seleciona intencionalmente aquilo que precisa, porque ocorre o transporte passivo? Dizemos que a membrana celular est em repouso quando a quantidade de sdio menor dentro da clula do que no meio exterior, e a concentrao de potssio maior dentro da clula do que no meio exterior. Isso d a clula uma carga negativa em relao ao meio exterior. Quando os canais inicos se abrem e grandes quantidades de ons entram e saem, geralmente a entrada de ctions maior do que a sada, e a clula se torna positiva em relao ao meio exterior. At esse ponto, s houve o transporte passivo. O transporte ativo entra em ao justamente para fazer com que a clula volte ao estado de repouso, ou seja, fique negativa novamente em relao ao exterior, e para isso, transporta ons de sdio para o exterior enquanto transporta ons potssio para o interior. E transporte feito por um sistema de transporte ativo chamado bomba de sdio/potssio. ons de sdio se ligam essa protena transportadora, ativando-a. Ento um grupo fosfato (vindo da fosforilao de uma molcula de ATP) se liga ela, fazendo com que mude de forma, transportando os ons de sdio para o exterior. Nesse mesmo momento em que est em contato com o meio exterior, ons de potssio se ligam ela, que ao perder a ligao com o fostato volta ao formato original, levando os ons de potssio para dentro da clula. Portanto, ao mesmo tempo em que o sdio expelido, o potssio introduzido na clula num processo constante, o que permite a clula compensar as variaes na sua polaridade que possam surgir devido ao transporte passivo dos canais inicos, permitindo a clula retornar ao seu estado de repouso. Quando a protena carregadora transporta apenas um tipo molecular, como no caso dos transportadores de glicose presentes nas membranas da maioria das clulas, dizemos que ela faz uniporte. Quando ela carrega simultanemente outros ons junto, chamamos de simporte, como no caso do epitlio intestinal cujas clulas ao transportarem glicose transportam junto ons de sdio. Quando h o transporte de duas mleculas diferentes em sentidos opostos, como na bomba sdio/potssio, chamamos de antiporte. Dvida: Transporte ativo secundrio