UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS ESCOLA DE VETERINRIA Colegiado dos Cursos de Ps-Graduao

MANEJO NUTRICIONAL E SUPLEMENTAO DIETTICA COM CROMO EM EQUINOS MANGALARGA MARCHADOR EM PROVA DE MARCHA

LILIAN DE REZENDE JORDO

Belo Horizonte Escola de Veterinria - UFMG 2009

LILIAN DE REZENDE JORDO

MANEJO NUTRICIONAL E SUPLEMENTAO DIETTICA COM CROMO EM EQUINOS MANGALARGA MARCHADOR EM PROVA DE MARCHA

Dissertao apresentada Escola de Veterinria da Universidade Federal de Minas Gerais, como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Zootecnia. rea de Concentrao: Produo Animal Orientadora: Prof. Dra. Adalgiza Souza Carneiro de Rezende

Belo Horizonte Escola de Veterinria - UFMG 2009

J82m

Jordo, Lilian de Rezende, 1981Manejo nutricional e suplementao diettica com cromo em eqinos Mangalarga Marchador em prova de marcha / Lilian de Rezende Jordo. - 2009. 101 p. : il. Orientador: Adalgiza Souza Carneiro de Rezende Dissertao (mestrado) Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinria Inclui bibliografia 1. Mangalarga (Cavalo) Alimentao e raes Teses. 2. Cromo na nutrio animal Teses. 3. Dieta em veterinria Teses. I. Rezende, Adalgiza Souza Carneiro de. II. Universidade Federal de Minas Gerais. Escola de Veterinria. III. Ttulo. CDD 636.108 5

Dissertaodefendidae aprovadaem 27 de Abril de 2009, pela ComissoExaminadora constitudapor:

--/ib

Prof. Dr. FernandoQueiroz de Almeida

Dedico este trabalho aos meus pais, Marlene e Adalberto.

AGRADECIMENTOS

Aos meus queridos pais Marlene e Adalberto que me ensinaram o valor da educao e sempre batalharam para me dar amor, sade e conhecimento. Ao meu irmo Atila que sempre me ajudou nos momentos que mais precisei e minha av materna Yara (in memorian) pelo carinho e por sua delicadeza. minha madrinha Tia Dalva e Tia Beatriz (in memorian), obrigada pelo amor e carinho constantes, mesmo distncia. Amo muito as senhoras. professora Adalgiza, no s pelos ensinamentos passados com tanta dedicao nesse tempo de convvio, mas pelo envolvimento e empenho no desenvolvimento deste projeto. Ao meu namorado e companheiro Hlio, que sempre esteve ao meu lado, me apoiando nos meus momentos de alegria e tristeza, nos meus sonhos e projetos... Obrigada por me acompanhar nessa verdadeira viagem que a vida!!! Universidade Federal Fluminense (UFF), instituio onde me graduei em Medicina Veterinria, e a todos os professores que realmente se empenharam em vencer as dificuldades, contribuindo com minha formao pessoal e profissional. Obrigada pelos ensinamentos, bons momentos, pela amizade e por acreditar que somos capazes. Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), pelo acolhimento e inmeras oportunidades concedidas. famlia do Sr. Joo Carlos Penna de Arajo Moreira, em especial aos irmos Dalton e Dario, por ter gentilmente cedido os animais para este trabalho, pela hospitalidade, carinho e interesse. Muito obrigada! Aos funcionrios da fazenda Santa Helena que muito colaboraram na realizao da etapa experimental. Aos professores ngela, Walter, Marlia, Elosa Saliba, Fernando Almeida (UFRRJ), Dalton, Danusa (Ed. Fsica UFMG), Fabola, dentre outros, que sempre se mostraram dispostos a ajudar e me ensinaram bastante. Aos estudantes de graduao, Patrcia Moss, e de ps, Raquel Moura, Vinicius Pimentel, Lindomrcia Costa, por todo o apoio durante o planejamento, fase experimental e anlises. Ao Seu Joo e famlia, obrigada por me fazerem sentir em casa. Vocs esto em meu corao.

 Heloisa, da secretaria do colegiado de ps-graduao em zootecnia, por ser uma profissional exemplar, por sua simpatia, capacidade de lidar com as pessoas e competncia. Aos funcionrios do Laboratrio de Nutrio Animal da Escola de Veterinria da UFMG (Toninho, Kelly, Marcos, Heloisa) pela ajuda nas anlises laboratoriais. Aos professores, colegas e funcionrios do Departamento de Zootecnia da UFMG. CAPES, pela bolsa concedida e FAPEMIG pelo suporte financeiro para realizao deste trabalho. empresa Tortuga Cia. Zootcnica Agrria pelo apoio financeiro e doao dos produtos utilizados no experimento, e tambm ao Dr. Neimar Severo da ABS PecPlan; ao B.E.T. Laboratories Endocrinologia Veterinria e ao Leonardo Santos de Freitas da Bioclin Quibasa Qumica Bsica pelo apoio concedido. Aos funcionrios e a todos que contriburam direta ou indiretamente para a minha formao.

Muito Obrigada!!!

"A mudana a lei da vida. " JOHN F. KENNEDY

"Todo grande progresso da cincia resultou de uma nova audcia da imaginao." JOHN DEWEY

SUMRIO
1 2
2.1 2.2 2.2.1 2.2.1.1 2.2.2.2 2.2.1.3 2.2.1.4 2.2.1.5 2.2.2

INTRODUO........................................................................................... REVISO DE LITERATURA................................................................

A PROVA DE MARCHA DA RAA MANGALARGA MARCHADOR... AVALIAO DO DESEMPENHO ATLTICO DE EQUINOS.................. Parmetros Bioqumicos.................................................................................. Insulina............................................................................................................ Cortisol............................................................................................................ Glicose Sangunea........................................................................................... Lactato Sanguneo........................................................................................... Glicerol e Triacilglicerol Plasmticos............................................................ Parmetros Clnicos de Avaliao do Desempenho Atltico de Equinos............................................................................................................ 2.2.2.1 2.2.2.2 2.2.2.3 2.3 2.4 Frequncia Cardaca....................................................................................... Frequncia Respiratria.................................................................................. Temperatura Retal........................................................................................... ESTRATGIA NUTRICIONAL PARA AUMENTAR O SUPRIMENTO DE GLICOSE SANGUNEA DURANTE O EXERCCIO............................ SUPLEMENTAO DIETTICA COM CROMO.......................................

19 20
20 22 23 23 24 24 25 27 27 27 29 30 33 34

3
3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.5.4 3.5.5 3.5.6 3.6

MATERIAL E MTODOS......................................................................
LOCAL, ANIMAIS, INSTALAES E DIETA........................................... TRATAMENTOS............................................................................................ PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL.......................................................... ESTIMATIVA DA DIGESTIBILIDADE IN SITU DOS ALIMENTOS....... PROCESSAMENTO LABORATORIAL DAS AMOSTRAS....................... Hemograma...................................................................................................... Protenas Totais, Albumina, Globulinas e Relao Albumina / Globulina..... Insulina e Cortisol............................................................................................ Glicose e Lactato............................................................................................. Triacilgicerol e Glicerol Plasmticos............................................................... Anlise Qumica da Dieta e das Fezes............................................................. CLCULOS....................................................................................................

37
37 39 40 42 42 43 43 43 43 43 44 44

3.7

ANLISE ESTATSTICA..............................................................................

45

4
4.1 4.2 4.2.1 4.4.2 4.2.3 4.2.4 4.2.5 4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3

RESULTADOS E DISCUSSO..............................................................
PARMETROS AMBIENTAIS..................................................................... PARMETROS BIOQUMICOS................................................................... Glicose............................................................................................................. Lactato............................................................................................................. Insulina e Relao Insulina : Glicose............................................................... Cortisol............................................................................................................. Glicerol e Triacilglicerol Plasmticos.............................................................. PARMETROS CLNICOS........................................................................... Frequncia Cardaca........................................................................................ Frequncia Respiratria e Temperatura Retal................................................. Peso Semanal e Eficincia Alimentar..............................................................

46
46 48 48 53 55 57 58 61 61 67 70

5 6

CONCLUSES........................................................................................... REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................... ANEXOS.......................................................................................................

74 74 88

LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Mdias desvio padro da glicemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 23,90 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle............................................................................................... Figura 2 Mdias desvio padro da lactatemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 25,30 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle............................................................................................... Figura 3 Mdias desvio padro da insulinemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 64,81 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle............................................................................................... Figura 4 Mdias desvio padro da cortisolemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 43,70 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle............................................................................................... Figura 5 Mdias desvio padro do triacilglicerol plasmtico de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 42,84 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.................................................................. 59 57 55 53 49

10

Figura 6

Mdias desvio padro do glicerol plasmtico de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 55,56 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.................................................................................... 59

Figura 7

Freqncia cardaca (bpm) de equinos MM durante a prova de marcha (P<0,0001). FC_obs = FC observada e FC_est = FC estimada. t = momento da prova em minutos...................................................................... 64

Figura 8

Freqncia cardaca (bpm) de equinos MM durante a recuperao (P<0,01). FC_obs = FC observada e FC_est = FC estimada. t = momento da prova em minutos...................................................................................... 64

Figura 9

Mdias desvio padro da frequncia respiratria de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 13,43 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle. ............................................................... 68

Figura 10

Mdias desvio padro para glicose sangunea de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 2,50 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.................................................................................... 68

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LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resumo dos efeitos anablicos da insulina na glicose sangnea: Captao de glicose pelas clulas e estocagem como glicognio e triacilgliceris (Adaptado de Champe et al., 2006 e Lehninger, 2007).................................. Tabela 2 Tabela 3 Tabela 4 Composio do concentrado* e volumoso oferecido para as guas durante o experimento................................................................................................. Rodzio dos animais ao longo das diferentes provas. Os nmeros romanos representam os animais................................................................................... Temperatura ambiente (TA), umidade relativa do ar (UR), ndice de temperatura e umidade (ITU), ndice de temperatura de globo e umidade (ITGU), temperatura de globo negro (TGN), temperatura de bulbo seco (TBS) e temperatura de bulbo mido (TBU) nos dias e horrios das provas de marcha. ...................................................................................................... Tabela 5 Correlao entre os parmetros ambientais e as variveis bioqumicas e clnicas de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs provas de marcha e antes (1), depois (2) e 25 minutos aps (3) a prova*............................................................................................................. Tabela 6 Glicemia (mg/dL) de equinos MM, suplementados ou no com cromo, avaliados antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min) nas trs provas de marcha e horrio de fornecimento do concentrado antes da terceira prova de marcha.............................................. Tabela 7 Correlao entre as variveis bioqumicas e clnicas de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs provas de marcha e antes (1), depois (2) e 25 minutos aps (3) a prova........................................ Tabela 8 Tabela 9 Concentrao sangunea de lactato de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min)................................... Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha, insulinemia e relao insulina : glicose de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min)......................... Tabela 10 Tabela 11 Concentrao sangunea de cortisol de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min)................................... Concentrao plasmtica de glicerol de equinos MM antes da prova (AP), 57 56 53 50 50 47 47 41 38 23

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depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min)................................... Tabela 12 Horrio de fornecimento da rao concentrada antes das primeira e segunda provas de marcha e triacilglicerol plasmtico de equinos MM, suplementados ou no com cromo, antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha. ........................................... Tabela 13 Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha e freqncia cardaca (bpm) em diferentes momentos da prova de marcha de equinos Mangalarga Marchador suplementados ou no com cromo (P>0,05). ........................................................................................................ Tabela 14 Freqncia cardaca (bpm)* de equinos MM, suplementados ou no com cromo e horrio de fornecimento da rao concentrada antes da prova de marcha............................................................................................................ Tabela 15 Frequncia cardaca (FC) de guas Mangalarga Marchador nos diferentes grupos experimentais, durante as provas de marcha e na recuperao psexerccio......................................................................................................... Tabela 16 Tabela 17 Tabela 18 Tabela 19 Tabela 20 Freqncia cardaca (FC) de equinos MM em repouso, no aquecimento (passo), na prova de marcha e na recuperao............................................... Freqncia respiratria e temperatura retal de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha......... Peso semanal de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs semanas do perodo experimental (P>0,05)...................................... Peso semanal de equinos ao longo das trs semanas do perodo experimental................................................................................................... Consumo mdio dirio estimado de matria seca da dieta total (Consumo MS Total) e do alimento volumoso (Consumo MS Volumoso), relao volumoso : concentrado, ganho de peso dirio (GPD), converso alimentar da dieta total (CA Total), dos alimentos volumoso (CA Volumoso) e concentrado (CA Concentrado) dos grupos cromo e controle (P>0,05)........ Tabela 21 Mdias de peso vivo, consumo total de MS, ED, PB e lisina dos animais nas trs semanas do experimento, comparados com as recomendaes do NRC (2007)....................................................................................................

60

60

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63

63 63 69 71 71

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LISTA DE ABREVIATURAS
% g L >; <; ACTH AGL AP Ca CA CETEA CHCM CO2 Cr Cr
3+

ndice de Recuperao Cardaca Microgramas Microlitros Maior Que; Maior ou Igual A Menor Que; Menor ou Igual A Adrenocorticotrpico cidos Graxos Livres Antes da Prova Clcio Converso Alimentar Comit de tica em Experimentao Animal Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia. Gs Carbnico Cromo Trivalente Cromo Trivalente Cloreto Crmico xido Crmico Cromo Nicotinato Cromo Picolinato Coeficiente de Variao Dbito Cardaco Decilitro Imediatamente Depois da Prova Energia Bruta Escore Corporal Energia Digestvel Aparente cido Etilenodiamino Tetra-actico Extrato Etreo Espao Morto / Volume Corrente Fibra Bruta Frequncia Cardaca

CrCl3 Cr2O3 CrNic CrPic CV DC dL DP EB EC ED EDTA EE EM / VC FB FC

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FC0 FCM FCM50 FCP FCP5 FCR FCR0 FCR5 FCR25 FDA FDN FR GC GPD GLUT-4 h HCM HHA ITGU ITU IV kg L LIPE Lys MG mg min mL mM MM MS

Frequncia Cardaca no Incio da Prova de Marcha Frequncia Cardaca Mdia da Marcha Frequncia Cardaca em 50 Minutos de Marcha Frequncia Cardaca Mdia do Passo Frequncia Cardaca em Cinco Minutos de Passo Frequncia Cardaca Mdia da Recuperao Frequncia Cardaca no Incio da Recuperao Frequncia Cardaca em Cinco Minutos de Recuperao Frequncia Cardaca em 25 Minutos de Recuperao Fibra em Detergente cido Fibra em Detergente Neutro Frequncia Respiratria Glicocorticide Ganho de Peso Dirio Transportadores de Glicose Insulino-dependente Hora Hemoglobina Corpuscular Mdia Hipotalmico-hipofisrio-adrenal ndice de Temperatura de Globo e Umidade ndice de Temperatura e Umidade Intravenoso Kilogramas Litro Lignina Purificada e Enriquecida Lisina Minas Gerais Miligrama minuto Mililitro Milimolar Mangalarga Marchador Matria Seca

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O2 P PAM PB PF pH PSI PV RIA RJ SNA SNC SNP SRI TA TC TBS TBU TG TGN Tpo TR UFMG UR VC VCM VGM VO2 VO2mx VO2pico VS

Oxignio Fsforo Presso Arterial Mdia Protena Bruta Produo Fecal Potencial Hidrogeninico Puro Sangue Ingls Peso Vivo Radioimunoensaio Rio de Janeiro Sistema Nervoso Autnomo Sistema Nervoso Central Sistema Nervoso Perifrico Substratos do Receptor de Insulina Temperatura Ambiente Temperatura Corporal Temperatura de Bulbo Seco Temperatura de Bulbo mido Triacilglicerol Temperatura de Globo Negro Temperatura de Ponto de Orvalho Temperatura Retal Universidade Federal de Minas Gerais Umidade Relativa do Ar Volume Corrente Volume Celular Mdio Volume Globular Mdio Consumo de Oxignio Consumo Mximo de Oxignio Pico do Consumo de Oxignio Volume Sistlico

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RESUMO
Existem pouqussimas pesquisas sobre um adequado manejo nutricional para melhorar o desempenho de equinos Mangalarga Marchador (MM) em treinamento para prova de marcha. O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos de trs diferentes intervalos entre o fornecimento de concentrado e a prova de marcha nas variveis bioqumicas, cardiorrespiratrias e termorregulatrias de equinos MM suplementados ou no com cromo (Cr). Doze guas saudveis (4,250,62 anos; 339,4023,10 kg peso vivo) foram randomicamente distribudas em dois grupos (zero ou 10 mg Cr), de acordo com um delineamento inteiramente casualizado, em arranjo em parcelas sub-subdivididas. A dieta foi composta por pastagem de Cynodon e concentrado (razo 1:1). Os primeiros 29 dias do experimento foram para adaptao dieta, ao Cr e ao exerccio; nos 15 dias seguintes, as guas foram submetidas a trs provas de marcha a campo com 50 minutos de durao e intervalo semanal. O concentrado foi oferecido meia, duas ou quatro horas antes do exerccio. A frequncia cardaca (FC) foi aferida antes, durante e at 25 minutos aps o exerccio. Frequncia respiratria, temperatura retal e amostras sanguneas foram medidas antes, no fim e 25 minutos aps o teste. No houve efeito da interao entre Cr e horrio de fornecimento de concentrado sobre todas as variveis fisiolgicas (P>0,05). A suplementao com Cr aumentou a glicemia antes e logo aps a segunda prova de marcha (P<0,01). Em adio, Cr reduziu a FC durante o segundo teste de marcha e diminuiu a primeira FC de recuperao aps o exerccio (P<0,05). Insulinemia foi maior quando o concentrado foi consumido 2 horas antes do teste (P<0,05). O concentrado oferecido 0,5 e 2 horas antes do teste reduziu a concentrao de triacilglicerol plasmtico nos primeiro (P<0,001) e segundo (P<0,05) testes de marcha, respectivamente. A FC mdia da marcha foi de 146,1013,2 bpm, e a FC pico foi de 153,16 bpm aos 17 minutos; indicando que a prova de marcha um exerccio submximo de intensidade moderada e predominantemente aerbico. Na recuperao ps-exerccio houve um rpido declnio da FC nos primeiros dois minutos, com 50% de reduo da FC pico 25 minutos aps o exerccio. O intervalo adequado entre o fornecimento de concentrado e a prova de marcha no deve ser reduzido em equinos suplementados com Cr. O Cr deve ser utilizado em guas MM durante o treinamento para provas de marcha, pois pode prevenir a fadiga, j que reduziu a frequncia cardaca dos animais durante e aps a prova, o que indicativo de maior eficincia do metabolismo energtico e melhor desempenho cardaco. Os equinos devem consumir concentrado antes de duas horas antes da prova. Palavras-chave: Carboidrato, concentrado, equino, exerccio, glicose, insulina, mineral, prova de marcha.

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ABSTRACT
The marcha test is a singular equestrian competition, of approximately 50 minutes (3.3 m/s) without rest. Nutritional management studies to improve Mangalarga Marchador (MM) horses performance during marcha test are limited. This work was design to investigate the effects of three different intervals between concentrate feeding and the beginning of the marcha test on biochemical, cardiorespiratory and thermoregulatory changes of MM horses supplemented or not with chromium. Twelve healthy mares (4.250.62 years old; 339.4023.10 kg BWT) were randomly assigned to two groups (zero or 10 mg Cr), according to a completely randomized design, with split-plot arrangement. The diet was Cynodon pasture and concentrate (50:50 ratio). The first 29 days of the trial were for diet, Cr and exercise adaptation; and in the next 15 days they were submitted to three weekly 50-minutes field marcha tests. The concentrate was fed 0.5, 2 or 4 hours before exercise. Heart rate (HR) was measured before, during and until 25 minutes after the exercise. Respiratory rate, rectal temperature and blood samples were measured before, at the end, and 25 minutes after the test. There was no effect of Cr by concentrate feeding strategy interaction on all physiological variables (P>0.05). Cr supplementation increased glycaemia before and soon after the second marcha test (P<0.01). In addition, Cr reduced the HR during the second marcha test and decreased the first post-exercise HR recovery (P<0.05). Insulinemia was greater when the concentrate was fed 2 hours prior to the test (P<0.05). Concentrate fed 0.5 and 2 hours before the test reduced plasma triacylglycerol in the first (P<0.001) and second (P<0.05) tests, respectively. The mean HR during marcha test was 146.1013.2 bpm, and peak HR was 153.16 bpm at 17 minutes; suggesting this type of exercise predominantly aerobic and moderate-intensity submaximal exercise. In post-exercise recovery, there was a rapid decline of HR in the first two minutes, with 50% reduction in peak HR of marcha 25 minutes after exercise. The interval between concentrate feeding and marcha tests should not be decreased in horses supplemented with chromium. Cr should be used in MM mares during training for marcha test because it may prevent fatigue, since it reduced the HR of animals during and after the exercise, which is indicative of greater efficiency of energy metabolism and improved cardiac performance. The horses should be fed more than 2 hours before that test. Key words: Carbohydrate feeding, concentrate, exercise, glucose, horse, insulin, marcha, mineral.

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1. INTRODUO

Existem atualmente 8,4 milhes de eqdeos no pas, sendo 5,8 milhes de equinos, 1,4 milhes de muares e 1,2 milhes de asininos (IBGE, 1997; 2005). O rebanho equino brasileiro o maior da Amrica do Sul e o terceiro maior do mundo, superado apenas pela China e pelo Mxico, com 7,9 milhes e 6,3 milhes de cabeas respectivamente (ESALQ, 2006). Os 30 segmentos inseridos no complexo brasileiro do agronegcio cavalo geram um faturamento anual de R$7,3 bilhes e 642,5 mil empregos diretos, aproximadamente seis vezes mais que a indstria automotiva nacional e vinte vezes mais do que a aviao civil brasileira. Somados aos empregos indiretos, o complexo equino brasileiro ocupa 3,2 milhes de pessoas (ESALQ, 2006). Dos 5,8 milhes de equinos, 900 mil cavalos, com maior valor agregado, so representados por 23 associaes de criadores das mais diferentes raas (ESALQ, 2006). Dentre essas, a Associao Brasileira dos Criadores do Cavalo Mangalarga Marchador (ABCCMM) registrou 290.012 animais de 1949 a 2000 e at 2004 possua 8.961 criadores inscritos (Costa et al., 2004). Assim, a raa Mangalarga Marchador (MM) a mais importante e numerosa raa brasileira e possui a marcha como andamento natural ao invs do trote. A marcha um andamento confortvel a quatro tempos, com apoio alternado dos bpedes laterais e diagonais, sempre intercalados por momentos de trplice apoio (ABCCMM, 2007). A principal caracterstica desse andamento que o animal nunca perde o contato com o solo. Em adio, o MM usado para uma prova funcional, chamada prova de marcha. Esta

prova foi caracterizada como uma competio de intensidade submxima (Prates et al., 2009) de aproximadamente 50 minutos, sem descanso e com velocidade mdia de 3,3 m/s, e um procedimento de avaliao padro da maioria dos campeonatos oficiais da raa. O treinamento e o manejo nutricional realizados no Brasil so ainda muito empricos. necessrio investigar procedimentos atualmente utilizados para a prova de marcha para propor protocolos de treinamento. Alm do mais, a proporo dos diferentes tipos de fibra muscular do cavalo MM ainda no foi definida. Com a evoluo da cincia do esporte equino tem-se buscado diversas vantagens competitivas e econmicas que no sejam consideradas ilegais, dentre os quais esto os recursos ergognicos. Para a Medicina Esportiva agente ergognico todo e qualquer mecanismo de efeito fisiolgico, nutricional ou farmacolgico que seja capaz de melhorar o desempenho nas atividades fsicas esportivas, ou mesmo ocupacionais. Os agentes ergognicos nutricionais so caracterizados pela aplicao de estratgias e pelo uso de suplementos nutricionais (Neto, 2001; Geor, 2006). Sua ao inclui incrementar a capacidade para o exerccio, retardando a depleo de energia ou o acmulo de lactato, aumentando o desempenho. Como exemplos de ergognicos tm-se o fornecimento de glicose antes do exerccio e a suplementao com o cromo. Desta forma, o manejo nutricional para a raa Mangalarga Marchador pode influenciar no desenvolvimento do desempenho fsico e conseqentemente melhorar a atuao desta raa. O efeito de fornecer carboidratos antes ou durante o desempenho atltico em equinos tem recebido considervel ateno, j que a suplementao de glicose pela administrao intravenosa (IV) antes ou durante a atividade fsica moderada a

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intensa prolongou a durao do exerccio at a exausto e aumentou a resistncia fadiga em equinos (Farris et al. 1995; Farris et al., 1998). A forma mais prtica do efeito da suplementao de glicose atravs do fornecimento de uma refeio rica em carboidratos solveis previamente ao exerccio. No entanto, seus efeitos na atividade atltica de equinos ainda no foram bem definidos (Jose-Cunilleras e Hinchcliff, 2004). Diversos trabalhos mostraram que uma refeio altamente glicmica, cerca de duas a quatro horas antes de um exerccio intenso a moderado, pode gerar no exerccio uma transitria hipoglicemia, menor mobilizao de lpides e depleo aumentada do glicognio muscular quando comparado com o jejum ou uma alimentao exclusivamente de forragem previamente ao trabalho fsico. Isso ocorre provavelmente devido aos efeitos anablicos da hiperinsulinemia (Vervuert et al., 1999; Jose-Cunilleras et al., 2002; Jose-Cunilleras e Hinchcliff, 2004). Essas alteraes no uso dos substratos e nos hormnios podem ser deletrias por prejudicar o uso das reservas corporais durante o exerccio. O fornecimento de cromo na dieta de equinos da raa Mangalarga Marchador submetidos ao concurso de marcha pode trazer benefcios, pois ao fazer parte da cromodulina, pode potencializar os efeitos da insulina e aumentar a tolerncia glicose, alterando o metabolismo de carboidratos, lipdios e aminocidos. A suplementao diettica com cromo pode permitir maior mobilizao dos lpides durante o exerccio, mesmo aps o fornecimento de concentrado, facilitando a utilizao de outras vias de fornecimento de energia alm da oxidao de carboidratos. Tambm, em equinos submetidos ao exerccio, o cromo reduziria o pico de insulina, diminuindo a relao insulina:glicose, reduzindo as

concentraes de lactato e cortisol sanguneos, sendo capaz de aumentar a imunidade e minimizar o estresse. Este trabalho teve como objetivos avaliar os efeitos de diferentes horrios de fornecimento de alimento concentrado sobre o metabolismo energtico, previamente ao exerccio e identificar os possveis benefcios ergognicos do cromo no desempenho de equinos Mangalarga Marchador submetidos ao treinamento para concurso de marcha.

2. REVISO DE LITERATURA

2.1. A PROVA DE MARCHA DA RAA MANGALARGA MARCHADOR

O Mangalarga Marchador tem como andamento natural a marcha, valorizada por transportar o cavaleiro de maneira cmoda, mantendo sempre pelo menos um membro em contato com o solo, e por no transmitir a ele os mesmos impactos que ocorrem quando os animais trotam, o que traz como conseqncia sua freqente utilizao nos enduros e cavalgadas. O andamento e a rusticidade do Mangalarga Marchador lhe conferem grande capacidade para percorrer longas distncias e enfrentar desafios naturais (Rezende, 2006). A prova de marcha da raa Mangalarga Marchador uma prova eqestre funcional singular (Rezende, 2006), que consiste em um quesito de avaliao da maioria dos campeonatos oficiais da raa. Compreende um exerccio de durao aproximada de 50 minutos, de intensidade submxima (Prates, 2007), com grande gasto energtico, no qual o animal desenvolve

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um longo percurso sem descanso e em velocidade mdia de 3,3 m/s (12 Km/h). Em uma competio realizam diversas provas de curta durao e contam com pequenos perodos de descanso entre elas, para que os animais retornem aos nveis fisiolgicos das funes cardiorrespiratrias (Rezende, 2006; Freitas, 2007). Assim, as exigncias destas provas so diferentes e a prescrio do treinamento e da nutrio, visando melhorar o desempenho dos equinos marchadores, devem ser estudadas. Durante a Exposio Nacional do Mangalarga marchador (ABCCMM, 2007), a prova de marcha faz parte dos seguintes campeonatos e provas: Campeonato de raa, dividido a princpio entre duas categorias, animais jovens, de 15 a 36 meses, e animais adultos, de 36 at 204 meses, onde so avaliadas a marcha e a morfologia do animal; Concurso de marcha da exposio; Campeonato Campeo dos Campees da Raa (machos e fmeas); Campeonato do Campeo dos Campees de Marcha (machos e fmeas); Concurso de Marcha de Castrados; Concursos de Prognies e Provas Funcionais, divididas em prova de marcha, morfologia e prova de ao (ABCCMM, 2007). O tempo de durao do julgamento de cada campeonato deve ser de no mnimo 20 minutos e no mximo 70 minutos. A prova de marcha para animais at 36 meses ocorre com a apresentao do animal ao cabresto no andamento marchado natural com velocidade mdia de 3,3 m/s.

O julgamento dos animais ocorre em duas etapas. A primeira consiste na dinmica do tringulo individual e a segunda na dinmica do tringulo corpo a corpo (ABCCMM, 2007). Na dinmica em tringulo individual, os animais devem ser conduzidos na marcha de velocidade mdia (cerca de 3,3 m/s), descrevendo a figura de um tringulo no sentido anti-horrio. Na primeira passagem os animais devero parar em cada vrtice do tringulo e na segunda passagem devero faz-la sem interrupo de seu andamento. facultado ao rbitro pedir o trabalho em guia ao crculo (ABCCMM, 2007). Na dinmica em tringulo corpo a corpo, na seqncia da etapa anterior com os animais em formao lado a lado comea a avaliao comparativa entre dois animais. Os animais devem ser conduzidos na marcha de velocidade mdia, descrevendo a figura de um tringulo no sentido antihorrio, sem interrupo de seu andamento. Nesta passagem os animais sero comparados dois a dois do ltimo para o primeiro classificado, ou seja, o ltimo com o penltimo, depois o penltimo com o antepenltimo e assim sucessivamente (ABCCMM, 2007). Nas duas etapas os animais so analisados observando-se por trs, de lado e pela frente quanto ao gesto de marcha, estabilidade, estilo, rendimento, regularidade, aprumos e articulaes, sendo que na primeira fase ocorre avaliao individual e na segunda avaliao comparativa (ABCCMM, 2007). Na prova de marcha para animais acima de 36 meses o equino apresentado montado no seu andamento marchado natural em marchas de velocidade baixa e mdia [aproximadamente 2,5 m/s (9 Km/h) e 3,3 m/s], ao comando dos rbitros. Nessa categoria, os rbitros montam em todos os

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animais. Enquanto montado, o rbitro inicia o movimento ao passo e avalia as marchas reunida, mdia e alongada, procurando mudar de mo e cumprir o mesmo percurso com todos os animais (ABCCMM, 2007). Nesta categoria, os animais iniciam a prova movimentando-se pela pista em sentido anti-horrio devendo executar uma volta completa pela pista em passo livre. Neste momento a naturalidade, docilidade, reaes do animal manuteno do passo, regularidade e cadncia do passo so avaliadas. Os equinos passam ento para uma marcha de baixa velocidade permanecendo nesta velocidade por um tempo determinado. Ao comando do rbitro os animais passam para a marcha de velocidade mdia, devendo mant-la. Os animais so montados e desmontados pelo rbitro em um crculo com 4 metros de dimetro. Aps o rbitro montar cada animal, o mesmo segue ao passo para avaliao da prova de ao e depois de complet-la, retorna ao julgamento de marcha, na marcha de velocidade mdia, conservando-a at o trmino da fase classificatria. No incio da fase final os animais devero retomar a marcha de baixa velocidade e, aps novo comando do rbitro voltam marcha de velocidade mdia mantendo-a at o final do julgamento (ABCCMM, 2007). Durante a prova de marcha, os animais so analisados comparativamente em relao ao gesto de marcha, estilo, comodidade e estabilidade, rendimento e regularidade, aprumos e articulaes (ABCCMM, 2007). Ao fim da prova, o rbitro justifica para o pblico a classificao, ordenados do pior ao melhor animal (Costa et al., 2003).

2.2. AVALIAO DO DESEMPENHO ATLTICO DE EQUINOS

O exerccio fsico caracteriza-se por uma situao que retira o organismo de sua homeostase, pois implica no aumento instantneo da demanda energtica da musculatura exercitada e, conseqentemente, do organismo como um todo. Assim, para suprir a nova demanda metablica, vrias adaptaes metablicas e hemodinmicas so necessrias, dentre elas, as referentes funo cardiovascular e ao msculo esqueltico durante o exerccio fsico (Brum et al., 2004). Conforme Rodrigues e Soares (2007) aprende-se mais sobre um sistema orgnico quando o mesmo posto em ao do que quando se encontra em repouso, desta forma, as respostas hemodinmicas e metablicas durante o exerccio oferecem uma oportunidade nica de analisar e integrar a fisiologia cardiovascular de um determinado indivduo. Testes de desempenho a campo so mais especficos e realistas, principalmente se forem similares s condies de competio (Gomide et al., 2006). De acordo com Hinchcliff e Geor (2004), treinamento refere-se a alteraes no comportamento induzido por certas prticas e condicionamento refere-se s alteraes fsicas que ocorrem em resposta a um exerccio repetitivo. Na prtica esses termos so considerados sinnimos e referem-se aos processos fisiolgicos, funes ou estruturas anatmicas que se adaptam aos estresses e s tenses induzidas pelo exerccio repetitivo.

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2.2.1. Parmetros Bioqumicos

2.2.1.1. Insulina

A insulina um hormnio anablico noesteride e no lipoflico sintetizado pelas clulas do pncreas como resposta principalmente ao aumento da glicemia (McKeever, 2002). A insulina se liga na subunidade de seu receptor, localizada na face externa da membrana plasmtica dos adipcitos e dos micitos do tecido muscular estriado esqueltico e cardaco. Isto provoca uma alterao conformacional desse receptor com autofosforilao dos resduos de tirosina em sua subunidade , localizados na face interna da membrana plasmtica e que funcionam como tirosina quinase. A tirosina quinase fosforila outras protenas, como os substratos do receptor de insulina (SRI) e desencadeia uma srie de reaes de fosforilao em cascata com o objetivo de estimular a translocao dos transportadores de glicose insulinodependente (GLUT-4) para a membrana plasmtica (Koolman e Roelm, 2005).

O GLUT-4 realiza o transporte facilitado de glicose nas clulas do msculo estriado esqueltico, estriado cardaco e do tecido adiposo. Quando no ocorre estimulao pela insulina, a densidade do GLUT-4 na membrana plasmtica muito reduzida, a maioria se localizando no interior de vesculas citoplasmticas. Aps o devido estmulo por esse hormnio, ocorre translocao do GLUT-4 para a membrana e ocorre maior transporte de glicose (Hypp, 2005). Quando a glicemia retorna ao normal, a insulinemia diminui e a maioria das molculas de GLUT-4 removida da membrana plasmtica por endocitose, sendo estocada em vesculas (Lehninger et al., 2007). A ligao da insulina ao seu receptor provoca uma srie de efeitos metablicos (Tab. 1). A resposta que ocorre dentro de segundos o aumento do transporte de glicose nas clulas sensveis a esse hormnio. Em minutos a horas ocorrem alteraes na atividade enzimtica, com mudanas dos estados de fosforilao das protenas existentes (Champe et al., 2006). A ao da insulina oposta aos fatores considerados diabetognicos, como o glucagon, a somatostatina, o cortisol e a adrenalina (Kaneko et al., 2008).

Tabela 1: Resumo dos efeitos anablicos da insulina na glicose sangnea: Captao de glicose pelas clulas e estocagem como glicognio e triacilgliceris (Adaptado de Champe et al., 2006 e Lehninger, 2007).
Efeitos Metablicos captao de glicose (msculo e tecido adiposo) captao de glicose no fgado glicognese (fgado e msculo) glicogenlise (fgado e msculo) gliclise, produo de acetil-coA (fgado e msculo) Enzimas alvo nmero de transportadores de glicose (GLUT-4*) na membrana plasmtica celular expresso da glicoquinase glicognio sintase glicognio fosforilase fosfofrutoquinase-1 (pelo da fosfofrutoquinase-2) complexo piruvato desidrogenase acetil-coA carboxilase lipase sensvel a hormnio lipoprotena lipase

sntese de cidos graxos (fgado) e liberao sntese de triacilgliceris (tecido adiposo)

*Protena transportadora de glicose sensvel insulina.

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A liberao de insulina estimulada pela glicose, aminocidos, cidos graxos, hormnios (glucagon, gastrina, secretina, colecistocinina, peptdeo inibitrio gstrico). Sua liberao inibida pela hipoglicemia e somatostatina. A meia-vida da insulina dura de 5 a 10 minutos (Schneider e Sayegh, 2002; Kaneko et al., 2008).

demandas metablicas sinalizadas pela reduo (Kanaley et al., 2002).

musculares, da glicemia

2.2.2.2. Cortisol

O grau de estimulao do eixo HHA no exerccio dependente de inmeros fatores, como refeies prvias, treinamento, condicionamento, composio corporal e outros fatores (Kanaley et al., 2002). Nos equinos a liberao de cortisol provavelmente afetada pela intensidade e durao do exerccio (McKeever, 2002), sendo que a extenso de seu aumento similar em exerccios mximos e submximos (Snow e Mackenzie, 1977a; 1997b). A secreo dos GC auxilia os animais a sobreviverem em situaes como o calor intenso, o trauma e o exerccio. A liberao de GC permite aos equinos tolerar e se adaptar aos desafios sua homeostase que ocorrem no dia a dia, preparando seus mecanismos de defesa e limitando as respostas indesejveis, contribuindo para sua recuperao (Johnson e Slight, 2002; McKeever, 2002). Dessa forma, a supresso da funo imune e dos efeitos inflamatrios pelo cortisol pode providenciar um ambiente permissivo para tolerar a leve quantidade de leso muscular necessria para que haja remodelamento induzido pelo treinamento (Harrington et al., 2004).

Os glicocorticides (GC) modulam a funo imune, agindo como antiinflamatrios e suprimindo as reaes imunes. Tambm, os GC exercem um efeito anti-insulinmico nos tecidos perifricos, reduzindo o uso de glicose pelos tecidos no-essenciais a favor da manuteno da disponibilidade de glicose para o sistema nervoso central (SNC) e estimulando a mobilizao de cidos graxos (Johnson e Slight, 2002; McKeever, 2002). Assim, esses hormnios economizam a glicose para o SNC, o que poderia retardar a fadiga central que ocorre no exerccio de resistncia, quando a glicemia diminui (McKeever, 2002). Nos equinos, a meia-vida do cortisol possui cerca de 1 a 2 horas (Rose e Hodgson, 1994). O exerccio, inclusive o de resistncia, causa um aumento na liberao de hormnio adrenocorticotrfico (ACTH) e conseqente liberao de cortisol, o que tem sido considerada uma resposta ao estresse. No entanto, a liberao desses hormnios se encontra dentro da faixa de normalidade j que o cortisol est envolvido na mobilizao de substratos e controle metablico no exerccio (McKeever, 2002). A ativao do eixo hipotalmico-hipofisrio-adrenal (HHA) engatilhada pelo sistema nervoso simptico (SNS), principalmente devido s

2.2.1.3. Glicose Sangunea

A remoo da glicose da corrente sangunea governada por inmeros fatores, a maioria do qual est relacionada taxa de utilizao da glicose. A prpria glicemia controla essa taxa e dessa forma, autoregulatria. Em elevada concentrao, a taxa de captao da glicose pelos tecidos, como o muscular e o heptico, aumenta devido ao efeito da ao da massa. A insulina aumenta a taxa de

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utilizao da glicose, ou pelo aumento da translocao de GLUT-4, nos micitos e adipcitos, ou pelo aumento de sua fosforilao, nos hepatcitos (Kaneko et al., 2008). A glicemia de jejum em equinos normalmente varia de 60 a 90 mg/dL (Ralston, 2002). Normalmente, no teste oral de tolerncia glicose, o animal possui um aumento limitado na glicemia e uma rpida queda de sua concentrao. No estado absortivo inicial, a taxa de entrada da glicose na circulao supera sua remoo e a glicemia aumenta. Com isto, a liberao heptica de glicose reduzida e ocorre a liberao de insulina. Em cerca de 60 minutos, o pico glicmico alcanado e depois comea a diminuir. Nessa fase, a taxa de remoo excede a de entrada e os mecanismos regulatrios de captao da glicose operam em seu mximo. Simultaneamente, a gliconeognese heptica diminui e a glicemia reduz rapidamente. Quando a glicemia atinge seu valor basal, ela continua a reduzir por um curto perodo de tempo e novamente retorna ao seu valor basal. Esta fase hipoglicmica ocorre devido a uma inrcia dos mecanismos regulatrios e geralmente, quanto maior a hiperglicemia, maior ser a subseqente hipoglicemia (Hoffman, 2003). Durante o exerccio, tanto o sistema nervoso simptico quanto o eixo HHA so ativados, o que aumenta os nveis circulantes de hormnios ACTH, cortisol, e catecolaminas (liberados pela poro medular da adrenal), como a adrenalina e a noradrenalina. Tambm, as catecolaminas suplantam a liberao normal de insulina estimulada pela glicose. Concomitantemente, a concentrao de glucagon aumenta. Catecolaminas aumentam a glicogenlise muscular e heptica, e junto com o cortisol, aumentam a concentrao de glicose sangnea atravs da ativao da glicogenlise e gliconeognese hepticas. Cortisol e catecolaminas tambm aumentam

a mobilizao de cidos graxos livres do tecido adiposo, tendo, portanto ao cetognica (Hyypp, 2005; Champe et al., 2006). O fator mais importante para a magnitude do aumento da captao da glicose no exerccio e no estado ps-absortivo a intensidade do exerccio, mas tambm de sua durao. Isto se deve a um maior recrutamento de fibras musculares e a um maior estresse metablico das fibras musculares ativas. Durante o exerccio, o principal destino da glicose nos micitos a gliclise e sua subseqente oxidao. O exerccio regular pode melhorar o controle glicmico, isto se deve parcialmente aos efeitos agudos do exerccio no metabolismo de glicose e s adaptaes induzidas pelo treinamento (Rose e Richter, 2005). A glicemia geralmente aumenta em todos os tipos de exerccio devido ao estmulo da glicogenlise heptica, contudo, no exerccio prolongado (maior que trs horas, principalmente) a concentrao de glicose diminui como resultado da depleo de glicognio heptico (Rose et al., 1977). Uma hipoglicemia pode causar uma fadiga prematura em exerccios prolongados de mais de uma a duas horas (Coggan e Coyle, 1991). Nesse tipo de exerccio, quando a glicemia diminui, a captao de glicose pelo msculo diminui tambm. Dessa forma, a glicemia um importante fator limitante da captao de glicose pelo msculo (Rose e Richter, 2005).

2.2.1.4. Lactato Sanguneo

A fadiga uma cadeia complexa de eventos, com contribuies tanto centrais e perifricas. Exerccios de curta durao e alta intensidade so limitados por uma falha na produo energtica associada a um

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aumento da concentrao de prtons e uma reduo da concentrao de ATP. J o exerccio de longa durao, em geral, resulta numa substancial depleo de glicognio muscular, que pode ocasionalmente limitar a capacidade do equino continuar a atividade fsica. Tambm, este tipo de exerccio impe uma enorme demanda termorregulatria, com o resfriamento atravs da evaporao originrio da sudorese como principal mecanismo de dissipao de calor (Hodgson et al., 1994). O aumento da intensidade do exerccio o principal fator que aumenta a oxidao de carboidratos em detrimento dos lipdeos. Com o aumento de sua intensidade, grande parte da energia gerada atravs da gliclise anaerbia, com conseqente produo exponencial de cido lctico e ons H+ (Arkinstall et al., 2004; Hargreaves, 2006). A produo de lactato tambm ocorre em intensidades de exerccio abaixo do consumo mximo de oxignio (VO2mx), pois durante todo tipo de exerccio, o lactato produzido pelo msculo em trabalho, mas elevadas concentraes no ocorrem at maiores intensidades serem alcanadas. Na gliclise e glicogenlise, ocorre um aumento em sua concentrao devido a converso do piruvato em lactato pela lactato desidrogenase, devido ao efeito da ao das massas. No entanto, um aumento significativo somente ocorre quando existe uma reduo na disponibilidade de oxignio nos tecidos (Gollnick e Saltin, 1982; Hargreaves, 2006). A disponibilidade de O2 a nvel muscular em geral sempre suficiente, ao contrrio do que se pensava anteriormente. Por isso, a ativao do metabolismo anaerbico se d quando o metabolismo aerbico est funcionando no mximo de sua capacidade e as necessidades energticas por unidade de tempo continuam aumentando. Por outro

lado importante ter em mente que dentro de um mesmo msculo existem fibras musculares que independentemente da disponibilidade de O2, no podem formar energia pela via oxidativa devido ausncia de mitocndrias e de mioglobina, ambas vitais para o funcionamento do metabolismo aerbico (Boffi, 2008). O acmulo de lactato no msculo, e consequente acidose intracelular, pode prejudicar a gliclise, a capacidade respiratria da mitocndria e estar relacionado a uma falha em manter a homeostase ADP/ATP no stio de ligao miosina-actina. O aumento de ADP local pode causar perda de desempenho por fadiga muscular, sendo o principal impedimento para a continuidade do trabalho (Gomide et al., 2006). Ascenso et al. (2001) afirmaram que o limiar anaerbio ou limiar de lactato, ponto em que existe um rpido aumento em sua concentrao, considerado um indicador fisiolgico associado transio entre o metabolismo aerbio e o anaerbio, sendo a concentrao sangnea de lactato (CSL) equivalente a 4 mmol/L referida como a mais precisa e criteriosa na determinao do limiar anaerbio. O limiar de lactato ocorre numa intensidade de exerccio inferior ao VO2mx do animal, o ponto dependendo de seu condicionamento fsico (Snow e Valberg, 1994). O limiar de lactato no sangue ou no plasma frequentemente melhor indicador do desempenho atltico que o VO2mx. Essa caracterstica reflete a estreita associao entre o limiar de lactato, a capacidade oxidativa do tecido muscular e a taxa de utilizao de carboidratos no exerccio (Hargreaves, 2006). Espera-se que num teste progressivo mximo, a curva de lactato a partir da concentrao de 4mmol/L tenha um comportamento mais exponencial, enquanto

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a partir dessa concentrao no teste constante submximo a curva de lactato seja mais linear (Ascenso et al., 2001). Interessante notar, que a curva do lactato no teste constante submximo aumenta mesmo com a carga constante, apresentando-se dessa forma j que o consumo de oxignio e as demandas metablicas so crescentes (Ascenso et al., 2001). O lactato tambm um importante metablito intermedirio durante e aps o exerccio, agindo como substrato para o metabolismo oxidativo do msculo estriado cardaco e esqueltico em contrao e como precursor gliconeognico (Hargreaves, 2006). Durante o exerccio, o msculo estriado esqueltico o principal local de oxidao do lactato, dessa forma ele pode ser simultaneamente liberado e captado pelo msculo em contrao. Tambm existem evidncias, em humanos, de que o msculo em no-contrao libera lactato, principalmente nos ltimos estgios de um exerccio de longa durao, fornecendo carbono para a sua oxidao ou para a gliconeognese (Hargreaves, 2006).

(2003), durante o exerccio aerbico de longa durao e leve intensidade, o msculo esqueltico realiza trabalho mecnico utilizando energia qumica obtida tanto pela oxidao da glicose como dos cidos graxos livres (AGL). A glicose e os AGL alcanam o sangue poucos minutos aps haver comeado o exerccio e logo aps ter degradado 20-30% do glicognio armazenado inicia-se a -oxidao (Boffi, 2008). Com o aumento da intensidade do exerccio, os lipdios no suprem mais completamente a demanda energtica do animal e os carboidratos oriundos da glicose sangnea e/ou do glicognio heptico e muscular tornam-se progressivamente mais importantes como substratos energticos (McMiken, 1983). Na liplise alm do aumento da concentrao plasmtica de AGL e glicerol, os triacilgliceris plasmticos tambm aumentam (Snow e Mackenzie, 1977a; Ps et al., 1989), depois dos AGL, provavelmente porque alm dos AGL serem oxidados no msculo esqueltico, eles agem como precursores para a sntese de triacilgliceris (Rose, 1986).

2.2.2. Parmetros clnicos de avaliao do desempenho atltico de equinos 2.2.1.5. Glicerol Plasmticos e Triacilglicerol

2.2.2.1. Freqncia Cardaca Durante trabalhos de resistncia como enduro, alta escola (treinamento e preparao para obedincia e postura), cavalgada competitiva por trilhas e, em certa extenso, exposies de raa em que o equino participa de vrias provas ocorre submximo desempenho durante longo tempo. Esses animais competem essencialmente em base aerbica gerando enormes quantidades de calor e perdas de suor (Ralston, 1997). Conforme Hoffman

Uma adequada resposta cardiovascular ao exerccio necessria para atender a demanda do fluxo sangneo adequado aos msculos em trabalho e aos tecidos obrigatrios e a fim de prover um volume adequado de fluidos para a sudorese e termorregulao. Ela depende de um mecanismo de defesa multissistmico do volume sangneo, da presso arterial mdia

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(PAM) e da tonicidade do plasma (McKeever, 2002). Dependendo da atividade realizada, como no exerccio, na digesto ou na termorregulao, o dbito cardaco (DC) deve ser distribudo de forma apropriada entre os diversos rgos (Poole e Erickson, 2004). A manuteno da homeostasia cardiovascular durante o exerccio mediada por mecanismos neuroendcrinos, que asseguram que o sistema possa atender a demanda necessria de fluxo sangneo para os msculos em trabalho no exerccio (McKeever, 2002). Em equinos, a freqncia cardaca (FC) de repouso varia em mdia de 30 a 40 bpm (McKeever, 2002). Nesses animais, a FC mxima varia entre 204 e 241 bpm, e no considerada uma importante medida do condicionamento fsico j que ela no se altera com o treinamento (Poole e Erickson, 2004). A antecipao do exerccio em equinos mediada pelo controle neuroendcrino e pode evocar uma supresso do controle parassimptico e um aumento da atividade nervosa simptica com aumento resultante da FC, da fora de contrao, do volume sistlico (VS) e do dbito cardaco (DC) (McKeever e Gordon, 2004). A FC durante o exerccio submximo de longa durao depende da intensidade do exerccio, das condies ambientais e do condicionamento fsico (Evans, 1994). Com a progresso do exerccio alm de alguns poucos segundos, um mecanismo mais sofisticado que o sistema nervoso autnomo (SNA) requisitado para um ajuste delicado da resposta inicial do distrbio da homeostase, que o exerccio. Nessa fase inicial, existe uma reduo da resistncia perifrica total que resulta numa vasodilatao dos vasos sanguneos do msculo em trabalho. Isto permite um aumento do fluxo sanguneo para estes leitos vasculares, contudo existe quase que um aumento simultneo no DC. Este rpido

aumento na funo cardaca central vem do ajuste dos sinais aferentes e eferentes pelos barorreceptores e receptores de volume colocados em pontos estratgicos no sistema cardiovascular. A adaptao dos sinais aferentes e eferentes pelo centro vasomotor da medula espinhal resulta num sinal de erro via SNA (McKeever, 2002). Durante o exerccio, existe um direcionamento do fluxo sangneo para msculos em trabalho sem comprometer a irrigao do SNC. A vasodilatao da pele e do tecido muscular esqueltico e a vasoconstrio da regio esplncnica e dos msculos em repouso so respostas caractersticas (Evans, 1994). No entanto, at mesmo com a mobilizao das reservas de volume sangneo, as demandas do exerccio de longa durao ou de elevada intensidade podem exceder a capacidade cardiovascular. O controle realizado pelos barorreceptores do tnus arterial se torna vital para a manuteno do DC e da PAM, e a vasoconstrio induzida pelo tnus simptico diminui o fluxo sanguineo para tecidos no obrigatrios durante o exerccio de alta intensidade. Esta resposta ainda mais pronunciada no exerccio de longa durao quando as perdas de fludo associadas sudorese comprometem o volume de fludo vascular e o retorno venoso (McKeever, 2002). Sem reposio ou compensao, a diminuio no retorno venoso associada com a perda de fludos pode causar uma reduo do DC e do fluxo sanguneo para os msculos em trabalho e para os leitos vasculares associada termorregulao. Para manter a PAM, o corpo compensa aumentando a FC e a contratilidade, um fenmeno chamado de cardiovascular drift ou desvio cardaco, que associado com um aumento da atividade simptica e da concentrao de catecolaminas circulantes (McKeever, 2002). A manuteno da PAM possui prioridade

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sobre a termorregulao e o metabolismo muscular (Hodgson et al., 2006). O consumo mximo de oxignio (VO2max) ocorre quando o consumo de oxignio no aumenta apesar do aumento da intensidade do esforo (Eaton, 1994). De acordo com Evans (2000), o consumo de oxignio (VO2) de repouso varia de 2 a 5 mL/Kg/min e o VO2mx de equinos Puro Sangue Ingls (PSI) de corrida 160 mL/Kg/min. Equinos PSI de corrida alcanaram valores de 140 a 187 mL/Kg/min (Rose et al., 1990; Seeherman et al., 1990) enquanto humanos atletas de elite alcanaram 70 a 90 mL/Kg/min (Saltin, 1985). Em equinos, provavelmente o VO2mx no alcanado at o animal atingir a FC de 200 bpm (Rose e Evans, 1987). Segundo Eaton et al. (1995a), existe uma relao entre VO2 e a freqncia cardaca de equinos, que uma estimativa razovel do consumo de oxignio em elevadas freqncias cardacas. A equao : VO2 (mL/Kg/min) = [0,833 * (FC) 54,7] (R2 = 86,5 %). J para baixas freqncias cardacas, a equao de Coenen (2005) confere uma melhor estimativa da FC: VO2 (mL/Kg/min) = [0,0019 * (FC)2,0653] (R2 = 90 %). Tambm, de acordo com Eaton et al. (1995b), possvel prever a porcentagem do VO2mx a partir da FC mxima: % VO2mx = [1,384 * (% da FC mxima) 41]. O declnio da FC na recuperao no seu primeiro minuto geralmente muito rpido. Ele ento em seguida diminui mais lentamente at seus valores de repouso. No entanto, a aferio da FC de recuperao extremamente susceptvel a rpidos aumentos devido excitao do animal (Evans, 1994) e fatores psicognicos podem influenciar essa FC se ela estiver abaixo de 120 bpm (Persson, 1983). O retardo do retorno da FC aos valores de normalidade na recuperao aps a prova um indicativo de uma anormalidade, como desidratao

intensa ou mau condicionamento fsico (Evans, 1994).

2.2.2.2. Freqncia Respiratria

Embora haja adaptaes do sistema cardiovascular e do tecido muscular estriado esqueltico ao exerccio, no ocorrem as mesmas adaptaes pulmonares ao treinamento. Este fator associado a uma maior demanda metablica no exerccio intenso leva a concluir que o sistema respiratrio o principal limitante do desempenho atltico de equinos (Ainsworth, 2004). As demandas de oxignio nos tecidos no so constantes e variam com o metabolismo. O exerccio extenuante representa a demanda mais extrema imposta aos mecanismos de transporte de gases (Cunningham, 2004). Essa demanda metablica deve ser atendida por um correspondente aumento das funes cardiorrespiratrias (Ainsworth, 2004). O volume corrente (VC) de repouso nos equinos de 12 mL/Kg. O aumento da ventilao-minuto pode ser alcanado pelo aumento da FR, do VC, ou de ambos (Lekeux e Art, 1994). A magnitude do aumento na funo ventilatria ocorre em funo da intensidade e da durao do exerccio. Com o acrscimo de sua intensidade ocorre um aumento do VC e da ventilao-minuto, aumento este correlacionado com a intensificao da atividade muscular inspiratria. A FR aumenta linearmente com a velocidade at 8 m/s, embora em maiores velocidades apenas um pequeno aumento na FR ocorra (Ainsworth, 2004). O VO2 aumenta linearmente com a intensidade do exerccio at alcanar seu VO2mx (Lekeux e Art, 1994).

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Um aumento no VO2 para suprir a demanda energtica do animal devido carga transportada, representada pelo peso do cavaleiro e dos arreios, obtido atravs de um aumento na ventilao (Thornton et al, 1987). O tipo de pista em que o exerccio realizado, o tipo de andamento e a nutrio do equino so aspectos a serem tambm considerados (Derman e Noakes, 1994). Em equinos de trote, o aumento na ventilao-minuto obtido por um aumento simultneo da FR e do volume corrente em baixas intensidades de exerccio e principalmente por um aumento da FR em maiores intensidades (Art e Lekeux, 1988a). Se o exerccio submximo e de longa durao, a ventilao do espao morto ir aumentar por um simultneo aumento da FR e da relao espao morto/volume corrente (EM/VC), frao de cada respirao que ventila o espao morto. Esta adaptao provavelmente reflete o papel termorregulatrio do sistema respiratrio (Lekeux e Art, 1994). Aps o exerccio, todos os parmetros clnicos, como a FR, retornam progressivamente aos seus valores de repouso, sendo a velocidade desse retorno dependente tanto da intensidade quanto da durao do exerccio realizado, do condicionamento fsico do animal e das condies climticas (Lekeux e Art, 1994). O elevado VO2 na recuperao est associado com uma elevada ventilaominuto que o principal resultado de uma alta FR (Art e Lekeux, 1988b). Cinco minutos aps o exerccio, o equino ainda hiperventila. Apesar de uma elevada relao espao morto/volume corrente (EM/VC), esta hiperventilao resulta numa hiperventilao alveolar e conseqente hiperoxia e hipocapnia (Art et al., 1990). O papel termorregulatrio do sistema respiratrio pode colaborar para a

hiperventilao ps-esforo. Esta hiperventilao ocorre por um aumento da FR ao invs do aumento do VC. Quando o ambiente est quente e mido, a FR um mau indicador da demanda ventilatria do equino (Art e Lekeux, 1988b). O exerccio constante submximo prolongado induz um aumento progressivo na FR com um aumento da relao EM/VC. Isto sugere que nos equinos, o sistema respiratrio se torna cada vez mais envolvido com a termorregulao no esforo de longa durao (Lekeux e Art, 1994).

2.2.2.3. Temperatura Retal

Os equinos so animais homeotermos, isto , mantm sua temperatura corporal praticamente constante, apesar de alteraes considerveis na temperatura ambiental. Existem diversas fontes de produo de calor metablico, como o fgado, o corao e o msculo estriado esqueltico. Este ltimo, durante o exerccio, o maior produtor de calor metablico (Cunningham, 2004). Isto porque no trabalho muscular, ocorre uma converso ineficiente da energia qumica em energia mecnica, com aproximadamente 80 % da energia sendo liberada como calor (Hodgson et al., 1994). Esse calor em excesso precisa ser dissipado para o ambiente. A zona termoneutra de equinos varia de 5 a 25 C. No entanto, podem ocorrer variaes individuais (Morgan, 1998). Quando a temperatura ambiente est acima da zona de termoneutralidade dos equinos, ocorre o envio de informaes aferentes, oriundas dos receptores centrais e cutneos sensveis ao calor, rea pr-ptica do hipotlamo e a outros neurnios hipotalmicos e mesenceflicos. Dessa forma, o SNC ativa

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mecanismos para aumentar a perda e reduzir a produo de calor. Os mecanismos consistem principalmente no aumento da vasodilatao perifrica, para maximizar a perda de calor pela irradiao e conveco, e no aumento da sudorese, para perder calor pela evaporao (Cunningham, 2004). Com o exerccio, a produo de calor aumenta devido ao seu maior metabolismo (Ott, 2005) e no exerccio, cerca de dois teros do calor metablico dissipado atravs da evaporao do suor, 20 a 30 % do calor perdido atravs do trato respiratrio e o restante armazenado no organismo, refletido por um aumento da temperatura central (Ott, 2005). Embora a taxa de produo de calor corporal seja menor durante o exerccio submximo, a produo total de calor substancialmente maior porque ele possui maior durao (McCutcheon e Geor, 2004). O equino possui uma baixa relao entre a rea de superfcie corporal:massa corporal (1:90-100) em comparao aos seres humanos (1:35-40), essa discrepncia associada a uma grande produo de calor metablico durante o exerccio aumentam a exigncia sobre o sistema termorregulatrio (Hodgson et al., 1994). A conduo de calor via sistema circulatrio o principal mecanismo pelo qual o calor transferido do msculo em trabalho para a pele e o trato respiratrio. O sistema cardiovascular age como um importante efetor dos mecanismos termorregulatrios, aumentando o fluxo sanguneo para a periferia e redistribuindo o dbito cardaco. Em repouso, a termorregulao atravs de ajustes no fluxo sangneo suficiente para manter uma estabilidade trmica e existe dessa forma, um equilbrio entre a vasodilatao trmica e a vasoconstrio. Esse maior fluxo sanguneo para a periferia atende inmeras funes termorregulatrias como a conduo do calor para a superfcie corporal, fornecendo o calor latente para

que haja a evaporao do suor e suprindo o maior fluxo de lquido para a sudorese (Hodgson et al., 1994). O sangue conduz o calor do crebro e das principais vsceras para a pele. Ocorre dessa forma, uma redistribuio do DC, com maior fluxo sanguneo voltado para a periferia atravs da vasodilatao das arterolas do leito vascular da pele e da abertura das anastomoses arteriovenosas nas extremidades. Dessa forma, ocorre uma reduo da temperatura central (Cunningham, 2004). Nos equinos, a sudorese a principal forma de perda de calor por evaporao. A perda de calor corporal pela evaporao ocorre quando a gua do suor, da saliva e das vias respiratrias so convertidas em vapor dgua. O suor dessa espcie, produzido pelas glndulas apcrinas, hipertnico em relao ao plasma e contm elevadas concentraes de sdio, cloreto, potssio e laterina. Isto contribui para que numa sudorese intensa haja desidratao e desequilbrio hdrico-eletroltico. A climatizao a climas quentes aumenta as taxas de sudorese, s que sua composio eletroltica no altera no exerccio prolongado ou treinamento (Hodgson et al., 1994; Cunningham, 2004). Em condies extremas de TA e UR, a taxa de sudorese pode ocorrer de 10 a 15 L/h (Ps et al., 2004). O fator que direciona para que haja a evaporao do suor na pele a diferena da presso de vapor. A eficincia da evaporao diminui com o aumento da UR, isto , quando o ar se torna mais saturado com o vapor dgua (Cunningham, 2004). importante no subestimar o trato respiratrio como uma rota para perda de calor nos equinos em exerccio. Sob condies de desidratao, onde a condutncia do calor para a pele atravs da corrente sangunea pode estar prejudicada no exerccio, o potencial da perda calrica

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atravs dos pulmes pode se tornar maior. Em adio, os equinos possuem a capacidade de aumentar sua ventilaominuto com o aumento da durao do exerccio, desse modo aumentando o potencial de perda de calor atravs desse mecanismo (Hodgson et al., 1994). Em condies quentes e midas, a FR e a ventilao-minuto aumentam na proporo da perda de calor (McCutcheon e Geor, 2004) e a perda de calor atravs da respirao tambm se torna comprometida. Dessa forma, equinos sofrendo de estresse trmico podero ofegar (com FR de at 200 rpm) no fim do exerccio na tentativa de dissipar o calor armazenado (Hodgson et al., 1994). Tambm, quando a TA excede a temperatura da pele, a perda de calor por radiao e conveco prejudicada (McCutcheon e Geor, 2004). Nos equinos em exerccio submetidos ao estresse trmico existe uma concorrncia pelo DC entre o msculo em exerccio, o miocrdio, o tecido adiposo e a pele, associados a uma perda de fludo pela sudorese e redistribuio de fludo para o interstcio dos msculos em trabalho, causando uma reduo no fluxo sanguneo para o tecido adiposo, que reduz a disponibilidade de cidos graxos para o exerccio (McCutcheon e Geor, 2004). Na competio entre a pele e o tecido muscular pelo DC durante o exerccio, o segundo obtm prioridade na manuteno da funo cardiovascular sobre a termorregulao. Dessa forma pode ocorrer nos equinos um menor fluxo sangneo para a pele e uma menor perda calrica (Hubert et al., 2002). No estresse trmico a FC e a FR se encontram elevadas e a TR pode alcanar at 43C (McCutcheon e Geor, 2004). O trabalho numa TA de 41C aumentou o uso do glicognio muscular e reduziu o uso dos triacilgliceris, quando comparado ao mesmo trabalho a 9C. No entanto, no ocorreu aumento da utilizao dos

carboidratos se o aumento da temperatura corporal (TC) foi atenuado pela climatizao. A menos que o estresse calrico cause aumento da TC, ele no influenciar o metabolismo energtico (Ott, 2005). No entanto, os efeitos deletrios de uma hipertermia podem criar efeitos adversos funo do SNC, ao metabolismo muscular e a capacidade ao exerccio (Ott, 2005). Exerccio submximo quando realizado em elevadas temperaturas resulta num aumento da glicemia, acima do que seria detectado em menores temperaturas. Este aumento exarcebado se deve a uma maior gliconeognese heptica, com pouco ou nenhum aumento do metabolismo energtico no msculo estriado esqueltico. Ento parece que o exerccio durante o estresse trmico resulta num maior uso de glicognio muscular, mas no num maior aumento da utilizao de glicose sangunea. Uma reduo na utilizao dos cidos graxos livres (AGL) ocorre nessas condies de elevada TA e sugere um desvio na atividade enzimtica (Ott, 2005), j que o aumento da temperatura muscular age nas enzimas glicolticas e glicogenolticas, alterando a taxa de fluxo entre essas vias (McCutcheon e Geor, 2004). Quando o exerccio realizado em condies quentes e midas, e principalmente se no estiver climatizado, ocorrer uma reduo do VO2mx e aumento da produo de lactato, com conseqente reduo da capacidade aerbica e maior dependncia do metabolismo anaerbico (Ps et al., 2004). A hipertermia do exerccio promove uma depleo de glicognio e o acmulo de lactato, que pode contribuir para uma fadiga mais rpida e uma exausto precoce (McCutcheon e Geor, 2004). Entretanto, existem poucas evidncias de que uma elevada TA altere a utilizao energtica caso a TC permanea numa faixa aceitvel (Ott, 2005).

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2.3. ESTRATGIA NUTRICIONAL PARA AUMENTAR O SUPRIMENTO DE GLICOSE SANGUNEA DURANTE O EXERCCIO

Em humanos, a maior disponibilidade de glicose durante exerccio moderado a intenso pela ingesto de glicose ou refeies ricas em carboidratos antes ou durante exerccios pode aumentar o desempenho, medido como um maior tempo para ocorrer a fadiga ou menor tempo para percorrer uma determinada distncia (Jacobs e Sherman, 1999). Por isso, estratgias alimentares que aumentam o suprimento de glicose para o msculo esqueltico durante o exerccio so chamadas de ergognicos em atletas humanos (Geor, 2006). Semelhantemente, o tempo para ocorrer a fadiga foi adiado em 14-20% em equinos exercitados at a exausto num VO2mx de 50-60%, quando foi fornecida glicose (2-3 g/min) via intravenosa (Farris et al., 1995, 1998). De acordo com Jose-Cunilleras e Hinchcliff (2004), a administrao campo de glicose, oral ou intravenosamente, em eventos equestres no uma interveno prtica. Uma melhor estratgia seria fornecer uma refeio rica em amido previamente atividade atltica. Esse procedimento altera o metabolismo de carboidratos e lipdios, mas seu efeito sobre o desempenho esportivo equino ainda no foi completamente elucidado (Jose-Cunilleras et al., 2002). Concentrados ricos em amido influenciam fortemente a concentrao de glicose, insulina e o metabolismo cido-bsico nos equinos. Quando o amido ingerido dentro de trs a quatro horas antes de um evento esportivo ocorre rpida hiperglicemia com o pico glicmico ocorrendo uma a duas horas aps a refeio, dependendo se feno est ou no disponvel, induzindo uma resposta

insulnica (Hintz, 1997; Ralston, 1997). A insulina reduzir a concentrao de glicose sangnea podendo faz-lo alm dos limites basais, de forma que a glicose durante uma prova pode estar abaixo do limite normal. Em humanos, a hipoglicemia pode ser responsvel pela fadiga durante um exerccio prolongado e extenuante (Ivy, 2005). Consumo de gros poucas horas antes da atividade fsica resultou em concentraes de glicose e insulina plasmticas aumentadas e concentrao dos cidos graxos livres diminuda no incio do exerccio (Lawrence et al., 1993). Contudo, depois de vrios minutos de atividade fsica, uma diminuio na concentrao da glicose plasmtica foi observada (Lawrence et al., 1993, 1995; Stull e Rodiek, 1995). Esta reduo na glicose plasmtica pode ser resultado do aumento de sua captao pelo msculo em trabalho sob a influncia da maior concentrao de insulina. Fornecer uma refeio rica em gros duas a trs horas antes do exerccio (comparado refeio rica em forragem de alfafa ou jejum) resultou em oxidao aumentada de carboidratos e oxidao diminuda de lipdios durante avaliao em esteira (JoseCunilleras et al., 2002). Refeio rica em gros antes do exerccio no reduziu o uso do glicognio muscular (Lawrence et al. 1993, 1995; Jose-Cunilleras et al., 2002), embora o glicognio heptico possa ter sido economizado em um estudo (Lawrence et al., 1993). Vrios trabalhos contra-indicaram o fornecimento de gros, e especialmente acares, antes do exerccio, principalmente durante competies prolongadas, pois a conseqente liberao de insulina interfere negativamente na mobilizao de lpides e no uso de cidos graxos livres alm de possivelmente gerar uma hipoglicemia transitria (Ecker e Lindinger; 1994; Pagan et al., 1995; Pagan e Harris, 1999). Segundo Geor (2006), esta supresso na mobilizao

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de lpides desempenho, carboidratos esgotamento carboidratos

pode ser prejudicial ao por acelerar a oxidao dos resultando em prematuro dos estoques endgenos de

recomendada especfica para o cromo (Anderson e Kozlovsky, 1985; Lukaski, 2000). J para os equinos, no h evidncias de sua essencialidade (Vervuert et al, 2005; NRC, 2007). A biodisponiblidade do cromo geralmente baixa, apresentando valores de 0,5% a 3% (Offenbacher et al., 1986), e a absoro do Cr inorgnico parece ser inversamente proporcional sua quantidade na dieta (Pechova e Pavlata, 2007). O cromo absorvido essencialmente no intestino delgado e em ratos, a principal regio de absoro o jejuno. As formas inorgnicas, como o cloreto crmico (CrCl3) e o xido crmico (Cr2O3) so mal absorvidos (NRC, 1997). Vrios fatores interferem na sua absoro no intestino delgado, nos quais os inibidores so agentes quelantes como o fitato e minerais como ferro, zinco e vandio em maior quantidade, alm de quantidades subtimas de cido nicotnico. Os estimuladores so os aminocidos, o oxalato, a vitamina C e o amido (NRC, 1997; Kobla e Volpe, 2000). O cromo na forma de complexos orgnicos, como cromo picolinato (CrPic), cromo nicotinato (CrNic), cromo-aminocido, cromolevedura e cromo-quelato, possui maior absoro. Formas naturais de cromo, como leveduras originrias de cervejarias (cromolevedura), podem atingir nveis de absoro de 10 a 25% (Anderson e Kozlovsky, 1985). Aps a absoro, o Cr circula pelo plasma na concentrao de 0,01 a 0,3 g/L, ligado transferrina e possivelmente albuminas. Por se ligar transferrina, o cromo possui um efeito significativo no transporte de ferro. A concentrao do Cr3+ no plasma pode estar diminuda no caso de uma infeco ou sobrecarga de glicose. O cromo pode ser armazenado em vrios tecidos do organismo, sem possuir um local especfico. A maior quantidade de cromo parece estar localizada no fgado, rins, bao e epiddimo,

2.4. SUPLEMENTAO COM CROMO

DIETTICA

At o momento, existe pouca informao esclarecendo a necessidade nutricional de cromo para os equinos (NRC, 2007), embora de acordo com Geor (2006), um suplemento pode ser um nutriente essencial ou uma substncia que tenha uma funo reconhecida no metabolismo ou funo tecidual, mas no seja reconhecida como nutriente essencial, assim como o cromo. Jackson (1997) sugeriu que a necessidade de cromo seja maior para equinos em exerccio do que quando sedentrios. Este dado reforado pelo trabalho de Lukaski (2000), com humanos, em treinamento de enduro. O cromo um micromineral que ocorre nas valncias de -2 a +6, sendo a forma hexavalente (Cr6+) ligada a problemas de toxidade, como ulcerao nasal e bronquite crnica aps inalao. A forma trivalente (Cr3+) a que realmente interessa nutricionalmente, sendo mais estvel, de baixa toxicidade e de maior margem de segurana (McDowell, 1992). Dentre as fontes alimentares encontram-se as oleaginosas, aspargos, cerveja, cogumelo, ameixa, pimenta-do-reino, cereais integrais, carnes, vsceras, forragens, leite, chocolates mais escuros, leguminosas e vegetais (Clarkson, 1997). As concentraes so de miligramas por quilo e, em adultos humanos, a ingesto diria e segura est estimada entre 50 e 200 g/dia e embora seja um elemento essencial nessa espcie, no existe uma ingesto diettica

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porm j se observou maior concentrao de Cr no corao e rins de ratos (Vallerand et al., 1984; Anderson, 1987). Desde o final da dcada de 50, definiu-se a necessidade da ingesto de cromo para a manuteno da tolerncia normal glicose em mamferos, o que desencadeou diversas pesquisas relacionadas relao do cromo com o metabolismo dos carboidratos. A necessidade em ratos foi identificada em 1957 por Schwart e Mertz e desde ento, a suplementao de cromo na dieta de humanos e outros mamferos vem despertando uma busca incessante de evidncias biolgicas que assegurem seu uso e validade. Ao cromo so atribudas diversas funes biolgicas. Sua funo primria potencializar os efeitos da insulina e, desse modo, alterar o metabolismo de carboidratos, lipdios e aminocidos. Esse metal o componente ativo de um oligopeptdeo de baixo peso molecular, cromodulina. Em mamferos formado pelo Cr3+ e por resduos de glicina, cistena, glutamato e aspartato (Vincent, 2000). At o momento, este complexo orgnico foi isolado em coelhos, sunos, bovinos, caninos, ratos, camundongos e no colostro, e parece estar amplamente distribudos entre os mamferos (Vincent, 2000). Sobre seu mecanismo de ao, supe-se que o Cr aumente a fluidez da membrana celular para facilitar a ligao da insulina ao seu receptor (Evans e Bowman, 1992) e que a cromodulina funcione como um carreador de cromo para protenas celulares deficientes neste mineral (Vincent, 1994). Tambm, o cromo pode aumentar o nmero de receptores de insulina e a sensibilidade das clulas do pncreas. Recentemente, o Cr foi caracterizado como componente do mecanismo de amplificao da sinalizao intracelular de insulina, responsvel pelo estmulo da translocao de GLUT-4, ou seja, um fator colaborador do aumento da

sensibilidade de receptores insulnicos na membrana plasmtica (Vincent, 1999). Embora os mecanismos de ao do Cr no tenham sido demonstrados bioquimicamente, sinais de sua deficincia marginal em roedores incluem diminuio da tolerncia glicose, menor longevidade e aumento das concentraes plasmticas de insulina, colesterol e triacilgliceris, o que demonstra que o Cr alm de estar ligado ao metabolismo dos carboidratos, interfere no metabolismo lipdico e protico simultaneamente. Sua deficincia em humanos parece estar relacionada maior incidncia de diabetes, hiperinsulinemia, reduo do nmero e da ligao a receptores de insulina, altos nveis sangneos de placas formadoras de colesterol e doena coronariana (NRC, 1997; Lukaski, 2000). Por estar diretamente ligado ao insulnica, o Cr participa do metabolismo protico, estimulando a captao de aminocidos pelas clulas e conseqentemente a sntese protica. Existem, ainda, evidncias sobre a funo do Cr no metabolismo lipdico, sendo atribudo a ele um efeito lipoltico (Kreider, 1999.). Devido a isso, a suplementao com cromo tem sido utilizada para aumentar a massa muscular e diminuir a gordura corporal em atletas e pacientes humanos. A suplementao com CrPic a potros de cerca de 1 ano, durante 112 dias, no obteve efeito em sua taxa de crescimento e desenvolvimento e nem em sua composio corporal. No entanto, essa suplementao aumentou a taxa de metabolizao de glicose nestes equinos e reduziu mais rapidamente o pico glicmico, aps o teste intravenoso de tolerncia glicose e resposta insulina (Ott e Kivipelto, 1999). J em Gentry et al. (1999), no mesmo teste, guas adultas suplementadas com CrPic no apresentaram diferena quanto concentrao de glicose e apresentaram

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maior concentrao de insulina plasmtica (P<0,002). Um efeito do cromo que tem sido bastante pesquisado na resposta imune, principalmente em animais submetidos s situaes de estresse. O aumento da concentrao sangunea de cortisol, que um fator de imunodepresso, aparece como elemento constante nos casos de estresse. Nos bovinos, a excreo de Cr maior durante o estresse e sua suplementao resultou no estmulo do sistema imune e menor morbidade e mortalidade no transporte de bovinos em confinamento (Jackson, 1997). Contudo, em Gentry et al. (1999), CrPic no afetou a funo imune de guas adultas. Durante o exerccio, o cromo mobilizado de seus estoques orgnicos para aumentar a captao de glicose pela clula muscular, mas sua secreo muito mais acentuada na presena de insulina. O aumento da concentrao de glicose sangnea induzida pela dieta estimula a secreo de insulina que, por sua vez, provoca maior liberao de cromo. O cromo em excesso no sangue no pode ser reabsorvido pelos rins sendo ento excretado na urina. rotina encontrar maiores concentraes de Cr na urina aps o fornecimento de carboidratos, principalmente na forma de acares (Anderson, 1987; Clarkson, 1997). A concentrao plasmtica de Cr aumenta durante exerccios aerbicos prolongados e mantm-se elevada duas horas aps o fim da atividade (Clarkson, 1997). E o exerccio fsico provoca maior excreo de Cr pela urina nos dias de competio atltica (Anderson, 1987; Rubin et al., 1998). As perdas urinrias de Cr no so restabelecidas rapidamente, em funo de sua absoro intestinal no ser suficiente para suprir o mineral perdido. Alm disso, o Cr3+ inorgnico incorporado lentamente cromodulina, nos rins e fgado (Schwarz e Mertz, 1959). Exerccios tanto aerbicos

quanto o treinamento de fora aumentam a absoro do Cr intestinal, mas a perda urinria ainda prioritria, resultando em um balano negativo de Cr, depleo e redistribuio dos estoques corporais aps o exerccio. Diante disso, especula-se que atletas possam apresentar deficincia de Cr com mais facilidade que indivduos sedentrios ou moderadamente ativos (Rubin et al., 1998), o que j justificaria sua suplementao. Equinos exercitados intensamente e alimentados com dieta rica em gros provavelmente excretam mais Cr em sua urina do que equinos sedentrios, o que poderia explicar porque num determinado estudo, animais sedentrios no responderam suplementao com cromo (Pagan, 2000). Vervuert et al. (2005) especularam que a suplementao com cromo no possui efeitos benficos em equinos saudveis submetidos ao exerccio. Em seu trabalho, o fornecimento de 4,15 ou 8,30 mg Cr/dia de Cr levedura no apresentou efeito nos parmetros bioqumicos e clnicos avaliados. No entanto, em eqdeos submetidos a competies e a trabalhos pesados o cromo pode minimizar o estresse, contribuindo para a homeostase e melhorando o desempenho de equinos em treinamento para as competies. Mertz et al. (1965) citaram que nos ratos os sintomas de deficincia de Cr so agravados por infeces, dietas de baixa protena, exerccios excessivos e perdas sanguneas. Pagan et al. (1995) realizaram um estudo controlado onde equinos PSI treinados foram suplementados por 14 dias com 5 mg de cromo-levedura (CROM). Eles foram exercitados numa esteira 3 horas aps receberem 1,81 Kg de concentrado e 5 horas aps ingerirem 1,36 Kg de volumoso. Essa suplementao no afetou as concentraes de glicose, insulina, cortisol ou triacilgliceris, aps um jejum de 8 horas.

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Aps 1 hora do fornecimento do concentrado, a concentrao de insulina tendeu a ser menor no grupo suplementado com cromo. Durante o exerccio, a glicose plasmtica tendeu a ser menor e as concentraes de triacilgliceris no perodo de recuperao foram maiores no grupo CROM (P<0,05). A concentrao do lactato plasmtico tendeu a ser menor e a concentrao do cortisol foi menor logo antes e nos estgios iniciais do exerccio. 0, 5 ou 10 mg de cromo quelato foram adicionados na dieta de guas Mangalarga Marchador submetidas a trs provas de marcha em dias alternados, tendo cada uma 50 minutos de durao. A FC do grupo que no recebeu cromo na dieta foi maior do que os grupos que receberam 5 ou 10 mg de Cr (P<0,05). Tambm, o fornecimento de 10 mg de Cr na dieta reduziu a FR aps o exerccio (P<0,05) (Prates, 2007; Prates et al., 2009).

Foram utilizadas 12 fmeas eqinas da raa Mangalarga Marchador, filhas de dois garanhes diferentes, com (mdiaDP) 4,250,62 anos, peso de 339,4223,09 Kg e escore corporal 2 3 (1 - 5; Carrol e Huntington, 1988). Antes de iniciarem no experimento as guas nunca tinham sido submetidas ao treinamento para prova de marcha e permaneciam soltas no piquete recebendo apenas gua e sal mineral. Os animais ficaram soltos em piquete1 de 8.3 ha, com Coast-cross (Cynodon dactylon x Cynodon nlemfluensis), bebedouro e cocho coberto para fornecimento de gua e sal mineral2 ad libitum. No incio do perodo experimental e semanalmente todas as guas foram pesadas e tiveram seu escore corporal avaliado. A cada pesagem a quantidade de alimento a ser fornecida diariamente, foi calculada de acordo com indicao do NRC (2007). Assim, era calculado 2,5% do peso de cada animal o que representava o consumo de MS at a prxima pesagem (estimado para equinos em trabalho moderado de acordo com NRC, 2007). A quantidade de concentrado fornecida representou de 50 a 60% desse valor, dependendo do escore corporal (EC) avaliado. Na escala de 1 a 5 (Carrol e Huntington, 1988), as guas que apresentavam EC igual ou superior a trs recebiam 50% do consumo de MS de alimento concentrado e aquelas que apresentavam o EC menor que trs, o concentrado oferecido at a prxima pesagem representava 60% do consumo de MS. O alimento concentrado (Tab. 2) foi misturado semanalmente na fazenda e calculado segundo tabela de composio de alimentos de Valadares Filho et al. (2006) e
1 2

3. MATERIAL E MTODOS

3.1. LOCAL, ANIMAIS, INSTALAES E DIETA

Os procedimentos realizados neste experimento foram aprovados pelo Comit de tica para Experimentao Animal da Universidade Federal de Minas Gerais (CETEA/UFMG) em 12 de maro de 2008 (protocolo n 230/07). O experimento foi conduzido no Haras Catuni (latitude, 16o 41 161 S; longitude, 43o 31 210 W; altitude, 784 m), localizado no municpio de Montes Claros (MG), durante o perodo de 09 de janeiro a 21 de fevereiro de 2008.

Aferido pelo GPS e Trex Vista Garmin Sal mineral Coequi Plus Tortuga

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exigncias nutricionais de equinos em trabalho moderado (NRC, 2007). Durante o perodo de condicionamento dos animais para as provas o concentrado foi oferecido s 06h00min e 18h00min em unidades de

servio, construdas de acordo com Carvalho e Haddad (1987). No concentrado da manh, foi acrescentado diariamente 50 mL de leo de soja.

Tabela 2 - Composio do concentrado* e volumoso oferecido para as guas durante o experimento.

Nutriente MS(%) PB(%) Lys (%)a EB (Mcal/kg) ED (Mcal/kg) ED (Mcal/kg) rao EE (%) FDN(%) FDA(%) Hemiceluloses (%) Ca (%) P (%) Cinzas (%) PB: ED (g/Mcal) Ca: P Cromo (mg/Kg) 4,45 68,32 33,61 34,72 0,21 0,23 9,59 36:1 0,91:1 18,24 Composio (%) Volumoso 34,93 8,06 0,22 4,25 2,25 2,84b 5,91 26,06 6,47 19,59 1,73 0,63 11,21 47:1 2,75:1 9,24 Concentrado 90,49 15,32 0,78 3,70 3,29b

*Composio do concentrado: 61% de milho, 19% de farelo de soja, 15% de farelo de trigo, 3% de calcrio calctico, 1% de fosfato biclcico e 1% de sal mineral sem cromo3 (Composio bsica por Kg: I- 125 mg; Cu- 1.200mg; Na- 120g; Ca- 185g; Mn- 970mg; Co- 21mg; Zn- 2,2g; Fe- 2g; S-12g; Se-10 mg; F(mx.)- 600 mg; P- 60g; Mg- 13,6 g; K- 20 g.). aDe acordo com dados da tabela de Valadares Filho et al. (2006). bAlm das 0,368 Mcal pertencentes aos 50 mL de leo de soja adicionados diariamente ao concentrado. Abreviaturas: Matria seca (MS), protena bruta (PB), lisina (Lys), energia bruta (EB), energia digestvel aparente (ED), extrato etreo (EE), fibra em detergente neutro (FDN), fibra em detergente cido (FDA) e fibra bruta (FB).

Sal Mineral Coequi Plus Tortuga.

38

3.2. TRATAMENTOS

mdia da marcha e ndice de recuperao cardaca (%) prximos foram sorteadas para cada horrio de fornecimento. A FC mdia da marcha e o ndice de recuperao cardaca foram obtidos de cada animal aps um perodo de 13 min que foi dividido em sesses contnuas de esforo fsico, sendo 4 minutos ao passo, 4 minutos marcha, 2 minutos ao passo e 3 minutos em estao, sendo os dois ltimos, o perodo de recuperao, conforme metodologia adaptada de Eaton et al. (1995a). Para a avaliao contnua da FC, as guas utilizaram frequencmetros cardacos (Polar RS400SD)5 que foram adaptados a uma faixa elstica que circundou o trax dos animais, de modo que os transmissores ficassem prximos regio do cilhadouro, na altura da veia torcica lateral. Os freqencmetros realizaram registros da FC a cada cinco segundos. Com o uso do programa da Polar6, os dados registrados nos monitores de pulso utilizados pelos cavalheiros foram posteriormente transferidos por infravermelho para um computador. O ndice de recuperao cardaca (%) foi obtido pela seguinte equao: % = {[(FCX marcha FCR5) / FCX marcha] * 100}. Onde: FCX marcha = FC mdia da marcha; FCR5 = FC ao final do perodo de recuperao. Dessa forma, os valores absolutos de cada indivduo foram corrigidos atravs de percentuais, permitindo comparar os integrantes da amostra e formar os grupos
5 6

Os tratamentos foram: dois tipos de suplementao (10 mg de um suplemento comercial de cromo quelato4 ou placebo, em cpsulas), trs diferentes horrios de fornecimento do alimento concentrado, 4 h, 2 h e 30 min antes da prova de marcha e os momentos de coleta dos dados. Os animais foram distribudos aos diferentes tratamentos atravs de sorteio. Essas cpsulas foram administradas diretamente na boca de cada animal, junto ao concentrado das 18 horas. Foram utilizados 10 mg de Cr quelato neste experimento, devido ao fato dessa dosagem ter reduzido a frequncia respiratria e a frequncia cardaca aps o exerccio (P<0,05) de guas Mangalarga Marchador submetidas prova de marcha, no trabalho de Prates (2007). Os dois grupos experimentais foram formados tentando minimizar as diferenas entre os animais em peso, condio corporal, idade, freqncia cardaca mdia da marcha e ndice de recuperao cardaca. Entre os seis animais de cada grupo variou o horrio de fornecimento do alimento concentrado no dia da prova de marcha, assim foram sorteadas duplas de cada grupo experimental para receberem o alimento concentrado (0,63 Kg/ 100 Kg PV) 4 h, 2 h ou 30 min. antes da prova teste (Tab. 3). A distribuio das guas nos horrios de fornecimento do alimento concentrado foi feita obedecendo ao seguinte critrio: cada duas guas, filhas de um mesmo garanho e de idade, peso, freqncia cardaca (FC)
2,5% de cromo e teor mnimo de 90% do cromo quelatado (carbo-amino-fosfoquelato de cromo) - Tortuga Cia. Zootcnica Agrria.
4

Polar S-Series Toolkit Polar Precision Performance

39

experimentais e como o coeficiente de variao da FCX marcha foi de 13,18%, valor inferior7 a 20 %, todos os animais puderam integrar a amostra.

3.3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

O experimento durou 44 dias e foi dividido em duas etapas, uma de 29 (prexperimental) e outra de 15 dias. A etapa pr-experimental foi para adaptao dos animais dieta, ao aditivo cromo e ao exerccio a que foram submetidos na etapa experimental. A segunda etapa (experimental) foi destinada coleta dos dados para avaliao do rendimento dos animais em trs provas de marcha simuladas nos dias 1, 8 e 15 do perodo experimental, de acordo com regulamento da XXVI Exposio Nacional do Cavalo Mangalarga Marchador, realizada pela ABCCMM (2007). Antes da etapa pr-experimental as guas foram vermifugadas8 e banhadas com soluo carrapaticida9. No incio dessa etapa foram coletadas de cada animal, amostras de sangue por puno da veia jugular, com agulha estril de coleta mltipla, em um frasco vacuolizado de quatro mL com EDTA, para realizao do hemograma. Esse material foi acondicionado em geladeira a +10C. No pr-experimento, o condicionamento dos animais para a simulao do concurso de marcha, adaptado de Meirelles (1997) e Prates (2007), foi realizado em uma pista de forma oval com dimenso aproximada de 60 x 20 m e 0 de inclinao. Os animais foram
Soares, D.D. (2007). Altec (ivermectina a 2%) - Tortuga Cia. Zootcnica Agrria. 9 Butox P CE 25 (deltametrina).
8 7

montados e exercitados em dias alternados (2, 4 e 6 feiras) inicialmente 10 min no passo (no sentido horrio), 5 min na marcha (no sentido horrio), 4 min no galope (2 min no sentido horrio e 2 min no sentido antihorrio), 5 min na marcha (no sentido antihorrio) e novamente 10 min no passo (no sentido anti-horrio). A cada quatro dias, a freqncia cardaca (FC) foi avaliada em torno de 5 min aps o exerccio (quando a sela era retirada do animal) e quando apresentava-se abaixo de 60 batimentos por minuto (bpm) significava que no houve esforo representativo para o condicionamento e a durao do exerccio foi aumentada em 5 min no tempo de marcha. Se a FC estava entre 60 a 70 bpm, demonstrava que o animal tinha apresentado boa recuperao e o tempo da marcha era mantido. Quando a FC excedia 70 bpm, significava que o animal estava com excesso de trabalho e o tempo de marcha era reduzido em 5 min at que os batimentos se apresentassem entre 60 e 70 bpm. Foram anotados em planilha individual os dados de avaliao do desempenho fsico antes e depois do exerccio, durante todo o perodo pr-experimental (FC) e experimental (FC, FR e temperatura retal). As temperaturas ambiente10, de globo negro11 [globo-termmetro confeccionado com bola de pingue e mantido na altura mdia do centro de gravidade dos animais, segundo Souza et al. (2002)], de bulbo seco e de bulbo mido12 e a umidade relativa do ar9 foram aferidas e anotadas nos dias de exerccio, s 06h00min, 08h00min, 09h30min, 10h00min, 12h00min, 14h00min, 15h30min, 16h00min e 18h00min, a fim de se avaliar a possvel influncia destes fatores ambientais no desempenho dos animais.

10 11

Relgio termo-higrmetro Minipa MT-242 Incoterm L-091/07 12 Termo-higrmetro de leitura direta Incoterm

40

Tabela 3 - Rodzio dos animais ao longo das diferentes provas. Os nmeros romanos representam os animais.
Fornecimento da rao (horas) 1 Semana Cromo V IX VII XI III I Controle VI X VIII XII IV II 2 semana 10h:00min Cromo IX VII V 16h:00min III I XI Controle X VIII VI IV II XII Cromo VII V IX I XI III 3 semana Controle VIII VI X II XII IV

4:00 2:00 0:30 4:00 2:00 0:30

Foram realizadas as estimativas dos ndices de Temperatura e Umidade (ITU) e de Temperatura do Globo Negro e Umidade (ITGU) a partir desses dados. O ITU foi calculado segundo Tojal (2002): ITU = Tbs + 0,36 * Tpo + 41,5 em que a Tbs a temperatura do termmetro de bulbo seco (C) e Tpo a temperatura de ponto de orvalho (C). O ITGU foi calculado de acordo com Tojal (2002): ITGU = Tgn + 0,36 * Tpo + 41,5 em que Tgn representa a temperatura do termmetro de globo negro (C) e Tpo, a temperatura de ponto de orvalho (C). A temperatura de ponto de orvalho (C) foi calculada atravs do programa Vaisala Humidity Calculator verso 2.1. (2007). As faixas de conforto, de risco e de estresse trmico nos animais desse experimento foram determinadas com base nas observaes de Hahn (1985) citado por Tojal (2002). Segundo ele tais faixas seriam vlidas para os animais domsticos em geral, inclusive equinos. Conforme este autor, um valor de ITU ou ITGU 70 indica condio normal, no estressante; um

valor entre 71 e 78 considerado uma situao crtica; entre 79 e 83 indica perigo e > 83 j constitui uma emergncia. Na simulao do concurso de marcha, os animais desenvolveram 5 min de passo com mdia de 1,6 m/s para aquecimento, seguidos de 50 min de marcha cadenciada (25 min para cada lado), com velocidade mdia de 3,33 m/s, sendo que um dia antes e um dia aps a prova as guas permaneceram soltas em piquete sem desenvolver qualquer atividade fsica. As provas de marcha foram realizadas s 10h00min e 16h00min de cada dia de prova, com seis animais em cada horrio. Com a utilizao de um frequencmetro a freqncia cardaca das guas foi avaliada nos momentos: antes e durante a prova e, aos 5, 10, 15, 20 e 25 minutos depois da prova. Imediatamente antes (tempo 0), imediatamente depois da prova (55 min) e 25 minutos aps o fim da prova (80 min), as freqncias respiratrias e as temperaturas retais foram aferidas e as amostras sangneas coletadas atravs de puno da veia jugular com agulha de coleta mltipla13 em tubos plsticos vcuo sem

13

Greiner Bio-one Brasil. 21 G (25 x 0,8 mm).

41

anticoagulante14, com EDTA15 e com heparina16.

3.4. ESTIMATIVA DIGESTIBILIDADE IN SITU ALIMENTOS

DA DOS

A digestibilidade dos alimentos da dieta foi determinada pelo mtodo de digesto cecal in situ, realizado no Laboratrio de Pesquisas em Sade Equina EQUILAB da Universidade Federal Rural do rio de Janeiro. Foi utilizado um equino adulto com 222 kg de peso vivo fistulado no ceco, segundo metodologia descrita por Lowe et al. (1970). O animal foi alimentado com uma dieta composta de 80% de volumoso e 20% de concentrado dividido em quatro fraes dirias, e consumo dirio, expresso em MS, equivalente a 2,5% do peso vivo (NRC, 2007). A metodologia utilizada para a conduo dos ensaios in situ foi adaptada dos procedimentos descritos por Huntington e Givens (1995). Foram utilizados sacos de nilon de porosidade de 45 (Tenyl) e com rea interna de 6,5 x 20,0 cm, segundo Hyslop et al. (1999), em uma relao de 20 g/cm. Aps selagem quente das laterais, os sacos foram secos em estufa de ventilao forada a 55C por 24 h, sendo depois pesados e identificados. Posteriormente, foram colocadas aproximadamente 5,2 g / saco de amostras do volumoso pr-seco e do concentrado, modas a 2 mm em sacos separados.

Aps selagem dos sacos, foi fixado na extremidade superior de cada saco um cordo de nilon (45 mm), a fim de permitir que o saco atingisse toda a poro cecal e com livre movimentao. Foram inseridos dois sacos com amostras dos alimentos e um em branco, todos previamente umedecidos em gua destilada por um minuto, antes da incubao, evitando assim flutuao no interior do ceco. Foram realizadas duas incubaes para cada alimento. Os sacos foram removidos do ceco aps 48 h de incubao e lavados manualmente com gua de corrente fria. A lavagem foi realizada suavemente at que na gua utilizada no aparecesse resduo, caracterizando a remoo das impregnaes. Os sacos foram secos em estufa de ventilao forada a 55C, por 48 h, e pesados para clculo das perdas de MS para cada saco. Ao trmino do ensaio, os resduos dos sacos do mesmo alimento foram misturados, homogeneizados e modos a 1 mm, sendo ento analisados quanto ao teor de MS (AOAC, 1990) no Laboratrio de Nutrio Animal do Departamento de Zootecnia da Escola de Veterinria da UFMG.

3.5. PROCESSAMENTO LABORATORIAL DAS AMOSTRAS

Os tubos sem anticoagulante e com heparina contendo amostras sanguneas foram mantidos resfriados em um isopor com gelo e centrifugados, no mesmo dia, a 3.000 rpm por 20 minutos numa centrfuga. Os sobrenadantes foram divididos em trs alquotas em tubos criognicos17 e

14 15

Vacuplast. Com gel separador, 9 mL. Vacuplast. 4 mL. 16 Labor Import. 7 mL.

17

TRP.

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congelados a -80 C em botijo18 com nitrognio lquido at o respectivo processamento.

3.5.1. Hemograma

atravs de kits disponveis comercialmente (RIA; Cortisol Coat-A-Coat e Insulin CoatA-Coat, Diagnostic Products Corp., Los Angeles, CA, USA), previamente validados para o uso em equinos (Reimers et al., 1982).

O hemograma foi realizado no laboratrio Branca de Neve, em Montes Claros (MG), de acordo com Stockham e Scott (2002). O volume celular mdio (VCM), o volume globular mdio (VGM) e a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (CHCM) foram obtidos por meio de clculos, segundo Stockham e Scott (2002).

3.5.4. Glicose e lactato

3.5.2. Protenas totais, Albumina, Globulinas e Relao Albumina/Globulina

A partir da amostra sangnea do tubo sem anticoagulante, as anlises das concentraes da glicose e do lactato foram determinadas imediatamente aps a coleta por leitura direta em glicosmetro autoanalisador19 e lactmetro autoanalisador20, respectivamente. Em adio, o ndice insulina : glucose (I:G) foi calculado.

3.5.5. Triacilglicerol e Glicerol Plasmticos As anlises foram realizadas no Laboratrio Branca de Neve, em Montes Claros (MG). O soro obtido foi utilizado na determinao das protenas totais pelo mtodo do biureto e a albumina foi determinada pelo mtodo do verde Bromocresol. Globulinas e relao albumina/globulina foram determinadas atravs de relaes matemticas.

3.5.3. Insulina e Cortisol

O triacilglicerol e o glicerol plasmticos foram determinados pela tcnica de espectrofotometria, a partir do plasma heparinizado. Para a anlise do triacilglicerol foi utilizado o kit comercial Triglicrides Lquido Estvel (K055) da Bioclin. Para o glicerol foi utilizado um kit da Bioclin21, onde a marcha analtica semelhante ao do kit anterior, sendo que a concentrao do padro utilizado foi de 98 mg/dL.

As concentraes sricas de insulina e cortisol foram analisadas no B.E.T. Laboratories Endocrinologia Veterinria, no Rio de Janeiro (RJ) por radioimunoensaio, utilizando-se o mtodo em fase slida,
18

Modelo XC 20. ABS PecPlan.

Accutrend GCT - Roche Accutrend Lactate - Roche 21 Gentilmente fornecido pelo Leonardo Santos de Freitas, do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento da Bioclin.
20

19

43

3.5.6. Anlise Qumica da Dieta e das Fezes

em frascos plsticos hermeticamente fechados e devidamente identificados. As amostras dos alimentos submetidas s seguintes anlises: foram

As amostras de volumoso e concentrado foram coletadas durante o perodo experimental nos dias 10 de janeiro, 6 e 20 de fevereiro de 2008. No piquete onde as guas permaneceram, a coleta do volumoso para anlise bromatolgica foi realizada segundo a tcnica de pastejo simulado (Gardner, 1986). As amostras foram mantidas separadas e permaneceram congeladas at seu processamento. A coleta das fezes teve durao de cinco dias, quando uma amostra foi coletada diariamente diretamente da ampola retal e acondicionada em saco plstico, identificado por animal e dia, e congelada at posterior anlise. No mesmo horrio das coletas foi fornecido, junto com o concentrado da tarde, s 18:00 h, o indicador externo LIPE, validado para a espcie por Lanzetta (2006), para estimativa da produo fecal dos animais, na dosagem nica de 250 mg / animal / dia, administrada atravs de cpsulas por via oral. O fornecimento do indicador iniciou-se 24 horas antes do perodo de coleta fecal, para adaptao e eliminao uniforme nas fezes. O processamento e anlise da composio qumica do volumoso, do concentrado e das fezes foi realizado no Laboratrio de Nutrio do Departamento de Zootecnia da Escola de Veterinria da UFMG, em Belo Horizonte (MG). As amostras foram descongeladas temperatura ambiente e posteriormente divididas em duas alquotas, pesadas, acondicionadas em bandejas e submetidas a uma pr-secagem em estufa de ventilao forada a 65C por 72 horas. Em seguida, foram novamente pesadas e modas em moinho tipo Willey em peneira de 1 mm (Silva e Queiroz, 2002). Este material foi acondicionado separadamente por animal

Matria seca (MS), protena bruta (PB) e extrato etreo (EE), segundo Silva e Queiroz (2002). Clcio (Ca), fsforo (P) e cinzas, segundo a AOAC (1990). Componentes da parede celular: Fibra em Detergente Neutro (FDN), Fibra em Detergente cido (FDA), de forma sequencial, Hemiceluloses (HCEL) e Ligninas (LIG), segundo Van Soest et al. (1991). Cromo, analisado por espectrofotometria de absoro atmica. Energia bruta da dieta e das fezes, analisada em bomba calorimtrica22, conforme a AOAC (1990). O indicador externo LIPE presente nas fezes de cada animal foi analisado atravs de espectroscopia no infravermelho, segundo Saliba (2005).

3.6. CLCULOS

1) Foram calculados os valores de produo fecal com o indicador externo LIPE, conforme descrito por Saliba (2005): PF (kg) = LIPE fornecido (g) x 100 (Ai / MS total) Onde PF = produo fecal; Ai = relao logartmica das intensidades de absoro
22

Parr 6200 Calorimeter.

44

das bandas dos comprimentos de onda a 1050 cm-1 / 1650-1; MS total = matria seca fecal total. O Ai foi calculado atravs da frmula: Ai = A1050 / A1650. Sendo que A = log I0 / I. Onde, I0 > intensidade e I < intensidade. 2) As perdas dos nutrientes aps as incubaes cecais in situ foram expressas como coeficientes de digestibilidade in situ da MS (DISMS), determinados pelo resduo de cada saco, do concentrado e do volumoso, de acordo com a frmula DISMS (%) = 1 resduo do saco (g) (I x MS alimento) Onde I = quantidade de alimento (g) inserido em cada saco; MS alimento = teor de MS determinada a 105C do alimento (AOAC, 1990). 3) Aps obteno dos valores de produo fecal e digestibilidade in situ dos alimentos volumoso e concentrado, foram realizados os clculos para estimar o consumo de MS da dieta total e do volumoso, conforme Saliba (2005): Consumo (kg MS) = produo de fezes x 100 (100 digestibilidade) Como o consumo de MS dirio e digestibilidade in situ da MS (DIMS) do concentrado eram conhecidos, foi estimada a quantidade de fezes produzidas que correspondia poro no aproveitada desse alimento. Em seguida, foi realizado o clculo do consumo dirio de volumoso, em kg de MS, uma vez que a DIMS tambm era conhecida e a produo fecal referente ao volumoso o resultado da diferena entre a produo fecal total e produo fecal referente ao concentrado. Logo, o consumo dirio de MS total resultou do somatrio dos consumos de concentrado e volumoso,

em kg de MS por dia. Para estimativa do consumo dirio de MS em porcentagem de peso vivo, foram considerados nos clculos os valores mdios das pesagens realizadas para cada animal. 4) Atravs das pesagens do incio e do final do perodo experimental, foram tambm calculados o ganho de peso dirio (GPD) e a converso alimentar (CA) dos animais: a) GPD (kg/dia) = peso final peso inicial (kg) n dias b) CA = consumo dieta em X dias (kg) ganho peso em X dias (kg) 3.7. ANLISE ESTATSTICA

Para as estimativas de consumo da dieta total e do alimento volumoso, ganho de peso dirio, relao volumoso : concentrado e converso alimentar, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com seis repeties por grupo experimental. Nas variveis porcentagem de consumo de matria seca total e do alimento volumoso em relao ao peso vivo, e relao volumoso: concentrado da dieta foi considerado o efeito da covarivel peso vivo. Para a varivel peso, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em arranjo em parcelas subdivididas, sendo o cromo a parcela e a semana de avaliao a subparcela, com seis repeties por grupo experimental. Para as demais variveis, o delineamento foi inteiramente casualizado, em arranjo em parcelas sub-subdivididas, sendo o cromo a parcela, o horrio de oferecimento da rao a subparcela e o momento de avaliao a

45

sub-subparcela, com seis repeties por grupo experimental. As variveis freqncia respiratria e relao insulina : glicose sofreram transformao logartmica para normalidade. Os efeitos de tratamento foram analisados pela anlise de varincia e as mdias comparadas pelo teste F (SAEG 9.1, 2007). Para a comparao das mdias da freqncia respiratria foi utilizado o teste Fisher-LSD, a 5% de probabilidade, e para a comparao das mdias das demais variveis, foi utilizado o teste de Newman Keuls a 5% de probabilidade. Para desenvolvimento da equao de predio, que permite estimar a freqncia cardaca, tomando como base a varivel independente momento da prova de marcha, foi empregada a anlise de regresso linear simples e mltipla, sendo modelo hiperblico para FC da marcha e modelo quadrtico para FC da recuperao. Para avaliao da correlao entre os parmetros bioqumicos, clnicos e ambientais foi utilizada correlao paramtrica de Pearson.

e segundo os dados de Hahn (1985, citado por Tojal), no primeiro dia de prova, o ndice de temperatura de globo e umidade (ITGU) foi de 73,11 e 77,19 (situao crtica). No segundo dia de prova, o ITGU foi de 80,22 e 81,24 (perigo). No terceiro dia de prova, s 10h:00min, o ITGU foi de 76,51 (situao crtica) e s 16h:00min, foi de 80,12 (perigo) (Tab. 4). As variveis temperatura ambiente (TA), umidade relativa do ar (UR), ndice de temperatura e umidade (ITU), temperatura de globo negro (TGN), temperatura de bulbo seco (TBS) e temperatura de bulbo mido (TBU) tambm se apresentaram elevadas (Tab. 4) no momento das provas, (mdiaDP) 30,322,70C, 47,8310,30 %, 75,792,74 C, 30,002,00 C, 30,002,65 C e 21,001,41 C, respectivamente. Os ndices de adaptao e conforto trmico determinam a adequao de um animal a um ambiente com relao a uma atividade especfica (Tojal, 2002). O ndice de temperatura globo negro e umidade (ITGU) foi considerado o ndice mais preciso para se medir o conforto trmico animal. Isso porque o ITGU calculado a partir dos dados aferidos no termmetro de globo negro. Este afere a combinao dos efeitos da energia radiante, da temperatura do ar e da velocidade do vento (Souza et al., 2002).

4. RESULTADOS E DISCUSSO

4.1. PARMETROS AMBIENTAIS

As provas de marcha foram realizadas s 10h00min e 16h00min de cada dia de prova

46

Tabela 4 - Temperatura ambiente (TA), umidade relativa do ar (UR), ndice de temperatura e umidade (ITU), ndice de temperatura de globo e umidade (ITGU), temperatura de globo negro (TGN), temperatura de bulbo seco (TBS) e temperatura de bulbo mido (TBU) nos dias e horrios das provas de marcha.
Hora do dia (h:min) Prova 1 2 3 Mdia DP Prova 1 2 3 Mdia DP TA (C) 25,40 29,90 31,10 28,80 3,00 10:00 UR (%) 64,00 51,00 50,00 55,00 7,81 ITU 71,71 75,23 73,71 73,55 1,77 ITGU TA (C) 73,11 30,10 80,23 32,90 76,51 32,50 76,62 31,83 3,56 1,51 Hora do dia (h:min) TBU (C) 20,00 20,10 21,90 20,67 0,87 TGN (C) 30,00 34,50 31,50 32,00 2,29 16:00 UR (%) 42,00 33,00 47,00 40,67 7,09 ITU 78,19 78,75 77,12 78,02 0,83 ITGU 77,19 81,25 80,12 79,52 2,10

TGN (C) 25,10 32,00 28,00 28,37 2,83

10:00 TBS (C) 23,7 27,00 25,20 25,30 1,35

16:00 TBS (C) 31,00 32,00 28,50 30,50 1,80

TBU (C) 22,00 21,10 22,30 21,80 0,62

Tabela 5 - Correlao entre os parmetros ambientais e as variveis bioqumicas e clnicas de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs provas de marcha e antes (1), depois (2) e 25 minutos aps (3) a prova*.
Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia x Lactato 0,4120 0,0001 x FR2 0,5227 0,0011 x TR2 0,5401 0,0007 x Lactato 0,4639 0,0001 x FR2 0,5012 0,0018 x Lactato1 0,4524 0,0056 Temperatura Ambiente x x x Glicose Lactato2 Lactato3 0,4845 0,3864 0,3076 0,0027 0,0199 0,0004 x Glicose1 x FR 0,2685 0,0021 x TR 0,2453 0,0046 x FCR5 0,3638 0,0292 x FR 0,2916 0,0008 x FCR1 0,3768 0,0235

0,5809 0,0002 x x Cortisol x FR3 x TR x TR2 x TR3 Cortisol 2 0,3340 0,2453 0,5401 0,3605 0,1783 0,3673 0,0465 0,0046 0,0007 0,0308 0,0311 0,0275 x TR3 x FC1 x FC2 x FC3 x FCM x FCR 0,3605 0,0148 0,0083 0,0444 -0,0219 -0,0751 0,0308 0,9316 0,9619 0,7970 0,8990 0,6632 Temperatura de Globo Negro x x x x Glicose x Glicose1 Lactato1 Lactato2 Lactato3 0,5693 0,5504 0,3781 0,2352 0,5385 0,0003 0,0005 0,0230 0,0064 0,0007 x FR3 x TR x TR2 x TR3 x FCM x FCR 0,4220 0,2881 0,6078 0,4829 -0,0133 0,0201 0,0109 0,0010 0,0001 0,0029 0,9385 0,9075

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Temperatura de Bulbo Seco x x x x x x x x FR Variveis Lactato Lactato Lactato Glicose Glicose1 Glicose3 Lactato 1 2 3 0,5210 0,6508 0,6054 0,4281 0,4146 0,6122 0,3864 0,4012 Correlao 0,0001 0,0001 0,0001 0,0092 0,0001 0,0001 0,0199 0,0001 Significncia Variveis x FR1 x FR2 x FR3 x TR x TR2 x TR3 x FCP x FCM x FCR 0,4771 0,5557 0,7153 0,3486 0,6470 0,7360 0,3691 0,0632 0,0014 Correlao 0,0033 0,0004 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,0268 0,7142 0,9934 Significncia Temperatura de Bulbo mido x x x x Variveis x Lactato x Glicose x Cortisol Glicose1 Glicose2 Glicose3 Cortisol2 0,2581 0,4119 0,5170 0,3888 0,3601 0,2110 0,3771 Correlao 0,0030 0,0001 0,0012 0,0191 0,0322 0,0131 0,0234 Significncia Variveis x FR x FR2 x FR3 x FCM x FCR x FCR5 0,2373 0,4256 0,3400 0,0164 -0,0896 0,4040 Correlao 0,0059 0,0097 0,0435 0,9244 0,6032 0,0145 Significncia Umidade Relativa do Ar x x x x x x Variveis Lactato Lactato Lactato x FR x FR1 Lactato Glicose Glicose1 1 2 3 - 0,5071 - 0,6240 - 0,5853 - 0,4388 - 0,3728 - 0,5877 - 0,3516 - 0,3988 Correlao 0,0001 0,0001 0,0002 0,0001 0,0001 0,0002 0,0001 0,0160 Significncia Variveis x FR2 x FR3 x TR x TR2 x TR3 x FCM x FCR - 0,5177 - 0,5950 - 0,3211 - 0,6245 - 0,6423 0,1102 0,0592 Correlao 0,0012 0,0001 0,0002 0,0001 0,0001 0,5225 0,7315 Significncia ndice de temperatura e umidade x x x x x x x x FR Variveis Lactato Lactato Lactato Glicose Glicose1 Glicose3 Lactato 1 2 3 0,5319 0,6359 0,6187 0,4609 0,4335 0,6729 0,3576 0,4040 Correlao 0,0001 0,0001 0,0001 0,0047 0,0001 0,0001 0,0323 0,0001 Significncia Variveis x FR1 x FR2 x FR3 x TR x TR2 x TR3 x FCM x FCR 0,4435 0,6009 0,6817 0,3440 0,6540 0,6861 -0,0245 0,0114 Correlao 0,0067 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,8870 0,9472 Significncia ndice de temperatura de globo e umidade x x x x Variveis x Lactato x Glicose x FR Lactato1 Lactato2 Lactato3 Glicose1 0,4245 0,4937 0,5062 0,3670 0,2031 0,5349 0,2514 Correlao 0,0001 0,002 0,0016 0,0277 0,0164 0,0008 0,0037 Significncia Variveis x FR2 x TR x TR2 x TR3 x FCM x FCR x FCR1 0,4912 0,2494 0,5556 0,3554 0,0308 0,0303 0,3862 Correlao 0,0024 0,0040 0,0004 0,0334 0,8587 0,8609 0,0200 Significncia *FCM = FC mdia da marcha; FCR = FC mdia da recuperao; FCR1= FC em 1 min. de recuperao; FCR5= FC em 5 min. de recuperao.

4.2. PARMETROS BIOQUMICOS

4.2.1. Glicose

Nas trs provas de marcha em geral (Figuras 1, 2, 3, 4, 5 e 6) no houve interao (P>0,05) entre cromo, horrio de fornecimento de concentrado e momentos de avaliao das diferentes variveis bioqumicas analisadas. Contudo, quanto glicose sangunea, na segunda prova de marcha (Tab. 6) houve interao entre cromo e momento de avaliao (P<0,01).

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A glicose sangunea (Tabelas 5 e 7) apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com TA (r = 0,3076), TGN (r = 0,2352), TBS (r =0,4146), TBU (r = 0,4119), ITU (r=0,4335), ITGU (r= 0,2031), lactato sanguneo (r = 0,4131) e FR (r = 0,2943) e correlao fraca e negativa com UR (r= 0,3728). A glicose AP (glicose1) exibiu correlao moderada e positiva com TA (r = 0,5809), TGN (r = 0,5385), TBS (r = 0,6122), TBU (r = 0,5170), ITU (r = 0,6729), ITGU (r = 0,5349) e lactato1 (r = 0,5440), correlao moderada e negativa com UR (r = - 0,5877) e no apresentou correlao (P>0,05) com insulina1. A glicose DP (glicose2) mostrou correlao fraca e positiva com TBU (r = 0,3880), sendo que no houve correlao com insulina2 (P>0,05). A glicose 25 min. aps a prova (glicose3) apresentou correlao fraca e positiva com TBS (r = 0,3864), TBU (r = 0,3601), lactato3 (r = 0,4186), FR3 (r = 0,4783), TR3

(r = 0,4342) e tambm com a insulina3 (r = 0,4422). Na primeira prova de marcha (Tab. 6), o exerccio aumentou a glicemia dos animais, que exibiram concentraes de glicose sangunea DP e 25 min. depois da prova semelhantes, sendo superiores a AP (P<0,05). Isto se deve ao estmulo da glicogenlise e gliconeognese hepticas que ocorre normalmente no exerccio (Rose et al., 1977) devido ativao do sistema nervoso simptico (SNS) e do eixo hipotalmico-hipofisrio-adrenal (HHA) com liberao de cortisol (Tab. 10), hormnio adrenocorticotrfico (ACTH), catecolaminas e glucagon (Hyypp, 2005). Isto pode explicar porque a glicose sangunea s apresentou correlao positiva com a insulina (Tab. 7) 25 min aps o fim da prova, quando os animais j se encontravam em repouso, pois antes da prova (AP), pela antecipao do exerccio, e imediatamente depois da prova (DP) ocorre ativao do SNS e a insulina deixa de ter controle direto sobre a glicemia (Hyypp, 2005).

Glicose (mg/dL)
200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Tempo (min)

Figura 1 Mdias desvio padro da glicemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 23,90 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

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Tabela 6 - Glicemia (mg/dL) de equinos MM, suplementados ou no com cromo, avaliados antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min) nas trs provas de marcha e horrio de fornecimento do concentrado antes da terceira prova de marcha.
Momento AP DP 25 min CV (%) (Valor de P) Momento AP DP 25 min CV (%)(Valor de P) Cromo 132,12Aa 142,50Aa 125,50Aa Primeira Prova 113,25B 136,75A 144,92A 41,51 (<0,05) Segunda Prova Controle 120,14Ab 98,50Bb 134,33Aa

Rao (h:min) AP 131,09Aa 4:00 141,63Aa 2:00 115,54Ab 0:30 CV (%)(Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas, minsculas Newman Keuls.

29,68 (<0,01) Terceira Prova DP 25 min 130,50Ba 126,00Aa 119,50Bb 142,25Aa 153,50Aa 136,75Aa 17,80 (<0,01) na linha e maisculas na coluna, diferem entre si pelo teste de

Tabela 7 - Correlao entre as variveis bioqumicas e clnicas de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs provas de marcha e antes (1), depois (2) e 25 minutos aps (3) a prova.
Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Variveis Correlao Significncia Lactato x Glicose 0,4131 0,0001 Lactato x TR 0,3357 0,0001 Glicose3 x TR3 0,4342 0,0082 TR x Cortisol 0,4038 0,0001 FR x TR 0,8011 0,0001 Lactato1 x Lactato3 x Lactato x Lactato2 x Glicose 1 Glicose3 FR FR2 0,5440 0,4186 0,3805 0,3501 0,0006 0,0111 0,0001 0,0364 Lactato2 x Lactato3 x Lactato x Glicose x TR2 TR3 Cortisol FR 0,4433 0,3896 0,1829 0,2943 0,0068 0,0188 0,0277 0,0008 Glicose1 x Glicose2 x Glicose3 x FR x Insulina1 Insulina2 Insulina3 Glicerol 0,1500 - 0,07 0,4422 0,2593 0,3875 0,6974 0,0069 0,0029 Glicerol x Insulina x Insulina1 x Insulina2 x Cortisol Cortisol Cortisol1 Cortisol2 0,1680 - 0,2388 - 0,1100 - 0,4206 0,0396 0,0057 0,5079 0,0106 FR1 x TR1 FR2 x TR2 FR3 x TR3 0,2000 0,6281 0,7464 0,8415 0,0001 0,0001 Lactato3 x FR3 0,4158 0,0050 Glicose3 x FR3 0,4783 0,0032 FR x Cortisol 0,3239 0,0002 Insulina3 x Cortisol3 - 0,0600 0,7261 FR2 X FC2 0,3902 0,0093

Ainda na tabela 6 observa-se que na segunda prova, o cromo promoveu maior glicemia AP e DP (P<0,01). Tambm, o cromo manteve quase que constante a glicemia nestes momentos, sendo que o grupo controle apresentou queda da concentrao de glicose sangunea DP

retornando a um valor prximo a antes do exerccio, aos 25 min. de recuperao. Diversos trabalhos afirmaram que o cromo trivalente (Cr) aumenta a tolerncia glicose e minimiza o estresse, incrementando o sistema imune e diminuindo os nveis de cortisol sanguneo. Isso porque o Cr, ao fazer parte da

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cromodulina, retarda e reduz o pico de insulina, aumentando sua biopotncia (Jackson, 1997; Ott e Kivipelto, 1999; Pechova e Pavlata, 2007). O Cr potencializa a insulina e sensibiliza os tecidos onde ela age, otimizando sua ao. Desta forma haver reduo da relao insulina : glicose (Lindemann et al., 1995; Jackson, 1997). Assim, foi previsto que neste trabalho o intervalo entre o fornecimento de concentrado e a prova de marcha pudesse ser reduzido em equinos suplementados com Cr, pois esse mineral aceleraria a passagem de glicose sangunea para os tecidos reduzindo a concentrao de insulina na corrente circulatria. Tambm foi esperado que pudesse haver maior liplise nestes animais, evidenciadas por maiores concentraes de glicerol e triacilglicerol plasmticos. No entanto, a suplementao com Cr no interagiu com o horrio de oferecimento de concentrado (Figuras 1 a 6) e no preveniu os efeitos adversos desse manejo nutricional (P>0,05). Surpreendentemente, na segunda prova de marcha, o Cr aumentou a glicemia imediatamente antes e aps o exerccio (Tab. 6, P<0,01), contrariando as informaes de Pagan et al. (1995), Ott e Kivipelto (1999) e Vervuert et al. (2005), e preveniu fadiga precoce. Dessa forma, na segunda prova deste experimento, a suplementao da dieta com Cr obteve efeito ergognico nutricional. Isto se deve provavelmente a um efeito poupador da glicose sangunea, direcionando a via de obteno de energia em direo oxidao lipdica, j que existem evidncias do Cr apresentar efeito lipoltico (Kreider, 1999). Outro mecanismo possvel seria estimular a glicogenlise heptica, o que bem menos plausvel, pois o Cr est diretamente associado aos efeitos anablicos da insulina (Vincent, 2000) e no aumentou a lactatemia. Ainda, este resultado no interferiu indiretamente na insulina, porque a glicose s foi relacionada positivamente

com este hormnio no fim do perodo de recuperao. Ainda na segunda prova de marcha, o grupo controle apresentou declnio da glicemia no fim do exerccio provavelmente devido ao maior consumo de glicose sangunea pelos msculos estriado esqueltico e estriado cardaco em trabalho sob ao do efeito antilipoltico da insulina (Tab. 9), assim como nos trabalhos de Lawrence et al. (1993, 1995) e de Stull e Rodiek (1995). Nos 25 min aps a prova, a glicemia voltou a aumentar presumivelmente devido gliconeognese heptica e menor concentrao de insulina sangunea na recuperao ps-esforo (Tab. 6). Somente os valores de glicose analisados isoladamente no esclareceram muito sobre o metabolismo de carboidratos durante a prova de marcha, pois a glicose tanto pode estar sendo liberada para a corrente circulatria quanto captada da circulao (Anderson, 1975; Kaneko et al., 2008). Seria necessria a utilizao de marcadores radioistopos para definir o efeito hiperglicemiante do Cr sobre a cintica da glicose no metabolismo energtico. Para entender esse efeito do Cr seus mecanismos de ao moleculares precisam ser melhor elucidados. Existem diversas possveis razes para a suplementao com 10 mg de Cr quelato no ter apresentado efeito direto nas demais variveis bioqumicas, em todas as trs provas, como a insulina (P>0,05). Uma delas seria que o Cr no uma droga e sim um nutriente (Anderson, 1997; Mertz, 1998; Pagan et al., 2000; Guerrero-Romero e Rodrguez-Morn, 2005) alm de ser amplamente distribudo na natureza, embora com baixssima disponibilidade na forma inorgnica (Pechova e Pavlata, 2007). Dessa forma, caso seus estoques nos tecidos do animal estiverem adequadamente repletos, sua suplementao no far diferena. No entanto, at o momento, no existe uma

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tcnica confivel capaz de dosar os estoques endgenos desse mineral (Vincent, 2000) para comprovar esta hiptese. Quanto glicemia, na terceira prova (Tab. 6), houve interao entre horrio de fornecimento do concentrado e momento de avaliao (P<0,01). O grupo que recebeu concentrado 4 h antes da prova apresentou glicemia praticamente constante ao decorrer dos trs momentos de anlise. O grupo 2 h terminou a prova com menor glicemia, retornando a um valor prximo a antes do exerccio aos 25 min. de recuperao. J o grupo meia hora, comeou o exerccio com glicemia reduzida em relao aos dois momentos posteriores prova. Finalmente, DP, o grupo meia hora tinha maior glicemia que aqueles dos outros horrios de alimentao. possvel que o consumo de concentrado AP tenha alterado as taxas de utilizao de glicose sangunea e de oxidao de carboidratos, semelhante ao ocorrido no trabalho de Geor et al. (2000). Na terceira prova de marcha, o grupo que recebeu concentrado 2 h antes (Tab. 6) apresentou menor glicemia no fim do exerccio o que pode ter ocorrido porque houve uma sobreposio do estado absortivo final, em que geralmente, quanto maior a hiperglicemia, maior ser a subsequente hipoglicemia (Hoffman, 2003), com o recrutamento de fibras musculares esquelticas (Rose e Richter, 2005) na prova de marcha. E tambm porque no exerccio a captao de glicose no msculo estriado esqueltico independe da ao da insulina, tendo este hormnio efeito aditivo sobre o processo de contrao muscular na translocao dos transportadores de glicose insulino-dependente (GLUT-4) (Hyypp, 2005; Hargreaves, 2006). No grupo 30 min a glicemia aumentou ao longo do tempo, sendo menor no incio da prova porque no houve neste momento tempo suficiente para haver suficiente

digesto do concentrado, pois de acordo com Jones (2007), nos equinos o alimento permanece aproximadamente 15 minutos no estmago. O fornecimento de concentrado 4 h antes da prova manteve a glicemia praticamente inalterada ao longo do tempo, o que pode refletir uma melhor regulao homeosttica da glicose sangunea nesse manejo nutricional. A glicemia (Fig. 1 e Tab. 6) se manteve dentro ou prximo ao intervalo dos valores de referncia de 70 - 140 mg/dL (Rose e Hodgson, 1994) nos diversos grupos experimentais, mesmo naqueles que receberam concentrado dentro de duas h antes do exerccio. Uma explicao plausvel a de Rose e Richter (2005), j que estes autores afirmaram que o exerccio regular poderia melhorar o controle glicmico e dessa forma, impedir uma possvel hipoglicemia causada pelo fornecimento do concentrado. Tambm, deve ter ocorrido um rgido controle do sistema neuroendcrino que mantm a concentrao sangunea de glicose dentro de uma faixa fisiolgica estreita. Alm do mais, o pico glicmico que se segue ingesto de concentrado provavelmente ocorreu como em Roberts e Hill (1973), Jacobs et al. (1982), Jeffcott et al. (1986) e Pagan et al. (1995), ou seja, aps 60 min. de consumo, e dessa forma no teria sido detectado pelos momentos de coleta sangunea nos diferentes grupos. No trabalho de Geor et al. (2000), uma maior glicose sangunea no incio do exerccio moderado aumentou o uso da glicose plasmtica e a oxidao de carboidratos e no alterou o uso do glicognio muscular. No entanto, neste trabalho, se houve uma hipoglicemia transitria durante a prova de marcha e aps o fornecimento de rao, ela no foi detectada porque as amostras sanguneas foram coletadas pontualmente AP, DP e 25 minutos aps. Esta caracteristicamente uma das limitaes das provas realizadas a

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campo. 4.4.2. Lactato

A lactatemia (Tab. 8) foi afetada pelo exerccio, sendo maior depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (P<0,01), mas no foi alterada pelo Cr ou pelo fornecimento de concentrado (P>0,05) (Fig. 2). Nenhuma das concentraes de lactato ultrapassou o limiar de lactato de 4,0 mmol/L, mesmo aps a prova, que seria sugestivo de maior oxidao dos carboidratos endgenos (Castejn et al., 2007). A prova de marcha um exerccio de

intensidade submxima (Prates et al. 2009) e a acidose lctica no ocorre na fadiga em intensidades submximas (Valberg, 1996), o que pode justificar que na prova de marcha no tenha havido aumento da lactatemia alm dos limites fisiolgicos. O lactato sanguneo (Tabelas 5 e 7) apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com TA (r = 0,4120), TGN (r = 0,4639), TBU (r = 0,2581), ITGU (r = 0,5319), FR (r = 0,3805), TR (r = 0,3357), glicose (r = 0,4131) e cortisol sanguneos (r = 0,1829), correlao moderada e positiva com TBS (r = 0,5210) e ITU (r = 0,5310) e correlao moderada e negativa com UR (r = -0,5071).

Lactato (mmol/L) 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Tempo (min)
Figura 2 - Mdias desvio padro da lactatemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 25,30 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

Tabela 8 - Concentrao sangunea de lactato de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min). Momento Lactato (mmol/L) 1,84B AP 2,09A DP 2,29A 25 min 24,63 (<0,01) CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

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O lactato AP (lactato1) exibiu correlao fraca e positiva com TA e ITGU, correlao moderada e positiva com TGN, TBS, ITU e glicose1 e correlao moderada e negativa com UR. O lactato DP (lactato2) mostrou correlao fraca e positiva com TA, FR2, TR2, correlao moderada e positiva com TGN, TBS, ITU e ITGU e correlao moderada e negativa com UR. O lactato 25 min. aps a prova (lactato3) apresentou correlao fraca e positiva com TA, TGN, TBS, ITU, ITGU, FR3, TR3 e glicose3 e correlao fraca e negativa com UR. Conforme Evans (2000) e Lindinger (2004), as alteraes que ocorrem no equilbrio cido-bsico no exerccio dependem da composio das fibras musculares dos msculos em exerccio, o que refletido pelas diferenas entre raas e a modalidade atltica desempenhada. Dessa forma, a discusso sobre a produo de lactato em equinos da raa Mangalarga Marchador se torna limitada, pois se desconhece, at o momento, a composio dos tipos de fibras musculares dessa raa, principalmente quando submetida ao treinamento para a prova de marcha. Os efeitos da ingesto de carboidratos, previamente ao exerccio, no foram completamente elucidados. possvel que a ingesto de carboidratos solveis antes do exerccio seja benfica em exerccios moderados a intensos. No entanto, em exerccios de intensidade baixa e longa durao (> 3 h), como o enduro, a ingesto de carboidratos na forma de concentrado com possvel consequente supresso da oxidao lipdica pode ser prejudicial ao desempenho (Geor, 2006). Dessa forma, por ser a prova de marcha de intensidade submxima (Prates et al., 2009) e durao intermediria entre exerccios de exploso (corrida a galope), e o enduro, com cerca de

50 min., sua durao no foi suficiente para que a reduo da glicemia e aumento expressivo da lactatemia ocorressem. As TA e UR se apresentaram elevadas (Tab. 4), assim como os demais parmetros ambientais no momento das provas de marcha. Segundo Ps et al. (2004), o maior calor ambiente e umidade relativa do ar estimulam a via glicoltica e aumentam a produo de lactato, provavelmente devido reduo do consumo de O2 e alterao do recrutamento das fibras musculares esquelticas. Desta forma, foram previstas concentraes sanguneas de lactato aumentadas, principalmente nos grupos que receberam dieta concentrada 2 h e 30 min. antes da prova, fato que no aconteceu. Pode ser tambm que este resultado ocorreu pelo condicionamento cardiorrespiratrio adquirido no perodo pr-experimental, o que colaborou para que os animais fossem mais eficientes na utilizao da via glicoltica aerbica de produo de energia. Normalmente, devido maior exigncia sobre os mecanismos termorregulatrios no exerccio, ocorre menor afluxo de sangue para o tecido adiposo e dessa forma pode ocorrer menor disponibilidade de cidos graxos para o msculo em trabalho e maior dependncia da via glicoltica para produo de energia (McCutcheon e Geor, 2004). Mesmo assim, o lactato permaneceu abaixo do limiar anaerbio (Fig. 2 e Tab. 8) o que mais uma vez sugere que os animais estavam condicionados para a prova de marcha e adaptados s condies ambientais do experimento. Embora o lactato sanguneo DP e 25 min. aps a prova no tenha alcanado o limiar de lactato, houve um aumento de sua concentrao porque no exerccio com uma maior produo de piruvato na gliclise, devido ao efeito da ao das massas, ocorre uma maior produo de lactato (Gollnick e Saltin, 1982; Hargreaves, 2006). Alm dos mais, dentro de um mesmo msculo existem

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fibras musculares que independentemente da disponibilidade de O2, no podem formar energia pela via oxidativa devido ausncia de mitocndrias e de mioglobina, ambas vitais para o funcionamento do metabolismo aerbico (Boffi, 2008). A concentrao de lactato sanguneo ao longo dos trs momentos de avaliao se manteve prxima a 2 mmol/L, cujo valor representa o limite superior do metabolismo exclusivamente aerbico, chamado de limiar aerbico (Muoz et al., 1999). Conforme Castejn et al. (2007), nessa concentrao sua produo e eliminao se equilibram e, portanto no h acmulo de lactato no msculo, o que indica que a prova de marcha um exerccio eminentemente aerbio.

4.2.3. Insulina e Relao Insulina : Glicose

A concentrao de insulina sangunea dos animais no apresentou correlao com nenhum parmetro ambiental avaliado (Tab. 5) e apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e negativa com cortisol sanguneo (r = -0,2388) (Tab. 7). A insulina AP (insulina1) no exibiu correlao com glicose1 e cortisol1 (P>0,05). J DP (insulina2), mostrou correlao fraca e negativa com cortisol2 (r = -0,4206) e no houve correlao com glicose2 (P>0,05). A concentrao de insulina dos animais 25 min. aps a prova (insulina3) apresentou correlao fraca e positiva com glicose3 (r = 0,4422) e no mostrou correlao positiva com cortisol3 (P>0,05).

Insulina (UI/mL) 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Tempo (min)

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 3 - Mdias desvio padro da insulinemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 64,81 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

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Tabela 9 - Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha, insulinemia e relao insulina : glicose de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min).
Momento da Avaliao AP DP 25 min CV (%) (Valor de P) Momento Insulina (UI/mL) Rao (h:min) 2:00 0:30 30,97Aa 26,04Ab 26,02Ba 22,22Bb 23,93Ca 16,26Cb 64,79 (<0,05) Insulina : glicose (UI/mL/mg/dL) Rao (h:min) 2:00 0:30 0,27Aa 0,10Ab 0,17Ba 0,19Aa 0,11Ba 0,17Aa 35,37 (<0,001) na linha e maisculas na coluna, diferem entre si pelo teste de

4:00 21,17Ac 12,31Bc 5,92Bc

4:00 0,16Ab AP 0,07Bb DP 0,04Bb 25 min CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas, minsculas Newman Keuls.

O fornecimento de concentrado quatro h antes da prova de marcha levou menor insulinemia (P<0,05) e menor relao insulina : glicose (I:G) (P<0,001) em todos os momentos avaliados (Tab. 9). Este resultado est de acordo com Ralston (1997) que afirmou que o concentrado deve ser oferecido no mnimo quatro h antes das provas de longa durao a fim de evitar uma hiperinsulinemia por um tempo prolongado durante a prova, o que impediria a liplise e aceleraria a fadiga dos animais. Tambm, o fornecimento de concentrado menos de duas horas antes do teste foi responsvel pelo aumento da I:G logo aps e 25 min aps o teste (P<0,001). A I:G do grupo que se alimentou 30 min antes do exerccio permaneceu inalterada durante os trs momentos de anlise. Ao contrrio do esperado, pode-se observar que a insulinemia foi maior quando o concentrado foi oferecido duas h ao invs de 30 min (P<0,05) antes do exerccio nos diferentes momentos avaliados. Provavelmente, quando os animais receberam concentrado 30 min antes da prova no houve tempo suficiente para que ocorresse adequada digesto do alimento ingerido e consequente aumento expressivo

da concentrao de insulina, pois de acordo com Jones (2007), a ingesta permanece no estmago por um perodo mdio de 15 minutos e a passagem da ingesta no intestino delgado ocorre durante cerca de 30 a 90 min aps a ingesto do alimento. Este resultado pode ter ocorrido tambm, pelo fato de haver caracteristicamente durante o exerccio reduo do fluxo sanguneo ao leito vascular esplncnico (Manohar, 1986), o que pode comprometer a digesto dos alimentos. Tambm, para o oferecimento de alimento concentrado quatro h antes do exerccio, a concentrao de insulina foi maior AP, contudo, DP e 30 min aps a prova as concentraes foram semelhantes (P<0,05). Para o fornecimento de concentrado duas h e 30 min antes da prova, a insulinemia foi maior AP, seguido de DP, reduzindo ainda mais 25 min aps a prova (P<0,05) (Tab. 9). A reduo da concentrao da insulina ocorre no exerccio prximo a um limiar de 50% do VO2mx (McKeever, 2002) principalmente devido liberao de catecolaminas, mas tambm devido ao glucagon, ao cortisol e somatostatina (Hypp, 2005). Dessa forma, j era esperada essa reduo ocorrer DP e 25 min. aps a prova de marcha.

56

4.2.4. Cortisol

No houve efeito do Cr e do horrio de fornecimento de concentrado (Fig. 4) sobre o cortisol sanguneo em todos os momentos avaliados (P>0,05).
Cortisol (ng/mL)

300 250 200 150 100 50 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Tempo (min) Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 4 - Mdias desvio padro da cortisolemia de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 43,70 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

O cortisol sanguneo (Tabelas 5 e 7) apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com TA (r = 0,1783), TBU (r = 0,2110), lactato sanguneo (r = 0,1829), FR (r = 0,3805), TR (r = 0,4038) e glicerol (r = 0,1680) e correlao fraca e negativa com insulina (r

= - 0,2388). Cortisol AP (cortisol1) no apresentou correlao (P>0,05) com insulina1. Cortisol DP (cortisol2) mostrou correlao fraca e positiva com TA (r = 0,3673) e TBU (r = 0,3771) e correlao fraca e negativa com insulina2 (r = 0,4206). Cortisol 25 min. aps a prova (cortisol3) no apresentou correlao com insulina3 (P>0,05).

Tabela 10 - Concentrao sangunea de cortisol de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min).
Momento da Avaliao Cortisol (ng/mL) 104,78C AP 217,52A DP 169,07B 25 min 34,67 (<0,01) CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

A concentrao de cortisol (Tab. 10) foi aumentada pela prova de marcha, sendo maior DP seguido de 25 min. aps a prova (P<0,01). Cortisol considerado um

57

hormnio do estresse e um fator de imunossupresso. Este hormnio possui ao antagnica sobre a insulina (Hyypp, 2005), e uma resposta caracterstica foi notada neste experimento (mostrada pela correo negativa entre insulina e cortisol no fim do exerccio). Seu aumento foi para evitar os efeitos deletrios de uma possvel hipoglicemia que possa ocorrer em um exerccio de durao prolongada. O aumento da concentrao do cortisol sanguneo se deu pelo exerccio e no pelo consumo do concentrado, embora seja conhecido que a ingesto de alimento possa aumentar essa concentrao (Hoffman, 2003). De maneira semelhante, em humanos, quando o exerccio e a ingesto de alimento foram utilizados para estimular a liberao do cortisol, o aumento provocado por estes dois fatores no foram aditivos e nenhum aumento marcante ocorreu quando o exerccio ocorreu no perodo ps-prandial (Brandenberger et al., 1982). Tambm, devido TBU elevada, ao estresse da manipulao dos animais e antecipao ao exerccio, os valores de cortisol AP j se apresentavam acima dos valores de referncia de 20 a 90 ng/mL citados por BET Laboratories (2007). Os valores de cortisol encontrados DP de 217,5275,41 ng/mL (Tab. 10) so praticamente o dobro de AP (104,7836,33 ng/mL) e corroboram com a afirmao de Snow e Rose (1981) e Church et al. (1987), em que nos equinos o exerccio resulta em um aumento de cortisol de duas a trs vezes o valor de repouso. Segundo Church et al. (1987), o cortisol sanguneo leva cerca de 4 h para voltar aos

valores de repouso aps um exerccio, o que, associado ao estresse da manipulao dos animais, justifica valores ainda elevados 25 min. aps a prova. Tambm, de acordo com Kingston (2004), o pico do cortisol ocorre cerca de 20 a 30 min. aps o exerccio, fato que no aconteceu, provavelmente devido s particularidades da prova de marcha na raa MM, pois Rezende (2006) afirmou que esta modalidade atltica sem igual, e que os animais sofrem grande gasto energtico, pois realizam a prova em crculo e sem descanso.

4.2.5. Glicerol e Triacilglicerol Plasmticos

Nas figuras 5 e 6 pode-se verificar que nas trs provas de marcha em geral, o Cr ou horrio de fornecimento de concentrado no alteraram as concentraes de triacilglicerol (TG) ou de glicerol plasmticos (P>0,05). No entanto, DP a concentrao de glicerol (Tab. 11) foi maior que nos outros dois momentos avaliados (P<0,01). Na primeira prova de marcha (Tab. 12), o fornecimento de concentrado 30 min. antes da prova apresentou a menor concentrao de TG (P<0,001). J na segunda prova foi o fornecimento de rao duas h antes do exerccio que exibiu menor valor de TG (P<0,05). Ainda na primeira prova, TG foi maior DP do que AP e 25 min. aps a prova (P<0,05). Observa-se ainda na tabela 7 que o glicerol plasmtico apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com cortisol sanguneo (r = 0,1680) e FR (r = 0,2593). TG no apresentou correlao (P>0,05) com nenhuma varivel avaliada.

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Triacilglicerol (mg/dL) 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80
Tem po (m in)

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 5 Mdias desvio padro do triacilglicerol plasmtico de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 42,84 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

Glicerol (mg/dL) 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80

Tempo (min)

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 6 Mdias desvio padro do glicerol plasmtico de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 55,56 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

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Tabela 11 - Concentrao plasmtica de glicerol de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25 min).
Momento Glicerol (mg/dL) 13,99B AP 17,82A DP 14,43B 25 min 55,56 (<0,01) CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

fornecimento de concentrado com menos de quatro h antes do exerccio reduziria a eficincia de mobilizao lipdica Nos equinos TG e glicerol plasmticos so indicadores de liplise (Snow e Mackenzie, 1977a; Ps et al., 1989). Os TG apresentaram-se dentro dos valores de referncia de 6-54 mg/dL (Kaneko et al., 2008) e os valores de glicerol apresentaramse acima dos valores de referncia de at 9,21 mg/dL (Vetlab, 2008) em todos os momentos avaliados. O glicerol plasmtico aumentou no exerccio (Tab. 11), provavelmente com os cidos graxos livres, em funo de uma maior liplise, em resposta a uma maior demanda energtica da prova de marcha. Os resultados de TG da primeira e segunda provas de marcha (Tab. 12) corroboram as afirmaes de Ralston (1997) de que a resposta insulnica ao pico glicmico aps o Como o fornecimento de concentrado 30 min ou duas h antes da prova de marcha aumentou a insulinemia e a I:G (Tab. 9) e teve uma influncia negativa sobre a liplise, recomendvel no fornecer concentrado dentro de duas h antes da prova de marcha. Isto porque a insulina o principal antagonista da liplise (Hyypp, 2005) o que se torna mais preocupante quanto maior for a durao da prova (Evans, 2000). A prova de marcha considerada uma prova de durao prolongada (Rezende, 2007) e em condies extraordinrias pode alcanar duas h de durao. Dessa forma, as maiores concentraes sanguneas de insulina durante as provas de marcha podem predispor os animais fadiga precoce.

Tabela 12 - Horrio de fornecimento da rao concentrada antes das primeira e segunda provas de marcha e triacilglicerol plasmtico de equinos MM, suplementados ou no com cromo, antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha. Triacilglicerol (mg/dL) em cada dia de teste Primeira Prova Triacilglicerol Triacilglicerol Momento Rao (h:min) (mg/dL) (mg/dL) 30,13B 41,33A AP 4:00 37,76A 40,56A DP 2:00 31,49B 17,48B 25 min 0:30 67,30 (<0,05) 32,71 (<0,001) CV (%) (Valor de P) CV (%) (Valor de P) Segunda Prova Rao (h:min) Triacilglicerol (mg/dL) 40,87A 4:00 24,02B 2:00 39,24A 0:30 49,83 (<0,05) CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

60

Possivelmente, os valores de glicerol AP (Tab. 11) j se encontravam acima dos valores de referncia de at 9,21 mg/dL devido ao estresse da manipulao dos animais e antecipao ao exerccio, que liberou cortisol e catecolaminas e estimulou a liplise. Pode ser tambm, que a raa Mangalarga Marchador tenha a concentrao deste metablito energtico maior do que a literatura cita como referncia. As concentraes de TG dos animais suplementados com Cr DP e 25 min. aps a prova de marcha no esto de acordo com os achados de Pagan et al. (1995), que observaram maiores concentraes de TG no perodo de recuperao de equinos PSI suplementados com esse micromineral e exercitados trs h aps consumirem 1,81 kg de alimento concentrado.

(P<0.05; Tab. 15). Cr foi responsvel pela menor FC da marcha no segundo teste e pela menor FC de recuperao no primeiro teste. Em adio, o fornecimento de concentrado 30 min antes do exerccio provocou a maior FC de recuperao (P<0,05; Tab. 15), at mesmo em seu ltimo minuto (P<0,05; Tab. 14). As tabelas 5 e 7 mostram que a FCP apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com TBS (r = 0,3691), FC2 mostrou correlao fraca e positiva com FR2 (r = 0,3902) e FCR1 exibiu correlao com TGN (r = 0,3768) e ITGU (r = 0,3862), FCR5 demonstrou correlao fraca e positiva com TA (r = 0,3638) e TBU (r = 0,4040). As FCs mdias do passo, da marcha e da recuperao foram de 104,9434,99 bpm, 145,3332,22 bpm e 85,6421,18 bpm, respectivamente. As figuras 7 e 8 forneceram elevadas estimativas da freqncia cardaca ao longo dos diferentes momentos da prova de marcha e da recuperao nas condies deste experimento, respectivamente. A FC pico (FCpico) da marcha estimada (Fig. 7) foi de 153,16 bpm aos 17 min. de marcha.

4.3. PARMETROS CLNICOS

Na tabela 13 e figuras 9 e 10 observa-se que no houve interao entre Cr, horrio de fornecimento de rao e momentos de avaliao da FC, FR e TR (P>0,05). Tambm, no houve efeito dos dias de prova de marcha nessas variveis (P>0,05).

4.3.1. Freqncia Cardaca

A freqncia cardaca (FC) no foi afetada pela suplementao com Cr ou pelo horrio de fornecimento da rao (P>0,05) (Tabelas 13 e 14). Tambm, no houve efeito dos dias de prova de marcha na FC (P>0,05). Contudo, houve interao entre cromo e o dia de prova na FC durante a prova de marcha e durante a recuperao

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Tabela 13 - Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha e freqncia cardaca (bpm) em diferentes momentos da prova de marcha de equinos Mangalarga Marchador suplementados ou no com cromo (P>0,05).
Rao (h:min) 4:00 2:00 0:30 Rao (h:min) 4:00 2:00 0:30 Rao (h:min) 4:00 2:00 0:30 Rao (h:min) 4:00 2:00 0:30 Cromo Repouso Antes 48,00 49,67 55,83 Repouso Antes 49,33 50,33 56,17 1 min 96,00 84,33 103,5 2 min 103,83 102,33 117,50 Aquecimento 3 min 95,83 106,83 114,83 Aquecimento 3 min 90,17 112,67 111,00 4 min 95,50 108,17 86,66 5 min 1 min 105,67 118,50 117,67 110,00 89,00 101,17 Controle 5 min 119,67 110,00 99,50 Cromo 50 min 154,67 134,83 155,67 0 min 171,33 138,83 122,17 Controle 0 min 157,17 133,17 143,33 1 min 106,33 110,83 91,00 2 min 145,67 124,50 121,67 3 min 140,33 139,00 120,50 Marcha 4 min 127,00 172,83 130,00 Marcha 4 min 158,33 168,83 142,17 5 min 144,17 161,33 129,83 10 min 139,50 171,83 135,67

1 min 66,83 81,83 91,83

2 min 88,67 92,50 115,50

4 min 113,33 111,00 102,33

2 min 177,83 150,00 120,17

3 min 188,17 166,60 110,67

5 min 157,67 150,50 148,50

10 min 173,33 155,17 136,83

15 min 157,83 145,83 150,50

20 min 162,67 161,50 143,33

Marcha 25 min 30 min 161,83 163,33 151,83 155,00 139,5 151,17 Marcha 25 min 30 min 162,83 148,33 132,00 147,83 167,00 148,17

40 min 163,33 149,67 155,00

1 min 143,83 126,33 114,83

5 min 85,50 84,67 100,50

Recuperao 10 min 15 min 82,17 78,33 74,67 71,33 95,50 88,33 Recuperao 10 min 15 min 71,33 67,83 101,17 78,50 99,33 84,00

20 min 76,50 65,67 84,67

25 min 67,17 63,17 78,17

15 min 154,17 142,83 148,17

20 min 168,5 128,00 161,50

40 min 141,17 146,33 160,83

50 min 153,33 143,70 164,17

1 min 149,00 117,56 146,66

5 min 84,00 93,00 98,17

20 min 61,50 80,17 93,17

25 min 58,33 63,33 86,00

CV (%)

8,90

62

Tabela 14 - Freqncia cardaca (bpm)* de equinos MM, suplementados ou no com cromo e horrio de fornecimento da rao concentrada antes da prova de marcha.
Dieta FC (bpm) 118,48 Cromo 119,65 Controle 9,45 (>0,05) CV (%) (Valor de P) Fornecimento da rao (h:min) FC (bpm) FCR25 (bpm)** 121,92 62,75B 4:00 118,78 63,25B 2:00 118,24 82,08A 0:30 8,90 (>0,05) 27,71 (<0,05) CV (%) (Valor de P) *FCR25= FC em 25 min. de recuperao. **Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

Tabela 15 - Frequncia cardaca (FC) de guas Mangalarga Marchador nos diferentes grupos experimentais, durante as provas de marcha e na recuperao ps-exerccio.
FC (bpm) durante a prova de marcha Cromo Controle 157,00Aa 146,57Aa 138,76Bb 158,53Aa 145,36ABa 149,68Aa 29,75 (<0,05) FC (bpm) de recuperao Teste Cromo Controle Rao (h:min) FC (bpm) 77,31Bb 97,89Aa 86.79B Primeiro 4:00 97,67Aa 90,86Aa 84.96B Segundo 2:00 88,67ABa 83,42Aa 97.49A Terceiro 0:30 38,36 (<0,05) 30,26 (<0,05) CV (%) (Valor de P) CV (%) (valor de P) Mdias seguidas de letras distintas, minsculas na linha e maisculas na coluna, diferem entre si pelo teste de Newman Keuls. Teste Primeiro Segundo Terceiro CV (%) (Valor de P)

Tabela 16 - Freqncia cardaca (FC) de equinos MM em repouso, no aquecimento (passo), na prova de marcha e na recuperao.
Momento FC (bpm) Momento FC (bpm) Momento FC (bpm) CV (%) Repouso Antes 51,56e Aquecimento 3 min 4 min 5 min 105,22b 102,83b 106,92b Marcha 3 min 4 min 5 min 10 min 15 min 20 min 144,22a 149,86a 148,67a 152,06a 149,89a 154,25a Recuperao Marcha 40 min 50 min 0 min 1 min 5 min 10 min 15 min 152,72a 150,97a 144,31a 133,03a 90,97c 87,36c 78,14d 7,16 1 min 87,39c 2 min 103,39b Marcha 1 min 2 min 106,31b 139,97a 25 min 152,5a 20 min 76,94d 30 min 152,39a 25 min 69,36d

Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls (P<0,001).

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FC (bpm)

180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 0 10 20 30 40 50 Tempo (min) FC_est FC_obs

FC = 155.75 - (44.01/t ); R = 91.85 %

Figura 7 - Freqncia cardaca (bpm) de equinos MM durante a prova de marcha (P<0,0001). FC_obs = FC observada e FC_est = FC estimada. t = momento da prova em minutos.

160
FC (bpm)

140 120 100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30

Tempo (min) FC_est FC_obs

FC = 137.44 - (6.90t + 0.18t ); R = 87.71 %

Figura 8 - Freqncia cardaca (bpm) de equinos MM durante a recuperao (P<0,01). FC_obs = FC observada e FC_est = FC estimada. t = momento da prova em minutos.

Na recuperao ps-exerccio (Fig. 8) houve um rpido declnio da FC nos primeiros dois min., com 50 % de reduo da FCpico da marcha aos 25 min aps o exerccio. No entanto, apresentou valores superiores ao de repouso (51,5610,38 bpm) mesmo nos 25 min. de recuperao (77,44 bpm). A FC logo aps o fim do exerccio foi atenuada

principalmente pela reativao do sistema nervoso parassimptico (SNP) (Hada et al., 2006). O retorno mais lento da FC de recuperao aos valores de repouso nos animais que consumiram concentrado 30 min antes da prova de marcha uma indicao de

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anormalidade clnica, como desidratao intensa, e est associado fadiga (Evans, 1994). Por isso, provvel que neste grupo tenha havido alteraes hemodinmicas relacionadas ao deslocamento de fludos para o trato gastrintestinal que associada excessiva sudorese (analisada subjetivamente) durante a prova de marcha contribuiu para elevar a concentrao de protena total e o hematcrito, como em Kerr e Snow (1982), e aumentado o dbito cardaco, como em McKirnan et al. (1991). No repouso, a FC (Tab. 16) j se encontrava levemente aumentada (51,5610,39 bpm), o que deve ter ocorrido atravs de um mecanismo central (efeito psicognico). Vrios fatores podem ter levado a este aumento da FC, como a antecipao do exerccio, a excitao, a puno venosa e o encilhamento do animal. Conforme Hamlin et al. (1972) e McKeever e Gordon (2004), essa FC de repouso e os aumentos iniciais da FC at 120 bpm (at o primeiro minuto de marcha) (Tab. 16 e Fig. 7) se devem supresso da atividade do SNP. Foram observados rpidos aumentos da FC no incio do passo e no incio da marcha atingindo um plat em dois minutos (Tab. 16 e Fig. 7). Estes aumentos esto associados com maior atividade do SNS e liberao de catecolaminas (Hamlin et al., 1972). No terceiro minuto de marcha, em que foram ultrapassados 140 bpm, os fatores psicognicos no possuram mais influncia direta sobre a FC (HeipertzHengst, 2002). No momento em que a FC atingiu um plat, em dois minutos de passo e de marcha (Tab. 16 e Fig. 7), foi estabelecido um equilbrio entre a demanda energtica e seu suprimento, realizado pelo metabolismo e pela circulao sangunea (Heipertz-Hengst, 2002). Nesse momento, a oferta de oxignio aos msculos ativos equivalente sua demanda (steady state ou estado estacionrio) e existe estreita relao entre

intensidade do esforo e magnitude da FC (Evans, 1994; Poole e Erickson, 2004). Os animais sofreram uma grande demanda termorregulatria (Tab. 4) no exerccio e a FC nos cinco minutos de recuperao foi relacionada (Tab. 5) TA (r = 0,3638 e P = 0,0292) e TBU (r = 0,4040 e P = 0,0145). Dessa forma, a FC mdia da marcha (145,3332,22 bpm) poderia ter sido menor em temperaturas mais amenas e em menores UR, ITU e ITGU, j que de acordo com Cunningham (2004), maior temperatura corporal causa vasodilatao perifrica, com reduo da pr-carga, demandando um aumento da FC para manter o dbito cardaco (DC). Na marcha, apesar do estresse trmico e da sudorese intensa no momento das provas, a FC permaneceu praticamente inalterada (Tab. 16), o que indica que no houve um cardiovascular drift (ou desvio cardaco). Isto sugere que os animais estavam adaptados quele ambiente e adequadamente condicionados ao exerccio imposto a eles. Os referenciais de Meirelles (1997) para a velocidade de queda da FC aps esforo para equinos de enduro foram utilizados para os animais deste trabalho devido a uma escassez de dados para equinos MM em prova de marcha e devido s semelhanas entre essas duas modalidades atlticas, pois ambos so exerccios submximos de durao prolongada. De acordo com Meirelles (1997), houve excesso de trabalho na prova de marcha, pois este autor afirmou que se a FC de equinos de enduro se apresentar acima de 72 bpm, 5 min. aps o exerccio significa que o animal realizou trabalho em excesso. No presente trabalho a FC nos 5 min. de recuperao foi de 107,44 bpm (Fig. 8), valores semelhantes aos encontrados em Prates (2007) em condies anlogas. Isso ocorreu, em parte, devido forte influncia

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das catecolaminas (adrenalina e noradrenalina) sobre o ritmo cardaco, j que a recuperao da FC costuma sofrer influncias tanto simpticas quanto parassimpticas (Evans, 1994; Almeida, 2007) e porque houve aferio dos parmetros clnicos e coleta sangunea dos animais. E tambm devido ao estresse trmico das guas, j que o sistema cardiorrespiratrio possui papel termorregulatrio e normalmente a FC aumenta em TA e UR elevadas, retornando mais lentamente aos valores de repouso quando as condies ambientais so desfavorveis (Evans, 1994; Hodgson et al., 1994). O lactato (Tab. 8) e as variveis clnicas aps o exerccio se encontraram dentro dos limites fisiolgicos e todos os animais conseguiram completar as provas, o que indicou que os animais estavam bem condicionados e que os referenciais de Meirelles (1997) para velocidade de queda da FC no so adequados para equinos MM submetidos a prova de marcha. Dessa forma, prope-se que os valores de recuperao estimados (Fig. 8) sejam referenciais para equinos MM em prova de marcha submetidos a um exerccio em condies semelhantes a deste trabalho, sendo que os animais devem apresentar-se com FC de at 102 bpm em 5 min de recuperao ou de at 77 bpm em 25 minutos aps a prova. Ao se empregar nesse trabalho as frmulas de Eaton et al. (1995a) e de Coenen (2005) como estimativa do consumo de oxignio (VO2) a partir da FC, no passo o VO2 estimado variou de 6,53 a 34,36 mL/Kg/min, na marcha de 33,86 a 73,79 mL/Kg/min e na recuperao de 65,51 a 12,06 mL/Kg/min. Verificou-se portanto, que o VO2 estimado da prova de marcha apresentou valores prximos aos dos equinos de enduro (40 a 80 mL/Kg/min) que percorreram distncias de 40 a 100 Km

e apresentaram velocidades de 2 a 6 m/s (Eaton, 1994). A FCpico da prova de marcha foi inferior a FC mxima dos equinos (220-260 bpm; Evans, 1994). A estabilidade dos valores de FC da marcha caracterizaram, quando associados aos valores da FCpico, este exerccio como de intensidade submxima (como no estudo de Prates et al., 2009). Em adio, pode ser deduzido que a prova de marcha essencialmente aerbica, j que sua FC permaneceu prxima a 150 bpm, e a lactetemia prxima a 2 mmol/L no exerccio (Castejn et al., 2007; Boffi, 2008). A partir da FC mdia da marcha, foi estimado o VO2 mdio dos animais como 66,36 mL/kg/min (Eaton et al. 1995a). Este valor permitiu estimar o gasto energtico mdio durante a prova de marcha, porque para cada litro de oxignio utilizado o equino gasta ~ 4,86 kcal (NRC, 2007). Adicionalmente, da FCpico da marcha e considerando a FC mxima como 220 bpm (Evans, 1994), o uso de oxignio alcanou 55,35 % do VO2 mximo (VO2max) (Eaton et al., 1995b). Este valor sugeriu que a prova de marcha um exerccio de intensidade moderada (35-55 % VO2max; Hinchcliff et al., 2004). O elevado VO2 na recuperao (Eaton et al., 1995a; Coenen, 2005), estimado a partir da FC mdia da recuperao, possui diversas razes metablicas possveis, dentre elas a ressntese de fosfocreatina muscular, o catabolismo do lactato sanguneo, a persistncia de elevada TR e a restaurao das reservas hormonais (Rose et al., 1988; Griego-Marsh et al., 2006). De acordo com as equaes de Eaton et al. (1995a) e de Coenen (2005), apesar das elevadas TA e UR nos trs dias de prova, o VO2 na prova de marcha (Fig. 8) provavelmente no foi reduzido. Normalmente, no calor excessivo existe aumento da ventilao do espao morto

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fisiolgico em detrimento da troca gasosa nos alvolos pulmonares (Art e Lekeux, 1988b). No entanto, os valores de VO2 a partir da FC so estimativos e podem no se apresentar dentro da realidade. Durante a prova de marcha, embora a velocidade e, portanto a intensidade do exerccio tenha sido praticamente constante, o VO2 provavelmente apresentou aumento progressivo porque mesmo nesse tipo de exerccio, as demandas metablicas, energticas e termorregulatrias so crescentes e tambm porque, de acordo com Eaton (1994), podem ocorrer variaes na pista e na conduo do animal realizada pelo cavaleiro.

0,2916), TBS (r = 0,4012), TBU (r = 0,2373), ITU (r = 0,4040), ITGU (r = 0,2514), lactato (r = 0,3805), glicose (r = 0,2943), glicerol (r = 0,2593), cortisol (r = 0,3239), correlao forte e positiva com TR (r = 0,8011) e correlao fraca e negativa com UR (r = - 0,3516). A FR25 min. aps a prova (FR3) apresentou correlao fraca e positiva com TA (r = 0,3340), TGN (r = 0,4220), TBU (r = 0,3400), lactato3 (r = 0,4158) e glicose 3 (r = 0,4783), correlao moderada e positiva com TGN (r = 0,4220), ITU (r = 0,6817) e TR3 (r = 0,7464) e correlao moderada e negativa com UR (r = - 0,5950). A TR (Tabelas 5 e 7) apresentou correlao fraca e positiva com TA (r = 0,2453), TGN (r = 0,2881), TBS (r = 0,3486), ITU (r = 0,3440), ITGU (r = 0,2494), lactato (r = 0,3357) e cortisol (r = 0,4038), correlao forte e positiva com FR (r = 0,8011) e correlao fraca e negativa com UR (r = 0,3211). A TR antes do exerccio (TR1) no exibiu correlao com nenhuma varivel analisada. A TR no fim da prova (TR2) mostrou correlao fraca e positiva com lactato2 (r = 0,4433) e FC2 (r = 0,3902), correlao moderada e positiva com TA (r = 0,5401), TGN (r = 0,6078), TBS (r = 0,6470), ITU (r = 0,6540), ITGU (r = 0,5556) e FR2 (r = 0,6281) e correlao moderada e negativa com UR (r = - 0,6245).

4.3.2. Freqncia Temperatura Retal

Respiratria

No houve efeito da suplementao com cromo ou do horrio de fornecimento de rao sobre a freqncia respiratria (FR) e a temperatura retal (TR) (Figuras 9 e 10) dos animais deste experimento (P>0,05). Contudo, os valores AP, DP e 25 min. aps a prova destas variveis foram diferentes (P<0,0001) (Tab. 17). A FR (Tabelas 5 e 7) apresentou, de acordo com Santos (2008), correlao fraca e positiva com TA (r = 0,2685), TGN (r =

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Frequncia Respiratria (m.r.p.m.) 120.00 105.00 90.00 75.00 60.00 45.00 30.00 15.00 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80
Tempo (min)

Cr 4:00 Cr 2:00 Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 9 Mdias desvio padro da frequncia respiratria de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 13,43 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

Temperatura Retal (C) 50.00 Cr 4:00 40.00 Cr 2:00 30.00 20.00 10.00 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80
Tempo (min)

Cr 0:30 Cont 4:00 Cont 2:00 Cont 0:30

Figura 10 Mdias desvio padro para glicose sangunea de 12 guas MM alimentas com concentrado quatro (4:00), duas (2:00) ou meia hora (0:30) antes da prova marcha e suplementadas ou no com Cr (P>0,05). CV = 2,50 %. 0 min = antes da prova; 55 min = depois da prova e 80 min = 25 min aps a prova. Cont = controle.

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Tabela 17 - Freqncia respiratria e temperatura retal de equinos MM antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha.
Freqncia respiratria Temperatura retal (C)** (m.r.p.m.)* 26,25C 37,81C AP 67,83A 39,41A DP 45,35B 38,39B 25 min 10,72 (<0,0001) 1,56 (<0,0001) CV (%) (Valor de P) *Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Fisher-LSD* ou de Newman Keuls.** Momento

A TR25 min. aps a prova (TR3) apresentou correlao fraca e positiva com TA (r = 0,3605), TGN (r = 0,4829), ITGU (r = 0,3554), lactato3 (r = 0,3896) e glicose3 (r = 0,4342), correlao moderada e positiva com TBS (r = 0,7360), ITU (r = 0,6861) e FR3 (r = 0,7464) e correlao moderada e negativa com UR (r = - 0,6423). Foram esperados menores valores de FR e TR devido suplementao diettica com Cr, porque este tratamento poderia provocar maior mobilizao lipdica. Com maior liplise, o grupo que recebeu Cr seria menor produtor de calor metablico (associado ao exerccio) e teria menor demanda termorregulatria sobre o sistema cardiorrespiratrio. Mas neste estudo, 10 mg de Cr no reduziram a FR no fim do exerccio (diferentemente de Prates, 2007), e nem a TR. Contudo, Cr reduziu a FC durante a prova de marcha e acelerou a velocidade de declnio da FC de recuperao (Tab. 15), melhorando o desempenho cardaco (como no estudo de Prates et al., 2009). Alm disso, Cr tornou a marcha energeticamente mais eficiente, pois existe uma forte relao entre a FC e o consumo de oxignio em intensidades submximas de exerccio (Eaton et al., 1995a). Devido s aes do Cr sobre a glicose (Tab. 6) e a FC (Tab. 15), Cr preveniu fadiga precoce neste estudo. Equinos alimentados com gros e submetidos a um exerccio aerbico prolongado (Clarkson, 1997) podem ter maiores deficincia de Cr devido sua maior excreo na urina do que obteno na

dieta (Rubin et al., 1998), especialmente em situaes de elevado estresse (Mertz et al., 1965; Jackson, 1997). Ento, o efeito favorvel do Cr sobre a prova de marcha pode ser parcialmente explicado pelo intenso desconforto trmico e elevada demanda termorregulatria sofrida durante o exerccio. Em uma competio, equinos MM realizam vrios testes de cerca de 50 minutos e lidam com pequeno perodo de descanso entre eles, muitas vezes sob calor intenso e elevada UR. medida que os animais vo vencendo as etapas das competies, eles podem vir a competir por dois a trs dias seguidos. Ento, uma rpida recuperao fornece vantagens bvias no concurso de marcha. A partir dos resultados deste trabalho, a suplementao com Cr na dieta de equinos MM pode ser considerada um agente ergognico efetivo e lcito. Contudo, Cr no uma panacia e nem uma droga, mas sim um nutriente. A complexidade da regulao neuroendcrina durante o exerccio (inerente ao tipo de exerccio e ao status alimentar), e as diferentes metodologias e condies ambientais podem explicar resultados to controversos observados na literatura. A FR (Tab. 17) se encontrou alterada em todos os momentos de aferio (P<0,0001), principalmente DP, confirmando a necessidade constante de termlise, j que os valores de FR foram relacionados aos de TR (Tab. 7) nos animais deste experimento. Antes da prova, a FR provavelmente estava um pouco acima da normalidade devido liberao de catecolaminas, pela antecipao ao exerccio. Isto pode ser

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confirmado em grande parte pela TR antes da prova (37,810,59C), que se apresentava normal. J DP e 25 min. depois da prova, a FR aumentou principalmente devido necessidade de manter a temperatura corporal constante. Foi observada intensa sudorao nos animais durante a prova e conforme McCutcheon e Geor (2004), isto quer dizer que a sudorese estava eliminado apenas 5% a 10% do calor corporal que poderia ser eliminado pela evaporao do suor. Nos equinos a sudorese principal forma de dissipar calor corporal e dessa forma a necessidade de aumentar a ventilao do espao morto respiratrio aumentou o que pode ser demonstrado pelo aumento da FR logo depois da prova (DP) e 25 min. depois da prova (Tab. 17). A prova de marcha um exerccio prolongado e dessa forma, o trabalho muscular libera grandes quantidades de calor metablico. Devido a isso e aos elevados parmetros ambientais e aos elevados ndices de conforto trmico (Tab. 4), os equinos deste experimento tiveram dificuldades em regular sua temperatura retal e, portanto sua temperatura central, como pode ser visto em DP (39,410,61C) (Tab. 17). No entanto, aps 25 min do fim do exerccio, os animais conseguiram reduzir sua temperatura corporal, atravs das maiores FR e sudorese intensa, visivelmente detectada em todos os animais nos trs dias de prova, retornando assim aos valores de normalidade. No entanto, sua temperatura retal 25 min. aps a prova (38,390,60C) permaneceu superior temperatura retal AP, o que pode ter ocorrido em virtude do intenso estresse trmico que os animais foram submetidos. Uma TA (Tab. 4) superior zona de termoneutralidade eqina (5C a 25C) (Morgan, 1998), associada a uma maior irradiao solar, demonstrada pelo termmetro de bulbo negro, e uma alta UR

contriburam para maior demanda ventilatria. A sudorese intensa e o ofego excessivo, aferido pela FR, nessas condies de elevadas TA e UR, provavelmente resultaram em algum grau de desidratao. A desidratao reduz a capacidade dos animais transferirem o calor do centro do corpo para as extremidades (Cunningham, 2004), o que tambm justificaria o aumento da TR depois da prova e 25 min. aps a prova em relao aos valores de repouso. Apesar das condies ambientais desfavorveis realizao da prova de marcha, nos trs dias de prova, todos os animais concluram com xito o exerccio imposto. Possivelmente, isso ocorreu em parte devido aos efeitos do treinamento no perodo pr-experimental, em que uma favorvel reduo do equivalente respiratrio (VE/VO2) (relao volume minuto para consumo de oxignio) possibilitou melhor extrao de oxignio nos alvolos pulmonares, garantindo adequado VO2 (Cunningham, 2004).

4.3.3. Peso Semanal e Eficincia Alimentar

A digestibilidade in situ da MS dos alimentos concentrado e volumoso foi de 88,96 % e 58,30 %, respectivamente, e a produo fecal total mdia dos animais, estimada pelo indicador externo LIPE, foi 3,52 kg/animal/dia (em anexo). Na tabela 20 encontram-se as mdias estimadas do consumo dirio de MS da dieta total e do alimento volumoso, em kg de MS por dia e porcentagem em peso vivo (% PV), relao volumoso : concentrado, GPD (kg/dia) e converso alimentar da dieta total (CA total), dos alimentos volumoso (CA volumoso) e concentrado (CA concentrado) dos grupos Cr e controle.

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Essas variveis foram semelhantes em ambos os grupos (P>0,05)

Tabela 18 Peso semanal de equinos MM, suplementados ou no com cromo, ao longo das trs semanas do perodo experimental (P>0,05).
Dieta Cromo Controle CV (%) Semana 1 372,50 348,50 Peso das guas (Kg) Semana 2 374,50 351,17 10,77 Semana 3 379,33 357,33

Tabela 19 Peso semanal de equinos MM ao longo das trs semanas do perodo experimental.
Peso das guas (Kg) 360,50B Semana 1 362,83B Semana 2 368,33A Semana 3 10,77 (<0,01) CV (%) (Valor de P) Mdias seguidas de letras distintas diferem entre si pelo teste de Newman Keuls.

Tabela 20 - Consumo mdio dirio estimado de matria seca da dieta total (Consumo MS Total) e do alimento volumoso (Consumo MS Volumoso), relao volumoso : concentrado, ganho de peso dirio (GPD), converso alimentar da dieta total (CA Total), dos alimentos volumoso (CA Volumoso) e concentrado (CA Concentrado) dos grupos cromo e controle (P>0,05). Consumo MS Total kg/ Consumo MS Volumoso Dieta Volumoso na dieta (%) dia (% PV) kg/ dia (% PV) 7,15 (1,97) 3,04 (0,84) 42,44 Cromo 7,11 (2,03) 3,16 (0,90) 44,19 Controle 7,77 (5,23) 12,87 (12,34) 7,01 CV (%) 7,13 (2,00) 3,10 (0,87) 43,32 Mdia Concentrado CA Dieta GPD (kg/dia) CA Total CA volumoso na dieta (%) concentrado 57,56 0,49 8,94 3,67 5,27 Cromo 55,81 0,63 13,20 5,72 7,48 Controle 5,36 4,50 32,87 18,11 21,89 CV (%) 56,69 0,56 11,07 4,70 6,38 Mdia

perodo experimental e suas exigncias nutricionais de acordo com NRC (2007). Na tabela 21 esto representadas as mdias estimadas de ingesto de MS, PB, ED e lisina dos animais nas trs semanas do

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Tabela 21 Mdias de peso vivo, consumo total de MS, ED, PB e lisina dos animais nas trs semanas do experimento, comparados com as recomendaes do NRC (2007).
PV mdio (kg) 1 e 2 semanas 16,83 NRC (2007) 361,67 Consumo 7,22 20,89 estimado 8,29* 17,17 NRC (2007) 368,33 3 semana Consumo 7,36 21,27 estimado Legenda: PV = peso vivo e Lys = lisina. *Consumo total MS = 2,25 % PV (NRC, 2007). Consumo MS (kg) 8,14* ED (Mcal) PB (g) 554,00 880,30 566,00 898,60 Lys (g) 24,00 38,90 24,00 39,72

Segundo NRC (2007), as exigncias nutricionais de ED para equinos em trabalho moderado foram atendidas pela dieta (Tab. 21). O concentrado utilizado neste trabalho apresentava teores adequados de ED e elevados teores de PB e o volumoso era bastante disponvel para os animais, devido baixa lotao do piquete, de 1,7 unidade animal23 / hectare. No perodo em que o experimento foi realizado, as gramneas encontravam-se em estado intermedirio de maturidade, com 8,06 % PB, 2,25 Mcal/kg, 68,32 % FDN e 33,61 % FDA (Tab. 2). De acordo com NRC (2007) as exigncias de PB para equinos em trabalho moderado so de 22 % acima da mantena, sendo que houve uma reduo significativa das necessidades de PB e pequena reduo das exigncias de lisina em relao ao NRC (1989) para animais em trabalho. As novas exigncias levam em considerao o aumento da massa muscular e as perdas de nitrognio na sudorese ao invs de uma relao fixa de PB : ED, como na edio anterior. O NRC (2007) considera ainda que na formulao da dieta sejam utilizadas fontes de protena de qualidade e digestibilidade melhores, e como o volumoso da dieta experimental era apenas de qualidade boa a razovel justifica-se o aumento proporcional do teor de PB no concentrado da dieta experimental. Tambm, de acordo com Lawrence (2008),
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difcil formular uma rao que atenda as necessidades energticas do animal sem extrapolar as necessidades de PB, pois quando se formula uma dieta o aspecto fundamental a ser observado o atendimento das exigncias de energia. Tambm, um excesso moderado de PB para equinos em trabalho de intensidade moderada, desde que se respeitem suas exigncias energticas, no ser prejudicial. A suplementao com Cr no alterou o peso vivo semanal (Tab. 18), o ganho de peso dirio, a converso alimentar da dieta total, do alimento volumoso e do concentrado (Tab. 20) das guas deste experimento (P>0,05). Estes resultados corroboram os trabalhos de Ott e Kivipelto (1999) e de Uyanik et al. (2008). No primeiro trabalho, CrPic foi oferecido a potros de um ano por 112 dias e no segundo CrPic foi consumido por equinos de 4 - 13 anos e baixo escore corporal (EC). O Cr um micronutriente que adicionado dieta dos equinos pode atuar nas diversas rotas bioqumicas. Est associado formao e manuteno dos tecidos, principalmente massa magra (Page et al., 1993; Boleman et al., 1995; Lindemann et al., 1995; Grant et al., 1997; Kornegay et al., 1997) por meio do aumento da sensibilidade insulina. Cr conhecido por influenciar a sntese de protena nuclear e sntese de RNA (Weser e Koolman, 1969; Okada et al., 1983, 1984; Ohba et al., 1986), alm de aumentar a

1 Unidade Animal (UA) = 450 kg de peso vivo

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incorporao e utilizao de aminocidos (Roginski e Mertz, 1969). Tambm, durante o exerccio, os msculos em trabalho captam a glicose sem a ao da insulina. Dessa forma, a insulina importante durante a recuperao do exerccio quando os estoques de glicognio no esto repletos (McKeever, 2002). Assim, foi suposto que o Cr pudesse alterar o ganho de peso de equinos em treinamento para prova de marcha, j que em bovinos submetidos a um elevado estresse o Cr obteve efeito positivo no ganho de peso (Chang e Mowat, 1992; Moonsie-Shageer e Mowat, 1993; Kegley et al., 1997). No entanto, a atuao do Cr no peso corporal da espcie bovina (Pechova e Pavlata, 2007), assim como nas espcies humana e suna (Ward et al., 1997; Anderson, 1998), controversa. Durante o perodo experimental houve maior ganho de peso (Tab. 19) na terceira semana e semelhana nas demais (P<0,01) o que pode ter ocorrido em virtude da adaptao ao exerccio imposto aos animais na terceira semana e uma hipertrofia muscular devido ao efeito do treinamento. Possivelmente, com um perodo experimental maior o efeito do Cr apareceria, pois segundo NRC (2007) so necessrios pelo menos 60 dias para que ocorra mudana do escore moderadamente magro para o moderado, fazendo uso de uma dieta com 32 a 41% de energia digestvel acima da mantena. A partir do peso dos animais ao longo das trs semanas de prova (Tab. 19) e da equao apresentada por Hodgson et al. (1994) para estimar a relao entre a rea de superfcie corporal e peso corporal, foi encontrada uma relao de 1:91 nas trs semanas, relao esta dentro do intervalo proposto por estes autores. Esta relao comprova a enorme demanda termorregulatria apresentada pelos animais deste experimento e confirma mais uma vez

que os animais estavam climatizados s condies ambientais das provas de marcha e adaptados s provas impostas a eles. O consumo mdio dirio total (Tab. 20), em kg de MS, foi semelhante entre os grupos Cr e controle (P>0,05). No trabalho de Anton et al. (2008), foram avaliados o efeito da adio da dieta de 1000 g de CrPic por oito semanas no apetite de mulheres adultas acima do peso e da administrao direta de 0; 0,4; 4 ou 40 ng de CrPic no terceiro ventrculo sobre o consumo voluntrio de ratos por 24 h. Nas mulheres o Cr reduziu o consumo em 25 % (P<0,0001), a fome (P<0,05) e o desejo por alimentos gordurosos (P<0,0001) e tendeu a reduzir o peso corporal (P = 0,08). Nos ratos, a administrao intracerebroventricular diminuiu o consumo voluntrio (P<0,05), com efeito dosedependente, indicando uma ao direta do Cr sobre o SNC. Estes autores sugeriram que o CrPic pode atuar sobre os sinais fisiolgicos de saciedade e inibir centralmente o consumo durante perodos de restrio calrica. Em pelo menos mais um estudo, com sunos (Page et al., 1993), CrPic inibiu o consumo voluntrio quando maiores doses de CrPic foram utilizadas. O mecanismo proposto por Anton et al. (2008) para estes efeitos que o CrPic poderia aumentar a sensibilidade insulina no SNC, o que seria crtico para regular o consumo e o peso corporal. Baseado nesses trabalhos esperava-se que o Cr pudesse reduzir o consumo alimentar e aumentar a eficincia alimentar das guas deste atual experimento, pelo concomitante aumento da massa magra. A suplementao diettica com 10 mg de Cr quelato pode no ter alterado o consumo alimentar destas guas pelo fato do tempo de adio deste mineral na dieta ter sido de apenas 29 dias no perodo pr-experimental. Contudo, os resultados deste trabalho atual concordam com os dados de Ott e Kivipelto (1999), cuja suplementao diettica de

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potros sobreanos com 175 a 700 g CrPic/kg do concentrado durou 112 dias. O NRC (2007) preconizou um consumo de MS para equinos em trabalho de intensidade moderada entre 2,25 % a 2,5 % do peso vivo. No presente trabalho, o consumo mdio total de MS de ambos os grupos Cr e placebo (2 % PV) se apresentou abaixo destes limites (Tab. 21), provavelmente porque a raa Mangalarga Marchador em treinamento para prova de marcha no clima tropical e subtropical necessite de um menor consumo energtico do que o recomendado pelo NRC (2007). Isto porque as exigncias nutricionais dos equinos so dependentes, dentre outros fatores, da categoria animal, do exerccio, do estado fisiolgico, da capacidade digestiva e metablica, do clima e das condies ambientais, e porque de acordo com Frape (2004), o consumo de MS da dieta limitado principalmente pela energia contida nos alimentos. As exigncias nutricionais desta raa ainda precisam ser definidas nas condies brasileiras de criao de equinos. O consumo voluntrio de MS de volumoso (Tab. 20) variou de 0,84 a 0,90 % PV, obtendo a mdia de 0,87 % PV, o que foi bem abaixo do esperado, pois Jackson e Pagan (2002) afirmaram que o mnimo de fibra recomendado na dieta 1 % PV. Tambm, a relao volumoso : concentrado de ambos os grupos para o perodo experimental foi menor do que 50:50, como recomendado por Lewis (2000). O elevado consumo proporcional de ED do concentrado explica o baixo consumo de volumoso e justifica em parte o menor consumo de MS total em relao ao recomendado pelo NRC (2007). Mais estudos devem ser realizados a fim de esclarecer o metabolismo energtico da prova de marcha com marcadores radioistopos, as exigncias nutricionais e o tipo e o comportamento das fibras musculares da raa Mangalarga Marchador

em diferentes condies ambientais, buscando determinar o momento ideal de fornecimento do concentrado em equinos suplementados ou no com Cr.

5. CONCLUSES

O trabalho mostrou que a suplementao diettica com cromo carboquelato no afetou o intervalo entre o fornecimento de concentrado e o incio da prova de marcha nos equinos da raa Mangalarga Marchador, mas preveniu a fadiga dos animais durante a prova. A rao concentrada deve ser oferecida aos eqinos que iro participar das provas de marcha com um intervalo de mais de duas horas entre seu fornecimento e o incio da prova. Os resultados da frequncia cardaca e da lactatemia caracterizaram a prova de marcha como um exerccio submximo, de intensidade moderada e predominantemente aerbico.

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ANEXOS

88

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS; GERAIS COMIT DE TICA EM EXPEIRIMENTAO ANIMAL -CETEA-

CERTIFICADO
Certificamos que o Protocolo nO230/2007, de fornecmento do alimento relativo ao projeto intitulado "Hor,-io (':tJmdietas enriquecitias com

,'Oncentrado at,tes da prova df.~,marcha em

eqinos n7ang.'1larga nJarchador alimentados

cromd', ql.~e corno responsvelAdalgiza Sou:z:aCarneh-o de Rezendf! , est tem

de acordo com os Princpios ticos da E,<perimenta~io Animal, adotados pelo

Comit de tlC.,em Experimentao j.lnin1,'ll(!:E:TEA/IJFMG),tendo sido

aprovadona reulli~iode 121 03/:Z008. Este certificado expira-se em 121 03 1 2013.

tCE:RTIFICA TE
We hereby c:ertif{::hJi:he Protocol nO 230/2007, t
\\

n~lated to the project entitied test Df nJarch i."

HOJ-ary

IfJl

milrislratiDn

of cO/Jcentrate

J"efoic~ the

m.rIr.rgalal!li1 n7arcl7ador

110n;es /'ed witJ7 ,c.f,ro.m'lJmuen.riched tfic~tS', under

the slJpervision of lf\d~;lniza Souza Carneir'cl de Re!zende,r is in agreementwit:~~

the Ethical Principies in Animal Exp'=rirnentaeon,"c/opte::i by the Ertl7icsC'Jmmittf'e

iJ7

,4n;lnal ExpeJ'iJ1rentation (C:E:1'EA/UFMG), W03S approved in ~',ard. 12, anel

2008.
This certificate expires in fv1arf:h 1.:!, 2013.

Belo Horizonte, 14 de MarodE}..2008.

OO~iwt
Administrativa 11 2 Andar, S~lIa2005 31270-~O'1 Belo Horizonte, MG E;~I$iI Telefone: (31) 3tI9!1-4516 Fax: (31) 3499.4fi16 ~w.uf!!lq.pr/bioelic:a/cetea ~~!!!!!@!lli~fi:lIfmQ.b! Unidade

AvenidaAntni,)Carlos, 6627- Campus Pampulha

Prof. Humberto Pereira 0ztvk:ira Coordenador do CETEA/lrFMG Universidade Federalde MinasGerais

(Mod.Cert. 1.0) v

Tabela 22 - Seleo dos animais.

Animal I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII MdiaDP CV (%)
1

Garanho A A A A A A B B B B B B -

Idade 5 5 3 4 4 4 4 4 5 5 4 4 4,240,62 14,62

Peso (Kg) 385 334 348 331 350 348 328 319 329 296 369 336 339,42 23,09 6,8

EC1 3 2 3 3 3 2,5 2,5 3 3 2 2,5 3 2,780,44 15,83

FCM2 159 164 141 138 182 178 127 124 163 148 181 142 153,9220,29 13,18

FCR53 65 134 90 61 193 110 58 100 89 69 62 48 89,9241,04 45,64

94 30 51 77 -11 68 69 24 74 79 119 94 -

%4 59,12 18,29 36,17 55,80 38,20 54,33 19,35 45,40 53,38 65,75 66,2 48,9416,5 33,71

Grupo cromo controle cromo controle cromo controle cromo controle cromo controle cromo controle -

Escore corporal (1 5), segundo Carrol e Huntington (1988). 2Frequncia cardaca mdia da marcha. 3Frequncia cardaca em cinco minutos de recuperao. 4%: ndice de recuperao cardaca.

Tabela 23: Data de nascimento, idade, escore corporal1 e pesagens (Kg), dos animais utilizados no experimento.
Animal I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII Mdia s CV (%)
1

8/1 3 2 3 3 3 2,5 2,5 3 3 2 2,5 3 2,71 0,40 14,64

16/1 3 2,5 3 3 3 3 3 3 3 2,5 2,5 3 2,88 0,23 7,87

Escore corporal1 23/1 30/1 6/2 33,5 3,5 3,5 3 3 3 3 3 3,5 3 3,5 3 3 3 3 3 3 3,5 3 3 3 3 3 3,5 3 3,5 3,5 3 3 3 3 3,5 3,5 33 3,5 3,5 3,00 3,17 3,29 0 0,25 0,26 0 7,77 7,82

13/2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3,00 0 0

20/2 3,3,5 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3,5 3,04 0,14 4,75

8/1 385 334 348 331 350 348 328 319 329 296 369 336 339,42 23,09 6,8

16/1 393 348 359 350 367 368 350 340 340 300 374 349 353,17 22,77 6,45

23/1 388 353 363 350 361 361 352 342 341 302 385 355 354,42 22,021 6,21

Peso (Kg) 30/1 382 355 355 385 359 363 352 340 343 305 388 351 356,5 22,69 6,37

6/2 395 365 373 345 371 368 358 342 348 310 390 361 360,5 22,76 6,31

13/2 394 365 363 351 378 369 361 349 352 312 399 361 362,83 22,554 6,21

20/2 399 378 365 349 384 374 366 355 355 320 407 368 368,33 23,14 6,28

Conforme Carrol e Huntington (1988).

90

Tabela 24 - Consumo alimentar (estimado do concentrado, do volumoso e da dieta total) e produo fecal dos animais do experimento, em kg de MS/ dia.
Animal I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII Mdia Volumoso (kg MS/ dia) 3,26 3,53 3,39 3,17 2,52 3,12 3,18 2,76 2,88 2,54 3,00 3,81 3,10 Concentrado (kg MS/ dia) 4,34 3,98 3,98 4,34 4,07 4,07 3,98 3,89 3,89 3,44 4,43 3,98 4,03 Total (kg MS/ dia) 7,60 7,52 7,37 7,51 6,59 7,19 7,16 6,65 6,77 5,98 7,44 7,79 7,13 Produo Fecal (kg MS/ dia) 3,72 3,95 3,81 3,63 2,95 3,55 3,60 3,17 3,29 2,91 3,48 4,23 3,52

Tabela 25 - Temperatura ambiente (TA C) e umidade relativa do ar (UR %) em diferentes horrios nas 1, 2 e 3 provas de marcha.
Prova 1 2 3 Mdia DP Prova 1 2 3 Mdia DP TA 31,5 32,1 34,4 32,67 1,53 TA 21,1 22,8 19,6 21,17 1,60 12:00 UR 48 38 40 42,00 5,29 TA 33,1 30,9 28,9 30,97 2,10 6:00 UR 68 77 91 78,67 11,59 Hora do dia (h:min) 8:00 TA UR 22,8 74 24,4 70 25,8 71 24,33 71,67 1,50 2,08 Hora do dia (h:min) 14:00 15:30 UR TA UR 43 33,6 37 36 34,4 32 59 32,3 49 46,00 33,43 39,33 11,79 1,06 8,74 09:30 TA 25,9 25,6 25,75 0,21 UR 61 67 64,00 4,24 18:00 TA 29,8 30,9 31,6 30,77 0,91 UR 41 39 46 42,00 3,61

91

Tabela 26 Temperatura de Globo Negro (TGN C), temperatura de bulbo seco (TBS C) e temperatura de bulbo mido (TBU C) em diferentes horrios nas 1, 2 e 3 provas de marcha.
Prova 1 2 3 Mdia DP Prova 1 2 3 Mdia DP Prova 1 2 3 Mdia DP TGN 35,00 36,50 32,30 34,60 2,13 TGN 35,00 37,00 31,10 34,37 2,45 TGN 20,5 21,00 19,10 20,20 0,80 6:00 TBS 21,00 21,50 19,90 20,80 0,67 Hora do dia (h:min) 8:00 TGN TBS TBU 22,10 22,00 19,10 23,50 22,10 20,00 24,10 22,80 20,50 23,23 22,30 19,87 0,84 0,36 0,58 Hora do dia (h:min) TBU TGN 21,50 38,00 21,10 36,90 22,40 28,00 21,67 34,30 0,54 4,48 Hora do dia (h:min) TBU 21,00 22,00 22,20 21,73 0,64 TGN 35,00 36,10 33,00 34,70 1,57 09:30 TBS 24,50 22,50 23,50 1,00

TBU 18,00 19,90 19,10 19,00 0,78 12:00 TBS 27,50 39,50 28,00 31,67 5,54 15:30 TBS 30,00 33,00 27,90 30,30 2,56

TGN 26,00 23,80 24,90 1,10 14:00 TBS 31,00 30,90 25,80 29,23 2,43 18:00 TBS 32,00 34,00 29,00 31,67 2,52

TBU 20,00 20,00 20,00 0,00

TBU 24,00 20,50 21,90 22,13 1,44

TBU 20,50 21,50 22,00 21,33 0,76

Tabela 27 - Valores de referncia e de repouso das principais variveis analisas. Valores de referncia Glicose sangunea (mg/dL) 70,00 140,00 Rose e Hodgson (1994). Lactato sanguneo (mmol/L) 1,11 - 1,78 Kaneko et al. (2008). Insulina (UI/mL) 1,00 50,00 BET Laboratories (2007). Cortisol (ng/mL) 20,00 90,00 BET Laboratories (2007). Triacilglicerol (mg/dL) 6,00-54,00 Kaneko et al. (2008). Glicerol (mg/dL) < 9,21 Vetlab (2008). Valores de repouso 42,191,66 Diniz et al. (2008). Frequncia cardaca (bpm) Frequncia respiratria (mrpm) 8,00 16,00 Houston e Radostits (2002). Houston e Radostits (2002). Temperatura Retal (C) 37,50-38,50

92

Tabela 28 Hemograma completo (srie vermelha) de equinos MM no incio do perodo prexperimental.

ANIMAL I VI II X IX IV VII XII VIII XI III V Mdia Desvio padro CV (%) Eritrcitos (x 106 cls/L) 8,9 10,0 9,5 8,2 8,0 8,9 8,0 9,0 8,0 9,7 7,5 9,5 8,8 0,8 9,3 Hemoglobina (g/dL) 11,6 12,7 10,9 13,6 12,7 12,1 12,8 12,3 14,9 13,4 12,6 12,9 12,7 1,0 7,9 Hematcrito (%) 28,0 32,0 27,0 34,0 30,0 31,0 32,0 31,0 40,0 35,0 33,0 31,0 32,0 3,4 10,6 VGM (3) 31,5 32,0 28,4 41,5 37,5 34,8 40,0 34,4 50,0 36,1 44,0 32,6 36,9 6,1 16,5 H.C.M (3) 13,0 12,7 11,5 16,6 15,9 13,6 16,0 13,7 18,6 13,8 16,8 13,6 14,6 2,1 14,3 CHCM (%) 41,4 39,7 40,4 40,0 42,3 39,0 40,0 39,7 37,3 38,3 38,2 41,6 39,8 1,5 3,8

93

Tabela 29 Hemograma completo (srie branca) de equinos MM no incio do perodo pr-experimental.

ANIMAL I VI II X IX IV VII XII VIII XI III V Mdia Desvio padro CV (%) Leuccitos (cl/mm3) 14500 14100 17500 21500 19100 19100 15900 12900 18600 17000 17500 17200 17075,00 2426,79 14,21 Basfilos (%) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Neutrfilos (%) 55 44 50 51 48 58 48 47 47 51 52 50 50,08 3,78 7,54 Eosinfilos (%) 5 4 9 7 7 6 6 5 6 7 6 6 6,17 1,27 20,55 Basfilos (%) 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 0,42 0,51 123,58 Linfcitos (%) 38 50 40 40 44 34 44 45 46 40 41 42 42,00 4,16 9,90 Moncitos (%) 2 1 1 2 1 1 1 2 1 2 1 1 1,33 0,49 36,93

Tabela 30 Protenas totais e fraes de equinos MM no incio do perodo pr-experimental.

ANIMAL I VI II X IX IV VII XII VIII XI III V Valor de referncia* Mdia Desvio padro Protena total (g/dL) 4,40 4,50 4,70 4,30 4,70 4,50 4,70 4,30 4,50 4,40 4,60 4,60 5,50-7,50 4,52 0,15 Albumina (g/dL) 2,80 3,30 3,10 2,80 3,10 2,30 3,20 3,00 3,10 2,90 3,40 3,40 2,60-3,70 3,03 0,31 Globulina (g/dL) 1,60 1,20 1,60 1,50 1,60 2,20 1,50 1,30 1,40 1,50 1,20 1,20 2,60-4,00 1,48 0,28 18,59 Relao albumina/globulina 1,75 2,75 1,94 1,87 1,94 1,05 2,13 2,31 2,21 1,93 2,83 2,83 0,60-0,90 2,13 0,51 24,19

3,25 10,17 CV (%) *Valores de referncia para animais adultos (Kaneko et al., 2008).

94

Tabela 31 - Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha e hemograma (srie vermelha) de equinos suplementados ou no com cromo, antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha (P>0,05).
Dieta Cromo Controle CV (%) Valor de referncia Cromo Controle CV (%) Valor de referncia Cromo Controle CV (%) Valor de referncia Cromo Controle CV (%) Valor de referncia Cromo Controle CV (%) Valor de referncia Cromo Controle CV (%) Valor de referncia 4:00 8,72 8,80 Fornecimento da Rao (h:min) 2:00 Eritrcitos (x 106 cls/L) 8,60 8,76 19,12 6,4-10 Hemoglobina (g/dL) 11,47 11,75 17,54 11-17 Hematcrito (%) 30,5 31,0 17,92 32-47 VCM (3) 35,47 35,39 17,58 37-59 HGM. (3) 13,34 13,41 6,7 15-17 CHCM (%) 37,61 37,90 5,53 30-36 0:30 8,82 8,98

11,3 11,9

11,63 12,32

30,17 30,83

31,5 32,33

34,60 35,03

35,71 36,00

12,96 13,52

13,19 13,72

37,45 38,60

36,92 38,11

Valores de referncia para animais adultos (Jain, 1993; Meyer et al., 1995).

95

Tabela 32 - Horrio de fornecimento do concentrado antes da prova de marcha e hemograma (srie branca) de equinos suplementados ou no com cromo, antes da prova (AP), depois da prova (DP) e 25 min aps a prova (25min) de marcha (P>0,05).
Leuccitos (clulas/mm3) Fornecimento da Rao (h:min) 4:00 2:00 12.683,33 12.133,33 Cromo 13.050,00 12.633,33 Controle 6.000 12.500 Valor de referncia* 8,67 CV (%) Neutrfilos Segmentados (clulas/mm3) Dieta Fornecimento da Rao (h:min) 4:00 2:00 6637,19 6248,66 Cromo 6547,19 6295,19 Controle 2.200-8.500 Valor de referncia* 8,54 CV (%) Eosinfilos (clulas/mm3) Dieta Fornecimento da Rao (h:min) 4:00 2:00 570,75 404,04 Cromo 434,57 442,17 Controle 100-1.000 Valor de referncia* 34,89 CV (%) Linfcitos (clulas/mm3) Dieta Fornecimento da Rao (h:min) 4:00 2:00 5.326,99 5277,99 Cromo 5872,5 5748,17 Controle 1.500-7.700 Valor de referncia* 9,69 CV (%) Moncitos (clulas/mm3) Dieta Fornecimento da Rao (h:min) 4:00 2:00 148,39 202,63 Cromo 195,75 147,81 Controle 100-1.000 Valor de referncia* 39,07 CV (%) *Valores de referncia para animais adultos (Jain, 1993; Meyer et al., 1995). Dieta 0:30 12.550,00 12.366,67

0:30 6672,84 6430,67

0:30 480,67 432,84

0:30 5166,84 5296,64

0:30 229,67 185,51

96

Tabela 33 - Horrio de fornecimento de concentrado e proteinograma antes da prova de marcha de equinos suplementados ou no com cromo (P>0,05).
Fornecimento da Rao Protena total (g/dL) (h:min) Cromo Controle 7,53 7,18 4:00 7,9 7,22 2:00 8,13 8,02 0:30 19,36 CV (%) 5,5-7,5 Valor de Referncia* Globulina (g/dL) Fornecimento da Rao (h:min) Cromo Controle 4,7 4,37 4:00 5,22 4,83 2:00 5,28 5,07 0:30 16,73 CV (%) 2,6-4 Valor de referncia* *Valores de referncia para animais adultos (Kaneko et al., 2008). Albumina (g/dL) Controle 2,82 2,83 2,95 6,96 2,6-3,7 Relao albumina/globulina Cromo Controle 0,65 0,67 0,52 0,62 0,53 0,58 25,81 0,6-0,9 Cromo 2,83 2,68 2,85

Tabela 34 - Horrio de fornecimento de concentrado e proteinograma antes da prova de marcha de equinos MM (P>0,05).
Fornecimento da Rao Protena Albumina Globulina (h:min) Total 7,36 2,83 4,53 4:00 7,56 2,76 5,03 2:00 8,08 2,9 5,18 0:30 5,5-7,5 2,6-3,7 2,6-4 Valor de referncia* 9,36 6,96 16,73 CV (%) * Valores de referncia para animais adultos (Kaneko et al., 2008). Relao Albumina/globulina 0,66 0,57 0,56 0,6-0,9 25,81

Vento (Km/dia)
25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 7 - Velocidade do vento no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

97

Evaporao (mm/dia)
10,0 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 11 - Evaporao no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.
Horas / Sol
14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 12 - Horas de sol no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias - Unimontes

98

Precipitao (mm)
30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 13 - Taxa de precipitao no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.
Temperaturas Mximas e Mnimas(C) 40,0 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 14 - Temperaturas mximas e mnimas no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.
Umidade Relatriva 21TMG (% )
120 100 80 60 40 20 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 15 - Umidade relativa do ar no ms de janeiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

99

Vento(Km/dia)
120,0 100,0 80,0 60,0 40,0 20,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29

Figura 16 - Velocidade do vento no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

Brilho Solar (Horas)

12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
Figura 17 - Brilho solar no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

Evaporao(mm/dia)
10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29

Figura 18 - Taxa de evaporao no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

100

Precipitao(mm)
60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29

Figura 19 - Precipitao no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

Temperaturas Mximas e Mnimas (C)

40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
Figura 20 - Temperaturas mximas e mnimas no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

Umidade Relativa TMG(% )

120 100 80 60 40 20 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
Figura 21 - Umidade relativa do ar no ms de fevereiro de 2008. Fonte: Estao Meteorolgica; Departamento de Geocincias Unimontes.

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