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Escuela Superior de Salud y Ambiente

Universidad Nacional del Comahue

1972

ESTUDIO BACTERIOLGICO DE AGUAS RECREACIONALES DE BALNEARIOS DEL RO LIMAY EN LA CIUDAD DE NEUQUN

Tesis presentada para optar por el ttulo de Licenciada en Saneamiento y Proteccin Ambiental

Ctedra de Microbiologa y Parasitologa. Escuela de Medicina. Universidad Nacional del Comahue (UNCo), Cipolletti.

AUTORA: Florencia Ins Ugolini. DIRECTORA DE TESIS: Bioq. Ms. Nora Beatriz Pierangeli. CODIRECTORA DE TESIS: Bioq. Ms. Silvia Viviana Soriano. TUTORA DE TESIS: Bact. Ana Mara Manacorda.
Fecha: 1 Diciembre 2.006.

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NDICE
AGRADECIMIENTOS.................................................................................................................. 4 RESUMEN ................................................................................................................................... 5 ABSTRACT.................................................................................................................................. 6 ABREVIATURAS......................................................................................................................... 7 INTRODUCCIN ......................................................................................................................... 8 DEFINICIN DEL PROBLEMA ............................................................................................... 8 DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO............................................................................... 9 UBICACIN GEOGRFICA................................................................................................ 9 LA CIUDAD DE NEUQUN .............................................................................................. 10 RELIEVE............................................................................................................................ 10 CLIMA................................................................................................................................ 11 EL RO LIMAY ................................................................................................................... 11 LOS BALNEARIOS EN LA CIUDAD DE NEUQUN ........................................................ 15 MARCO TERICO ................................................................................................................ 19 CALIDAD DEL AGUA RECREACIONAL .......................................................................... 19 OBJETIVOS........................................................................................................................... 19 HIPTESIS............................................................................................................................ 19 MATERIALES Y MTODOS ..................................................................................................... 19 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. DISEO DEL MUESTREO MICROBIOLGICO...................................................... 19 PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRAS........................................................ 19 RELEVAMIENTO DE DATOS CLIMTICOS............................................................ 19 ANLISIS DE LAS MUESTRAS ............................................................................... 19 ANLISIS FSICO-QUMICO ............................................................................... 19 RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESFILOS HETERTROFOS AEROBIOS TOTALES ......................................................................................... 19
RECUENTO DE HETERTROFOS EN PLACA ..................................................... 19 TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP) ................................................ 19

2.4.1. 2.4.2.

2.4.2.1. 2.4.2.2.

2.4.3.

RECUENTO DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y FECALES............... 19

Prueba Presuntiva............................................................................................... 19 Prueba Confirmatoria .......................................................................................... 19

2.4.3.1. 2.4.3.2.

2.4.4. 2.4.5.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN.................................................................... 19 DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS DE LAS BACTERIAS AISLADAS....................................................................................... 19

RESULTADOS........................................................................................................................... 19 3.1. 3.2. RELEVAMIENTO DE DATOS CLIMTICOS............................................................ 19 ANLISIS DE LAS MUESTRAS ............................................................................... 19

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3.2.1. 3.2.2.

ANLISIS FSICO-QUMICO ............................................................................... 19 RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESFILOS HETERTROFOS AEROBIOS TOTALES ......................................................................................... 19
RECUENTO DE HETERTROFOS EN PLACA ..................................................... 19 TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP) ................................................ 19

3.2.2.1. 3.2.2.2.

3.2.3.
a) b)

RECUENTO DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y FECALES............... 19

Recuento de Bacterias Coliformes Totales................................................................... 19 Recuento de Bacterias Coliformes Fecales .................................................................. 19

3.2.4. 3.2.5.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN.................................................................... 19 DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS DE LAS BACTERIAS AISLADAS....................................................................................... 19

DISCUSIN ............................................................................................................................... 19 CONCLUSIONES ...................................................................................................................... 19 BIBLIOGRAFA CITADA........................................................................................................... 19 ANEXOS .................................................................................................................................... 19 ANEXO I: TEMPERATURA DEL AGUA EN CADA MUESTREO........................................... 19 ANEXO II: DESCRIPCIN DE LAS PRUEBAS BIOQUMICAS UTILIZADAS ...................... 19 ANEXO III: IDENTIFICACIN DE LAS BACTERIAS HALLADAS A PARTIR DE PRUEBAS BIOQUIMICAS ....................................................................................................................... 19 ANEXO IV: DIMETROS (MM) DE LOS HALOS DE INHIBICIN DE LOS ANTIMICROBIANOS ............................................................................................................. 19 ANEXO V: VALORES GUAS BACTERIOLGICOS PARA AGUAS RECREACIONALES .. 19 ANEXO VI: PARMETROS ANALIZADOS POR LA AIC....................................................... 19 ANEXO VII: CONTAMINACIN DEL ARROYO DURN....................................................... 19

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AGRADECIMIENTOS
Principalmente agradezco a mi mam, Mnica, y a mi pap, Carlos, quienes me alentaron y apoyaron en todo momento a lo largo de mis estudios, poniendo a mi alcance todo lo necesario para priorizar mi educacin. A mi directora de tesis, Nora Pierangeli, por aceptarme como tesista y brindarme el Laboratorio de Microbiologa y Parasitologa de la Escuela de Medicina para realizar los anlisis microbiolgicos. A mi codirectora Viviana Soriano, por su apoyo en el trabajo de laboratorio y en la correccin de la tesis. Agradezco enormemente a la profesora Ruth Astete, por su constante gua en la labor diaria en el laboratorio, en la toma de muestras y por su paciencia y calidez, ya que sin su colaboracin me hubiera sido difcil llevar adelante el trabajo en el laboratorio. A Lorena Lazzarini, por disponer de su conocimiento y buena voluntad para guiarme en el trabajo de laboratorio y en la interpretacin de los resultados. A mi tutora, Ana Manacorda, por su disposicin y sugerencias para facilitarme el camino a lo largo de este trabajo. A mis amigos de la universidad y compaeros de estudio durante la carrera, Aye, Leo, Cele, Celi, Martn y Walter, por los mates y momentos compartidos, y que seguiremos compartiendo. Finalmente, quiero agradecer inmensamente a Hugo por su colaboracin y apoyo incondicional en todo momento.

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RESUMEN
En el presente trabajo se realizaron anlisis fsico-qumicos y bacteriolgicos de cinco muestras del ro Limay en los balnearios pblicos Gatica, Ro Grande y Municipal, de la ciudad de Neuqun, durante el mes de Febrero del ao 2.006. A partir de los resultados obtenidos, se concluy que la calidad fsicoqumica del agua en el perodo estudiado fue muy buena. Por otro lado, se observ que existen bacterias indicadoras de contaminacin fecal de cantidad variable de acuerdo a las condiciones del ambiente, viables durante todo el verano. El balneario Municipal present la media geomtrica de bacterias hetertrofas totales mesfilas aerobias y de coliformes fecales ms alta, sobrepasando levemente el valor lmite establecido para coliformes fecales, atribuyndose esto en parte a la apertura de la compuerta que permite la descarga del arroyo Durn a escasos metros de donde comienza dicho balneario, producto del aumento de su caudal a causa de las lluvias. Se identificaron cepas de Pseudomonas y de las bacterias incluidas en el grupo de las Coliformes, se hall a Escherichia coli, Enterobacter spp., Klebsiella spp., y Serratia spp. Dentro de stas, las coliformes fecales utilizadas como indicadores de contaminacin de origen fecal, son Escherichia coli, Enterobacter spp. y Klebsiella spp, las cuales presentaron resistencia a ciertos antimicrobianos empleados. stas generan un posible riesgo para la salud de los baistas, debido a que son patgenos oportunistas y a ellas se asocia la presencia de patgenos estrictos, entre los ms importantes Salmonella, Shigella, E. coli diarreignica, Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum y Enterovirus.

PALABRAS CLAVE: Coliformes fecales, agua recreacional, ro Limay.

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ABSTRACT
A total of fifteen water samples from the Limay river in Neuqun city were analysed during February 2006. Physicochemical and bacteriological analyses were carried out in five samples from each of the public beaches: Gatica, Ro Grande and Municipal. The results obtained in the present study showed that the physicochemical quality of water samples was adequate during the study period. However, bacteria used as fecal pollution indicators were found in concentrations that varied depending on the environmental conditions. The highest geometric mean of total heterotrophic bacteria and of fecal coliforms was registered in the Municipal beach, slightly exceeding the baseline accepted for fecal coliforms. This fact could in part be due to the opening of the gate which allows the discharge of Duran stream near to the beginning of this beach, as a consequence of the increase in its water volume because of the rain. Species of Pseudomonas and of coliform bacteria as Escherichia coli, Enterobacter spp., Klebsiella spp., and Serratia spp. were identified. Most of the isolates were resistant to at least one of the antibacterial agents tested. E. coli, Enterobacter spp. and Klebsiella spp, are fecal coliforms used as indicators of fecal pollution. These bacteria could constitute risk factors to swimmers health, since they are opportunist pathogens and the presence of several strict pathogens as Salmonella, Shigella, diarrheagenic E. coli, Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, and Enterovirus is associated to them.

KEY WORDS: Fecal coliforms, recreational water, Limay river.

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ABREVIATURAS
AIC: Autoridad Interjurisdiccional de las Cuencas de los Ros Limay, Neuqun y Negro. BRILA: Caldo Lactosa Verde Brillante Bilis. cm: Centmetro. der: Derecha. EPA: Agencia Ambiental de los Estados Unidos de Amrica. Fig.: Figura. hs:Horas. izq: Izquierda. km: Kilmetro. m: Metro. mg: Miligramo. ml: Mililitro. NMP: Nmero Ms Probable de microorganismos. UFC: Unidad Formadora de Colonias.

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INTRODUCCIN
DEFINICIN DEL PROBLEMA
El ro Limay, en los balnearios de la ciudad de Neuqun, denominados, Gatica, Ro Grande y Municipal, es altamente concurrido durante todo el verano, debido a las altas temperaturas caractersticas de esa poca y a que es un espacio pblico y gratuito que brinda la oportunidad para la recreacin y el contacto con la naturaleza. A su vez, estos balnearios son de fcil acceso y se ubican en distintos puntos de la ciudad, siendo Ro Grande el balneario ms cercano al centro neuquino. Estudios realizados en distintas ciudades del mundo prueban que existen enfermedades vinculadas al agua de uso recreacional, consecuencia de la presencia de microorganismos patgenos en el agua. Debido a esto, son necesarios controles que monitoreen la calidad del agua durante todo el verano, poca en la que los balnearios se habilitan con fines recreativos. Los controles realizados por la Autoridad Interjurisdiccional de las Cuencas de los Ros Limay, Neuqun y Negro (AIC) (AIC, 2.001, 2.002), en conjunto con la Subsecretara de Gestin Ambiental de la Municipalidad de Neuqun, evalan solamente la cantidad de bacterias Escherichia coli presentes en los balnearios de Neuqun. Adems, no se han encontrado estudios realizados sobre la caracterizacin bacteriolgica del ro Limay para uso recreacional, en donde se identifiquen bacterias que, en ciertas cantidades, puedan ser riesgosas para la salud humana, y donde se evale si presentan resistencia a antimicrobianos. El ro Limay, en su trayecto por la ciudad de Neuqun, recibe aportes de distintos efluentes contaminados, como el arroyo Durn, que luego de lluvias abundantes vuelca su contenido a pocos metros del Balneario Municipal y, en esos casos, dicho balneario es inhabilitado por la Municipalidad de Neuqun (Cuadros, 2.005; Diario Ro Negro, 2.004; Municipalidad de Neuqun 28/2/2.002, 7/3/2.002). Debido a esto, la carga bacteriana del ro es diversa y puede contener bacterias patgenas resistentes a ciertos antimicrobianos que pongan en riesgo la salud de los usuarios del ro, especialmente aquellos ms susceptibles, como nios, ancianos y personas con su sistema inmunolgico comprometido. En este trabajo se estudi la calidad bacteriolgica del agua de los balnearios Gatica, Ro Grande y Municipal, del ro Limay en la ciudad de Neuqun, en el mes de febrero del ao 2.006. Se cuantificaron bacterias mesfilas aerobias hetertrofas totales, bacterias coliformes totales y fecales, a partir de la colimetra se identificaron las cepas aisladas y se determin su susceptibilidad a algunos antimicrobianos. A su vez, se evaluaron las principales propiedades fsico-qumicas que caracterizan estas aguas.

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INTRODUCCIN

DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO

UBICACIN GEOGRFICA El rea de estudio del presente trabajo abarca parte de la costa del ro Limay, en su paso por la ciudad de Neuqun. La misma es la capital de la provincia de Neuqun, y se halla emplazada en el Alto Valle de Ro Negro y Neuqun, en el Norte de la Patagonia de la Repblica Argentina. La superficie de la ciudad de Neuqun, segn la Direccin de Catastro de la Municipalidad de Neuqun, es de 12.000 hectreas, y su longitud (a lo largo de la Ruta Nacional 22) es de 14 km. Por lo que la longitud del ro Limay a lo largo de esta ciudad es aproximadamente la misma. En el caso de los balnearios, la longitud de cada uno se estima, para Gatica en 800 m, para Ro Grande en 200 m y para el balneario Municipal, en 400 m. Es decir, que los tres balnearios sumaran en total, una longitud aproximada de 1.400 m sobre uno de los brazos del ro Limay. La provincia de Neuqun (Ver Figura N 1) se ubica en el extremo Noroeste de la regin patagnica, entre las coordenadas 36 08 y 41 08 de latitud Sur, y 68 01 y 72 58 de longitud Oeste. Dista 1.215 km de la Capital Federal (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001).

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INTRODUCCIN

Sitio de estudio

Figura N 1: Mapa de la provincia de Neuqun y sitio de estudio.

LA CIUDAD DE NEUQUN Su nombre significa -en lengua mapuche- "atrevido, arrogante, audaz" o "el que tiene la fuerza". La ciudad est ubicada en la confluencia de los ros Limay y Neuqun, que dan origen al ro Negro (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). La ciudad fue declarada como la nueva capital de la provincia el 12 de Septiembre de 1.904, por iniciativa del Gobernador del territorio Carlos Bouquet Roldn. En esta ciudad, que cuenta con 203.190 habitantes (INDEC, 2.001) aproximadamente, se concentra el accionar administrativo, poltico y econmico de la provincia del mismo nombre (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). RELIEVE En la zona del Alto Valle de Ro Negro y Neuqun, en donde se halla la ciudad de Neuqun, predominan las mesetas patagnicas, y surcndolas, en direccin Oeste-Este, se encuentran profundos valles fluviales, de anchura desmesurada - entre 5 y 15 km -, producto de la accin erosiva de los grandes ros locales, como el Neuqun y el Limay. Los valles constituyen depresiones de origen fluvial. Son relativamente anchos, labrados por el ro que les ha dado origen, con diferentes niveles aterrazados producto de los antiguos cauces del curso principal. Estos valles presentan un rea de fondo llano, delimitados por terrazas fluviales de bordes escarpados conocidas como bardas, con el desarrollo de una amplia

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INTRODUCCIN

planicie de inundacin en una margen y el curso de agua recostado sobre una de las bardas en la otra margen (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). Es por esto, que la ciudad de Neuqun posee lmites naturales como el ro Limay al Sur, la barda al Noroeste y el ro Neuqun al Noreste. CLIMA La provincia de Neuqun se encuentra prcticamente dentro del dominio del clima templado, y ms especficamente en la ciudad de Neuqun predomina un clima denominado semirido de meseta. Este clima es una transicin al clima rido patagnico hacia el Sur y el Oeste. Debido a la altura de la meseta, el efecto de la temperatura es moderado con respecto al continente. El aire es muy seco y las precipitaciones son escasas, ya que son menores a 300 mm por ao. A su vez, la zona se caracteriza por presentar heladas y granizo. Con respecto a los vientos, stos son fuertes, secos y fros provenientes del Sudoeste, los que acentan la aridez de la zona (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). EL RO LIMAY El ro Limay (ver Figura N 2), cuyo caudal de 650 m3/s lo caracteriza como un ro de corriente rpida, constituye el drenaje natural de las estribaciones orientales de la Cordillera de los Andes en el Sur de la provincia de Neuqun, drenando un rea de 61.597 km2. Su principal afluente es el ro Colln Cur en el curso superior del ro Limay y ste ltimo, junto con el ro Neuqun, origina el ro Negro, para el cual contribuye con el 70% del aporte anual del mismo (Valicenti). Nace en el lago Nahuel Huapi, localizado al Sur de la provincia de Neuqun. Su curso posee una orientacin SudoesteNordeste y recorre una distancia aproximada de 400 km, desde su naciente hasta la confluencia con el ro Neuqun, como se observa en la Figura N 3 (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001).

Figura N 2: Vista area del ro Limay.

Gentileza Municipalidad de Neuqun.

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Ro Neuqun

Ro Negro Ro Limay

1.212 m

Figura N 3: Imagen satelital de la confluencia de los ros Limay y Neuqun, que originan el
ro Negro.

Este ro, alimentado por 37 lagos cordilleranos, presenta el rgimen propio de los cursos de agua emisarios de zonas lacustres en las que las precipitaciones pluviales y nveas son embalsadas por esos lagos, los cuales devuelven los volmenes de agua retenidos en forma gradual, disminuyendo as la violencia de las crecidas y aumentando el caudal de los estiajes (Universidad Nacional del Comahue & Gobierno de la Provincia de Neuqun, 1.982). Algunos de los lagos principales que alimentan al Limay son: Nahuel Huapi, Traful, Lolog, Huechulafquen, Tromen, Quilln y Alumin (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). A su vez, el curso principal del Limay recibe el aporte en su margen izquierda de los ros Traful (emisario del lago homnimo) y Colln Cur (su principal afluente), como se mencion anteriormente, contribuyendo con las 2/3 partes del caudal formado en la confluencia. Otros afluentes de importancia son los ros Alumin, Catn Lil, Malleo, Chimehun, Caleuf, Picn Leuf, entre otros (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). En su margen derecha no recibe el aporte de agua de la magnitud con que lo recibe de su margen opuesta, slo la presencia de los arroyos Comallo, Pichi Leuf, el Caadn Pilahu y el arroyo Michihuau, todos provenientes de la provincia de Ro Negro (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). La cuenca del ro Limay, como toda la zona cordillerana de la provincia de Neuqun, se alimenta prcticamente en forma exclusiva de la humedad proveniente del Ocano Pacfico a travs de los vientos hmedos del Oeste, originados en el centro de alta presin del Pacfico Sur (Universidad Nacional del Comahue & Gobierno de la Provincia de Neuqun, 1.982). Es por esto que el rea cercana a la naciente del ro Limay presenta una

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INTRODUCCIN

vegetacin boscosa atenuante de la escorrenta inicial. A su vez, el curso de agua ha sido regulado y transformado en una serie de lagos artificiales por la construccin de obras hidroelctricas, como Alicur, Piedra del guila, El Chocn, y Pichi Picn Leuf, adems de una obra de produccin de agua pesada, en Arroyito. Gracias a estas obras, con las aguas del ro Limay se fertilizaron zonas desrticas, se gener energa, se acrecent la produccin y se foment la industria en la zona. A partir de estas concesiones artificiales comenzaron a cambiar las condiciones demogrficas, sociales y econmicas de la regin (Navarro Floria & Nicoletti, 2.001). El predominio invernal de las precipitaciones, unido a la latitud del ro Limay y a la presencia de cordones de cierta altura, determinan que una parte de la cuenca tenga influencia nival. Entonces, puede decirse que existe una hoya de alimentacin mixta: pluvio-nival, y tal circunstancia es de suma importancia pues se refleja en el rgimen de variacin anual de sus caudales (Universidad Nacional del Comahue & Gobierno de la Provincia de Neuqun, 1.982). Para concluir, el ro Limay en su paso por los balnearios en estudio en este trabajo, los recorre mediante uno de sus brazos de menor porte, siendo sin embargo, de aguas rpidas y transparentes, como es caracterstico de este cauce en toda su extensin. En la Figura N 4 siguiente puede observarse un mapa de la cuenca del ro Limay y la localizacin del sitio de estudio.

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Sitio de estudio

Figura N 4: Mapa de la cuenca del ro Limay.

Fuente: AIC.

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LOS BALNEARIOS EN LA CIUDAD DE NEUQUN Los balnearios del ro Limay en la ciudad de Neuqun, estudiados en este trabajo son: Gatica, Ro Grande y Municipal (Ver Figura N 5). El curso del ro Limay al llegar a la ciudad de Neuqun forma distintos brazos, uno de los cuales bordea la ciudad y es el que se utiliza, como se mencion previamente, para la recreacin en los balnearios citados. ste recorre primero el balneario Gatica, luego el balneario Ro Grande y finalmente el balneario Municipal, como se aprecia en la Figura N 6.

Balneario Municipal

Balneario Ro Grande

Balneario Gatica

Figura N 5: Plano del sector centro Sur de la ciudad de Neuqun indicando sus balnearios.
Fuente: Municipalidad de Neuqun.

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Balneario Municipal Isla 132 Balneario Ro Grande

Balneario Gatica 800 m

Figura N 6: Imagen satelital donde se aprecian los balnearios neuquinos.

A continuacin se observarn fotografas areas e imgenes satelitales de los distintos balnearios. Balneario Gatica: ubicado en la calle Gatica, en su interseccin con el ro Limay (Figura N 7).

Calle Gatica

Figura N 7: Vista area del balneario Gatica.

Gentileza Municipalidad de Neuqun.

En la Figura N 8, que se observa a continuacin, puede apreciarse ms detalladamente la extensin del balneario, el recorrido del brazo del ro Limay y la isla que se ubica enfrente.

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Calle Gatica

Balneario Gatica

Isla

257 m

Figura N 8: Imagen satelital donde se aprecia el balneario Gatica.

Av. Olascoaga

Balneario Ro Grande: situado en la avenida Olascoaga y la calle Democracia (Figura N 9).

Figura N 9: Vista area del balneario Ro Grande.

Gentileza Municipalidad de Neuqun.

En la Figura N 10, se aprecia el balneario Ro Grande y el puente que conduce a la Isla 132.

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Calle Ro Negro

Av. Olascoaga

Isla 132

Balneario Ro Grande

160 m

Figura N 10: Imagen satelital en la que se observa el balneario Ro Grande.

Balneario Municipal

Balneario Municipal: localizado en la calle Linares, en su interseccin con el ro Limay (Figuras N 11 y 12).

Figura N 11: Vista area del balneario Municipal.

Gentileza Municipalidad de Neuqun.

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Figura N 12: Balneario Municipal.

En la Figura N 13, se observa la ubicacin del balneario Municipal, cmo el arroyo Durn cruza (en forma subfluvial) el brazo del ro Limay, y atraviesa la isla 132 para desembocar finalmente en el cauce principal del mencionado ro.

Brazo del ro Limay Balneario Municipal Calle Linares

Arroyo Durn Isla 132

183 m

Figura N 13: Imagen satelital donde se observa el balneario Municipal.

Los tres balnearios cuentan con un Operativo de Seguridad Balnearia brindado por la Municipalidad, que funciona desde el 1 de Diciembre hasta el 15 de Marzo, ofreciendo servicio de guardavidas en horario de 12 a 21 de Lunes a Domingo (Municipalidad de Neuqun, 9/12/2.005). En el ltimo operativo, que comenz a funcionar el 1 de diciembre de 2005, hubo 60 guardavidas, apostados cada diez metros sobre la ribera del ro Limay, y ms de 40 personas, entre las que se encontraron auxiliares y mdicos, a

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cargo de la seguridad de los baistas en las costas de los balnearios Gatica, Ro Grande y Municipal (Municipalidad de Neuqun, 10/3/2.006). Sin embargo, debido a los altos caudales del ro Limay durante el ltimo verano, consecuencia de las erogaciones de las represas aguas arriba de la ciudad de Neuqun, los tres balnearios permanecieron inhabilitados por precaucin, del 1 al 29 de Diciembre del 2.005 (Municipalidad de Neuqun, 1, 2, 5, 9, 12, 26, 29/12/2.005) y del 16 al 26 de Febrero del 2.006 (Municipalidad de Neuqun 16, 17, 20, 24/2/2.006). Esto se debi a que la cantidad de agua normal para realizar actividades veraniegas en esos espacios recreativos costeros, sin correr riesgos, oscila entre 500 y 600 m3/s (Municipalidad de Neuqun 1/12/2.005) y en los perodos mencionados el caudal sobrepas este ltimo valor, tornndose el ro ms correntoso. A su vez, los tres balnearios cuentan con sanitarios pblicos, parrillas (Ver Figura N 14) y servicio de kioscos, bares y venta ambulante de comida. Adems, los balnearios Gatica y Municipal poseen juegos infantiles.

Figura N 14: Parrillas en el balneario Municipal.

Estos espacios son muy concurridos, y estn destinados a la recreacin y esparcimiento de todos los habitantes de Neuqun y alrededores, como as tambin de turistas, siendo por esto un pblico de todas las edades y condiciones socioeconmicas. Algunas de las actividades que se realizan son la natacin y la navegacin en lanchas, kayaks y canoas. Debido a que en el verano 2.005-2.006, se vi colmada la capacidad de los balnearios, la Municipalidad est analizando para la prxima temporada estival la habilitacin de nuevos balnearios, porque as lo est pidiendo la poblacin (Municipalidad de Neuqun, 15/3/2.006). No slo los balnearios pblicos de la ciudad de Neuqun son un espacio que favorece la recreacin para un gran nmero de personas, sino que brindan tambin la posibilidad de vincularse directamente con un ambiente natural agradable. Debido a estos motivos, la calidad de las aguas del ro Limay en dichos sectores, debe ser la adecuada para no poner en riesgo la

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salud de la poblacin, especialmente la de los nios, quienes estn ms expuestos a contraer enfermedades, y adems, para conservar un recurso natural tan valioso como es el ro Limay y su ecosistema. Para esto es conveniente monitorear peridicamente los niveles de contaminacin del agua, la cual puede ser de diversa ndole, por ejemplo, qumica, fsica o biolgica, como la contaminacin bacteriolgica. En el caso de la contaminacin biolgica, los microorganismos pueden contribuir de diversas maneras: produciendo enfermedades, creando una biomasa estticamente desagradable, generando metabolitos txicos, y modificando el ecosistema natural de un lugar. Por ejemplo, al introducir bacterias exticas en cantidades importantes, se crea una competencia con las bacterias autctonas, en la que se ven favorecidas las bacterias exticas por encontrarse en mayor nmero. El tipo de contaminacin ms frecuente y mejor reconocida por el ciudadano medio es la derivada de la acumulacin de compuestos o de microorganismos en los cursos fluviales, lo que consecuentemente altera el empleo recreativo de los mismos. Es un hecho que la contaminacin de la mayora de los ambientes con el tiempo repercute en el medio acutico (Grant & Long, 1.989).

MARCO TERICO
CALIDAD DEL AGUA RECREACIONAL Las aguas utilizadas con propsitos recreativos deberan estar suficientemente libres de contaminantes microbiolgicos, fsicos, y qumicos, para asegurar que haya un riesgo mnimo en la salud y en la seguridad del usuario. La determinacin del riesgo de enfermedad o dao a partir de amenazas microbiolgicas, fsicas, o qumicas est basada en un nmero de factores (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992), incluyendo los siguientes: Evaluaciones sanitarias del ambiente. Evidencia epidemiolgica. Lmites de organismos indicadores. Presencia de patgenos. Definiciones Previas Playas: Una playa natural es cualquier lnea de costa o ribera de una corriente, lago, ocano, pantano o manantial termal utilizada con fines recreativos (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Aguas recreacionales: Las aguas recreacionales se refieren a aquellas aguas utilizadas no slo para actividades de contacto primario, como natacin, windsurf y ski acutico, donde hay inmersin de cuerpo entero, sino tambin para actividades de contacto secundario, como navegacin y

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pesca (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Uso recreacional: El uso recreacional se define en este documento, como cualquier actividad que involucra inmersin intencional (por ejemplo, natacin) o inmersin accidental (por ejemplo, ski acutico) del cuerpo, incluyendo la cabeza, en aguas naturales (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Aguas naturales: Las aguas naturales se definen como cualquier cuerpo de agua marina, estuario o dulce, como as tambin cualquier curso de agua construido artificialmente usando aguas naturales no tratadas (FederalProvincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Caractersticas Fsicas y Qumicas del Agua Recreacional Para evaluar las caractersticas fsicas del agua recreacional, las Guas Canadienses para la Calidad del Agua Recreacional, sugieren ciertos valores lmites para los parmetros ms importantes, como pH, temperatura, turbidez, claridad y penetracin de la luz, color, grasas y aceites (FederalProvincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Gran cantidad de compuestos qumicos inorgnicos pueden afectar las aguas naturales de recreacin al ser vertidos o alcanzar los cursos de agua. Esto depende de la proximidad de industrias a los cursos de agua, del tratamiento de sus efluentes, de los canales, arroyos y desages que desembocan en el ro, de la escorrenta del agua de lluvia que arrastra compuestos depositados en el suelo, entre otros factores. Tambin existen muchas fuentes de contaminacin debida a sustancias qumicas orgnicas, incluyendo manufactura industrial y el uso industrial y domstico de dichos productos como pinturas, combustibles, tinturas, pegamentos, pesticidas, y productos de limpieza (National Water Quality Data Bank, 1.988). En cuanto a los posibles riesgos en la salud debidos a compuestos qumicos orgnicos, Brown et. al. (1.984) en un trabajo sobre solventes voltiles, compar la dosis estimada de absorcin drmica con la dosis oral ingerida bajo diversas situaciones de exposicin, incluyendo natacin, inmersin e ingesta. Sus hallazgos indicaron que la absorcin drmica constituy entre el 29 y 91% de la dosis total. Por ejemplo, si un nio de 21,9 kg nadara 1 hora en el agua (con el 90% del cuerpo sumergido) e ingiriera 1 L (su ingesta normal diaria) de agua conteniendo 0,5 mg/L de tolueno, la dosis de tolueno absorbida por va drmica sera el 91% de la dosis diaria absorbida proveniente de las dos vas, la drmica y la oral (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Debido a la falta de suficiente informacin cientfica, se recomienda que no se establezcan lmites medibles para sustancias qumicas presentes en el agua de recreacin, para riesgos de exposicin en humanos. Las decisiones de uso deberan basarse en la calidad esttica (ej., presencia de olor o aceites y grasas visibles) y otros factores considerados en la evaluacin
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sanitaria del ambiente (ej., proximidad a una descarga industrial) (FederalProvincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). En el presente trabajo se utilizaron como valores guas para evaluar la calidad fsico-qumica del agua recreacional, a los valores propuestos por el Cdigo Alimentario Argentino para agua de consumo humano (1.994). Por lo expuesto anteriormente, se considera necesario estudiar la calidad del agua recreacional del ro Limay en la ciudad de Neuqun, durante la temporada estival cuando la concurrencia de pblico es mayor, y no solamente a comienzos o fines de la misma. Por este motivo, la determinacin de la calidad bacteriolgica y fsico-qumica de sus aguas, tendra una utilidad ms completa e importante. Adems, existe la necesidad de identificar las bacterias que pudieran estar presentes en las aguas mencionadas, no slo para caracterizar con un mayor detalle sus aguas, sino tambin para reflexionar sobre los posibles riesgos en la salud de la poblacin y el ambiente. Contaminacin Microbiolgica En las aguas naturales de uso recreativo existen distintos microorganismos, que si se hallan en grandes cantidades, pueden alterar el ecosistema y afectar la salud de las personas que concurren a estos cursos de agua. Un grupo importante de bacterias que puede influir en la calidad del agua, es el de las bacterias coliformes, provenientes de fuentes como la materia fecal, entre otras. Adems, en las aguas recreacionales se han aislado otras bacterias que pueden suponer riesgos para la salud pblica, por contacto con el cuerpo, ingestin o inhalacin (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). La contaminacin fecal se refiere a la contaminacin a partir de microorganismos que se encuentran en el tracto gastrointestinal de animales de sangre caliente, incluyendo el ser humano. Para detectar esta contaminacin se utilizan microorganismos indicadores de contaminacin fecal, que son aquellos que se encuentran en grandes cantidades en las heces humanas y en las de los dems vertebrados de sangre caliente, que son de fcil identificacin y deteccin, y permiten evaluar la potencial presencia de otros microorganismos patgenos que suelen acompaarlos (Ctedra de Microbiologa Ambiental, 2.003). La contaminacin fecal de aguas superficiales constituye una seria amenaza para el ambiente y la salud pblica. Esto se debe en parte, a que adems de los microorganismos introducidos en aguas recreacionales a travs de la contaminacin fecal humana o animal, una cantidad de microorganismos patgenos son autctonos de dichas reas, o una vez introducidos, son capaces de colonizar el ambiente (World Health Organization [WHO], 2.003).

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Existe una situacin de riesgo potencial de contaminacin de las aguas de los balnearios del ro Limay (Ver Anexo VII), debido al aporte de aguas contaminadas de diversos afluentes que desembocan en l. Uno de ellos es el arroyo Durn (Ver Figuras N 15 y 16), cuyas aguas estn contaminadas con efluentes cloacales (Cuadros, 2.005), provenientes del drenaje natural de los pozos ciegos, conexiones clandestinas y filtraciones, que recibe durante todo su recorrido (Ver Figura N 17) entre la zona de Valentina Sur Rural y su desembocadura a metros del Balneario Municipal (Municipalidad de Neuqun, 7/3/2.002).

1.200 m

Figura N 15: Imagen satelital del recorrido del arroyo Durn.

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Balneario Municipal

Isla 132 Balneario Ro Grande

Balneario Gatica

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Figura N 16: Imagen satelital donde se observa la desembocadura del arroyo Durn en el
ro Limay.

Figura N 17: Aporte de efluentes en el arroyo Durn, luego de cruzar la calle La Pampa al
1.300.

El arroyo atraviesa distintos barrios de la ciudad, cruzando calles a cielo abierto, como se observa en la Figura N 18.

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Figura N 18: Recorrido del arroyo Durn, antes de cruzar la calle La Pampa al 1.300 (izq.)
y en el cruce de la Avenida Olascoaga (der.).

Como antecedente puede considerarse lo ocurrido a fines de Enero del 2.004, cuando el agua de lluvia y los sedimentos que se acumularon en el arroyo Durn fueron liberados en el balneario Municipal y como consecuencia, en das siguientes, el ro Limay recibi una concentracin de bacterias mayor a la habitual, provocando un potencial riesgo en la salud de los baistas, por lo cual el municipio lo inhabilit temporalmente (Diario Ro Negro, 2.004). Esta situacin ocurri en distintas oportunidades, alcanzando los coliformes fecales valores de 9.000 UFC/100 ml (Municipalidad de Neuqun, 28/2/2.002 & 7/3/2.002). El Subsecretario de Gestin Ambiental de la Municipalidad de Neuqun, Juan Carlos Roca, afirm que el nivel de contaminacin que presenta el arroyo Durn es importante (Municipalidad de Neuqun, 14/12/2.005). Debido a esto, en condiciones normales, funciona un sifn que desva las aguas de ese curso a travs de la isla 132 para que no ingresen al Balneario Municipal (Municipalidad de Neuqun, 30/1/2.006). Este sistema consiste en una compuerta y un ducto (Ver Figura N 19) que transporta el contenido del arroyo por debajo del cauce del ro en el sector previo al Balneario Municipal, donde termina el predio del Club deportivo El Bigu, excepto en los das de lluvia, en los que la compuerta se mantiene abierta para que el caudal del arroyo incrementado por las precipitaciones, descargue en dicho lugar. De esta forma, se evita que haya obstrucciones y que rebalse el contenido del arroyo en los alrededores (Municipalidad de Neuqun, 28/2/2.002). Segn el Director General de Limpieza Urbana de la Municipalidad de Neuqun, el Ing. Rubn Botticelli, esta operacin se realiza cuando el caudal del arroyo sobrepasa los 2 m3/s, que es el valor mximo que puede tolerar el sifn que transporta el contenido del arroyo al sector del ro Limay ubicado al otro lado de la Isla 132, la cual se halla frente al Balneario Municipal. Una vez que el arroyo cruza subterrneamente el brazo del ro, sale a la superficie nuevamente y atraviesa la isla N 132 hasta desembocar en el curso principal del ro Limay.

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Figura N 19: Descarga del arroyo Durn en un brazo del ro Limay, a metros del Balneario
Municipal. Gentileza Direccin Municipal de Proteccin Ambiental de Neuqun.

Cada vez que la compuerta del arroyo Durn se abre para que descargue su contenido en el ro Limay, en cercanas del club El Bigu, el balneario Municipal es inhabilitado por la cantidad de das requeridos para que se normalice su nivel de bacterias coliformes fecales. Esto acarrea la eliminacin temporal de un espacio recreativo para la poblacin local. Teniendo en cuenta las diversas situaciones de riesgo ambiental y sanitario en cada uno de los puntos de los balnearios de Neuqun, la Secretara de Gestin Ambiental de la ciudad de Neuqun propone avanzar en un programa de manejo integral de las aguas recreacionales, de forma que se puedan prevenir dichas situaciones de riesgo para la salud de baistas y acampantes (Municipalidad de Neuqun, 1/2/2.002). Riesgos en la Salud Debido al Contacto Directo con el Agua Los riesgos en la salud asociados con el contacto directo con el agua incluyen infecciones transmitidas por microorganismos patgenos, como a su vez, heridas causadas por diversos elementos, sustancias qumicas y desechos introducidos en el agua (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). En cuanto a sustancias qumicas presentes en el agua, los nitratos son un parmetro muy importante a tener en cuenta, debido a que valores mayores a los 45 mg/l, pueden producir una enfermedad en la sangre conocida como "sndrome del nio azul" o metahemoglobinemia, que afecta a la hemoglobina. Los ms perjudicados por esta enfermedad son los bebs menores de 6 meses, porque su cuerpo an carece de las enzimas esenciales para revertir la enfermedad. Los procedimientos actuales de anlisis microbiolgico del agua se basan en que la mayora de los microorganismos patgenos llegan a los cursos fluviales como resultado de la contaminacin fecal, y por lo tanto la posibilidad de detectar sta a niveles bajos es la mejor garanta para
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preservar la potabilidad de las reservas de agua. Dentro de estos microorganismos transportados por el agua encontramos a bacterias como Escherichia coli diarreignicas, Salmonella sp., Shigella sp., otras enterobacterias, Vibrio sp., Leptospira sp. , Mycobacterium sp. y Francisella sp. Dentro de los virus se hallan Enterovirus, Hepatitis A, Adenovirus, Coxsackie A y B, Reovirus y Parvovirus. Por ltimo, dentro de los protozoos y metazoos se encuentran Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Entamoeba sp., Acanthamoeba sp., Naegleria sp., Hartmanella sp., Echinococcus granulosus, Ascaris sp., Trichuris sp. y Taenia sp., entre otros (Grant & Long, 1.989; Marshall et. al. 1.997). Como ejemplo de bacterias patgenas para el hombre, transportadas por agua, es de gran importancia E. coli diarreignica, que puede incluir a E. coli enteropatognica, causa significativa de enfermedades diarreicas en los nios (Higgins et. al. 2.005). Existe un gran nmero de grmenes patgenos que pueden transmitirse al ser humano a travs de la utilizacin del agua con fines recreativos, como por ejemplo, patgenos humanos y "oportunistas", como Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella, Vibrio parahemolyticus, V. vulnificus, Aeromonas hydrophila y Candida albicans, que pueden multiplicarse en aguas recreativas en presencia de suficiente cantidad de elementos nutritivos o ser tambin consecuencia de la existencia de organismos vertidos al agua a travs de la piel o los orificios superiores de los usuarios, como es el caso de Staphylococcus aureus; por ltimo pueden citarse otras especies, como micobacterias y leptospiras, Francisella tularensis y especies patgenas de Naegleria (meningoencefalitis amebiana) (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Numerosos estudios epidemiolgicos han identificado en baistas enfermedades gastrointestinales y de las vas respiratorias superiores (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992; Dufour, 1.984). En uno de ellos, se observ una relacin lineal directa entre enfermedades gastrointestinales y densidades bacterianas en aguas de dos indicadores de contaminacin fecal, Enterococcus spp. y E. coli. Para estos dos indicadores examinados, la relacin entre las enfermedades asociadas a la natacin y las densidades de bacterias indicadoras fue casi idntica (Dufour, 1.984). La mayora de los investigadores han acordado que las exigencias de calidad bacteriolgica del agua recreacional son menores que para el agua de bebida, pero el agua recreacional debera ser mantenida razonablemente libre de bacterias de conocido origen patgeno (Acua del Pino et. al., 1.998). Microorganismos Indicadores Se utilizan diversos microorganismos indicadores de la calidad de las aguas recreativas, debido a que no existe un solo procedimiento que sea adecuado para aislar todos los microorganismos del agua. Sin embargo, la presencia

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de uno de estos indicadores no implica necesariamente la existencia o ausencia de otros microorganismos (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). El indicador ideal de contaminacin fecal de aguas recreacionales sera uno de los patgenos entricos, como Salmonella o el virus Norwalk, ms frecuentemente responsables de enfermedades transmitidas por el agua. Sin embargo, no se utilizan como indicadores, ya que son difciles de aislar e identificar debido a que estn usualmente presentes a bajos niveles y se encuentran distribuidos irregularmente, incluso durante brotes de enfermedades. Adems, la ausencia de un patgeno no asegura necesariamente que otros patgenos entricos se encuentren tambin ausentes. Sumado a esto, analizar cada posible enfermedad de transmisin acutica causada por un microorganismo sera prohibitivamente costoso en trminos tanto de tiempo como de dinero. Debido a estas razones, es comn monitorear otras bacterias ms abundantes, pero no patgenas, presentes en heces humanas y animales. La presencia de nmeros elevados de estas bacterias en el ambiente acutico es indicadora de contaminacin fecal y de la posible presencia de patgenos entricos (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). El grupo de microorganismos coliformes es adecuado como indicador de contaminacin bacteriana (Red Iberoamericana de Potabilizacin y Depuracin del Agua) ya que los coliformes: Son contaminantes comunes del tracto gastrointestinal tanto del hombre como de los animales de sangre caliente. Estn presentes en el tracto gastrointestinal en grandes cantidades. Permanecen por ms tiempo en el agua que las bacterias patgenas. Se comportan de igual manera que los patgenos en los sistemas de desinfeccin. Las bacterias recomendadas como indicadores de la calidad del agua recreativa son: coliformes, especies de Pseudomonas, Streptococcus, Staphylococcus y, ms raramente, Legionella. El grupo de bacterias coliformes est formado por todas las bacterias aerobias y anaerobias facultativas, gramnegativas, no formadoras de esporas y con forma de bastn (bacilo) que fermentan la lactosa, produciendo gas y cido en 48 horas a 35 C (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Los microorganismos coliformes, algunos de los cuales son saprfitos de vida libre, pueden multiplicarse en madera y desechos o restos orgnicos, y son capaces de producir a veces barros en el interior de las tuberas. Los residuos industriales contienen elevadas concentraciones de elementos nutritivos para las bacterias y pueden favorecer grandes sobrecrecimientos

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de coliformes en aguas efluentes y afluentes. La identificacin de los microorganismos tiene valor en el momento de determinar la fuente de la que procede el aumento de su densidad y que es consecuencia de la multiplicacin de dichos microorganismos sobre o dentro de materiales orgnicos. La presencia de un gran nmero de coliformes del mismo tipo en el agua de un pozo o manantial o en una sola canilla de un sistema de distribucin, sugiere que se ha producido la citada multiplicacin. (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Los indicadores fundamentales de la contaminacin por fuentes humanas, animales de compaa, roedores, y agua de lluvia son los coliformes fecales (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). stos son considerados indicadores tiles porque estn presentes en virtualmente todos los animales de sangre caliente, incluyendo los humanos, en nmeros que sobrepasan notablemente las cantidades de patgenos (FederalProvincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). Existen procedimientos, como la Tcnica de Fermentacin en Tubos Mltiples para Coliformes Fecales, que utilizan una temperatura especfica para separar microorganismos del grupo coliforme procedentes de fuentes fecales de los no fecales; en esta tcnica, por ejemplo, la temperatura de incubacin es de 44,5 + 0,2 C. Las modificaciones de los procedimientos tcnicos, la estandarizacin de los mtodos y los estudios detallados de los miembros del grupo coliforme permiten reafirmar la importancia de determinar los coliformes fecales en aguas recreacionales (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Existen diversos lmites mximos internacionales recomendados para evaluar la calidad del agua recreacional, propuestos por organismos como la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (EPA) y el Ministerio Nacional de Salud y Bienestar de Canad, entre otros (Pereira de Brito et. al., 1.998; WHO, 2.000). Debido a que E. coli es un microorganismo presente en materia fecal de casi todos los animales de sangre caliente, incluyendo los humanos, ambos organismos recomiendan a esta bacteria como uno de los organismos indicadores ms sensible de contaminacin fecal para sistemas de agua dulce (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992; Mc Lellan, 2.004; United States Environmental Protection Agency [EPA], 1.986, 2.000). En 1.986, la EPA recomend dos nuevos organismos indicadores para la evaluacin de la calidad del agua recreacional. Estos fueron Enterococcus spp. (tanto para aguas marinas como para aguas dulces) y E. coli (para aguas dulces nicamente). Estos organismos fueron elegidos en base a estudios epidemiolgicos conducidos en varias playas de Estados Unidos que mostraron una fuerte correlacin positiva entre los organismos y la ocurrencia de gastroenteritis asociada a la natacin (EPA, 2.000).

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En la ciudad de Neuqun no existen valores guas propios de microorganismos indicadores de la calidad bacteriolgica del agua recreacional, por lo que se adoptan valores de las Guas Canadienses para la Calidad del Agua Recreacional. Las mismas recomiendan el uso de uno de los siguientes indicadores para el monitoreo de rutina de la calidad del agua recreacional- Enterococcus, E. coli, o el grupo de las bacterias coliformes fecales. De acuerdo con estas guas, la media geomtrica de por lo menos cinco muestras, tomadas durante un perodo que no exceda los treinta das, no debera sobrepasar el nmero de 200 E. coli/100 ml de muestra. El muestreo debera volver a realizarse cuando cualquiera de las muestras exceda el nmero de 400 E. coli/100 ml (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992). En pases como Estados Unidos, como precaucin se suelen clausurar las playas cuando los recuentos de coliformes fecales superan el nivel que se considera estndar para usos recreativos, de 1.000/100 ml. Las normas de algunas zonas de los Estados Unidos exigen que los vertidos desinfectados de aguas residuales no excedan este lmite (Atlas & Bartha, 2.002).

Indicadores adoptados por la ciudad de Neuqun

En la ciudad de Neuqun, el gobierno Municipal adopta por Ordenanza N 8.320/98, las mencionadas Guas Canadienses de Calidad de Agua Recreacional para establecer el criterio de calidad de sus balnearios, utilizando como indicador al grupo de los coliformes fecales, por lo cual el nivel mximo tolerable para aguas recreacionales es de 200 coliformes fecales/100 ml de agua (Concejo Deliberante de la Ciudad de Neuqun, 1.998). Para determinar la aptitud del agua en los balnearios de la ciudad de Neuqun con el objeto de habilitarlos para el uso de la poblacin, la AIC realiza recuentos de E. coli en muestras de agua, previamente al inicio de la temporada estival, siguiendo los criterios expuestos por las Guas Canadienses mencionadas anteriormente, adoptndose E. coli como un indicador de riesgo potencial en los baistas de contraer enfermedades gastrointestinales (Municipalidad de Neuqun, 2/1/2.003; AIC, 2.001, 2.002). No se realiza en la actualidad la identificacin de los dems gneros y especies bacterianos encontrados en las muestras, ni se determina su susceptibilidad a antimicrobianos.

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OBJETIVOS
Los objetivos del presente trabajo son, a partir de muestras de agua del ro Limay tomadas en tres balnearios distintos de la ciudad de Neuqun, en el momento de mayor concurrencia de pblico:

Objetivo General
Evaluar la posible contaminacin bacteriana y fsico-qumica de aguas recreacionales del ro Limay.

Objetivos Especficos
Evaluar la calidad fsico-qumica de las muestras de agua. Cuantificar bacterias hetertrofas mesfilas aerobias totales. Cuantificar bacterias coliformes totales y fecales. Aislar e identificar las bacterias encontradas en las muestras de agua. Determinar en antimicrobianos. las bacterias aisladas la sensibilidad a

Reflexionar acerca de los potenciales riesgos en la salud de los usuarios de las aguas recreacionales y el ambiente, ocasionados por la contaminacin bacteriolgica del agua.

HIPTESIS
El agua del ro Limay, en los balnearios Gatica, Ro Grande y Municipal de la ciudad de Neuqun, contiene bacterias indicadoras de contaminacin fecal viables durante todo el verano, las cuales pueden presentar resistencia a ciertos antimicrobianos, y generar un posible riesgo para la salud de los baistas.

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2.1. DISEO DEL MUESTREO MICROBIOLGICO
Para lograr cumplir con los objetivos del presente trabajo, fueron seleccionados los tres balnearios de la ciudad de Neuqun, sobre el ro Limay, habilitados como tales por la Municipalidad de dicha ciudad. stos son: Gatica, Ro Grande y Municipal. Se realizaron cinco muestreos para el estudio microbiolgico del agua, tomando muestras por duplicado en cada caso, una para procesar y la otra para ser almacenada en caso de ser necesaria debido a algn inconveniente con la primera. El intervalo de tiempo entre cada muestreo no sobrepas el plazo de una semana, siendo las fechas correspondientes a cada uno las siguientes: Muestreo1: 13-2-2.006. Muestreo 2: 20-2-2.006. Muestreo 3: 23-2-2.006. Muestreo 4: 27-2-2.006. Muestreo 5: 2-3-2.006.

2.2. PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRAS

El procedimiento se realiz acorde con la metodologa enunciada en el libro Mtodos Normalizados para el Anlisis de Aguas Potables y Residuales (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). En cada uno de los cinco muestreos, la muestra correspondiente a cada balneario se tom siempre en un mismo punto de referencia, estando ubicado el mismo en la mitad de la extensin que abarca cada balneario. Las muestras fueron recogidas a 30 cm por debajo de la superficie del agua y a una distancia de la orilla considerable, para evitar el contacto con sta o el lecho del ro. Las mismas se tomaron en las primeras horas de la tarde y en diversas condiciones ambientales y climticas, considerando los momentos en que podra esperarse una mxima contaminacin, es decir, en los perodos de influencias de corrientes y vientos o en las llegadas de torrentes y aguas residuales, por ejemplo al da siguiente de una lluvia. Las muestras se obtuvieron en frascos de vidrio estriles que se mantuvieron cerrados, envueltos en papel hasta el momento de tomar las muestras. Una vez destapado el frasco se llen con agua del ro, sin enjuague previo, y se tap inmediatamente.

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MATERIALES Y MTODOS

Al hacer la toma de la muestra se dej un amplio espacio areo en el frasco, de aproximadamente 2,5 cm, para facilitar la mezcla por agitacin antes de proceder al estudio. El procedimiento se realiz manualmente, sosteniendo el frasco con una mano y, una vez destapado, sumergindolo boca abajo, girndolo hasta que el cuello apuntara hacia arriba con la boca dirigida hacia la corriente. El volumen de cada muestra fue entre 200 y 250 ml, siendo suficiente para realizar todos los anlisis microbiolgicos previstos. Cada frasco fue rotulado, identificando la fecha y el lugar de procedencia de la muestra, acompaado con una descripcin, en un registro separado, de la hora en que se tom la muestra, profundidad y temperatura del agua. Inmediatamente luego de ser tomadas las muestras, las mismas fueron colocadas en una heladera porttil con refrigerantes, para su traslado al Laboratorio de Microbiologa de la Escuela de Medicina de la UNCo, en la ciudad de Cipolletti, donde se realizaron los anlisis microbiolgicos (Ver Figura N 20). En todos los muestreos el transporte al laboratorio no excedi las dos horas.

Figura N 20: Escuela de Medicina de la UNCo, en Cipolletti (izq.) y trabajo en el

Laboratorio de Microbiologa (der.).

Una vez en el laboratorio, las muestras fueron procesadas inmediatamente. Para la esterilizacin de los materiales a utilizar en el laboratorio (Figura N 21) y en la toma de muestras se emple un autoclave, en el cual el proceso se llev a cabo a 1 atm, a 121 C durante 15 minutos, y una estufa de esterilizacin (Figura N 22), que utiliza calor seco, en la cual la esterilizacin se realiz a 180 C durante una hora. En ambos casos se emplearon indicadores de proceso de esterilizacin para verificar el correcto cumplimiento.

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Figura N 21: Material de trabajo utilizado en los anlisis microbiolgicos.

Figura N 22: Autoclave (izq.) y estufa de esterilizacin (der.).

2.3. RELEVAMIENTO DE DATOS CLIMTICOS

Se registraron las condiciones climticas en cada muestreo, obtenidas del Servicio Meteorolgico Nacional (Servicio Meteorolgico Nacional, 2.006). Los parmetros considerados fueron: temperatura mnima y mxima, velocidad y direccin del viento, nubosidad, visibilidad, presin atmosfrica y humedad relativa.

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MATERIALES Y MTODOS

2.4. ANLISIS DE LAS MUESTRAS

A continuacin se detallan los anlisis que se llevaron a cabo y la tcnica utilizada para cada uno de ellos. 2.4.1. ANLISIS FSICO-QUMICO Se realizaron los anlisis fsico-qumicos de tres muestras de agua del ro Limay, una de cada balneario, en el Laboratorio I.D.A.C. de la ciudad de Cipolletti, Ro Negro. Cada muestra se recogi en una botella plstica de 1 litro de capacidad, con un rtulo identificando el lugar, la fecha y la hora de toma de cada muestra. El procedimiento para obtener las muestras, fue el mismo que el empleado en la toma de las muestras para realizar los anlisis microbiolgicos. Las mismas se conservaron en una heladera porttil hasta su traslado inmediato al laboratorio. 2.4.2. RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESFILOS HETERTROFOS AEROBIOS TOTALES 2.4.2.1. RECUENTO DE HETERTROFOS EN PLACA El recuento de hetertrofos en placa, anteriormente denominado recuento estndar en placa, es un procedimiento cuyo objeto consiste en calcular el nmero de bacterias hetertrofas vivas que existen en el agua (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Para determinar el nmero de microorganismos, se sembr 0,1 ml de muestra por cada balneario, sobre la superficie de agar nutritivo (Mtodo de la Placa Difusa) (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992), en placas de Petri por duplicado. La tcnica consisti en colocar la alcuota de agua sobre la superficie de agar, y extenderla con una esptula de Drigalsky estril, para lograr una distribucin homognea de la muestra. Luego, las placas se incubaron en estufa de cultivo a 35 C durante 48 hs. Cabe destacar, que durante el perodo de incubacin, se supone que cada bacteria viable es capaz de originar una colonia macroscpica que ser utilizada para realizar el recuento. Sin embargo, las bacterias en una muestra de agua pueden encontrarse aisladas o en agrupaciones (de a pares o en cadenas) o asociadas a partculas. Por ello cada colonia que se desarrolla puede estar originada por uno o ms organismos y entonces los resultados de los recuentos deben expresarse como UFC por unidad de volumen (no como bacterias por unidad de volumen) (Ctedra de Microbiologa General, 2.002). Luego de transcurrido el perodo de incubacin, se contaron las colonias en las placas donde el recuento se hallaba entre 30 y 300 colonias, y se
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promedi el resultado de las muestras sembradas por duplicado. En aquellas placas con gran desarrollo bacteriano, donde el recuento sobrepas las 300 colonias, se realizaron diluciones de la muestra para repetir el procedimiento y obtener recuentos menores a 300 colonias. Finalmente, se calcul el resultado multiplicando dicho promedio por la inversa de la dilucin utilizada, expresndolo en UFC por mililitro de muestra (UFC/ ml). Debe considerarse que las bacterias que se desarrollan en el medio de cultivo elegido, son aquellas que pueden utilizar los nutrientes disponibles y que adems se adaptan a las condiciones de oxgeno, potencial redox, pH, temperatura y perodo de incubacin. No existe un medio nutritivo ni una combinacin de temperaturas y tiempos de incubacin que aseguren la recuperacin de todas las bacterias viables de una muestra de agua (Ctedra de Microbiologa General, 2.002). 2.4.2.2. TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP) Este es otro mtodo que se utiliz para obtener el nmero de microorganismos mesfilos hetertrofos aerobios totales, pero en este caso, el medio para permitir el desarrollo de dichos microorganismos es el caldo nutritivo. Previamente a sembrar la muestra se realizaron diez diluciones al dcimo de la misma. Una vez obtenidos las diez diluciones, se sembr 0,1 ml con micropipeta utilizando tips estriles, por triplicado, de cada dilucin en caldo nutritivo. Posteriormente, los tubos sembrados fueron incubados en estufa de cultivo a 35 C durante una semana. Transcurrido el tiempo de incubacin se leyeron los resultados, tomndose como positivos los tubos con caldo nutritivo en los que hubo desarrollo, los cuales se ven turbios debido a la proliferacin de microorganismos. Se tom nota, para cada dilucin, del nmero de tubos positivos y se obtuvo un nmero caracterstico representado por tres cifras. La primera cifra fue la correspondiente al nivel de dilucin menos concentrado en el que hubo mayor cantidad de tubos positivos, y la segunda y tercer cifra, correspondieron a los niveles de dilucin consecutivos al primer nivel. Una vez obtenido el nmero caracterstico, se lo busc en la Tabla de Mc Crady (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992), donde se establece el Nmero Ms Probable (NMP) de microorganismos presentes en la muestra, calculado mediante un mtodo estadstico para cada combinacin posible de tubos. Al nmero obtenido de esta tabla se lo multiplic por la inversa de la menor dilucin en la que se hallaron tres tubos positivos, o sea, correspondiente a la dilucin de la primera cifra del nmero caracterstico.
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Los resultados se expresaron como NMP de microorganismos mesfilos hetertrofos aerobios totales por ml de muestra (NMP/ml). 2.4.3. RECUENTO DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y FECALES Para realizar el recuento de las bacterias coliformes se sigui el siguiente esquema de trabajo (Figura N 23):
Muestra de Agua

Incubar los tubos de fermentacin con caldo Mac Conkey 35 0,5 C durante 24 hs.

PRUEBA PRESUNTIVA

Tubo (+)

Tubo (-)

Tubo (+) a las 48 hs

Tubo (-) a las 48 hs

Reincubar 24 hs

Ausencia de Coliformes

Incubacin en BRILA a 35 C durante 24 hs

Incubacin en EC a 44,5 C durante 24 hs

PRUEBA CONFIRMATORIA

Gas (+) a las 24 hs

Gas (-) a las 24 hs

Gas (+) a las 24 hs

Gas (-) a las 24 hs

Reincubar 24 hs

Gas (+) a las 48 hs

Gas (-) a las 48 hs

Presencia de Coliformes Totales

Ausencia de Coliformes Totales

Presencia de Coliformes Fecales

Ausencia de Coliformes Fecales

Tubos (+): presentan acidez y gas en 24-48 hs.

Figura N 23: Esquema de trabajo para el recuento de coliformes totales y fecales.

Fuente: Ctedra de Microbiologa Ambiental, 2.003.

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Para determinar el nmero de bacterias coliformes totales y fecales se utiliz la Tcnica de Fermentacin en Tubos Mltiples (a travs de las Pruebas Presuntiva y Confirmatoria), en la cual los resultados se expresan en trminos de NMP de microorganismos existentes. Este nmero, basado en determinadas frmulas de probabilidad, es un clculo de la densidad media de coliformes en la muestra (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Para obtener este nmero, se tom nota, para cada concentracin de la muestra (10, 1 y 0,1 ml) sembrada por triplicado, del nmero de tubos positivos en la Prueba Confirmatoria, y se obtuvo un nmero caracterstico representado por tres cifras. La primera cifra correspondi al nmero de tubos positivos de mayor concentracin de muestra, o sea 10 ml, la segunda correspondi al nmero de tubos positivos conteniendo 1 ml de muestra y la tercera cifra correspondi al nmero de tubos positivos conteniendo 0,1 ml de muestra. Una vez obtenido el nmero caracterstico se ingres a la tabla del ndice de NMP, para distintas combinaciones de resultados positivos, cuando se utilizan 3 tubos por dilucin (10 ml, 1 ml y 0,1 ml) (APHA, 1.967) y se expres el resultado como NMP de bacterias/100 ml de muestra. 2.4.3.1. Prueba Presuntiva

A partir de cada muestra de agua se tomaron 0,1 ml y 1 ml y se sembraron por triplicado en tubos conteniendo 10 ml de caldo Mac Conkey estril de simple concentracin, y 10 ml de muestra se sembraron por triplicado en tubos conteniendo 10 ml de Caldo Mac Conkey de doble concentracin. Todos los tubos posean dentro una campana de Durham invertida. Los tubos sembrados fueron incubados en estufa a 35 C durante 24 a 48 hs. Luego de la incubacin se registraron los tubos positivos, siendo stos aquellos que presentaban gas en la campana de Durham y un viraje de color del medio de cultivo, de violeta a amarillo, debido ste a la produccin de acidez. Ambas reacciones dadas aparecieron como consecuencia de un presunto desarrollo de bacterias que fermentan la lactosa. Debido a que existen bacterias Gram positivas que son capaces de producir igual reaccin, el resultado debi confirmarse, realizndose una Prueba Confirmatoria para coliformes totales y otra para coliformes fecales. 2.4.3.2. Prueba Confirmatoria

A la Prueba Confirmatoria se llevaron todos los tubos positivos de la Prueba Presuntiva en los que apareci gas y/o crecimiento cido dentro de las 2448 hs de incubacin. a) Recuento de bacterias coliformes totales En esta fase se confirm la presencia o ausencia de bacterias coliformes totales en las muestras de agua, mediante el cultivo en Caldo Lactosa Verde
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Brillante Bilis (BRILA) en tubos de ensayo, cada uno conteniendo una campana de Durham invertida. Para esto se inocul con ansa una porcin de los tubos positivos de la Prueba Presuntiva en tubos con caldo BRILA. Luego, se incubaron en estufa de cultivo durante 48 hs a 35 C, tomndose una lectura a las 24 hs y otra a las 48 hs. El criterio de positividad adoptado fue la formacin de gas en la campana de Durham, pudiendo tambin haber turbidez una vez transcurrido el tiempo de incubacin. El resultado se expres, segn lo explicado previamente, como NMP de coliformes totales/100 ml de muestra. b) Recuento de bacterias coliformes fecales En esta etapa se confirm la presencia de bacterias coliformes fecales en las muestras de agua, mediante el cultivo en Caldo EC en tubos de ensayo, cada uno conteniendo una campana de Durham invertida. El caldo EC, permite diferenciar entre los coliformes de origen fecal (provenientes del intestino de los animales de sangre caliente) y los procedentes de otras fuentes (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Se inocul con ansa una porcin de los tubos positivos de la Prueba Presuntiva en tubos con caldo EC, e inmediatamente los tubos sembrados se colocaron en un bao de agua termostatizado a 44,5 C durante 24 hs. Una vez transcurrido el tiempo de incubacin se registraron los tubos positivos como aquellos en donde hubo produccin de gas, pudiendo existir tambin turbidez. El resultado se expres, segn lo explicado previamente, como NMP de coliformes fecales/100 ml de muestra. El punto de corte para el recuento de coliformes fecales en aguas dulces recreacionales, que se tom para este trabajo, fue el de 200 NMP/100 ml, recomendado por las Guas Canadienses de Calidad de Agua Recreacional (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality, 1.992), y adoptado por el Municipio de Neuqun segn la Ordenanza N 8.320/98. 2.4.4. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN A partir de los tubos positivos confirmados, se realiz un aislamiento en agar EMB en placas de Petri, sembrando por estriacin, por cada tubo de Caldo BRILA y de Caldo EC que produjo gas. Las placas se incubaron en forma invertida en estufa a 35 C durante 24 hs. A partir de stas, se obtuvieron colonias tpicas (rosas a rojo oscuras con un brillo metlico superficial) y atpicas (rosas, rojas, blancas o incoloras sin brillo).

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A continuacin, a partir de las colonias aisladas, se sembr cada colonia en un tubo de ensayo con agar nutritivo, se incub a 35 C durante 24 hs y se guard la cepa aislada en la heladera. A cada cepa se le realiz una Tincin de Gram para observar las bacterias al microscopio y verificar que fueran bacilos gramnegativos, segn corresponde a la definicin de coliforme. Posteriormente, a cada cepa aislada, se le realizaron pruebas bioqumicas (Ver Anexo II) para identificar gnero y especie, y una prueba de susceptibilidad a antimicrobianos (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992; Mac Faddin, 1.980). Las pruebas bioqumicas empleadas fueron las siguientes: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) Prueba del cido Sulfhdrico (SH2). Prueba del Indol. Prueba de la Motilidad. Prueba del Citrato. Prueba con Agar Hierro Triple Azcar (T.S.I.). Prueba de la Decarboxilasa Lisina. Prueba de Rojo de Metilo. Prueba de Voges-Proskauer. Prueba de la Oxidasa. Sensibilidad a Colistina. Sensibilidad a Cefoxitina.

2.4.5. DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS DE LAS BACTERIAS AISLADAS A las bacterias aisladas e identificadas se les evalu la sensibilidad a diversos antimicrobianos, mediante el Mtodo de Difusin de Agar (CLSI, 2.006). Para realizar esta prueba, se sigui el mtodo estandarizado recomendado por el CLSI, que se basa en el mtodo originalmente descripto por Bauer y Kirby et. al. (1.966). Se emplearon caldo y agar Meller-Hinton, hisopos estriles de algodn, pinza metlica estril y una solucin testigo de turbidez 0,5 de la escala de Mc Farland. De acuerdo con dicho mtodo se prepar un inculo de la cepa aislada, tomando entre 3 a 5 colonias del cultivo original con un ansa e introducindolas en 5 ml de Caldo Meller-Hinton hasta alcanzar una turbidez similar a la del testigo 0,5 de Mac Farland. La suspensin bacteriana obtenida fue absorbida con un hisopo estril de algodn, con el cual luego se inocularon las placas de Petri de vidrio conteniendo agar Meller-Hinton, aplicando el hisopo sobre la superficie del agar, efectuando estras en direcciones diferentes. Las placas se prepararon con 25 a 30 ml de agar Meller-Hinton de modo de obtener una capa de 4 mm de alto.

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A continuacin, se aplicaron los discos impregnados con antimicrobianos sobre la superficie del agar por medio de una pinza estril. Para lograr que los discos hicieran buen contacto con la superficie del agar se ejerci con la pinza una ligera presin sobre los mismos. Los antimicrobianos ensayados para cada cepa son: Cefalotina, Cefotaxima, Ceftacidima, Cefepime, Amipicilina+Sulbactama, Piperacilina+Tazobactama, Imipenem, Meropenem, Gentamicina, Amicacina, Trimetoprima+Sulfametoxasol y Ciprofloxacina. Posteriormente, las placas se incubaron invertidas en la estufa a 35 C durante 18 hs aproximadamente. Concluida la incubacin, se procedi a la medicin de los halos de inhibicin en cada placa para cada antimicrobiano empleando una regla milimetrada. Conocidos los dimetros de inhibicin para cada antimicrobiano, pudo determinarse si la bacteria es Sensible (S), de Sensibilidad Intermedia (I) o Resistente (R), de acuerdo a la tabla (Tabla N 1) publicada por CLSI (2.006).
Tabla N 1: Agentes antimicrobianos y dimetros de inhibicin.

Agente Antimicrobiano Cefalotina (CEF) Cefotaxima (CTX) Ceftacidima (CAZ) Cefepime (FEP) Amipicilina Sulbactama (AMS) Piperacilina Tazobactama (TAZ) Imipenem (IMP) Meropenem (MEM) Gentamicina (GEN) Amicacina (AKN) Trimetoprima Sulfametoxasol (TMS) Ciprofloxacina (CIP)

Dimetro de la zona de inhibicin (mm) R* () 14 14 14 14 11 17 13 13 12 14 10 15 I* 15 a 17 15 a 22 15 a 17 15 a 17 12 a 14 18 a 20 14 a 15 14 a15 13 a 14 15 a 16 11 a 15 16 a 20 S* () 18 23 18 18 15 21 16 16 15 17 16 21

*: R: Resistente, I: Intermedio, S: Sensible.

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3.1. RELEVAMIENTO DE DATOS CLIMTICOS
Las distintas condiciones climticas presentes en cada da de muestreo se presentan en la Tabla N 2.
Tabla N 2: Condiciones climticas durante los muestreos.
MUESTREOS CONDICIONES CLIMTICAS Mnima Mxima Velocidad (km/h) Direccin Nubosidad Visibilidad (km) Humedad relativa (%) Presin atmosfrica (hPa) 1 13-Feb Temperatura (C) Vientos 17 33 9 N Despejado 20 39 986 2 20-Feb 20 35 5 NE Variable 10 92 979,4 3 23-Feb 10 17 9 E Variable 10 81 991,8 4 27-Feb 9* 23* 9 SE Parcialmente nublado 20 50 981,7 5 02-Mar 11 22 5 O Algo nublado 20 42 984,6

Fuente: Servicio Meteorolgico Nacional y * Diario Ro Negro

3.2. ANLISIS DE LAS MUESTRAS

3.2.1. ANLISIS FSICO-QUMICO Los resultados de los anlisis fsico-qumicos se detallan en la Tabla N 3 a continuacin. A su vez, en las Tablas N 4 y 5 se presentan los valores fsico-qumicos de referencia sugeridos por diversos organismos.

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Tabla N 3: Anlisis fsico-qumico del agua del ro Limay en los balnearios Gatica, Ro
Grande y Municipal.

PARMETRO Color Olor Turbiedad Conductividad pH Slidos Disueltos Totales Dureza Total (en CaCO3) Cloruros (en Cl) Sulfatos (en SO4) Nitratos (en NO3) Nitritos (en NO2) Amonio Calcio Magnesio Sodio Arsnico Flor

MTODO

Conductimtrico Potenciomtrico Electroanaltico Titulomtrico Titulomtrico EFM Colorimtrico EFM EFM Colorimtrico Colorimtrico Fotometra llama Colormetrico EFM

VALOR OBTENIDO Gatica Ro Grande Municipal Incolora Incolora Incolora Inodora Inodora Inodora No presenta No presenta No presenta 70 uS/cm 70 uS/cm 90 uS/cm 7 7 6,8 50 mg/l 50 mg/l 60 mg/l 29 mg/l 28 mg/l 29 mg/l 2 mg/l 2 mg/l 2 mg/l 6 mg/l 6 mg/l 10 mg/l < 2,5 mg/l < 2,5 mg/l < 2,5 mg/l 0,02 mg/l no contiene no contiene < 0,02 mg/l < 0,02 mg/l < 0,02 mg/l 8 mg/l 8 mg/l 8 mg/l 2,2 mg/l 1,9 mg/l 2,2 mg/l 5 mg/l 6 mg/l 9 mg/l < 0,05 mg/l < 0,05 mg/l < 0,05 mg/l < 0,1 mg/l < 0,1 mg/l < 0,1 mg/l

Tabla N 4: Valores de referencia para las caractersticas fsicas del agua.

PARMETROS FSICOS VALOR DE REFERENCIA Turbiedad Color Olor 50 UNT (1) No establecido (1) Sin olores extraos (2)

Fuente: (1): Guas Canadienses para el agua recreacional, 1.992. (2): Cdigo Alimentario Argentino. Captulo XII - Bebidas Hdricas, Agua y Agua Gasificada. Agua Potable - Art. 982 (Res. MS y AS n 494 del 7/7/94). "Agua potable de Suministro Pblico" y "Agua Potable de Uso Domiciliario".

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Tabla N 5: Valores de referencia para las caractersticas qumicas del agua.

PARMETRO
pH Slidos Disueltos Totales Dureza Total (CaCO3) Cloruro Sulfatos Nitratos Nitritos Amonio Arsnico Flor

MTODO
Potenciomtrico

VALOR DE REFERENCIA
6,5 - 8,5 (1, 2) Mx. 1.500 mg/l (2) Mx. 400 mg/l (2) Mx. 350 mg/l (2) Mx. 400 mg/l (2) Mx. 45 mg/l (2) Mx. 0,10 mg/l (2) Mx. 0,2 mg/l (2) Mx. 0,05 mg/l (2) 0,6 - 1,7 mg/l (2) *

Caractersticas Qumicas Sustancias Inorgnicas

Electroanaltico Titulomtrico Titulomtrico Espectrofotomtrico Colorimtrico Espectrofotomtrico Espectrofotomtrico Colorimtrico Espectrofotomtrico

Fuente: (1): Guas Canadienses para el agua recreacional, 1.992. (2): Cdigo Alimentario Argentino, 1.994. (3): Obras Sanitarias de la Nacin Argentina. * La cantidad mxima se da en funcin de la temperatura promedio de la zona, teniendo en cuenta el consumo diario del agua de bebida.

La temperatura ambiente y del agua del ro Limay registrada en cada muestreo se presenta en la Figura N 24 siguiente.
Temperatura del Agua del Ro Limay vs. Temperatura Ambiente

25
Temperatura del agua (C)

20 15 10 5 0 33 35 17 23 22
Tem peratura am biente (C) en los m uestreos 1 a 5 Gatica Ro Grande Municipal

Figura N 24: Temperatura ambiente y del agua del ro Limay durante los muestreos.

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3.2.2.

RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESFILOS HETERTROFOS AEROBIOS TOTALES El recuento de las bacterias hetertrofas totales mesfilas aerobias se presenta en la Tabla N 6.
Tabla N 6: Recuento de las bacterias hetertrofas totales mesfilas aerobias.

Balneario

Muestreo

Gatica

Ro Grande

Municipal

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

Bacterias Hetertrofas Totales Mesfilas Aerobias Tcnica del Nmero Recuento Ms en placa Probable (UFC/ml) (NMP/ml) 2 2 2,50 x 10 4,72 x 10 3 3 1,50 x 10 1,54 x 10 2 2 2,50 x 10 7,50 x 10 2 2 2,50 x 10 3,00 x 10 2 1 4,50 x 10 4,00 x 10 2 1 2,50 x 10 3,83 x 10 2 1 7,50 x 10 4,3 x 10 3 3 2,50 x 10 1,04 x 10 2 1 9,50 x 10 4,00 x 10 2 1 2,00 x 10 3,90 x 10 2 1 2,50 x 10 1,77 x 10 3 2 4,50 x 10 1,50 x 10 3 4 4,50 x 10 > 3,00 x 10 2 2 4,50 x 10 1,86 x 10 2 1 9,5 x 10 7,10 x 10

3.2.2.1. RECUENTO DE HETERTROFOS EN PLACA En la Figura N 25 se observa la distribucin de los microorganismos hetertrofos totales mesfilos aerobios segn el Recuento en Placa, a lo largo de los cinco muestreos.

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3500 3000 2500 UFC/ml 2000 1500 1000 500 0 1 2 3 4 5 Muestreos Gatica Ro Grande Municipal

Figura N 25: Distribucin temporal de los microorganismos hetertrofos totales mesfilos

aerobios segn el recuento en placa.

En las Figuras N 26 y 27 que aparecen a continuacin se observan las placas de Petri conteniendo las colonias de microorganismos hetertrofos totales mesfilos aerobios.

Figura N 26: Recuento en placa, agar en superficie, Balneario Gatica.

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Figura N 27: Recuento en placa, agar en superficie, del Balneario Ro Grande, donde el
recuento sobrepas las 300 colonias y debieron realizarse diluciones.

3.2.2.2. TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP) En la Figura N 28 se aprecia la distribucin, a lo largo de los cinco muestreos, de los microorganismos hetertrofos totales mesfilos aerobios segn la Tcnica del Nmero Ms Probable.
100000

10000

NMP/ml

1000

Gatica Ro Grande Municipal

100

10

1 1 2 3 4 5 Muestreos

Figura N 28: Distribucin temporal de los microorganismos hetertrofos totales mesfilos

aerobios segn la tcnica del Nmero Ms Probable.

En la Figura N 29 que se observa a continuacin se pueden apreciar las series de tubos de ensayo empleados para realizar el recuento de microorganismos hetertrofos totales mesfilos aerobios, segn la tcnica del Nmero Ms Probable.

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Figura N 29: Material utilizado para el recuento de bacterias hetertrofas totales mesfilas
aerobias. Tcnica del NMP.

3.2.3.

RECUENTO DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y FECALES En la Tabla N 7 se presentan los valores obtenidos para el recuento de las bacterias coliformes totales y fecales.
Tabla N 7: Recuento de las bacterias coliformes.

Balneario

Muestreo 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

Bacterias Coliformes Totales Fecales (NMP/100 ml) (NMP/100 ml) 3 3 1,1 x 10 1,1 x 10 2 9 2,4 x 10 4,6 x 10 3 1,1 x 10 2 4,6 x 10 1 2,9 x 10 3 1,1 x 10 2 4,6 x 10 2 4,6 x 10 1 9,3 x 10 1 2,1 x 10 3 1,1 x 10 3 > 1,1 x 10 3 > 1,1 x 10 3 > 1,1 x 10
2

Gatica

7,5 x 10 1 9,3 x 10 1 4,3 x 10 <3 2,1 x 10 2 2,4 x 10 1 4,3 x 10 1 4,3 x 10 1 1,5 x 10 2 4,6 x 10 3 > 1,1 x 10 3 > 1,1 x 10 1 4,3 x 10
1

Ro Grande

Municipal

a) Recuento de Bacterias Coliformes Totales En la Figura N 30 se aprecia la distribucin a lo largo de los cinco muestreos, de las bacterias coliformes totales.

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RESULTADOS

1200 1000 800 NMP/100 ml Gatica 600 400 200 0 1 2 3 4 5 Muestreos Ro Grande Municipal

Figura N 30: Distribucin temporal de las bacterias coliformes totales.

A continuacin se presenta parte de los materiales utilizados para llevar a cabo la Prueba Presuntiva de la colimetra. Como se observa en la Figura N 31 los tubos contienen caldo Mac Conkey, sembrado e incubado, en los cuales el color amarillo y el gas en la campana de Durham, que no se puede apreciar en este caso, indican presencia de presuntos coliformes, mientras que los tubos con caldo violeta y ausencia de gas en la mencionada campana, indican inexistencia de dichas bacterias.

Figura N 31: Prueba Presuntiva, caldo Mac Conkey.

La Figura N 32 presenta una serie de tubos con caldo BRILA, empleados en la Prueba Confirmatoria de coliformes totales.

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RESULTADOS

Figura N 32: Prueba Confirmatoria, caldo BRILA.

b) Recuento de Bacterias Coliformes Fecales En la Figura N 33 se aprecia la distribucin a lo largo de los cinco muestreos, de las bacterias coliformes fecales.

1200 1000 800 NMP/100 ml Gatica 600 400 200 0 1 2 3 4 5 Muestreos

Valor de corte

Ro Grande Municipal

Figura N 33: Distribucin temporal de las bacterias coliformes fecales.

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RESULTADOS

Se calcularon las medias geomtricas de los recuentos microbiolgicos, las cuales se observan en la Tabla N 8 a continuacin.
Tabla N 8: Media geomtrica de los recuentos bacteriolgicos.
Bacterias Hetertrofas Totales Mesfilas Aerobias Bacterias Coliformes

____________________________
Balnearios Gatica Ro Grande Municipal Recuento en placa (UFC/ml) 5,8 x 102 4,85 x 102 6,38 x 102 Tcnica del NMP (NMP/ml) 2,54 x 102 9,8 x 101 4,65 x 102

__________________
Totales Fecales (NMP/100 ml) 5,72 x 102 2,29 x 102 4,98 x 102 7,8 x 101 3,1 x 101 2,05 x 102

En la Figura N 34 se observan tubos con caldo EC previamente sembrado e incubado, para detectar la presencia de bacterias coliformes fecales.

Figura N 34: Prueba Confirmatoria, caldo EC.

3.2.4.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN A continuacin, en las Figuras N 35 y 36, se observan las cepas bacterianas aisladas en agar EMB, las cuales presentan distintos colores y caractersticas apreciables a simple vista.

Figura N 35: Reaislamiento en agar EMB.

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Figura N 36: Colonias verdes brillantes (izq.) y colonias mucoides (der.).

Para realizar la identificacin de las cepas bacterianas aisladas se utilizaron pruebas bioqumicas, como las que se muestran en la Figura N 37 , las cuales no estn inoculadas y en la Figura N 38, en la que hay pruebas, inoculadas e incubadas, positivas y negativas.

Figura N 37: Pruebas bioqumicas sin inocular.

Figura N 38: Pruebas bioqumicas incubadas.

Las bacterias identificadas en los balnearios en estudio se presentan en la Tabla N 9.

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RESULTADOS

Tabla N 9: Identificacin de las bacterias aisladas.

MUESTREOS 1

BALNEARIOS Gatica Escherichia coli Klebsiella sp. Serratia sp. Ro Grande Municipal Escherichia coli

2 Enterobacter sp. Enterobacter sp. 3 Escherichia coli Klebsiella sp. Pseudomonas sp. Serratia sp. Klebsiella sp. Escherichia coli

Klebsiella sp. Pseudomonas sp. Serratia sp. Escherichia coli Enterobacter sp. Enterobacter sp. Enterobacter sp. Pseudomonas sp. Enterobacter sp. Klebsiella sp. Escherichia coli Klebsiella sp. Klebsiella sp. Serratia sp. Escherichia coli Escherichia coli Pseudomonas sp. Klebsiella sp.

En las Figuras N 39-42 se aprecian los distintos porcentajes de cada bacteria identificada en este trabajo, primero en conjunto para los tres balnearios estudiados y luego los valores para cada balneario en particular.
Distribucin porcentual del total de las bacterias identificadas

21%

25%

E. coli Klebsiella sp. Serratia sp. Enterobacter sp. Pseudomonas sp.

18% 13%

23%

Figura N 39: Distribucin porcentual del total de las bacterias halladas en los tres
balnearios estudiados.

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RESULTADOS

Distribucin porcentual de las bacterias identificadas en el balneario Gatica

17%

8%

25%

E. coli Klebsiella sp. Serratia sp. Enterobacter sp.

25%

25%

Pseudomonas sp.

Figura N 40: Distribucin porcentual de las bacterias halladas en el balneario Gatica.

Distribucin porcentual de las bacterias identificadas en el balneario Ro Grande

27%

9%

E. coli Klebsiella sp. Serratia sp.

18%

46%

Enterobacter sp.

Figura N 41: Distribucin porcentual de las bacterias identificadas en el balneario Ro

Grande.

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RESULTADOS

Distribucin porcentual de las bacterias identificadas en el balneario Municipal

43%

38%

E. coli Klebsiella sp. Enterobacter sp. Pseudomonas sp.

13%

6%

Figura N 42: Distribucin porcentual de las bacterias identificadas en el balneario

Municipal.

3.2.5.

DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS DE LAS BACTERIAS AISLADAS La susceptibilidad a distintos antimicrobianos de las bacterias identificadas se presenta en la Tabla N 10 a continuacin. Mientras que los porcentajes de la resistencia de las bacterias a antimicrobianos se observan en la Tabla N 11.

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RESULTADOS

Tabla N 10: Susceptibilidad a antimicrobianos de las bacterias identificadas.

ANTIMICROBIANOS Trimetoprima Sulfametoxazol

BALNEARIO MUESTREO

BACTERIAS Ceftacidima Cefotaxima

Piperacilina Tazobactama

Amipicilina Sulbactama

1 2 Gatica 3 4 5

Ro Grande

3 4 5 1 2

3 Municipal 4

Referencias

Escherichia coli Klebsiella sp. Serratia sp. Serratia sp. Enterobacter sp. Escherichia coli Enterobacter sp. Klebsiella sp. Serratia sp. Pseudomonas sp. Escherichia coli Klebsiella sp. Escherichia coli Klebsiella sp. Serratia sp. Enterobacter sp. Klebsiella sp. Enterobacter sp. Enterobacter sp. Klebsiella sp. Klebsiella sp. Klebsiella sp. Serratia sp. Escherichia coli Escherichia coli Enterobacter sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Escherichia coli Enterobacter sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Klebsiella sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Sensible Medianamente sensible Resistente

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Ciprofloxacina

Gentamicina

Meropenem

Amicacina

Cefalotina

Imipenem

Cefepime

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RESULTADOS

Tabla N 11: Resistencia de las especies bacterianas a los antimicrobianos ensayados.

RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS (%) MEM AMS GEN AKN TMS 10 11 29 63 CAZ CEF CTX FEP TAZ IMP CIP 14 BACTERIAS Escherichia coli Klebsiella sp. Serratia sp. Enterobacter sp. Pseudomonas sp.

10 11 20 57 100

11 29 63

13

30 11 40 57 100

22 20 13

13

10 -

Referencias: CEF: Cefalotina; CTX: Cefotaxima; CAZ: Ceftacidima; FEP: Cefepime; AMS: Amipicilina sulbactama; TAZ: Piperacilina tazobactama; IMP: Imipenem; MEM: Meropenem; GEN: Gentamicina; AKN: Amicacina; TMS: Trimetoprima sulfametoxasol; CIP:Ciprofloxacina. Nota: Para el clculo de los porcentajes de resistencia a antimicrobianos para cada especie bacteriana, se tomaron cepas resistentes y con sensibilidad intermedia.

En la Figura N 43 se observan placas de Petri conteniendo agar MellerHinton y discos de antimicrobianos, utilizados para realizar los antibiogramas de las bacterias identificadas.

Figura N 43: Antibiogramas.

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El anlisis de los datos clmticos mostr que la temperatura ambiente en los muestreos 1 y 2 tuvo una mxima de 33 y 35 C respectivamente, en el muestreo 3 se registraron los valores ms bajos y en los muestreos 4 y 5, la mxima alcanz 23 C y 22 C respectivamente. La temperatura del ro Limay en cada muestreo fue prcticamente la misma en los tres balnearios en estudio, con valores comprendidos entre 17 C (muestreo 4) y 23 C (muestreos 1 y 2). En todos los casos la temperatura del agua fue directamente proporcional a la temperatura ambiente. La velocidad del viento fue muy baja en los cinco muestreos y su direccin, variable. El uso del agua del ro Limay en los balnearios estudiados tiene como fin la recreacin. Desde el punto de vista fsico-qumico, los parmetros analizados no sobrepasaron los valores de referencia establecidos para el agua potable de suministro pblico y de uso domiciliario en el Cdigo Alimentario Argentino (Cdigo Alimentario Argentino, 1994). Considerando que la ingesta de agua de uso recreacional es mnima y ocasional, los valores permitidos no necesitan ser tan estrictos. Por esta razn puede afirmarse que las caractersticas fisico-qumicas del agua de los tres balnearios son muy buenas. El agua del ro Limay se caracteriza por tener muy bajo contenido de sales (bajo contenido de slidos disueltos totales), de cationes bivalentes (baja dureza) y de materia orgnica (bajo contenido de nitratos). Adems, no contiene metales pesados por encima de los puntos de corte para agua potable de consumo humano. El anlisis bateriolgico mostr que el recuento en placa de mesfilos hetertrofos aerobios totales a lo largo de los cinco muestreos de agua en los tres balnearios en estudio, oscil entre 1,77 x 102 y ms de 3,00 x 103 UFC/ml de agua. No existen lmites regulatorios nacionales para este parmetro en aguas de uso recreacional. El muestreo con el recuento bacteriano ms sobresaliente fue el 3 en el balneario Municipal (ms de 3,00 x 103 UFC/ml). Esto se debe en parte a que el da anterior a este muestreo llovi, por lo tanto, la Municipalidad de Neuqun abri la compuerta del arroyo Durn, ubicada a pocos metros de donde comienza dicho balneario, para que descargara su alto caudal en las aguas del ro Limay en el mencionado balneario. La compuerta se mantuvo abierta hasta el 28 de Febrero del 2.006 (Municipalidad de Neuqun, 17/5/2.006), siendo sta una de las razones para mantener el balneario inhabilitado hasta el 26 de Febrero del 2.006, reanudndose la actividad balnearia el da 27 de Febrero (Municipalidad de Neuqun, 20/2/2.006, 24/2/2.006, 27/2/2.006). A este recuento mximo, le sigui el muestreo 2, con valores similares entre los balnearios Gatica y Municipal. En los muestreos 1, 4 y 5, el recuento no alcanz valores muy altos, y stos no difirieron entre los balnearios en forma notable. An as, los recuentos mximos en cada uno de estos muestreos correspondieron al balneario

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Gatica en el muestreo 1, al balneario Ro Grande en el muestreo 4 y al balneario Municipal en el muestreo 5. La cantidad de bacterias halladas durante todo el estudio, utilizando la Tcnica del NMP, vari entre 2,00 x 10 y 4,5 x 104 NMP de bacterias/ml de agua. Aqu sobresali el muestreo 3 en el balneario Municipal, al igual que al utilizar la tcnica del Recuento en Placa, alcanzando un valor (4,50 x 104 NMP/ml) que sobrepas notablemente a los dems muestreos. Esto se debe en gran parte a lo mencionado anteriormente con respecto al arroyo Durn, es decir que el da anterior al muestreo llovi y por este motivo la Municipalidad abri su compuerta para que el caudal incrementado producto de las precipitaciones, no desbordara. En el muestreo 1 y 2 el recuento ms alto se obtuvo en el balneario Gatica, mientras que en los muestreos 4 y 5 sobresali el balneario Municipal. Al igual que para el recuento en placa no existen lmites regulatorios nacionales para este parmetro en aguas de uso recreacional. Los valores del recuento de coliformes totales a lo largo del estudio variaron entre 2,10 x 10 y ms de 1,10 x 103 NMP/100 ml de agua. No existen lmites regulatorios nacionales para este parmetro en aguas de uso recreacional. Los valores gua que utilizan otros pases oscilan entre 7 x 10 NMP/100 ml y 1 x 104 NMP /100ml (Ver Tabla N 15 Anexo V). A lo largo de los muestreos, no se observ un solo valor mximo de coliformes totales, sino que distintos balnearios alcanzaron el mismo valor pico, 1,10 x 103 NMP/100 ml, en diferentes muestreos. Ms especficamente, en el muestreo 1 este valor se observ en el balneario Gatica. En el muestreo 2 se observ en los balnearios Ro Grande y Municipal. En el muestreo 3 sobresali el balneario Municipal, con un valor mayor a 1,10 x 103 NMP/100 ml. En el muestreo 4, dos fueron los balnearios, Gatica y Municipal, que presentaron el mencionado valor mximo, siendo para Gatica mayor a 1,10 x 103 NMP/100 ml. Por ltimo, en el muestreo 5 sobresali el recuento en el balneario Municipal, con un valor mayor a 1,10 x 103 NMP/100 ml. O sea que el balneario Municipal alcanz el valor pico de 1,10 x 103 NMP/100 ml o mayor a ste, en todos los muestreos con excepcin del 1. Los recuentos de coliformes fecales ms significativos se hallaron en el balneario Gatica en el primer muestreo (1,10 x 103 NMP/100 ml de agua) y en el balneario Municipal en los muestreos 3 y 4, alcanzando en ambos casos un valor mayor a 1,10 x 103 NMP/100 ml de agua. En el caso del balneario Municipal, estos valores se deben en parte, al aporte del arroyo Durn entre los das 22 y 27 de Febrero del 2.006, durante los cuales se mantuvo abierta la compuerta que permite su descarga en este balneario cuando el caudal se ve incrementado, en esta ocasin debido a la lluvia del da 22 de Febrero. Cabe mencionar que los muestreos 3 y 4 se realizaron el 23 y 27 de Febrero, respectivamente. Como se mencion previamente, el arroyo Durn se encuentra altamente contaminado con efluentes cloacales

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(Cuadros, 2.005, Municipalidad de Neuqun, 7/2/2.002). En el muestreo 2 el valor ms alto de coliformes fecales se observ en el balneario Municipal, al igual que en los muestreos 3 y 4. Mientras que en el muestreo 5 los valores de coliformes fecales fueron los mismos para los tres balnearios. El valor gua de coliformes fecales para aguas de uso recreacional que adoptan distintos organismos nacionales, debido a que no existen valores gua nacionales, es el citado en las normas canadienses de calidad de agua recreacional (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality; 1.992). Al calcular la media geomtrica, se detect que el balneario Municipal present el valor ms alto de coliformes fecales a lo largo del perodo estudiado. Adems, dicho valor sobrepas levemente el lmite sugerido por distintos organismos para coliformes fecales en aguas recreacionales, que es de 200 NMP/100 ml de agua, siempre considerando la media geomtrica de como mnimo cinco muestras en un perodo no mayor a los 30 das (Federal-Provincial Working Group on Recreational Water Quality; 1.992). Sin embargo, en cada uno de los tres balnearios estudiados, en al menos uno de los muestreos, se detectaron valores superiores a la media (2,00 x 102 NMP/100ml). En el balneario Gatica este valor fue sobrepasado notablemente (1,10 x 103 NMP/100 ml) en los muestreos 1 y 2, mientras que en el balneario Ro Grande dicho valor fue superado en el muestreo 3 (2,40 x 102). La media geomtrica de los coliformes fecales obtenida para cada balneario en el mes de Febrero, fue superior en los tres casos a la media geomtrica de E. coli obtenida por la AIC para el mes de Diciembre del 2.005 (Ver Tabla N 16, Anexo VI) con la que el organismo determin la aptitud de los balnearios para la temporada estival 2.005-2.006. Es por esto que puede afirmarse que la cantidad de bacterias es muy variable en intervalos de tiempo reducidos, ya que las mismas dependen de las condiciones del clima, del ro, y del incremento en la afluencia de gente que nada en sus aguas. Los organismos se denominan utilizando una clasificacin taxonmica jerrquica, en la que el orden de mayor a menor es: Reino, Filum (o divisin), Subfilum (o subdivisin), Clase, Orden, Familia, Gnero y Especie. Los cinco reinos existentes, son: Prokaryotae o procariotes (antes llamados Monera), Protista o protistas, Fungi u hongos, Plantae o plantas y Animalia o animales. Las bacterias unicelulares pertenecen al reino de los Procariotes. Difieren de los dems organismos en que carecen de ncleo distintivo y otros organelos celulares (Curtis & Barnes, 1.993). Las bacterias aisladas ms frecuentemente del medio acutico son los bacilos gram-negativos, y de hecho, el 90 % de todos los aislamientos pertenecen a esta categora, incluyendo por lo general especies de Vibrio, Pseudomonas y Flavobacterium u organismos relacionados. Los ros y arroyos presentan por lo comn elevadas concentraciones de tipos gram-

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positivos, probablemente debido a los aportes del entorno terrestre pero, no obstante, predominan los gram-negativos (Grant & Long, 1.989). En este trabajo, se lograron identificar diversas bacterias presentes en el agua recreacional del ro Limay. En todos los casos se lleg hasta la clasificacin de gnero bacteriano, y en uno, E. coli, se logr adems determinar la especie. No se pudo identificar cada especie en los dems gneros, debido a que para eso se requieren gran cantidad de anlisis adicionales, los cuales demandan mucho tiempo, materiales y conocimientos bioqumicos y microbiolgicos especficos, que escapan a los objetivos de este estudio. Las bacterias que se identificaron son: E. coli, Enterobacter spp., Klebsiella spp., Serratia spp. y Pseudomonas spp. Las bacterias identificadas incluidas en el grupo de las coliformes son E. coli, Enterobacter spp., Klebsiella spp., y Serratia spp. Dentro de stas, las coliformes fecales utilizadas como indicadores de contaminacin de origen fecal, son: Escherichia coli, Enterobacter spp. y Klebsiella spp. Sin embargo, especies termotolerantes de Klebsiella tienen muchas fuentes. Han sido observadas en efluentes de pulpa y papel triturado, de plantas textiles, de plantas procesadoras de algodn, y en desechos de caa de azcar, en ausencia de contaminacin fecal (EPA, 1.986). En conjunto se considera a los coliformes como indicadores, ya que indican la existencia de heces humanas o animales. En las heces se pueden encontrar todo tipo de coliformes. Aunque E. coli se halla casi siempre en las contaminaciones recientes procedentes de animales de sangre caliente, tambin pueden hallarse otros coliformes en casos de contaminacin en los que E. coli no existe. Los gneros Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter y Escherichia suelen representar la mayor parte de los microorganismos aislados en aguas naturales, siendo Enterobacter el que se asla con mayor frecuencia (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Segn un estudio realizado, E. coli comprende cerca del 97 % de los organismos coliformes en heces humanas, Klebsiella spp. comprende 1,5 % y Enterobacter y Citrobacter spp. juntos comprenden otro 1,5 %. A su vez, se demostr que E. coli represent entre el 90 y el 100 % de todos los coliformes de heces de 8 especies de animales domsticos, incluyendo los pollos. Klebsiella spp. constituy una proporcin significativa de los coliformes solamente en heces de cabras (8 % del total de los coliformes) y cerdos (6,8 %) (Dufour, 1.977). En otro estudio se ha demostrado que los coliformes fecales representaron entre 93 y 99 % de los coliformes en heces de humanos, aves de corral, gatos, perros, y roedores (Geldreich, 1.970). El restante gnero identificado, Pseudomonas spp., no pertenece al grupo de los coliformes. Esto se debe a que por ejemplo, Pseudomonas, es oxidasa positiva y las bacterias coliformes son oxidasa negativas. Los bacilos oxidasa positivos, gramnegativos y no esporulados no son bacterias

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coliformes (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). En el total del estudio considerando a los tres balnearios, E. coli se identific en el porcentaje ms alto, el cual fue el 25 %. Sin embargo, al analizar por separado cada balneario, se puede afirmar que el gnero identificado con mayor frecuencia en el balneario Ro Grande, fue el de Klebsiella spp., que se identific en el 46 % de las cepas aisladas. Le sigui el balneario Municipal, en donde el gnero de mayor incidencia fue Pseudomonas spp., representando el 43 % de las cepas aisladas, y en menor medida, E. coli, con el 38 %. Mientras que en el balneario Gatica, la incidencia fue menor que en los otros dos balnearios, observndose que, tanto E. coli como Klebsiella spp. y Serratia spp., alcanzaron el mismo porcentaje mximo de incidencia, 25 %. Sin embargo, en este balneario la diversidad de los gneros bacterianos fue mayor, hallndose 5 gneros distintos, cuando en cambio, en los restantes balnearios se encontraron 4 gneros diferentes, los cuales fueron los mismos que aparecieron en el Balneario Gatica. En cuanto a la susceptibilidad a los antimicrobianos utilizados, puede concluirse que la resistencia a los antimicrobianos -lactmicos para E. coli fue: 30 % a Amipicilina Sulbactama y 10 % a Cefalotina. No hubo cepas resistentes a otros -lactmicos. La resistencia a Trimetoprima Sulfametoxasol fue 10 % y la resistencia a Amicacina fue 10 %. No se hallaron cepas resistentes a las otras drogas ensayadas. En las cepas de Klebsiella la resistencia hallada fue: 22% a Piperacilina Tazobactama, 11 % a Cefalotina, 11 % a Amipicilina Sulbactama, 11 % a Cefotaxima y 11 % a Trimetoprima Sulfametoxasol. No se hallaron cepas resistentes a las otras drogas ensayadas. Los gneros Enterobacter y Serratia presentaron resistencia natural a varios -lactmicos, entre ellos Cefalotina y Amipicilina Sulbactama. El 29 % de las especies de Enterobacter fueron resistentes a Trimetoprima Sulfametoxasol. Las bacterias del gnero Pseudomonas poseen resistencia natural a varios antimicrobianos por mltiples mecanismos. La resistencia hallada fue: 100 % a Cefalotina, 100 % a Amipicilina Sulbactama, 63 % a Cefotaxima y 63 % a Trimetoprima Sulfametoxasol. La mayora de las cepas bacterianas identificadas en los tres balnearios presentaron notable sensibilidad a los antimicrobianos ensayados. Debido a la menor presin selectiva a drogas antimicrobianas en hbitats naturales, los niveles de resistencia adquirida en estas cepas son notablemente inferiores a los hallados en cepas que habitualmente se encuentran en muestras clnicas. Los coliformes estn ampliamente distribuidos en la tierra, las plantas y el agua (Mandel et. al., 1.991), y forman parte de la flora intestinal normal de muchos animales incluido el ser humano. Si bien producen gran cantidad de enfermedades en el ser humano (30 al 35 % de las septicemias, ms del 70
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% de las infecciones del tracto urinario y muchas infecciones intestinales), se comportan como patgenos oportunistas (Murray et. al.). La mayora de las infecciones a causa de estas bacterias se originan por va endgena, es decir, a partir de la misma flora normal del individuo. A su vez, es importante la transmisin a travs de agua de bebida y alimentos. Para el agua de uso recreacional, los niveles gua de coliformes fecales son ms permisivos que para el agua de consumo humano. Las infecciones ms importantes son las que resultan de infecciones de heridas, las otitis externas o del nadador y las que resultan de la ingesta accidental de agua. Las bacterias estudiadas son indicadoras de contaminacin fecal, su hallazgo podra alertar sobre la probable presencia de patgenos estrictos como algunos de los ms importantes, Salmonella, Shigella, E. coli productoras de diarrea, Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Enterovirus, los cuales son mucho ms lbiles a las condiciones ambientales que las indicadoras. E. coli es la causa ms frecuente de algunas de las infecciones bacterianas ms comunes, incluyendo las infecciones del tracto urinario, la bacteriemia y la diarrea bacteriana de los viajeros. Tambin es una causa importante de meningitis neonatal y puede producir otras infecciones clnicas incluyendo neumona (Mandel et. al., 1.991). Las cepas de Enterobacter son patgenas oportunistas que rara vez producen enfermedad humana primaria. No obstante, son colonizadores frecuentes de los pacientes hospitalizados, en particular tratados con antibiticos, y se han asociado con infecciones de quemaduras, heridas, respiratorias y urinarias (Mandel et. al., 1.991). Este gnero afecta el tracto respiratorio inferior y el torrente sanguneo. La resistencia a antibiticos es un problema especialmente grave en las especies de Enterobacter (Murray et. al.). Como el gnero Enterobacter, el gnero Serratia es un oportunista reconocido como patgeno humano (Mandel et. al., 1.991). En cuanto al gnero Pseudomonas, si bien el Cdigo Alimentario Argentino exige para agua de consumo humano ausencia de Pseudomonas aeruginosa (especie ms habitual del gnero Pseudomonas) en 100 ml, no existen lmites regulatorios para aguas recreacionales. Las especies del gnero Pseudomonas son microorganismos ubicuos que se encuentran en la tierra, en la materia orgnica en descomposicin, en la vegetacin y en el agua. Se hallan tambin en el ambiente hospitalario en reservorios hmedos, como la comida, las flores de los jarrones, las pilas, los baos, los lavatorios, los respiradores y los equipos de dilisis, e incluso las soluciones desinfectantes. Es infrecuente que forme parte de forma persistente de la flora microbiana normal de los humanos, excepto en los pacientes hospitalizados y en los pacientes ambulatorios inmunodeprimidos (Murray et. al.).

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La amplia distribucin ambiental de Pseudomonas es posible por sus sencillos requerimientos de crecimiento. Son capaces de utilizar muchos compuestos orgnicos como fuentes de carbono y de nitrgeno, y algunas cepas crecen incluso en agua destilada usando los restos de los nutrientes. Las especies de Pseudosmonas poseen muchos factores estructurales, enzimas y toxinas que aumentan su virulencia a la vez que los hacen resistentes a los antibiticos que se usan con ms frecuencia. A pesar de su presencia ubicua, su capacidad de crecer en prcticamente cualquier ambiente, sus propiedades de virulencia y su resistencia a mltiples antibiticos, Pseudomonas no son patgenos muy frecuentes, ya que las infecciones que causan son fundamentalmente oportunistas (es decir, restringidas a los pacientes con compromiso de los mecanismos de defensa del husped) (Murray et. al.).

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CONCLUSIONES
A partir de los resultados obtenidos en el presente trabajo, puede concluirse que la calidad fsico-qumica del agua del ro Limay en los balnearios Gatica, Ro Grande y Municipal en el perodo estudiado fue muy buena, ya que no se sobrepasaron los valores propuestos en el Cdigo Alimentario Argentino para agua de consumo humano, considerando que el uso evaluado fue para recreacin. En cuanto a la calidad bacteriolgica, el balneario que obtuvo la mayor media geomtrica de bacterias hetertrofas totales mesfilas aerobias y de coliformes fecales, fue el balneario Municipal, sobrepasando levemente el valor lmite establecido para coliformes fecales de 200 NMP/100 ml. Esto se atribuye principalmente a que la compuerta para la descarga del arroyo Durn, a pocos metros de donde comienza dicho balneario, se mantuvo abierta durante los recuentos ms altos obtenidos, debido al aumento de su caudal producto de la lluvia, siendo dicho arroyo una fuente de contaminacin por su alta carga bacteriana. Las medias geomtricas de los balnearios Gatica y Ro Grande no sobrepasaron el valor gua para coliformes fecales, aunque s lo hicieron en muestreos individuales. Adems, las bacterias indicadoras de contaminacin fecal halladas podran generar un riesgo para la salud de los baistas, debido a que son patgenos oportunistas y a ellas se asocia la presencia de patgenos estrictos como algunos de los ms importantes: Salmonella, Shigella, E. coli productoras de diarrea, Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Enterovirus. Por lo tanto, puede confirmarse la hiptesis planteada inicialmente, o sea que el agua del ro Limay, en los balnearios Gatica, Ro Grande y Municipal de la ciudad de Neuqun, contiene bacterias indicadoras de contaminacin fecal viables durante todo el verano, de nmero notablemente variable en el transcurso del mismo, y resistentes a ciertos antimicrobianos.

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CONCLUSIONES

Recomendaciones:
Se sugiere a la autoridad de aplicacin realizar controles de la calidad bacteriolgica del agua de los balnearios del ro Limay, en forma peridica a lo largo de todo el verano para cada temporada estival, ya que la cantidad de bacterias vara constantemente. De esta forma se tendra una caracterizacin ms amplia del ro y se evaluara si los balnearios son aptos en los distintos meses del verano. Asimismo, es necesario identificar las especies bacterianas y otros patgenos que habitan en el ro, para llevar a cabo una vigilancia epidemiolgica del mismo, como as tambin, evaluar la susceptibilidad de dichos microorganismos a antimicrobianos para controlar su patrn de resistencia y determinar cundo haya riesgo para la salud de los baistas. Es recomendable realizar acciones que disminuyan la contaminacin del arroyo Durn, e interrumpir su descarga espordica en el Balneario Municipal, como a su vez su recorrido a cielo abierto por la Isla N 132, la cual tambin es un espacio recreativo; entubando los sectores ms conflictivos de dicho arroyo, entre otras acciones, que permitan un mejor manejo del recurso hdrico y recreacional en la ciudad de Neuqun. Debe considerarse adems, que debido al tamao de la poblacin es insuficiente la cantidad de espacios naturales de esparcimiento, por lo que sera apropiado habilitar nuevos balnearios a lo largo del ro Limay.

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BIBLIOGRAFA CITADA
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ANEXOS
ANEXO I: TEMPERATURA DEL AGUA EN CADA MUESTREO
Tabla N 12: Temperatura del agua en cada muestreo.

Muestreo 1 2 Gatica 3 4 5 1 2 Ro Grande 3 4 5 1 2 Municipal 3 4 5

Balneario

Fecha 13-Feb 20-Feb 23-Feb 27-Feb 02-Mar 13-Feb 20-Feb 23-Feb 27-Feb 02-Mar 13-Feb 20-Feb 23-Feb 27-Feb 02-Mar

Hora 16:25 16:55 14:00 13:48 14:00 17:00 17:10 14:15 14:03 14:10 17:15 17:25 14:35 14:15 14:25

T del agua (C) 23 23 19 17 19 23 23,5 19 17 19 22 23 18,5 17 19

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ANEXOS

ANEXO II: DESCRIPCIN DE LAS PRUEBAS BIOQUMICAS UTILIZADAS

El mtodo de preparacin para cada una de las pruebas bioqumicas fue el siguiente: 1) Se pes exactamente la cantidad calculada de acuerdo con las indicaciones del prospecto. 2) Se rehidrat con agua destilada. 3) Se calent suavemente hasta su disolucin. 4) Se coloc entre 4 y 5 ml aproximadamente, dependiendo de la prueba, en cada tubo pequeo de vidrio con tapa. 5) Se esteriliz en autoclave a 121 C, durante 15 minutos a 1 atm de presin. 6) En el caso de medios slidos se dej que stos solidifiquen: a) Agar SIM: solidifica en posicin vertical. b) Agar Citrato de Simmons: se dej enfriar en posicin inclinada, para formar un pico de flauta largo, con poca profundidad. c) Agar TSI: se dej enfriar en posicin inclinada, formando un pico de flauta con bastante profundidad. d) Agar Lisina: se dej enfriar en posicin inclinada, formando un pico de flauta con bastante profundidad. 7) Se conserv refrigerada entre 4 y 10 C hasta su utilizacin. 8) Se inocul con ansa estril, excepto en el caso del Agar SIM, para el cual se us una aguja estril. 9) Se incub en estufa a 35 C durante 24 hs. Las pruebas bioqumicas utilizadas fueron las siguientes: 1) Prueba del cido Sulfhdrico (SH2): su principio consiste en determinar si se ha liberado cido sulfhdrico por accin enzimtica, de los aminocidos que contienen azufre produciendo una reaccin visible de color negro (Mac Faddin, 1.980). El medio empleado fue el agar Sulfuro-Indol-Motilidad (SIM), medio semislido y el agar Hierro Triple Azcar (TSI). Ver Figura N 47.
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ANEXOS

a) Prueba Positiva: la presencia de SH2 se detecta por la aparicin de un anillo o precipitado negro. b) Prueba Negativa: no hay cambios en el medio. 2) Prueba del Indol: su principio consiste en determinar la capacidad de un organismo de desdoblar el indol de la molcula triptfano (Mac Faddin, 1.980). El indol es un producto del metabolismo del triptfano (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). El medio empleado fue el agar SIM, medio semislido. El Revelador usado fue el Reactivo de Indol de Kovacs, aunque tambin puede utilizarse el Reactivo de Indol de Ehrlich. a) Prueba Positiva: mediante el uso del Revelador de Indol, el Reactivo de Kovaks, la aparicin en la superficie del agar en la capa alcohlica, de un anillo fucsia. b) Prueba Negativa: no se produce color en la capa alcohlica; toma el color amarillo del Reactivo de Kovacs o de Ehrlich (Figura N 44).

Figura N 44: Prueba del Indol.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

3) Prueba de la Motilidad: su principio consiste en determinar si un organismo es mvil o inmvil (Mac Faddin, 1.980). El medio empleado fue el agar SIM, medio semislido. a) Prueba Positiva (motilidad): los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio, provocando turbiedad. Pueden mostrar un crecimiento en estras vellosas (Mac Faddin, 1.980). b) Prueba Negativa (sin motilidad): crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra; el medio circundante se mantiene claro (Mac Faddin, 1.980). Ver Figura N 45.

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ANEXOS

Figura N 45: Prueba de la Motilidad.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

4) Prueba del Citrato: su principio consiste en determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo, provocando alcalinidad (Mac Faddin, 1.980). Se utiliz el medio de Citrato de Simmons. a) Prueba Positiva: crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta. b) Prueba Negativa: no se observa cambio de color (Mac Faddin, 1.980). Ver Figura N 46.

Figura N 46: Prueba del Citrato.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

5)

Prueba con Agar Hierro Triple Azcar (T.S.I.): su principio consiste en determinar la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible produccin de cido sulfhdrico (SH2) (Mac Faddin, 1.980). Se utiliz el Agar Hierro Triplemente Azucarado (TSI). Interpretaciones (ver Figura N 47): a) Utilizacin del Hidrato de Carbono 1) Fermentacin de la Glucosa solamente. a) En pico de flauta: Reaccin alcalina. Color rojo.

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ANEXOS

b) Capa profunda: Reaccin cida. Color amarillo. 2) Fermentacin, tanto de la glucosa como de la lactosa. a) Pico de flauta: Reaccin cida. Color amarillo. b) Capa profunda: Reaccin cida. Color amarillo. 3) No hay fermentacin de la glucosa ni de la lactosa (no entricos). a) Pico de flauta. Reaccin alcalina. Color rojo. b) Capa profunda. 1. Organismo aerbico: No se observa crecimiento. No hay cambio de color. El color es el mismo del tubo no inoculado. Color anaranjado rojizo. Si no hay seguridad, se compara con el tubo no inoculado. 2. Organismo facultativo: Reaccin alcalina. Color rojo. 4) No fermenta ni la glucosa ni la lactosa; bastante comn. a) Pico de flauta. 1. Crecimiento solamente. 2. No hay cambio de color; se mantiene el mismo del tubo no inoculado (color anaranjado rojizo). b) Capa profunda. 1. Crecimiento solamente. 2. No hay cambio de color; se mantiene el mismo del tubo no inoculado (color anaranjado rojizo). b) Produccin de Gas 1) Aerognico. a) Produccin de gases: Dixido de carbono (CO2) e Hidrgeno (H2). b) Se manifiesta por lo siguiente: 1. Una sola burbuja de gas. 2. Burbujas en el medio. 3. Desdoblamiento del medio.

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ANEXOS

4. Desplazamiento completo del medio del fondo del tubo, dejando un rea clara. 5. Ligera muesca del medio en el costado del tubo. 2) Anaerognico: no hay produccin de gases. c) Produccin de cido sulfhdrico (SH2): la presencia de un precipitado negro (Sulfuro ferroso) se manifiesta por: 1. Un color negro distribuido por toda la capa profunda y que enmascara la acidez: puede haber una ligera evidencia en el pico de flauta. 2. Un anillo negro cerca de la parte superior de la capa profunda. 3. Un precipitado negro distribuido por la capa profunda, pero que no oculta totalmente la acidez (Mac Faddin, 1.980).

a) No inoculado.

b) cido/cido, gas.

c) Alcalino/cido, gas (reversin).

d) Alcalino/cido.

e) Alcalino- cido, gas.

f) Alcalino, cido, gas, SH2.

g) Alcalino sin cambio.

Figura N 47: Prueba con agar TSI.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

6) Prueba de la Decarboxilasa Lisina: esta prueba estudia la capacidad de las bacterias para metabolizar el aminocido lisina. Estudia la enzima

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ANEXOS

citocromo oxidasa como medio para distinguir entre grupos de bacterias (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Se utiliz el Agar Lisina. a) Prueba Positiva: prpura turbio a un prpura amarillento apagado (producido por la cadaverina) (Mac Faddin, 1.980). b) Prueba Negativa: color amarillo claro y brillante (solamente fermentado por la glucosa) (Mac Faddin, 1.980). (Ver Figura N 48).

Figura N 48: Lisina positiva (izq.) y negativa (der.).

7) Prueba de Rojo de Metilo: su principio consiste en: a) Comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales cidos de la fermentacin de la glucosa, y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. b) Es una prueba cualitativa de la produccin de cido (determinacin del pH); algunos organismos producen ms cidos que otros (Mac Faddin, 1.980). Se utiliz el Caldo RMVP (Rojo de Metilo-Voges Proskauer) y el Revelador Rojo de Metilo, indicador del pH. a) Prueba Positiva: el cultivo es lo suficientemente cido como para permitir que el Reactivo Rojo de Metilo mantenga un definido color rojo (pH: 4,4) en la superficie del medio. b) Prueba Negativa: color amarillo (pH: 6) en la superficie del medio (Mac Faddin, 1.980). Ver Figura N 49.

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ANEXOS

Figura N 49: Prueba de Rojo de Metilo.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

8) Prueba de Voges-Proskauer: su principio se basa en determinar la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetona), a partir de la fermentacin de la glucosa (Mac Faddin, 1.980). Se utiliz el Caldo RMVP (Rojo de Metilo-Voges Proskauer) y los Reveladores Alfa Naftol e Hidrxido de Potasio (KOH), en ese orden, en reemplazo de este ltimo puede usarse tambin Hidrxido de Sodio (NaOH). a) Prueba Positiva: color marrn en la superficie del medio (presencia de acetona). b) Prueba Negativa: color amarillo en la superficie del medio (el mismo color del reactivo). Puede formarse un color cobrizo, pero an as la reaccin es negativa (debido a la accin de los reactivos al mezclarse). Ver Figura N 50.

Figura N 50: Prueba de Voges-Proskauer.

Fuente: Mac Faddin, 1.980.

9) Prueba de la Oxidasa: su principio se basa en determinar la presencia de las enzimas oxidasas (Mac Faddin, 1.980). Las bacterias coliformes son oxidasa negativas (American Public Health Association [APHA], American Water Works Association & Water Pollution Control Federation [WPCF], 1.992). Para realizar esta prueba se utilizaron discos de papel embebidos en una solucin estabilizada de oxalato de para-aminodimetilanilina, droga utilizada para detectar la produccin de citocromo oxidasa, enzima respiratoria

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ANEXOS

presente en los gneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, etc. (Laboratorios Britania, 2.006). Se us el mtodo indirecto, el cual consiste en humedecer el disco con un cultivo en caldo del organismo sospechoso (Mac Faddin, 1.980). En este caso, se utiliz solucin fisiolgica, aproximadamente 0,2 ml, en un tubo de hemlisis para preparar una suspensin bacteriana densa (Laboratorios Britania, 2.006). Para esto se tom un inculo de la colonia, conservada en el agar nutritivo en pico de flauta, utilizando el mango de madera de un hisopo estril. Luego, se coloc el disco del reactivo con una pinza estril y se registr la reaccin inmediatamente. a) Prueba Positiva: el medio toma color rosa, dentro de los 2 minutos. b) Prueba Negativa: no se produce un cambio de color en el medio. 10) Sensibilidad a Cefoxitina y a Colistina Tanto para evaluar la sensibilidad de la cepa a la Cefoxitina como para la Colistina, se siguieron los siguientes pasos: 1. Se realiz una suspensin de un inculo de una cepa joven de 24 hs, en 1 ml aproximadamente de Caldo Muller-Hinton estril, utilizando un ansa estril hasta alcanzar una turbidez similar a la del testigo 0,5 de Mac Farland. 2. La suspensin bacteriana obtenida fue absorbida con un hisopo estril de algodn, con la cual luego se inocularon placas de Petri de vidrio, conteniendo 25 a 30 ml de agar Meller-Hinton, de modo de obtener una capa de 4 mm de alto, aplicando el hisopo sobre la superficie del agar, efectuando estras en direcciones diferentes. 3. A continuacin, se aplicaron los monodiscos de Cefoxitina y de Colistina sobre la superficie del agar por medio de una pinza estril. 4. Luego, se incubaron las placas invertidas en estufa a 35 C durante 18 hs. 5. La lectura consisti en medir con una regla milimetrada el dimetro del halo de inhibicin alrededor del disco del antimicrobiano empleado, esto luego indicar su sensibilidad a dicha sustancia.

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ANEXOS

ANEXO III: IDENTIFICACIN DE LAS BACTERIAS HALLADAS A PARTIR DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

Tabla N 13: Identificacin de las bacterias halladas mediante pruebas bioqumicas.
Balneario Muestreo PRUEBAS BIOQUIMICAS ANTIMICROBIANOS Bacterias Rojo de VogesSIM TSI Cefoxitina Colistina Citrato Lisina Oxidasa Identificadas SH2 Indol Motilidad Lactosa Glucosa Gas SH2 Metilo Proskauer D (mm) Int. D (mm) Int. Escherichia coli + + + + 20 S 18 S 1 Klebsiella sp. + + + + + 20 S 18 S Serratia sp. + + + + + "+/-" 18 S 9 I 2 Serratia sp. + + + + + 15 I 0 R Enterobacter sp. + + + + + 0 R 11 S Escherichia coli + + + + + + + 3 Escherichia coli + + + + + + + Enterobacter sp. + + + + + + 10 R 11 S Klebsiella sp. + + + + 18 S 10 I 4 Serratia sp. + + + + + + + 17 I 8 R Pseudomonas sp. + + + 11 R 9 I Escherichia coli + + + + + + + 5 Klebsiella sp. + + + + + + 20 S 10 I Klebsiella sp. + + + + + + + 18 S 8 R Escherichia coli + + + Klebsiella sp. + + + 24 S 12 S 2 Serratia sp. + + + + 0 R 0 R Enterobacter sp. + + + + + 0 R 9 I Klebsiella sp. + + + + + 21 S 9 I 3 Enterobacter sp. + + + + 0 R 9 I Enterobacter sp. + + + + + 16 R* 9 I Klebsiella sp. + + + + + + 20 S 18 S 4 Klebsiella sp. + + + + + 20 S 18 S Klebsiella sp. + + + + 23 S 12 S Klebsiella sp. + + + + + + 20 S 18 S Klebsiella sp. + + + + + + 19 S 9 I 5 Klebsiella sp. + + + + + + + 20 S 9 I Serratia sp. + + + + + + 17 I 0 R Escherichia coli + + + + + 1 Escherichia coli + + + + + + 21 S 11 S Enterobacter sp. + + + + 0 R 10 I 2 Pseudomonas sp. + + + Pseudomonas sp. + + + Escherichia coli + + + + + + + + Enterobacter sp. + + + + + + + + 12 R 10 I 3 Pseudomonas sp. + + + Pseudomonas sp. + + + Escherichia coli + + + + + + + 4 Escherichia coli + + + + + + + Escherichia coli + + + Klebsiella sp. + + + + + 23 S 10 I 5 Pseudomonas sp. + + + 9 R 10 I Pseudomonas sp. + + + 0 R 10 I Pseudomonas sp. + + + + * Presenta colonias dentro del halo

Gatica

Ro Grande

Municipal

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ANEXOS

ANEXO IV: DIMETROS (mm) DE LOS HALOS DE INHIBICIN DE LOS ANTIMICROBIANOS

Tabla N 14: Dimetros de los halos de inhibicin de los antimicrobianos.
DIMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIN DE LOS ANTIMICROBIANOS (mm) Trimetoprima Sulfametoxazol 34 32 30 26 30 26 26 24 32 26 24 28 30 27 28 34 30 0 0 22 26 28 30 26 30 27 24 28 30 30 0 0 0 26 26 0 0 27 0 34 20 18 14 20 Piperacilina Tazobactama

BALNEARIO MUESTREO

BACTERIAS

Amipicilina Sulbactama

Escherichia coli Klebsiella sp. Serratia sp. 2 Serratia sp. Enterobacter sp. Escherichia coli 3 Escherichia coli Gatica Enterobacter sp. Klebsiella sp. 4 Serratia sp. Pseudomonas sp. Escherichia coli 5 Klebsiella sp. Klebsiella sp. Escherichia coli Klebsiella sp. 2 Serratia sp. Enterobacter sp. Klebsiella sp. 3 Enterobacter sp. Enterobacter sp. Ro Grande Klebsiella sp. 4 Klebsiella sp. Klebsiella sp. Klebsiella sp. Klebsiella sp. 5 Klebsiella sp. Serratia sp. Escherichia coli 1 Escherichia coli Enterobacter sp. 2 Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Escherichia coli Enterobacter sp. 3 Pseudomonas sp. Municipal Pseudomonas sp. Escherichia coli 4 Escherichia coli Escherichia coli Klebsiella sp. 5 Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. *Presenta colonias dentro del halo 1

28 28 26 26 0 20 20 0 26 18 0 20 28 21 0 30 0 6 0 24 20 26 24 21 28 21 19 28 26 26 0 0 0 19 18 0 0 20 18 34 25 0 0 0

42 44 32 32 34 32 32 16 34 26 24 32 34 28 30 40 26 30 0 26 32 30 36 30 34 28 28 30 36 34 16 0 0 30 28 0 0 29 30 40 30 24 26 22

36 32 28 30 28 23 28 24 32 26 22 28 28 25 28 34 28 28 24 22 26 28 30 29 28 27 25 30 30 30 26 26 24 27 26 16 23 27 30 34 28 26 24 27

46 34 34 34 34 30 34 30 36 18 24 30 34 30 30 38 32 30 30 24 34 32 34 18 32 20 25 32 40 34 30 30 30 25 28 28 26 30 28 40 27 34 30 28

16 18 20 14 0 22 22 7 18 17 0 16 20 20 0 18 0 0 0 16 26 18 20 16 20 20 20 20 18 14 0 0 0 20 20 0 0 20 16 34 25 0 14 14

36 30 28 26 30 26 26 26 26 19 24 28 30 24 26 34 28 26 24 26 30 28 28 24 30 21 12 28 30 28 30 30 30 23 26 30 30 22 21 34 20 32 30 20

30 28 26 26 24 28 26 24 32 28 36 26 26 26 24 32 24 24 26 24 26 28 28 29 26 30 27 26 32 30 16 16 15 29 30 24 24 29 30 28 26 26 36 30

36 26 30 28 32 26 28 28 32 20 20 28 30 24 30 38 28 30 24 24 30 30 30 26 30 21 22 30 36 34 28 30 30 24 26 24 28 25 24 34 22 24 42 20

24 22 20 20 20 20 18 18 24 20 24 20 20 19 20 22 20 20 20 20 22 24 24 20 20 20 19 20 20 20 17 16 19 20 20 17 15 21 19 18 19 26 24 20

13 24 24 22 24 24 24 22 26 20 28 24 24 20 24 28 24 24 24 20 26 24 26 22 26 20 21 24 26 28 26 24 28 21 22 24 22 21 20 24 21 30 32 26

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Ciprofloxacina 42 34 28 34 34 30 28 28 32 24 34 30 34 27 28 40 30 28 30 19 40 28 30 25 30 23 26 30 40 34 34 34 34 22 28 32 30 26 26 34 27 42 36 22

Gentamicina

Ceftacidima

Meropenem

Cefotaxima

Amicacina

Cefalotina

Imipenem

Cefepime

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ANEXOS

ANEXO V: VALORES GUAS BACTERIOLGICOS PARA AGUAS RECREACIONALES

Tabla N 15: Ejemplos de valores guas y estndares para la calidad microbiolgica del
agua recreacional.

Pas/Organismo
Tailandia (7) Japn (10) Yugoslavia (10) Puerto Rico (7) Ecuador (10) Venezuela (7) Colombia (10) Espaa (8)
1

Valores Guas de Coliformes

Coliformes Totales 1.000 NMP/100 ml 1.000/100 ml 2.000/100 ml 1.000 /100 ml < 70 NMP/100 ml 1.000/100 ml 10.000 NMP/100 ml (I) 500 NMP/100 ml (G) 1.000 NMP/100 ml Coliformes Fecales 200 NMP/100 ml 200/100 ml 200/100 ml 2.000 NMP/100 ml (I) 100 NMP/100 ml (G) 150 NMP/100 ml 200 NMP/100 ml 200 NMP/100 ml 200/100 ml 200 NMP/100 ml 200 NMP/100 ml (3, 4) 2 126/100 ml 200 NMP/100 ml 2 126/100 ml Escherichia coli -

Australia/Nueva Zelanda (7) Carolina del Norte (EEUU) (7) Florida (EEUU) (7) US EPA (1, 9, 10) Canad (2) Argentina (11) AIC (5, 6) Neuqun capital

200 NMP/100 ml -

I: valor de carcter imperativo y de obligado cumplimiento. G: valor gua, cuya consecucin ser un objetivo de la accin sanitaria. 1 : Frecuencia mnima de muestreo bimensual. 2 : Media geomtrica de por lo menos cinco muestras, tomadas durante un perodo que no exceda los treinta das. Fuente: (1): US EPA; 2.000.- California Beaches-Regulations and Guidance-. Draft Guidance for Salt and Freshwater Beaches - Appendices. Appendix B US EPA Guidance for Recreational Waters and Beaches. 5 pp. (2): FEDERAL-PROVINCIAL WORKING GROUP ON RECREATIONAL WATER QUALITY OF THE FEDERAL-PROVINCIAL ADVISORY COMMITTEE ON ENVIRONMENTAL AND OCCUPATIONAL HEALTH; 1.992.-Guidelines for Canadian Recreational Water Quality. Minister of National Health and Welfare, Canada. 101 pp. (3): CONCEJO DELIBERANTE DE LA CIUDAD DE NEUQUEN; 1.998.- Ordenanza 8.320: "Control Ambiental de las Actividades del Cdigo de Planeamiento y Gestin Urbano Ambiental de la Ciudad de Neuqun", Neuqun. (4): MUNICIPALIDAD DE NEUQUEN; 2.002.- Boletn de Prensa. (2-1-2.003). (5): SECRETARA DE GESTIN AMBIENTAL-A.I.C.; 2.001.- Red Complementaria de Monitoreo de la Calidad del Agua. Determinacin de la Aptitud del Agua para Uso Recreativo con Contacto Directo (balnearios). Cipolletti, Argentina. 21 pp. (6): SECRETARA DE GESTIN AMBIENTAL-A.I.C.; 2.002.- Programa: Control Bacteriolgico de Balnearios. Determinacin de la Aptitud del Agua para Uso Recreativo con Contacto Directo. (7): URS HOLDINGS, INC.; 2005.- Elaboracin de Tres (3) Anteproyectos: Normas de Calidad de Aguas Marinas y Costeras, Normas para el Control de Olores Molestos y Normas de Calidad de Aire. Documento Final Cientifico y Tcnico: Normas de Calidad de Aguas Marinas y Costeras. Presentado para: Autoridad Nacional del Ambiente. Panam. 120 pp. (8): B.O.E. n. 167, del 13 de julio de 1988. Real Decreto 734/1988, del 1 de julio, por el que se establecen normas de calidad de las aguas de bao. Madrid, Espaa. 6 pp. (9): EPA; 1.986.- Ambient Water Quality Criteria for Bacteria. EPA-440/5-84/002. Office of Water. Regulations and Standards. Criteria and Standards Division. Washington, D. C. 24 pp.

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ANEXOS
(10): World Health Organization (WHO), 2.000.- Monitoring Bathing Waters. A Practical Guide to the Design and Implementation of Assessments and Monitoring Programmes. F & FN Spon. London, Great Britain. (11): Subsecretara de Recursos Hdricos de la Nacin, Repblica Argentina ; 2.003.- Desarrollos de Niveles Guas Nacionales de Calidad de Agua Ambiente correspondientes a Escherichia coli/Enterococos. Buenos Aires, Argentina. 11 pp.

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ANEXOS

ANEXO VI: PARMETROS ANALIZADOS POR LA AIC

Tabla N 16: Media geomtrica de E. coli en el ro Limay utilizada para determinar la aptitud de los balnearios de Neuqun.

Media Geomtrica de Escherichia coli (NMP/100 ml) Temporada 2.000-2.001 2.002-2.003 2.003-2.004 2.004-2.005 2.005-2.006 34 4 8 8 27 Gatica 38 2 1 8 23 Ro Grande 37 7 15 89 45 Municipal Balneario
Nota: Las muestras se obtuvieron entre Noviembre y Diciembre.

Tabla N 17: Parmetros fsico-qumicos del ro Limay.

PARMETROS FSICO-QUMICOS DE CALIDAD DEL AGUA Fecha 27-Nov 18-Dic 29-Nov 20-Dic 17-Nov 20-Dic
T agua (C) pH Conductividad (uS/cm) O (mg/L) S.S.T. (mg/L) S.D.T. (mg/L) Alcalinidad (mg CaCO3/L) Na (mg/L) K (mg/L) Ca (mg/L) Mg (mg/L) Dureza (mg CaCO3/L) Sulfatos (mg/L) Cloruros (mg/L) C.O.T. (mg C/L)

15,7 19,2 18,6 20 17 16

7,87 7,81 8,08 7.40 7,5 7,6

80 81 84 70 74 72

9,5 9,6 9,4 0 0

2,7 3,4 4,7 4,4 8,1 5,1

56,5 51,8 61 62,8 59,5 60

33,5 34,6 34,2 34,7 33,4 34,2

5 4,6 4,6 4,7 4,4 4,5

0,7 0,6 0,8 0,8 0,7 0,7

8,5 8,3 8,8 8,5 7,8 8,1

1,9 1,9 1,9 1,9 2 1,9

29 28,7 29,7 29,1 27,5 28,1

6,4 5,4 5,9 5,9 5,5 5,7

1,8 1,3 1,8 1,2 1,6 1,8

1,7 1,9 1,7 1,9 2 1,2

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ANEXOS

ANEXO VII: CONTAMINACIN DEL ARROYO DURN

A continuacin se presentan tres artculos del Diario Ro Negro, sobre la contaminacin del arroyo Durn.

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ANEXOS

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ANEXOS

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ANEXOS

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FIRMAS
CIUDAD: Neuqun.

FECHA: 1/12/2.006.

NMERO TOTAL DE PGINAS: 92.

FIRMA TESISTA: Florencia Ins Ugolini ____________________

FIRMA DIRECTORA: Nora Beatriz Pierangeli _________________

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