UNIVERSIDAD EARTH ESTABLECIMIENTO DEL MICELIO DEL HONGO SHIITAKE (Lentinus edodes) EN TRONCOS DE MADERA Y ASERRN ENRIQUECIDO CON

NUTRIENTES Por

ANA SALOM LPEZ ARGOTTI

DIANA MARITZA SEGURA DAZ

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de INGENIERO AGRNOMO Con el grado de LICENCIATURA

Gucimo, Costa Rica Diciembre, 2005

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de Ingenieras Agrnomas con el grado de Licenciatura

Profesor Asesor

________________________ Richard Taylor, PH.D.

Profesor Asesor

________________________ Takatsuru Nishikawa, Lic.

Decano

________________________ Marln Breve, PH.D

Candidata

________________________ Ana Salom Lpez Argotti

Candidata

________________________ Diana Maritza Segura Daz

Diciembre, 2005

DEDICATORIA

A mi padre, Hernn, por su incansable esfuerzo por sacar adelante a nuestra familia pensando siempre en lo mejor y dndome el ejemplo de una persona luchadora, firme y ejemplar, que ha entregado su vida por el bienestar de sus hijos. A mi madre, Patricia, por su amor, esfuerzo y apoyo incondicional de siempre, por confiar en m y hacerme sentir que soy capaz de lograr lo que me proponga. A mis hermanos, David y Mnica porque son las dos personitas ms especiales en mi vida, mi razn ms grande de felicidad en todo momento, mi fuerza para seguir adelante. Gracias por existir y ser parte de m. A Jos Eduardo, por su amistad y apoyo incondicional siempre. Ana Salom

A mis padres, por supuesto. Gracias por ser mi ejemplo a seguir durante todos estos aos y por el gran esfuerzo que han realizado para brindarme la oportunidad de forjarme un futuro como profesional. Los amo. A Paola y Cid por sus consejos, amor y apoyo incondicional. Y finalmente a todos los que estuvieron ah sin estar presentes

Diana

AGRADECIMIENTO

Hace cuatro aos empezamos un nuevo ciclo en nuestras vidas, y parece que fue en un abrir y cerrar de ojos que transcurri todo este tiempo de grandes esfuerzos, constancia y perseverancia reflejados en nuestro crecimiento personal y profesional. Ahora, est por cerrarse esta etapa y es este proyecto el resultado de ello; razn por la cual agradecemos a Dios y a todas aquellas personas que han hecho posible que este sueo se haga realidad. En especial, queremos agradecer a nuestros donantes por confiar en nuestra capacidad y ser parte de nuestra formacin profesional para ser lderes de cambio. Tambin a nuestros profesores asesores Richard Taylor y Takatsuru Nishikawa por su apoyo, sus conocimientos y el tiempo dedicado a la realizacin de este proyecto. Al personal del Taller Didctico y el Laboratorio de Ciencias Naturales por su colaboracin en el desarrollo de nuestro estudio. Al profesor Vctor Quiroga quien nos brind su ayuda, el tiempo, la motivacin y la comprensin para que este trabajo, hoy, sea una realidad. Finalmente, a ustedes queridas amigas quienes ms que amigas han sido

nuestras hermanas y lo ms valioso que hemos podido encontrar en este lugar, que nos han enseado a vivir, disfrutar, aprovechar y creer en la verdadera amistad. A cada una de ustedes que con sus personalidades nicas y hasta cierto punto incomprensibles nos dieron la oportunidad de conocerlas y de brindarles lo mejor de nosotras. Tanto es as que, ahora las palabras sobran mientras podamos hablar con la mirada y en el futuro, sean los recuerdos vividos los que permanezcan y fortalezcan este sentimiento de cario y amor que tenemos por cada una de ustedes. Diana y Ana Salom

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Miguel gracias por ser y estar conmigo, por tu paciencia, apoyo y comprensin en los momentos ms difciles, porque siempre escuche de ti lo que necesitaba y cuando lo necesitaba. Juan Enrique gracias por una incomprensible pero genial amistad que espero dure siempre, para que continu siendo llena de risas y momentos felices. A mi familia por todo el apoyo y cario que me han dado siempre. Ana Salom

Quiero agradecer a toda mi familia por el apoyo que me han dado durante toda mi vida, en especial quiero agradecer a mis abuelos y mis tos por alentarme siempre a luchar por mis sueos y seguir siempre hacia adelante a pesar de que el camino sea duro. A Anel mi gran amiga de estos cuatro aos, le doy las gracias por ser mi salvavidas y por su apoyo incondicional. A Juan Enrique, simplemente gracias por esta amistad y por todoA Salo, gracias por la oportunidad de realizar este proyecto juntas, y por permitirme mostrarle que las apariencias engaante adoroA todos mis amigos Miguel, Santi, Arturo, Luis E., Jacobo, Ronald, Juan y Omari, gracias por compartir junto a m los mejores momento de la vida. Diana

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RESUMEN

El Shiitake (Lentinus edodes) es un hongo extico de origen asitico, que se cultiva en troncos de rboles de maderas duras y tambin en sustratos artificiales enriquecidos con nutrientes. El consumo de este hongo se ha incrementado durante los ltimos aos debido a sus caractersticas organolpticas y medicinales. El objetivo de este proyecto fue el de evaluar el desarrollo del micelio del Lentinus en tres tipos de madera: Melina (Gmelina arborea), Eucalipto (Eucaliptus camaldulensis), Sotacaballo. (Zygia latifolia), y en dos sustratos artificiales

enriquecidos con nutrientes uno inoculado con EM al 2% y el otro sin EM. De las tres maderas evaluadas durante seis meses el eucalipto fue la nica madera que respondi bien al desarrollo del micelio, por otro lado en los sustratos enriquecidos con nutrientes la diferencia no fue estadsticamente significativa (p<0.05) entre los dos tratamientos. Sin embargo, durante las ocho semanas de evaluacin el tratamiento con EM al 2% presento un desarrollo ms lento del micelio.

Palabras claves: Shiitake (Lentinus edodes), micelio, sustratos enriquecidos, Melina (Gmelina arborea), Eucalipto (Eucaliptus camaldulensis), Sotacaballo. (Zygia latifolia).

Lpez Argotti, A; Segura Daz, D. 2005. Establecimiento del micelio del hongo Shiitake (Lentinus eddes) en troncos de madera y aserrn enriquecido con nutrientes. Proyecto de Graduacin Lic. Ing. Agr. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 52 p.

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ABSTRACT

Shiitake (Lentinus edodes) is an exotic Asian mushroom, that is cultivated in hardwood logs and in artificial enriched substrates. The consumption of this mushroom has increased during the last ten years because of its medicinal and gourmet uses. This project evaluated the spawning of Lentinus in three diferent kinds of wood: Melina (Gmelina arborea), Eucalyptus (Eucaliptus camaldulensis), Sotacaballo. (Zygia latifolia); and in two artificial substrates. The substrate was divided into two portions. One was inoculated with 2% activated EM and the other was treated with equal amounts of tap water. Of the three woods evaluated during six months, eucalyptus was the only wood that responded well as shown by spawning. In the case of the nutrient enriched substrates, the difference between both treatments was not statistically significant (p<0.05). During the eight weeks of evaluation, however, the treatment with EM at 2% presented slower development of the mycelium.

Key words: Shiitake (Lentinus edodes), spawn, enriched substrates, Melina (Gmelina arborea), Eucalyptus (Eucaliptus camaldulensis), Sotacaballo. (Zygia latifolia).

Lpez Argotti, A; Segura Daz, D. 2005. Establecimiento del micelio del hongo Shiitake (Lentinus eddes) en troncos de madera y aserrn enriquecido con nutrientes. Proyecto de Graduacin Lic. Ing. Agr. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 52 p.

TABLA DE CONTENIDO Pgina DEDICATORIA........................................................................................................ V AGRADECIMIENTO.............................................................................................. VII RESUMEN.............................................................................................................. IX ABSTRACT ............................................................................................................. X LISTA DE FIGURAS ............................................................................................ XIII LISTA DE ANEXOS .............................................................................................XIV 1 2 INTRODUCCIN .............................................................................................. 1 OBJETIVOS...................................................................................................... 3 2.1 OBJETIVO GENERAL .............................................................................. 3 2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS..................................................................... 3 3 REVISIN DE LITERATURA ........................................................................... 4 3.1 MERCADO MUNDIAL............................................................................... 4 3.2 PROPIEDADES MEDICINALES DEL SHIITAKE...................................... 5 3.3 PRODUCCIN ......................................................................................... 6 3.3.1 Produccin en troncos de madera............................................... 6 3.4 CULTIVO EN BOLSAS DE POLIPROPILENO ....................................... 11 4 MATERIALES Y MTODOS .......................................................................... 14 4.1 PREPARACIN DEL AGAR PAPA DEXTROSA (APD): .................. 14 4.1.1 Aislamiento de la cepa .............................................................. 14 4.1.2 Preparacin del sorgo para propagacin del micelio................. 14 4.1.3 Inoculacin del sorgo. ............................................................... 15 4.2 PREPARACIN E INOCULACIN DE TRONCOS. ............................... 16 4.2.1 Ubicacin de los troncos ........................................................... 18 4.3 PREPARACIN DEL SUSTRATO DE ASERRN Y NUTRIENTES CON Y SIN EM. ...................................................................................... 19 4.3.1 Seleccin del sitio para la fructificacin..................................... 19 5 RESULTADOS Y DISCUSIN ....................................................................... 20 5.1 PRODUCCIN EN TRONCOS............................................................... 20 5.2 ESTABLECIMIENTO DEL HONGO SHIITAKE EN BOLSAS DE ASERRN INOCULADAS CON NUTRIENTES ................................. 22 6 7 8 9 CONCLUSIONES ........................................................................................... 26 RECOMENDACIONES................................................................................... 27 BIBLIOGRAFA CITADA................................................................................ 28 ANEXOS......................................................................................................... 31 xii

LISTA DE FIGURAS Figura Pgina

Figura 1, 2 y 3. Sorgo escurrindose luego de ser cocinado durante 30 minutos y la preparacin de las botellas a inocular con el micelio del hongo Shiitake. ......................15 Figura 4. Micelio del hongo Shiitake inoculado en el sorgo............................................15 Figura 5. Troncos seleccionados para la inoculacin del micelio. ..................................16 Figura 6. Perforacin del tronco de Sotacaballo para la inoculacin..............................17 Figuras 7, 8 y 9. Proceso de inoculacin con el micelio del hongo Shiitake del tronco de Sotacaballo.....................................................................................................................17 Figuras 10 y 11. Sellado de hoyos con cera de abeja y tronco de eucalipto despus de inoculado y sellado.........................................................................................................18 Figura 12. Estructura metlica donde se colocaron los troncos una vez inoculados......18 Figuras 13 y 14. Corte y vista transversal de tronco de Eucalipto mostrando el desarrollo del micelio del hongo Shiitake a las 5 semanas de inoculado........................................20 Figuras 15 y 16. Ataque de insectos en troncos de Melina y Sotacaballo......................21 Figura 17. Nmero de bolsas de sustrato enriquecido con nutrientes con ms del 50% del desarrollo del micelio del hongo Shiitake en un tratamiento con EM al 2% y uno sin EM, evaluado durante 8 semanas..................................................................................22 Figura 18. Nmero de bolsas que se contaminaron durante el proceso de desarrollo del micelio del hongo Shiitake en tratamiento con EM al 2% y tratamiento sin EM durante 8 semanas.........................................................................................................................24

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LISTA DE ANEXOS Anexo Pgina

Anexo 1. Valor nutricional por cada 100 gr. De hongo Shiitake:.................................... 33 Anexo 2. Constituyentes Activos del Shiitake ................................................................ 33 Anexo 3. Clasificacin biolgica del hongo.................................................................... 34 Anexo 4. Fotos............................................................................................................... 34

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1 INTRODUCCIN La industria de hongos exticos ha tenido un gran desarrollo durante los ltimos aos a nivel mundial. En la actualidad, la produccin mundial es de 6.158.000 toneladas al ao. Es importante mencionar que en 1986, el hongo ms consumido fue el Champin comn (Agaricus bisporus), con un 56.2 % del mercado mundial. Sin embargo, para el ao de 1997 este hongo haba disminuido a un 31.8%, debido al consumo de nuevas especies exticas tales como el Shiitake (14.2%) (Medina, 2004). Entre los principales productores a nivel mundial se encuentra China con un 50 % de la produccin de hongos exticos lo que representa 3 millones de toneladas al (25.4%) y el ostra

ao. Actualmente, la produccin en Amrica es muy baja, sin embargo; pases como Mxico, Chile y Argentina se han convertido en los principales productores latinoamericanos (Lora 2000). El Shiitake (Lentinus edodes) o tambin conocido como el hongo Japons Negro o el hongo Chino Negro es una seta de origen asitico, que se ha cultivado desde hace siglos en grandes cantidades sobre troncos de rboles de maderas duras y semiduras como por ejemplo el eucalipto y el roble entre otros. Su raz etimolgica proviene del griego y del latn Lentinus que viene de Lentis o Lenshape por su forma de sombrero y edodes que significa que esta es una especie comestible. Por otro lado, la palabra Shiitake proviene del japons Shii que es rbol proveniente de la familia del roble (Fabaceae) y take que es hongo (Staments 1983). El Shiitake no slo se destaca por ocupar el segundo lugar a nivel mundial de consumo, si no tambin por sus propiedades medicinales, entre estas se destacan las anticancergenas. Adems, este hongo, por sus caractersticas organolpticas, es de fcil colocacin en el mercado y por su utilizacin como materia prima para la elaboracin de diversos subproductos como por ejemplo: harinas, suplementos alimenticios (cpsulas), cerveza, vino, t, galletas entre otros (Medina 2004).

Garca (1987) menciona en su libro Cultivo de Setas y Trufas que el Shiitake presenta una estructura que asemeja la forma de un sombrero convexo que se aplana e incluso se hunde en el centro, este posee de 4 16 cm. de dimetro y un color variable desde ocre parduzco a claro pardo rojizo con cierto tono violceo. La carne es blanca, con un leve sabor cido y un alto contenido proteico.

2 OBJETIVOS 2.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar la eficiencia de produccin del hongo Shiitake utilizando diferentes medios de cultivo (troncos de maderas locales y aserrn tratado con EM al 2% y sin l).

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Evaluar la respuesta de tres tipos de maderas a la inoculacin del micelio de Shiitake en troncos de melina, sotacaballo y eucalipto.

Evaluar el efecto en el crecimiento del micelio de hongo Shiitake en sustrato de aserrn blanco tratado con EM al 2% y sin l.

Recomendar los sustratos ms adecuados para la propagacin y establecimiento del micelio del hongo Shiitake bajo condiciones del Trpico Hmedo.

3 REVISIN DE LITERATURA Segn Medina (2003) los hongos se encuentran distribuidos ampliamente en todo el planeta y se adaptan a casi todos los climas, sin embargo se requieren ciertos elementos indispensables para su crecimiento tales como materia orgnica y agua.

Desde hace cientos de aos, los hongos se han venido utilizando como alimento humano y, en muchos casos, en la medicina tambin. En la actualidad, han venido cobrando gran importancia debido a las amplias alternativas de sabores, texturas y formas de preparacin (Medina, 2003). Los hongos son una fuente alternativa de alimentacin, debido a su alto contenido de protenas, que en algunos casos llega al 40% de su peso seco. Algo que vale la pena resaltar es su utilizacin en terapias contra enfermedades como el cncer y el sida, debido al efecto activador del sistema inmunolgico que presentan algunos de ellos (Medina, 2003).

3.1

MERCADO MUNDIAL De acuerdo con Lora, (2000) en los ltimos 32 aos la industria de los hongos

exticos ha tenido un gran desarrollo a nivel internacional. Su produccin mundial representa, en la actualidad, cerca de 6.160.800 toneladas mtricas por ao con un crecimiento sostenido cercano al 5% por ao (Chang, 2004). El hongo ms consumido sigue siendo el champin comn (Agaricus bisporus), seguido de cerca por el

Shiitake (Lentinula edodes) y por ltimo el hongo Ostra (Pleurotus spp). El principal productor es China con un 50% de la produccin mundial de hongos exticos, casi 3.000.000 toneladas anualmente. Sin embargo, la calidad no ha sido tan buena, lo que ha ocasionado una reduccin en el mercado Europeo, en pases como Italia (Lora 2000).

El hongo Shiitake es uno de los que tiene mayor inters econmico ya que ofrece atractivas oportunidades de mercado, por lo que en la actualidad muchas empresas se dedican a producirlo. Cabe destacar que al ser un hongo gourmet se caracteriza por estar destinado a nichos selectivos y de alto poder adquisitivo (Cisterna 2004). Segn Carlos Cisterna (2004), el Shiitake es altamente apreciado en pases asiticos tales como Japn, Tailandia, Corea y China, especialmente por su sabor y por sus beneficios en la salud humana. Tradicionalmente, el Shiitake ha sido cultivado en las regiones montaosas de Asia utilizando tcnicas milenarias, no obstante, en los ltimos treinta aos se han realizado estudios para desarrollar sistemas de cultivos mejorados, con el propsito de incrementar su rendimiento y su comercializacin en pases occidentales.

3.2 PROPIEDADES MEDICINALES DEL SHIITAKE Los hongos, en general, presentan un alto valor nutritivo (Anexo 1); muestra de ello es que varios anlisis realizados, confirman que las setas son muy ricas en oligoelementos, hierro, silicio, magnesio o azufre, adems; en vitaminas, especialmente la vitamina C, D, riboflavina y el cido flico entre otros (Albert, 2003). De acuerdo con Vicobos (2005) el Shiitake es el ms popular y el ms estudiado entre los hongos medicinales desde finales de los aos sesenta, en el anexo 2 se pueden observar los constituyentes activos de este hongo. El cual posee los nueve aminocidos esenciales en la dieta del ser humano y un bajo contenido calrico (390 caloras por Kg.). Este hongo posee un agente anti- cncer (Lentinan), sustancias anti-oxidantes, vitaminas y elementos inorgnicos como el selenio, adems; estimula en el organismo la produccin de interfern que es un agente antiviral. El consumo de este hongo reduce el colesterol, previene la trombosis y la formacin de altos niveles de azcar en la sangre (Medina, 2003).

3.3 PRODUCCIN La produccin del Shiitake se divide en dos categoras: cultivo en troncos y cultivo en sustratos sintticos. La innovacin en el uso de sustratos sintticos (aserrn) fue adoptada en 1983 por K. Mori. Esta nueva tecnologa promovi el desarrollo de la industria de produccin de hongos comestibles en China, con esto este pas toma el liderazgo en produccin y mercado a nivel mundial, dejando atrs a Japn su mayor competidor.

3.3.1 Produccin en troncos de madera El Shiitake crece de forma natural en la madera muerta (descomposicin) de diferentes especies de maderas duras y en diferentes condiciones climticas. El material usado se puede dividir en tres categoras: los que fructifican a los 20C, los que crecen entre los 10 y 15C y los que fructifican a los 10C. No hay inculo que pueda producirse durante todo el ao. Si se desea tener una produccin constante se debe usar una combinacin de diferentes materiales (Chang; et al., 2004). Segn (Chang; et al., 2004) el Lentinus es un hongo saprofito, que crece en el cambium de los troncos secos, mediante la absorcin de los nutrientes que se encuentran en la madera. La corteza de los troncos protege el crecimiento del micelio y juega un rol importante en el desarrollo del cuerpo fructfero. Los troncos utilizados para la produccin del Shiitake deben contener suficiente cantidad de nutrientes para el desarrollo de los hongos. El Lentinus crece en troncos de hoja ancha que provienen principalmente de las familias de las Fagaceae que incluye especies como el roble. Bratkovich (2004) menciona en su investigacin sobre la Produccin del Hongo Shiitake, que el crecimiento del hongo va a depender de la edad y/o el grosor del tronco, adems es mejor utilizar troncos de un tamao uniforme para facilitar el manejo y los costos de produccin. Por lo general, se sabe que los troncos viejos y gruesos son de difcil manipulacin, adems que el crecimiento del micelio es mucho ms lento por lo que retrasa el desarrollo del hongo. Sin embargo, cuando el desarrollo ha iniciado y si los hongos son de buena calidad estos tendrn un alto rendimiento y la duracin en produccin de los troncos ser por varios aos. 6

La mejor poca para talar los rboles en pases subtropicales es cuando los troncos tienen niveles altos de carbohidratos y otras sustancias orgnicas, y cuando la corteza no es fcilmente arrancada, esto por el alto contenido de nutrientes. Despus de talados los rboles estos, deben ser colocados por aparte sin cortar sus ramas, ya que la humedad de los mismos puede perderse fcilmente, causando algunos rompimientos al final de los cortes (Chang; et al., 2004). En la gua de produccin a pequea escala de cultivo del Shiitake en troncos publicada por Davis (1995), menciona que el contenido ptimo de humedad de los troncos debe estar entre 40 y 55 %. Si es menor al 40% el crecimiento del micelio se ver reducido y si es menor al 20%, el micelio no podr crecer. Si el contenido de humedad es 60%, pero muy alcalino (el pH ptimo debe estar entre 4.5-5.5) el tronco es inadecuado para el crecimiento del micelio de Lentinus y puede fcilmente contaminarse con otros hongos dainos. Si los rboles estn muy secos, la viabilidad del micelio es muy poca debido al contenido insuficiente de humedad, y el trabajo de inoculacin se torna ms difcil. Por lo tanto, hay un incremento en la tendencia de inoculacin de troncos inmediatamente luego de ser cortados, este proceso tiene la ventaja de estimular el suave desarrollo del micelio del hongo, esto porque los troncos comienzan a secarse desde el hoyo de inoculacin, y el desarrollo del micelio sigue en direccin del proceso de secado (Davis, 1995). Chang; et al., (2004) menciona que el material de trabajo es derivado de una parte del tejido del cuerpo fructfero por lo cual la seleccin del material del hongo con el que se va a trabajar es de suma importancia ya que debe dar al micelio una excelente viabilidad, un alto rendimiento de cuerpos fructferos de calidad superior y, si es posible, una gran adaptabilidad al medio ambiente. El crecimiento del cultivo puro del micelio en un plato de agar no es recomendado para su uso directo como medio de cultivo, este tiene que ser transferido para su crecimiento en un medio de cultivo especfico, que sea fcil de manejar, barato y conveniente para la inoculacin. En general, hay dos tipos de sustratos para el cultivo

del Lentinus. El primero es hecho por la inoculacin del micelio del hongo dentro de un medio de aserrn y el segundo es con trozos de madera (Chang; et al., 2004). Segn Chang; et al. (2004) el aserrn se debe tamizar para remover todas las impurezas y luego se mezcla con ingredientes suplementarios. Se disuelve agua con azcar y se roca sobre el sustrato extendido. La humedad de la mezcla es la adecuada cuando esta es apretada con la mano y el agua gotea levemente. Luego, la mezcla se deposita en botellas de cultivo o en bolsas de polipropileno. Se presiona hasta aplanar la superficie del medio y con una varilla en el centro del mismo se hace un hoyo de 1.52 cm. de dimetro para la inoculacin. Los contenedores son tapados con algodn y cubiertos con papel aluminio despus de ser inoculados. Luego de esto se debe inocular entre 24 a 25 C durante 30-40 das. El segundo tipo de sustrato para el Lentinus es hecho por la inoculacin del hongo dentro de cuas o piezas cilndricas de madera. Cuando el micelio ha crecido totalmente en las piezas de madera, estos pueden ser usados como el sustrato para el hongo (Chang; et al., 2004). Seguidamente se da la inoculacin de los troncos, los hoyos se realizan directamente en la madera y estos son preparados con la utilizacin de una herramienta adecuada para esta labor (taladro). El tamao adecuado del hoyo es entre 1-1.5 cm. de dimetro y 1.5 2 cm. de profundidad. Debe tenerse en cuenta que el hoyo debe estar 1 cm. por debajo de la corteza. La separacin entre hoyos hacia lo largo debe ser de 20 30 cm., adems debe existir una separacin a lo ancho de 5 6 cm. entre cada hoyo. Los hoyos son ordenados en patrones alternos creando espacios entre cada fila de 12 cm. de separacin (Bratkovich, 2004). De acuerdo a Bratkovich (2004), las esporas son tomadas de las botellas de cultivo o de las bolsas plsticas de polipropileno y se dividen en pequeas partes aproximadamente del tamao del dedo pulgar y con un peso aproximado de 1g, luego cada parte de las esporas son colocadas en cada hoyo. Se debe evitar que las esporas sean contaminadas por el polvo.

Los hoyos son sellados con un tapn del tamao correcto hecho de la corteza del tronco o de otro material. Se puede utilizar un taladro o un sacabocados para hacer los tapones. Estos deben ser ligeramente ms largos que el hoyo, para asegurar un buen sellado. El grueso del tapn es de 3 a 4 mm, los tapones que son muy delgados son aptos para perderse durante el secado y los que son muy gruesos tienden a entrar muy profundo en el hoyo. Los tapones de corteza deben ser obtenidos de rboles jvenes o de ramas donde la parte de madera es incluida. Estos tapones son golpeados ligeramente con un martillo dentro del hoyo, luego se sella con una capa de parafina para prevenir la contaminacin de otros hongos y adems para mantener constante el contenido de humedad (Chang; et al., 2004). Es importante mencionar que el micelio del Lentinus comienza a crecer vigorosamente cuando la temperatura se encuentra en 10C y se inhibe el crecimiento de microorganismos dainos por la baja temperatura. Cuando la temperatura alcanza los 20C el crecimiento del micelio es adecuado, por otro lado, a esta temperatura se da el desarrollo de microorganismos competidores para el micelio. Al mismo tiempo durante la esporulacin, la humedad relativa en el aire debe ser entre 70 y 80 % y no debe ser mayor al 85% ya que se puede dar una contaminacin mayor de los troncos (Chang; et al., 2004). Davis (1995) sugiere que luego de la inoculacin, los troncos deben ser colocados en un lugar con condiciones favorables para el desarrollo del micelio. Los principales requerimientos para el rpido y vigoroso crecimiento del micelio son:un correcto contenido de agua en los troncos y una apropiada temperatura alrededor de los troncos. Bajo condiciones naturales no hay que irrigar durante el crecimiento del micelio, por lo tanto, los troncos deben ser ordenados para prevenir la excesiva prdida por evaporacin. La seleccin del lugar de colocacin de los troncos es importante para el xito o el fracaso del cultivo, porque el lugar puede tener mucha influencia para el secado de los troncos. Esto significa que el sitio seleccionado debe localizarse hacia el sur o sureste con una leve inclinacin, con un 30% de la luz solar a travs de las ramas de los rboles, una buena ventilacin y una baja humedad (Bratkovich, 2004).

Bajo condiciones favorables, un micelio blanco comienza a crecer dentro del tapn alrededor de los 20 das despus de la inoculacin y luego de una forma lenta se extiende hacia adentro de los troncos. El esparcimiento del micelio es lento en un estado inicial, pero este se convierte ms vigoroso y alcanza la colonizacin a travs del interior del tejido del tronco. Despus de 40-50 das de la inoculacin, el micelio blanco crece desde el cambium y se puede observar en ambos lados del final del tronco (Davis, 1995). Segn Davis (1995), luego que el micelio se ha desarrollado totalmente en los troncos, estos deben ser transferidos a otro lugar con diferentes condiciones del medio, esto para la estimulacin de la fructificacin. La localizacin apropiada para el desarrollo de los cuerpos fructferos debe ser ms hmeda y con menos ventilacin que el lugar pasado. Para la estimulacin de la fructificacin de los hongos, los troncos son ordenados en posicin vertical por la inclinacin de las filas, uno u otro en uno de los lados o en ambos lados alternamente en diferentes soportes. El mtodo de ordenamiento de los troncos permite un conveniente manejo y una fcil cosecha. El desarrollo de los hongos en este nivel requiere de mucha humedad durante su crecimiento vegetativo. El cultivo debe ser cuidadosamente sombreado y el porcentaje de humedad debe mantenerse alto. Bajo condiciones naturales depende del tipo de rbol usado, despus de que los troncos son removidos de la inmersin en agua, los cuerpos fructferos aparecern (Chang; et al., 2004). En promedio, se pueden obtener tres cosechas por tronco por ao. Con este mtodo es posible obtener hongos de los troncos por 6 aos, pero el rendimiento al quinto ao es generalmente bajo, no obstante; un periodo de uso de 3 aos de produccin es una prctica normal (Chang; et al., 2004). De acuerdo con Chang; et al., (2004), el rendimiento en fresco del Lentinus a travs del tiempo de vida natural de los troncos puede ser como mucho hasta un 35% y en promedio es alrededor de 15-20%. El tiempo de cosecha depende de la naturaleza del producto deseado, por ejemplo, para el hongo fresco, la cosecha se realiza cuando

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el 50-60% del sombrero esta abierto, para hongos deshidratados se cosecha con un 7080% del sombrero abierto.

3.4 CULTIVO EN BOLSAS DE POLIPROPILENO Como se ha mencionado, el Lentinus ha sido tradicionalmente cultivado en troncos de madera dura en un ambiente natural, pero una alternativa ha sido el desarrollo de tcnicas de cultivo que permiten una produccin ms intensa. Muestra de ello es la utilizacin del sustrato obtenido de la mezcla de aserrn con otros ingredientes, y con un crecimiento controlado o semi controlado de las condiciones del ambiente (Chang; et al., 2004). Se pueden mencionar dos caractersticas especiales del mtodo de cultivo de hongos en bolsas plsticas, estas pueden ser generalizadas en: 1. Los materiales usados para hacer los troncos sintticos son principalmente aserrn y otros productos o remanentes agrcolas, como por ejemplo desechos de caf, cscaras de semillas de girasol y cscaras de semillas de algodn, las cuales son abundantes y se encuentran disponibles en la mayor parte del mundo. 2. Este mtodo acorta el tiempo de produccin y da un alto rendimiento. En troncos sintticos, los hongos pueden ser cosechados alrededor de los 60-80 das despus de la inoculacin. Esto es 5 meses ms temprano que los hongos cultivados en troncos naturales. El proceso completo de cosecha toma menos de 8 meses el cual se acorta en 1
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a 2 aos comparado con el mtodo natural.

Bajo condiciones semicontroladas y controladas, la eficiencia biolgica puede alcanzar un promedio del 80%. Esto significa que de 100 Kg. de aserrn con suplementos, se puede producir 80 Kg. de hongos frescos. Los materiales usados para el cultivo del Lentinus son bolsas de polipropileno adems de varias elementos usados como sustratos para el crecimiento del Shiitake. La bolsa debe ser de polipropileno porque este polmero soporta las temperaturas requeridas en el autoclavado (121C). El tamao de la bolsa que comnmente se utiliza es de 15 x 30 cm. Las botellas de vidrio pueden tambin usarse para el cultivo del hongo en un sustrato sinttico debido a que estos sirven como contenedores 11

resistentes de temperatura. El principal constituyente del sustrato es el aserrn de diferentes tipos de maderas, pero el salvado de arroz, de maz y CaCO3 son tambin incluidos. Otras fuentes de celulosa, hemicelulosa y lignina como hojas de t, cscaras de semillas de algodn y girasol y desechos de caf, pueden ser utilizadas en diversas combinaciones con aserrn o sin l (Chang; et al., 2004). De acuerdo con Albert (2003), los tipos comunes de aserrn contienen, usualmente, pequeas piezas de madera y otro tipo de materiales duros. Consecuentemente, el aserrn debe ser tamizado para remover pedazos duros e indeseados que pueden perforar la bolsa cuando estas son llenadas. Tales perforaciones pueden permitir la entrada de hongos nocivos y contaminantes al sustrato. Todos estos materiales deben estar frescos y secos. La mezcla del sustrato debe ser colocada en contenedores resistentes al calor, comnmente en bolsas de polipropileno de 30 x 15 cm., luego se debe presionar suavemente dentro de la bolsa, dndole forma de tronco, posteriormente se esteriliza a 121C por una hora. Cuando el contenido de los contenedores se haya enfriado, el inculo es despositado en la superficie del sustrato. El sustrato inoculado es incubado entre 20 y 25C en la oscuridad durante 3 a 6 meses, esto dependiendo del sustrato y del inculo utilizado (Albert, 2003). Chang; et al., (2004) menciona que durante la expansin del micelio, este secreta enzimas que degradan sustancias complejas en el compost, como la lignina, celulosa y hemicelulosa, en pequeas molculas solubles, las cuales pueden ser absorbidas por el micelio en crecimiento y usadas como nutriente para ayudar al crecimiento del micelio. Si inicialmente el tronco artificial se encuentra listo para la fructificacin, el plstico de la bolsa debe ser removido completamente y el tronco que queda debe invertirse y colocarse en un lugar hmedo o en una superficie mojada durante un da. Despus de dos o tres das el tronco debe ser reinvertido y colocado en estantes. A este tiempo empezarn a aparecer, en la parte superior de la bolsa, pequeas cabezas con coloracin oscura. Despus de inducir la fructificacin, tres o cuatro das despus los hongos podrn ser cosechados. (Chang; et al., 2004).

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Segn Albert (2003) bajo condiciones normales los troncos artificiales no necesitan ser regados, despus de la iniciacin de las cabezas del hongo porque el contenido de humedad del compost es usualmente alrededor del 70%. Si el contenido de humedad baja entre 60% y 50%, la bolsa debe ser regada, sin embargo la productividad se ver afectada.

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4 MATERIALES Y MTODOS Las actividades que se llevaron a cabo para la realizacin del proyecto se describirn en los siguientes pasos:

4.1 PREPARACIN DEL AGAR PAPA DEXTROSA (APD): Para la preparacin del Agar- Papa Dextrosa, se us una marca comercial (DIFCO) que viene lista para ser preparada en Laboratorio.

4.1.1 Aislamiento de la cepa A partir de una cepa madre, se obtiene el material de reproduccin del hongo esto se realiza a travs del micelio. El cultivo madre puede replicarse una vez por semana, mientras este se encuentre a una temperatura entre los 20 y 25C puede permanecer por un perodo de dos meses.

4.1.2 Preparacin del sorgo para propagacin del micelio. Se dej remojando aproximadamente 4 Kg. de sorgo en agua destilada durante 24 horas. Este mismo da se lavaron las botellas con jabn neutro y agua destilada, posteriormente se dejaron secando en el horno durante un da. Al da siguiente, se cocin el sorgo durante 30 minutos, se escurri y se dej enfriar (Figura 1). Luego se llenaron partes de cada botella con sorgo, se taparon con algodn (Figuras 2 y 3), se recubrieron con papel celofn transparente, se sujetaron con una liga y se cubrieron con papel aluminio. Finalmente, se colocaron las botellas en el autoclave por una hora.

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Figura 1, 2 y 3. Sorgo escurrindose luego de ser cocinado durante 30 minutos y la preparacin de las botellas a inocular con el micelio del hongo Shiitake.

4.1.3 Inoculacin del sorgo. La inoculacin se realiz en un cuarto limpio, preferiblemente en una cmara de flujo laminar. El inoculador debe de mantener la asepsia durante el proceso, debe lavarse las manos con agua, jabn y alcohol etlico al 70%. Los materiales con los que se van a trabajar (botellas con sorgo, alcohol etlico al 70%, cepa, cuchilla, mechero) deben encontrarse en la cmara. Se asperj la cuchilla con alcohol y se flame antes de cada corte e inoculacin. Se destapa la caja petri, se introduce la cuchilla y se corta un trozo de 1cm. Se abre la botella con el sorgo, se flamea la boca, se introduce el corte y se tapa con la mecha, el celofn y el papel aluminio. Este proceso se repite hasta terminar de inocular todas las botellas preparadas. Por ltimo, se coloca en la incubadora o un lugar oscuro a temperatura ambiente durante 15 das. Como se muestra en la figura 4, el sorgo deber quedar colonizado con el micelio del hongo Shiitake.

Figura 4. Micelio del hongo Shiitake inoculado en el sorgo. 15

4.2 PREPARACIN E INOCULACIN DE TRONCOS. Se evaluaron 3 tipos de madera: Melina (Gmelina arborea), Eucalipto (Eucaliptus camaldulensis) y Sotacaballo. (Zygia latifolia). Los troncos deben presentar condiciones ptimas para el desarrollo del hongo, por ejemplo debe estar libre de pudriciones, agujeros o plagas ya que en este estado el tronco es ms susceptible al ataque de otras plagas como hormigas y comejn (Figura 5). Se deben escoger troncos recin cortados por el alto porcentaje de humedad que poseen; estos deben limpiarse con un cepillo y agua para eliminar el musgo y ramas pequeas. Si los troncos presentaran alguna herida esta debe ser sellada con la cera de abeja para que no se de ningn problema de contaminacin durante el proceso de crecimiento.

Figura 5. Troncos seleccionados para la inoculacin del micelio.

El lugar en el que se debe realizar la inoculacin debe ser amplio, limpio y bajo techo. Como se muestra en la figura 6, para hacer los agujeros se va a usar un taladro con una broca de 11/2 pulgada de largo por 1/2 pulgada de grosor, los agujeros no deben ser de ms de 3 cm de profundidad. La broca debe ser esterilizada cada vez que se realice una perforacin en el tronco, sumergindola en alcohol etlico al 70% y flamendola posteriormente.

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Figura 6. Perforacin del tronco de Sotacaballo para la inoculacin.

Despus de realizar cada agujero, este debe inocularse inmediatamente, agregando el sorgo hasta llegar al borde del hoyo (al ras de la superficie) este proceso se puede observar en la figura 7,8 y 9, luego se utiliza un hisopo de esponja esterilizada para sellarlo con cera de abeja derretida para evitar la contaminacin por agentes externos (Figura 10 y 11). Es importante mencionar que durante el proceso se debe de esterilizar la esptula antes de cada inoculacin y evitar el menor contacto con la superficie del tronco.

Figuras 7, 8 y 9. Proceso de inoculacin con el micelio del hongo Shiitake del tronco de Sotacaballo.

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Figuras 10 y 11. Sellado de hoyos con cera de abeja y tronco de eucalipto despus de inoculado y sellado.

La cantidad de agujeros por tronco va a depender del dimetro del mismo, sin embargo el promedio para un tronco de 1m de largo es de 7 agujeros por fila y de 5 a 6 filas por tronco (generalmente siembra 5cm entre surco o fila y 14cm entre agujero).

4.2.1 Ubicacin de los troncos Luego de inoculados los troncos estos deben colocarse en un lugar con buena ventilacin, alta humedad y baja luminosidad. Es importante mencionar que los troncos no pueden estar en contacto directo con el suelo esto para reducir el riesgo de contaminacin, lo ideal es colocarlos en una estructura de metal (Figura 12) que permita que el tronco se encuentre durante los primeros meses de crecimiento en posicin horizontal y antes de la fructificacin en posicin vertical.

Figura 12. Estructura metlica donde se colocaron los troncos una vez inoculados. 18

4.3 PREPARACIN DEL SUSTRATO DE ASERRN Y NUTRIENTES CON Y SIN EM. La elaboracin del sustrato se realiz con 100 Kg. de aserrn, 5 Kg. de salvado de arroz, 2 Kg. de azcar granulada, 5 Kg. de carbonato de calcio, 200 gramos de sulfato de magnesio con 7 aguas y 1 Kg. de sulfato de calcio (Ver Anexo 4, figura 3, 4 y 5). . Como se observa en el anexo 4 en las figuras 6,7 y 8, con todos estos materiales se elabor una mezcla homognea con una humedad del 50- 60 %. Se separ el aserrn en dos lotes de 50 Kg. y se agreg agua con EM activado al 2% a uno de ellos y al otro solo agua. En ambos casos, la humedad se ajust entre 50 y 60%. Seguidamente, se llenaron las bolsas de polipropileno con un 1 Kg., del sustrato de aserrn con EM al 2% y sin l, asegurndose que quedaran bien compactadas. Posteriormente, se esterilizaron las bolsas en un autoclave para proceder a inocularlas una vez que estuvieran fras (Ver Anexo 4, Figura 9). Para la inoculacin se abrieron las botellas que contenan el micelio (Anexo 4, Figura 10). Se prepararon las bolsas con el sustrato para que estas no permanecieran por mucho tiempo expuestas a la contaminacin. Con un asa, previamente esterilizada y flameada con alcohol etlico al 70%, se depositaron aproximadamente 10 gr. del micelio en cada bolsa con sustrato. Luego se taparon las bolsas inoculadas con papel peridico previamente autoclavado y secado, asegurndose el cierre con una liga en la parte superior de cada bolsa.

4.3.1 Seleccin del sitio para la fructificacin La seleccin del lugar se hizo tomando en cuenta las mejores condiciones para el desarrollo del micelio. Las bolsas con el micelio se colocaron en un vivero ubicado en las instalaciones de las residencias estudiantiles. La infraestructura usada fue muy sencilla .Entre los materiales empleados estn: madera, zarn y un techo de plstico. Las bolsas se colocaron sobre unas mesas hechas de hierro.

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5 RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1 PRODUCCIN EN TRONCOS Al realizar el primer muestreo a las 12 semanas de haber inoculado los troncos, los micelios que lograron desarrollarse fueron los que se inocularon en los troncos de Eucalipto. Esto se puede observar en el la Figuras 13 y 14, donde se muestra, en un corte transversal, la expansin del micelio (color blanco) hacia el centro del tronco y una vista de la colonizacin en el extremo izquierdo del tronco. Cabe resaltar que en el Sotacaballo y la Melina el micelio no logr establecerse por el ataque de insectos que penetraron la capa de cera y consumieron el sorgo inoculado (Figura 15 y 16).

Figuras 13 y 14. Corte y vista transversal de tronco de Eucalipto mostrando el desarrollo del micelio del hongo Shiitake a las 5 semanas de inoculado.

El desarrollo del micelio en los troncos de Eucalipto puede obedecer a su efecto aleloptico. Espinosa, (1996) hace referencia a que las hojas y cortezas de estos rboles contienen numerosos cidos fenlicos, flavonoides, taninos y monoterpenoides los cuales tienen propiedades fitotxicas e insecticidas. Adems menciona que estos compuestos aleloqumicos se pueden liberar naturalmente de todo tipo de tejidos del tronco, ya sean vivos o muertos, y su capacidad de liberacin depende de la parte del rbol as como de la especie del mismo. Por esta razn, puede ser, que el ataque de 20

hormigas y tijeretillas no afect directamente al desarrollo del micelio en los troncos de Eucalipto.

Figuras 15 y 16. Ataque de insectos en troncos de Melina y Sotacaballo.

Otro factor que pudo evitar el crecimiento del micelio son las condiciones climticas, ya que durante la etapa de incubacin los troncos estuvieron expuestos a grandes variaciones del clima. Esto puede deberse a que a mediados del mes de junio, segn los datos obtenidos en la estacin meteorolgica de la Universidad EARTH, hubo 10 das continuos de sequa por lo que los troncos de Melina y Sotacaballo, pudieron haber perdido un alto porcentaje de humedad. Segn Davis (1995), el contenido ptimo de humedad de los troncos debe estar entre 40 y 45 %. Si es menor al 40% el crecimiento del micelio se ver reducido y si es menor al 20%, el micelio no podr crecer. Posteriormente a esta sequa vino una temporada de lluvias cortas de alta intensidad, por lo que el golpe de las gotas de lluvia posiblemente hizo que muchos de los sellos de cera se aflojaran y cayeran permitiendo la contaminacin del micelio y facilitando la entrada de insectos. Durante la etapa de inoculacin, dos troncos de Sotacaballo y uno de Melina se contaminaron, esto fue evidente a los dos da de inoculados tras la formacin de unas esporas de color negro alrededor de cada hoyo. Esto pudo deberse a errores cometidos durante el proceso metodolgico como una inadecuada esterilizacin de los instrumentos utilizados o un mal sellado de los troncos. 21

5.2

ESTABLECIMIENTO DEL HONGO SHIITAKE EN BOLSAS DE ASERRN INOCULADAS CON NUTRIENTES En la figura 17, se puede observar el aumento de las bolsas de aserrn con un

desarrollo del ms del 50% del micelio del hongo Shiitake durante las 8 semanas de evaluacin. Cabe destacar que el tratamiento sin EM al 2% tuvo al final de la

evaluacin 6 bolsas ms que el tratamiento con EM al 2%(Ver Anexo 4, Figura 1 y 2). Suponemos que esto se dio porque el EM retard el desarrollo del micelio. Esto pudo suceder porque cuando se aplic al sustrato de aserrn el EM, ste origin una mayor cantidad de microorganismos, los cuales no se eliminaron definitivamente en el proceso de esterilizacin quizs por no haber dejado el sustrato el tiempo necesario en el autoclave, por lo que a la hora de la inoculacin, el micelio tuvo que competir con otros microorganismos para poder establecerse.

16 Bolsas con ms del 50% de micelio desarrollado 14 12 10 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Semanas evaluadas Con EM al 2% Sin EM

Figura 17. Nmero de bolsas de sustrato enriquecido con nutrientes con ms del 50% del desarrollo del micelio del hongo Shiitake en un tratamiento con EM al 2% y uno sin EM, evaluado durante 8 semanas.

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Otro factor importante es que durante el proceso de compostaje, la mxima temperatura que alcanz el sustrato con EM al 2% fue de 44C y para el sustrato sin EM, la temperatura alcanzada fue de 49C. En este ltimo tratamiento se pudo dar una mayor eliminacin de microorganismos lo que facilit el proceso de esterilizacin del sustrato a pesar de no haberse realizado durante el tiempo adecuado; en cambio, en el primer tratamiento, al alcanzar una temperatura menor, puedo ser que los microorganismos resistieran esta temperatura y que durante el proceso de esterilizacin no se eliminaran totalmente y compitieran con el micelio. Esto podra explicar, en parte, la razn por la cual el nmero de bolsas desarrolladas en el caso del sustrato con EM al 2% fue menor que en el tratamiento testigo (sin EM). A pesar que se obtuvo una baja cantidad de bolsas con ms del 50% del micelio desarrollado (14 para el tratamiento sin EM y 8 para el tratamiento con EM al 2%) cabe destacar que an se encuentran en etapa de crecimiento 12 bolsas para el tratamiento sin EM y 7 bolsas para el tratamiento con EM al 2%, esto se debe a que el micelio no tiene el mismo comportamiento a la hora de desarrollarse en cada bolsa por lo que puede tener diferencia de tiempo de desarrollo entre bolsas del mismo lote. En cuanto a los resultados obtenidos por la contaminacin de las bolsas de sustratos enriquecidos con nutrientes en los dos tratamientos durante 8 semanas de evaluacin, se obtuvo por medio de la regresin lineal de los resultados (Figura 18) que el nmero de bolsas contaminadas por semana, en el tratamiento con EM al 2%, es de cinco en promedio, asimismo se puede observar en la ecuacin del tratamiento sin EM que se contaminaban tres bolsas por semana, sin embargo, al no existir diferencia significativa se puede decir que cualquiera de los dos mtodos se pudieron contaminar durante el proceso por las mismas razones.

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45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 Semanas Tratamiento sin EM Linear (Tratamiento con EM) y = 2.9643x + 1.7857 R2 = 0.8982 y = 4.8571x - 0.1071 R2 = 0.9317

Contaminadas

Tratamiento con EM Linear (Tratamiento sin EM)

Figura 18. Nmero de bolsas que se contaminaron durante el proceso de desarrollo del micelio del hongo Shiitake en tratamiento con EM al 2% y tratamiento sin EM durante 8 semanas.

Como se mencion anteriormente, en ambos tratamientos hubo una alta incidencia en la contaminacin de las bolsas inoculadas. El primer factor que pudo ser el causante de esta contaminacin es el insuficiente tiempo (60 minutos) de esterilizacin del sustrato en la autoclave, ya que segn la investigacin realizada por Cisterna (2004) donde compara las ventajas y desventajas de la esterilizacin y pasteurizacin para sustratos en el cultivo de hongos, menciona que para el Shiitake se debe realizar una esterilizacin en autoclave a una temperatura de 121C durante 90150 minutos. Tambin durante el proceso de esterilizacin por la alta temperatura y la presin a las que se sometieron las bolsas, se pudieron crear micro perforaciones que permitieron la entrada de agentes contaminantes. Adems, algunas bolsas se pegaron entre s, por lo que a la hora de separarlas existi la posibilidad de que se formaran pequeas fisuras. Otro factor que pudo aumentar la posibilidad de contaminacin es la falta de prctica para la inoculacin, que se vio reflejada en un lento procedimiento, que 24

aument el tiempo de exposicin del inculo y del sustrato con los microorganismos del medio, al mismo tiempo, se pudo dar una mala esterilizacin de los instrumentos contaminando el sustrato entre cada inoculacin realizada. Por ltimo, en el campo se dio la contaminacin de tres bolsas debido a que la liga se revent esto pudo obedecer a las altas temperaturas a que fueron expuestas en el autoclave por lo que el papel peridico se cay, permitiendo la entrada de otro tipo de microorganismos.

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6 CONCLUSIONES

De las tres maderas evaluadas, el eucalipto es la nica especie que permiti el establecimiento y desarrollo del micelio del hongo Shiitake en el Trpico Hmedo.

La utilizacin de EM al 2% en el compostaje del sustrato de aserrn, no tuvo ninguna diferencia significativa en el efecto en el desarrollo del micelio del hongo Shiitake en comparacin con el tratamiento sin EM.

La contaminacin de las bolsas fue muy alta en ambos tratamientos durante el proceso de establecimiento del sistema, por lo que la eficiencia del mismo es baja.

Durante el establecimiento del sistema en troncos de madera surgieron factores externos, principalmente climticos, que no pudieron ser controlados, por lo que estos, en determinado momento, afectaron el desarrollo adecuado del micelio.

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7 RECOMENDACIONES

El sorgo para el establecimiento del micelio debe ser cocinado durante 30 minutos mximo, para evitar que pierda su estructura y para facilitar su manejo durante la inoculacin.

Para la inoculacin de los troncos de madera se recomienda evaluar el uso de otros sustratos tales como el aserrn con semolina de arroz o trigo para facilitar el sellado de los agujeros en donde se realiza la inoculacin.

Las botellas de vidrio utilizadas en la propagacin del micelio deben tener la boca de un dimetro mayor que facilite la extraccin del inculo.

Se recomienda utilizar parafina, en lugar de cera de abeja, para el sellado de los hoyos en los troncos, debido a que este material es ms resistente al golpe de la lluvia y al ataque de los insectos.

Es importante que los materiales (bolsas, ligas y argollas plsticas) que se vaya a esterilizar en el autoclave sean resistentes a las altas temperaturas a las que se someten, ya que muchas veces estos reducen su tamao original.

Se recomienda el uso de pabilo para cerrar las bolsas despus de ser inoculadas, ya que las ligas se rompen con facilidad.

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8 BIBLIOGRAFA CITADA Albert, E. 2003. Hongos medicinales (en lnea). s.l., INTECH. Consultado 22 oct. 2005. Disponible en http://www.iib.unsam.edu.ar/IIBINTECH/html/laboratorios/micologia/micologia.htm Bratkovich, S. 2004?. Shiitake mushroom production: obtaining spawn, obtaining and preparing logs, and inoculation (en lnea). Ohio State University. Consultado 24 oct. 2005. Disponible en http://ohioline.osu.edu/for-fact/0040.html Cisterna, C. 2004. Esterilizacin vs pasteurizacin en sustratos de cultivo (en lnea). Micotec Talca, CL. Consultado 10 oct. 2005. Disponible en http://www.micotec.cl/Pasteurizacion_vs_Esterilizacion.pdf Chang, S; Miles, P. 2004. Mushrooms: cultivation, nutritional value, medicinal effect, and environmental impact. 2 ed. Boca Ratn, US. 464 p. Davis, J. 1995. Producing shiitake mushrooms: a guide for small scale outdoor cultivation on logs (en lnea). North Carolina Cooperative Extension Service. Consultado 24 oct. 2005. Disponible en http://www.ces.ncsu.edu/nreos/forest/woodland/won-20.html Espinosa, F. 1996. Revisin sobre la alelopata de Eucalyptus LHerit (en lnea). Mxico, MX; Universidad Nacional Autnoma. Consultado 10 oct. 2005. Disponible en http://www.socbot.org.mx/publicaciones/boletin/bolres58e.html Garca, M. 1987. Cultivo de setas y trufas. Madrid, ES. Mundi- Prensa. 130 p. Lora, M. 2000.. Mercado internacional del hongo shiitake (en lnea). s.l., INDAP Consultado 20 mar. 2005. Disponible en http://serinfo.indap.cl/doc/mercado%20%internacional%20del%20hongo%20shiitake.doc Medina, R. 2004. Produccin de hongos comestibles (en lnea). Consultado 3 mar. 2005. Disponible en http://www.micotec.cl/prodcuccion%20mundial.pdf

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Staments, P; Chilton, JS. 1983. The mushroom cultivator: a practical guide to growing mushrooms at home. Washington, US, Agarikon Press. 431 p. Vicobos. Seccin de nutricin: las setas y el hombre (en lnea). s.n.t. Consultado 27 mar. 2005. Disponible en http://usuarios.lycos.es/vicobos/nutricion/setas/setas3.html

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9 ANEXOS

Anexo 1. Valor nutricional por cada 100 gr. De hongo Shiitake: 39 caloras 15-35% protenas 7.3 g. carbohidratos 0.8 g. fibra 0.8 mg. tiamina (53% cdr) 0.5 mg. riboflamina (29% cdr) 5.5 mg. niacina (27.5% cdr) Alto contenido en vitamina D (200iu. 50%) Anexo 2. Constituyentes Activos del Shiitake Los principales componentes qumicos del hongo, son los siguientes: Eritadenina Hipolipidmico C-1-2 (polisacrido) Inmunoactivo Lectina Inmunoactivo Lentinan (poliacrido) Inmunoactivo Emitanina (polisacrido) Inmunoactivo EP3 (lignina) Antiviral, inmunoactivo KS-2, KS-2-B Antiviral, inmunoactivo (pptido) antibacterial Poli ribonucletidos Inmunoactivo Ac2p (polisacrido) Antiviral FBP (protena) Antiviral Thioprolina (TCA) Eliminador de nitritos (aminocido)

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Anexo 3. Clasificacin biolgica del hongo.

Reino: Divisin: Sub-divisin: Clase: Sub-clase: Orden: Familia: Gnero: Espcie:

Fungi Eumycota Basidiomycota Hymenomycetes Holobasidiomycetidae Agaricales Tricolomataceae Lentinula L. edodis

Anexo 4. Fotos.

Figura 1. Colonizacin del micelio del Hongo Shiitake en la bolsa del tratamiento sin EM.

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Figura 2. Colonizacin del micelio del hongo Shiitake en la bolsa del tratamiento con EM al 2%.

Figura 3. Aserrn utilizado para la elaboracin del sustrato enriquecido con nutrientes.

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Figura 4. Aplicacin de los nutrimentos al aserrn.

Figura 5. Mezcla del aserrn con los nutrimentos.

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Figura 6. Aplicacin de agua al aserrn.

Figura 7. Mezcla para homogenizar la humedad en el sustrato.

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Figura8. Cubierta plstica para proteger el sustrato durante el proceso de compostaje.

Figura 9. Bolsas esterilizadas con sustrato de aserrn enriquecido con nutrientes.

Figura 10. Inoculacin de las bolsas de aserrn con el micelio del hongo Shiitake.

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