1.2.

Encefalites eqinas (leste, oeste e venezuelana) As encefalites dos eqinos nas Amricas so causadas por vrus que esto classificados em 16 duas famlias:Togaviridae e Flaviviridae , antes classificados universalmente como Arbovrus dos grupos A e B, respectivamente. Os vrus causadores das encefalites eqinas leste, oeste e venezuelana so RNA-vrus, envelopados, que esto classificados na famlia Togaviridae, gnero Alphavirus. Possuem uma grande variedade de hospedeiros que inclui mosquitos, aves e mamferos, dentre os quais o 6 homem, o que torna sua epidemiologia bastante complexa . Estas enfermidades so consideradas importantes zoonoses, tanto pela gravidade da doena no homem como pela similaridade sintomtica com outras encefalites, em especial a raiva. A encefalite eqina do leste (EEL) foi detectada pela primeira vez nos Estados Unidos, em Massachusetts, em 1931, a partir de onde foram detectados surtos em vrios outros Estados. O vrus foi isolado apenas em 1933, sendo ele o mais virulento entre os trs, determinando letalidade em animais de 80%-90% e em humanos de 65%, com alta freqncia de seqelas permanentes nos sobreviventes, como retardo mental, convulses e paralisia. Nos humanos, 6 as crianas e os idosos so mais susceptveis . A EEL apresenta nos eqdeos quatro padres de infeco e duas formas clnicas. Os padres de infeco so: a) caracterizada por uma reao febril bifsica (fatal ou no); b) simples aumento de temperatura; c) viremia, sem febre ou qualquer outro sintoma e d) ausncia de viremia e manifestaes clnicas. Em relao s formas clnicas, ressaltam-se a atxica (caracterizada pela perda de equilbrio, cegueira, patas abertas, apoio lateral) e a paraltica (caracterizada por profunda depresso, 6 plpebras tumefeitas, olhos fechados, sonolncia e taquicardia) . Atualmente, so conhecidas quatro linhagens ou grupos do vrus da EEL: I, IIA, IIB e III, tendo 17 sido registradas no Brasil as linhagens IIA, IIB e III . Os ltimos isolamentos de vrus foram 18,19 realizados no Estado de So Paulo , porm vrios estudos epidemiolgicos em vetores ou 20 sorolgicos em eqinos tm demonstrado sua ampla difuso no Pas . H autores, no entanto, que diferenciam apenas variantes norte-americanas e sul-americanas, sendo as primeiras 17 consideradas mais virulentas em humanos e eqinos . A EEL possui dois ciclos epidemiolgicos: o bsico silvestre (enzotico), que ocorre nos pntanos, e um segundo ciclo, com erupo de focos naturais. No primeiro h participao de aves silvestres e mosquitos do gnero Aedes e no segundo, pssaros locais ou domsticos e 6 mosquitos do gnero Culex . Nestes dois ciclos os cavalos e humanos so hospedeiros terminais. Entre 1912 e 1930 mais de 30.000 eqinos morreram em regio dos Estados Unidos com sintomatologia semelhante da EEL, mas com uma letalidade de 3%-4% em humanos e 50% 6 em animais . O vrus da encefalite eqina do oeste (EEO) foi isolado em 1938 e apresentava caractersticas sorolgicas semelhantes, tendo mosquitos do gnero Culex como vetores. Os cavalos e o homem so hospedeiros acidentais e menos de 1% desenvolve sintomas, apresentando baixa viremia. H controvrsias sobre o isolamento do vrus da EEO em eqinos no Brasil, porm h 21 registro de isolamento em Culex, na floresta da Tijuca, no Rio de Janeiro .

Cerca de 30 espcies de aves desempenham papel importante como reservatrios. Estes animais podem apresentar alta viremia, havendo indcios de que os rpteis, no inverno, podem 6 atuar tambm como reservatrios . O vrus da encefalomielite eqina venezuelana (EEV) foi isolado pela primeira vez em 1934, em Guajira, Venezuela, e atualmente uma reemergncia continental; possui um carter explosivo, envolvendo muitos indivduos (cavalos e humanos) e, por esta razo, possui forte impacto econmico e social. Embora sejam conhecidos seis subtipos do vrus da EEV, somente dois deles so importantes para eqinos e humanos. No ciclo epizotico, alm dos eqinos atuarem como amplificadores dos vrus, foram descritos isolamentos virais em cerca de 30 outras espcies de mamferos. Os principais vetores epidmicos so mosquitos dos 22 gneros Aedes, Mansonia e Psorophora . No ciclo enzotico da EEV os vrus no so patognicos para cavalos, sendo que os morcegos podem atuar como hospedeiros alternativos para manuteno da circulao viral, especialmente quando muitos mamferos silvestres tornam-se imunes. Entre os gneros e/ou espcies de morcegos j identificados como hospedeiros alternativos destacam-se: Desmodus rotundus, Artibeus spp, Carollia perscipillata e Uroderma bilobatum, com isolamentos realizados 23,24,25 no Brasil (Vale do Ribeira, SP), Mxico, Equador e Guatemala . Pelo exposto, possvel observar a ampla gama de reservatrios dos Alphavirus (como aves 6 silvestres, domsticas e sinantrpicas), roedores, quirpteros, ungulados e rpteis . A saliva dos mosquitos possui vrus com alto ttulo e, atravs da picada, promovem uma infeco subcutnea que atinge a musculatura esqueltica no ponto de inoculao, atingindo, posteriormente, as clulas de Langerhans que levam os vrus at os linfonodos locais. A habilidade de atingir o sistema nervoso central (SNC) depende da durao e do grau da viremia e das caractersticas da cepa viral. A forma de penetrao no SNC ainda desconhecida; porm, sugere-se que a dos vrus da EEL e da EEO se d atravs do plexo 6 coride, enquanto a do vrus da EEV, do nervo olfativo . Eqinos e humanos so hospedeiros terminais das EEL e EEO, pois as transmisses eqinoeqino e eqino-humano no ocorrem. Diferentemente, a transmisso do vrus da EEV, que pode ser eliminado por secrees orais e nasais, pode ocorrer por contato direto ou aerossis. Os animais infectados pelos Alphavirus apresentam febre, cegueira, depresso, anorexia, paralisia labial, perda de reflexos, andar cambaleante ou em crculos e paralisia, podendo ou no evoluir para o bito. Estes sintomas fazem com que seja impossvel o seu diagnstico clnico, bem como o da raiva, exigindo desta forma tcnicas laboratoriais especficas. Entre as tcnicas clssicas de diagnstico laboratorial est o isolamento viral em camundongos lactentes e/ou cultivos celulares (fibroblasto de embrio de galinha, VERO, BHK etc.); a identificao pode ser feita por meio de teste de neutralizao por reduo de placas, fixao de complemento e imunofluorescncia direta ou indireta. Deve-se ressaltar, no entanto, que os vrus das EEL, EEO e EEV possuem bastante sensibilidade s variaes de pH e temperatura, o que torna o seu isolamento muito difcil, e o que impe o imediato envio de amostras de SNC 26 ao laboratrio . Amostras pareadas de soro obtidas na fase aguda e na fase de convalescena (2 ou 3 semanas aps) podem tambm fornecer resultados confiveis, desde que realizados testes sorolgicos, tais como o de neutralizao, inibio de hemaglutinao, fixao do complemento 26 ou ELISA com anticorpos especficos . Soroconverso de at quatro vezes nos ttulos de anticorpos das coletas de sangue confirmatria de encefalite viral. Soropositivo em uma s coleta pode ser indicativo de infeco em casos de animais no-vacinados. Sangue e lquido cfaloraquidiano podem, tambm, ser coletados na fase aguda e enviados ao 26 laboratrio para isolamento viral em camundongos ou clulas . As tcnicas moleculares (RT-

PCR e seqenciamento) tm sido utilizadas no diagnstico das encefalites, permitindo a comparao dos diferentes isolados e estudos filogenticos. Outras causas de sintomatologia neurolgica, incluindo infeces bacterianas e fngicas, tumores, doenas parasitrias, doenas degenerativas e intoxicaes, devem ser investigadas atravs de testes especficos. A preveno dos eqinos contra as encefalites eqinas realizada com o uso de vacinas, que so recomendadas a partir do terceiro ms, com revacinao semestral. As vacinas comerciais utilizadas no Brasil so ainda as bivalentes (EEL e EEO) e inativadas, tendo em vista a no comprovao da ocorrncia do vrus da EEV. Medidas de controle de vetores tambm reduzem o risco de exposio e, conseqentemente, de infeco, tais como a eliminao de gua parada e criadouros de mosquitos. 1.3. Encefalite de St. Louis (ESL) O vrus da encefalite eqina de St. Louis est classificado na famlia Flaviviridae, gnero Flavivirus,amplamente distribudo nas Amricas, desde o Canad at a Argentina. um RNA-vrus que faz parte do complexo antignico das Encefalites Japonesas, juntamente com Murray Valley, Kunjin, Rocio, Ilheus, febre do Nilo Ocidental etc. Foi reconhecido como um vrus causador de uma encefalite humana em 1932, em um surto em Illinois, e no ano 6 seguinte em Saint Louis e Kansas, no Missouri, Estados Unidos . No Brasil, o primeiro isolamento do vrus da ESL foi realizado em 1960, em um pool de mosquitos Sabethes 20 belisarioicoletados na rodovia Belm-Braslia . Os principais reservatrios destes vrus so as aves silvestres (passeriformes e columbiformes), os primatas, os marsupiais e outros silvestres. J foi isolado de morcego insetvoro Tadarida brasiliensis mexicana, no Texas (EUA). O vrus transmitido por mosquitos 20 do gnero Culex . Assim como em outras encefalites, as aves migratrias, em suas distintas rotas, so responsveis pela disperso dos vrus pelas Amricas. H, no entanto, diferenas biolgicas e 6 genticas entre os isolados na Amrica do Norte e Amrica do Sul . As manifestaes clnicas em humanos da ESL podem variar muito, desde inaparentes (com freqncia), a leves sintomas e infeco grave. Nas infeces graves comumente ocorrem dor de cabea, febre alta, desorientao, tremores, convulses, paralisia, coma e morte. a encefalite viral mais comum nos Estados Unidos, sendo mais grave em jovens e idosos. Nestes ltimos a mortalidade de cerca de 30%. Quando ocorre a doena em humanos, aparece tambm em cavalos e outros mamferos, geralmente na forma subclnica. Na Argentina a distribuio do vrus da ESL ampla, com casos em humanos e eqinos. No Brasil h vrios levantamentos sorolgicos que relatam a presena de anticorpos em humanos 27 e, em algumas oportunidades, houve isolamento viral . A verificao de anticorpos em eqinos tambm tem sido realizada, porm a infeco em geral inaparente e , por esta razo, no est bem dimensionada. O diagnstico da ESL pode ser realizado com sangue ou tecido nervoso, pelas tcnicas convencionais de diagnstico das arboviroses. Atualmente, as tcnicas moleculares oferecem 26 uma grande contribuio para o seu diagnstico . No h vacina para sua preveno, porm, nos Estados Unidos, em reas de ocorrncia de ESL, as autoridades de sade mantm programas de vigilncia, com captura de aves, para monitorar a presena de anticorpos. 1.4. Febre do Nilo Ocidental (FNO)

O agente causal da febre do Nilo Ocidental (FNO) tambm um vrus classificado na famlia Flaviviridae, gnero Flavivirus, e faz parte do complexo antignico das encefalites 16 japonesas . O primeiro isolamento do vrus da FNO foi realizado em Uganda, em 1937, e at o final da dcada passada era reconhecida como uma doena do Velho Mundo. Na dcada de 1950 causou em Israel uma doena febril em humanos e na dcada de 1970 ficou restrito frica, 28 Europa, sia e Oceania . Em 1999, o vrus da febre do Nilo Ocidental emergiu no Novo Mundo, tendo sido identificado como agente causal de um surto de encefalite em humanos ocorrido em Nova York (EUA), com 62 casos documentados e 7 mortes. Em eqinos foram registrados 24 casos e 9 mortes. Nos anos subseqentes houve uma ampla difuso da Costa Leste Oeste dos Estados Unidos e, posteriormente, em direo Amrica Central, com deteco de casos no Mxico, El Salvador 29,30 e Ilhas do Caribe . A partir de 2004 foram identificados anticorpos em eqinos da Colmbia e da Venezuela pela 31,32 tcnica de neutralizao por reduo de placas . Em 2006, o vrus foi isolado de eqinos na 33 Argentina (provncia de Buenos Aires) , onde, mais recentemente, em estudo retrospectivo, 34 foram identificadas aves sorologicamente positivas . Diversas espcies de animais do Velho e do Novo Mundo possuem anticorpos contra o vrus da FNO; porm, o isolamento mais raro em animais do Velho Mundo, quando comparado com o Novo Mundo. Isto ocorre, provavelmente, porque os recentes isolados so mais 30 patognicos . O vrus da FNO j foi isolado em cerca de 170 espcies de aves e 30 de vertebrados (eqdeos, morcegos, camelos, sunos, caprinos, ovinos, ces e anfbios). A evoluo da infeco depende da espcie envolvida, da idade do animal, do status imunolgico e da patogenicidade do vrus isolado. Alm da transmisso por vetores (Culex sp), a FNO possui outras formas de transmisso, tais 35 como por transfuso, por transplantes de rgos, placentria e percutnea . Algumas caractersticas epidemiolgicas da FNO devem ser mencionadas: predomina o ciclo amplificado em aves; h possibilidade de transmisso vertical em aves; h a transmisso cloacal-oral; a ingesto de carcaas e mosquitos pode infectar aves; h infeco natural em morcegos (Tadarida brasiliensis eEptesicus fuscus); e os casos em eqinos precedem a 36 deteco de aves soropositivas . A elevada persistncia do vrus em uma regio se deve, principalmente, transmisso vertical em vetores e sobrevivncia em vetores durante o inverno. Segundo alguns autores, a difuso do vrus da FNO no Continente Americano vem se constituindo em um problema de sade pblica desconcertante, face s diferenas apresentadas em ecossistemas tropicais ou 30 provvel atenuao do vrus no continente sul-americano . Para o diagnstico laboratorial as tcnicas recomendadas so: o isolamento viral, a imunofluorescncia direta, o ELISA, o teste de neutralizao por reduo de placas e as tcnicas de biologia molecular (RT-PCR e seqenciamento). O material a ser enviado ao laboratrio, no caso da doena em animais que foram a bito, o SNC de eqinos e sangue, crebro, fgado e bao das aves. No caso da pesquisa de anticorpos, o soro o material de 35 eleio . Considerando que no Brasil h a segunda maior avifauna do planeta, que chegam centenas de 36 espcies de aves migratrias do Hemisfrio Norte, onde o vrus foi isolado com freqncia , e que h grande diversidade de espcies de vetores, a entrada e a manuteno do vrus na regio esto favorecidas.

O controle da FNO se faz, atualmente, por meio da vacinao dos susceptveis e do controle de vetores, sendo que novas vacinas esto em teste, alm das de vrus vivo modificado e 35 inativadas que existem comercialmente. Entretanto, no Brasil no h vacina disponvel . Quadro 1. Principais caractersticas de algumas zoonoses virais de eqdeos. Patologia Famlia Gnero Transmisso Reservatrio Raiva Encefalite eqina leste Encefalite eqina oeste Encefalite eqina venezuelana Encefalite St. Louis Febre do Nilo Ocidental Rhabdoviridae Togaviridae Togaviridae Togaviridae Flaviviridae Flaviviridae Lyssavirus Alphavirus Alphavirus Alphavirus Flavivirus Flavivirus Direta Vetorial Vetorial Vetorial Vetorial Vetorial Carnivora Chiroptera Aves Aves Roedores silvestres/Aves Aves Aves

2. Diagnstico das encefalites virais: coleta, envio de amostras e testes laboratoriais Os procedimentos para coleta, conservao e acondicionamento das amostras biolgicas podem ser variados, na dependncia dos exames a serem realizados. Para possibilitar o diagnstico diferencial importante o envio de fragmentos de todas as regies do sistema nervoso central, a saber: crtex, corno de Amon, cerebelo, tronco enceflico e medula; soro sanguneo, em condies de refrigerao ou congelamento, da forma mais rpida possvel. O diagnstico laboratorial destas encefalites pode ser feito atravs do isolamento e identificao viral ou de testes sorolgicos. Os testes principais so: imunofluorescncia direta (IFD), inibio da hemaglutinao (HI), soroneutralizao (SN) e ensaio imunoenzimtico (ELISA). Amostras de sangue podero ser utilizadas para obteno de soro ou para isolamento viral, devendo ser utilizados frascos com tampa de rosca, evitando o vazamento de lquido. Conforme descrito, as patologias que afetam o sistema nervoso central normalmente no apresentam leses macroscpicas, sendo importante que observaes clnicas sejam encaminhadas junto com a amostra. Devem ser tomados cuidados especiais para a coleta das amostras, pois a retirada do encfalo nestes animais requer tempo e esforo. A cabea do animal pode ser removida desfazendo a articulao atlantoccipital. Devem ser previstos instrumentais adequados para abertura da calota craniana, bem como recipientes com desinfetantes apropriados (hipoclorito, lisol e fenol, entre outros) para imerso do instrumental utilizado. Para o diagnstico de raiva e das outras encefalites a amostra deve ser acondicionada em recipientes ou saco plstico duplo, vedados hermticamente, identificado de forma clara e legvel, no permitindo que a identificao se apague com gua ou gelo. A amostra deve ser colocada em caixa trmica, rotulada, bem fechada, no permitindo vazamentos. Para o diagnstico das demais zoonoses, o soro o material de eleio. Deve ser considerado que, de acordo com a RDC n 306 de 07/12/2004, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa), e a Resoluo n 358 de 29/04/2005, do Conselho Nacional de Meio Ambiente (Conama), os resduos que apresentam risco potencial sade humana e ao meio ambiente no podero ser dispostos no meio ambiente sem tratamento prvio que 37,38 assegure a descaracterizao de risco do resduo . A manipulao cuidadosa, a assepsia, o transporte at o laboratrio e o destino adequado dos espcimes constituem medidas essenciais para se evitar acidentes.

Equipamentos de proteo individual (EPIs): devem ser utilizadas luvas de procedimentos, mscaras, protetores oculares, macaco ou avental impermevel (considerar o conforto trmico e mobilidade), proteo impermevel para sapatos ou botas. Em determinadas reas, deve ser considerado o uso de repelentes e vestimenta capaz de proteger contra picadas de insetos.