Departamento de Engenharia de Alimentos UNICENTRO 25 a 27 de maio de 2011 Guarapuava PR ISSN: 2236-3947

DETERMINAO DE CIDOS GRAXOS LIVRES EM LEOS VEGETAIS POR FT-NIR E CALIBRAO MULTIVARIADA

DETERMINATION OF FREE FATTY ACIDS IN VEGETABLE OILS BY FT-NIR AND

MULTIVARIATE CALIBRATION
Djssica Tatiane Raspe Departamento de Tecnologia Universidade Estadual de Maring UEM Umuarama, PR djessicaraspe@hotmail.com Vitor Augusto dos Santos Garcia Departamento de Agronomia Universidade Estadual de Maring UEM Maring, PR vitoraugusto16@hotmail.com Flvio Augusto Vicente Seixas Departamento de Bioqumica Universidade Estadual de Maring UEM Umuarama, PR seixas_flavio@yahoo.com.br. Camila da Silva Departamento de Tecnologia Universidade Estadual de Maring UEM Umuarama, PR camiladasilva.eq@gmail.com

III Encontro Paranaense de Engenharia de Alimento DEALI/UNICENTRO 25 a 27 de maio de 2011

Resumo: mtodos instrumentais tm sido reportados como alternativas aos mtodos convencionais comumente aplicados em anlise qumicas, dentre os quais a espectrometria no infravermelho prximo com transformada de Fourier (FT-NIR) tem superado a tcnica convencional fornecendo procedimentos analticos rpidos, diretos, precisos e no-invasivos. Este trabalho tem como objetivo a aplicao da espectroscopia FT-NIR acoplada calibrao multivariada na determinao do percentual de cidos graxos livres (AGL) em leos vegetais. O mtodo analtico desenvolvido utilizou como matriz de calibrao misturas de leo de soja e cido olico em propores de 0,3 a 38% (em massa) de cido olico. Dentre as principais aplicaes da metodologia desenvolvida est a avaliao do teor de AGL em leos vegetais com potencialidade na produo de biodiesel. Palavras-chave: cidos graxos livres; FT-NIR; calibrao multivariada. Abstract: instrumental methods have been reported as alternatives to conventional methods commonly applied in chemical analysis, among which the Fourier transform near infrared spectroscopy (FT-NIR) has overtaken the conventional technique providing rapid analytical procedures, direct, precise and noninvasive. This work investigates the application of FT-NIR spectroscopy coupled with multivariate calibration to determine the percentage of free fatty acids (FFA) in vegetable oils. The analytical method used as the matrix of calibration mixtures of soybean oil and oleic acid in proportions from 0.3 to 38% (by weight) of oleic acid. The main applications of the developed methodology is assessing the level of FFA in vegetable oils with potential for biodiesel production. Keywords: free fatty acids; FT-NIR; multivariate calibration.

1 Introduo
A busca constante por fontes alternativas e renovveis de energia tem se tornado necessria, devido possvel escassez de combustveis fsseis e preocupaes de ordem ambiental. Dentro deste contexto, a produo de biocombustveis a partir de leos vegetais (biodiesel), tem sido largamente investigada e bem reportada na literatura [1,2,3], pois trata-se do processamento de uma fonte de energia renovvel, com crescente disponibilidade, com produo disponvel em vrios pases e uso sustentado que no provoca danos ao meio ambiente [4].

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No cenrio Nacional, a soja destaca-se como a principal matria-prima a ser utilizada para a produo de biodiesel [5]. No entanto, devido ao fato de se tratar de um substrato com fins alimentcios, a busca por alternativas a mesma foco de interesse. As tendncias atuais destacam a potencialidade do leo de pinho manso, leo da palmeira macaba, leo de caroo do algodo e leos residuais de fritura entre os principais substitutos ao leo de soja na obteno de biocombustveis [5]. Entre as principais caractersticas dos substratos citados, podemos destacar o elevado teor de cidos graxos livres. Diferentes metodologias analticas tm sido propostas para a determinao de cidos graxos livres em leos vegetais, dentre elas, a Cromatografia Gasosa [6, 7, 8], Espectrometria de Ressonncia Magntica Nuclear [9, 10], Espectrometria no Infravermelho [11, 12], Espectrometria no Infravermelho Prximo [13, 14, 15, 16, 17] entre outros. Segundo a AOCS [18], a acidez em leos vegetais pode ser determinada atravs da titulao cido-base, utilizando hidrxido de sdio como titulante e fenolftalena como indicador, sendo tal mtodo comumente utilizado devido simplicidade de operao. Entretanto, este mtodo lento, trabalhoso e carece de preciso. Na determinao deste parmetro, grandes quantidades de amostras e reagentes so consumidas durante a operao e h muita dificuldade na visualizao do ponto de viragem do indicador [16]. A Agncia Nacional de Petrleo (ANP) [19] especifica a determinao por tcnicas cromatogrficas que envolvem etapas complexas de preparo da amostra como a derivatizao e custos com padronizao interna. Outros mtodos so aplicados envolvendo tcnicas de cromatografia lquida de alta eficincia [20] onde se elimina as etapas de derivatizao, no entanto, observa-se o elevado consumo de solventes utilizados como fase mvel e longo tempo de anlise. Um mtodo analtico que tem sido capaz de superar tais inconvenientes a Espectrometria FT-NIR. Essa tcnica fornece procedimentos analticos rpidos, diretos (sem pr-tratamento), reprodutveis, no-invasivos e, alm disso, o custo por anlise relativamente baixo quando comparada s tcnicas clssicas de referncia [21]. Dentro deste contexto, este trabalho tem por objetivo a aplicao da espectroscopia FT-NIR associada a ferramentas quimiomtricas (calibrao multivariada) na quantificao de cidos graxos livres em leos vegetais visando utilizao destes substratos para a produo de biodiesel.

2 Material e Mtodos
2.1 Material
Foram utilizados como matriz de calibrao do mtodo analtico leo de soja comercial (Marca Soya) e cido olico (Synth P.A.) ambos sem nenhum tratamento prvio. Na etapa de titulao das amostras foram utilizados: soluo de

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lcool etlico/ter Etlico 2:1 (v:v) (Vetec/Nuclear), Hidrxido de Sdio 0,1 N (Nuclear) e o Indicador Fenolftalena (Nuclear).

2.2 Composio do Grupo de Calibrao e Validao

Para criao do banco de dados de calibrao e validao, nas amostras de leo de soja foram acrescentados percentuais de cido olico em intervalos de concentrao de 0,3 a 38 % (mg de cido olico/100 mg de amostra), totalizando 170 amostras estudadas. Sendo 114 amostras utilizadas para calibrao da metodologia e 56 amostras para validao interna. Outras 10 amostras foram preparadas para formao do grupo de calibrao externa, com percentual de cido olico de 6,0 a 33% (mg de cido olico/100 mg de amostra). Aps o preparo das amostras realizaram-se as anlises de titulao cidobase em triplicata utilizando como metodologia de referncia o mtodo Ca 5a-40 [18], a fim de verificar o percentual de acidez em cido olico nas amostras. Determinado o percentual de cido olico nas amostras, realizou-se a medida das amostras em espectrofotmetro FT-NIR N200 (Bchi) em triplicata. As medidas foram realizadas em temperatura de 20C 1C, utilizando uma placa de petri de vidro (altura de 1,7 cm e dimetro de 9 cm), cobrindo uma regio espectral de 1000 a 2500 nm.

2.3 Tratamento Quimiomtrico dos Dados

A anlise quimiomtrica dos dados obtidos foi realizada no Software NIR Cal 4.21, o qual avalia o melhor mtodo quimiomtrico para regresso dos dados, bem como o tratamento dos espectros de absoro (quando necessrio). Os mtodos propostos sero avaliados com base no erro mdio quadrtico (RMSE), determinado pela equao 1:

RMSE =

i =1

( y p y REF ) 2 N

(1)

onde os termos "yp"e "yREF" denotam o valor previsto e o valor de referncia, respectivamente. O erro padro relativo designado como RMSEC (%) para a calibrao e RMSEP (%) para a validao (predio). O modelo aprovado refere-se ao que levou ao menor valor possvel RMSE para um conjunto de amostras no utilizadas anteriormente para constru-la (ou seja, o conjunto de validao).

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3 Resultados e Discusso
O estabelecimento da faixa de calibrao do mtodo adotou como critrio os valores de acidez reportados na literatura em relao a leos vegetais utilizados para produo de biodiesel [5, 19]. A calibrao do mtodo foi avaliada considerando a correlao entre o percentual de cidos graxos livres (AGL) predito pelo FT-NIR e o percentual determinado pelo mtodo de titulao de referncia. No tratamento quimiomtrico dos dados, avaliou-se o mtodo quimiomtrico dos mnimos quadrados parciais (PLS) para a regresso dos dados, para o espectro sem tratamento prvio e espectro com pr-tratamento (1 e 2 derivada pelo mtodo de Savitzky-Golay) conforme apresenta a Tabela 1. Tabela 1. Resultados do tratamento quimiomtrico dos dados.
Espectro sem tratamento RMSEC RMSEP 0,5068 0,5094 1 Derivada 0,2841 0,4613 2Derivada 0,4369 0,5886

Com base nos valores apresentados (Tabela 1) o mtodo PLS com espectro derivado (1 derivada) utilizando 7 fatores primrios, foi selecionado, pois apresentou os menores valores de RMSE para as etapas de calibrao e validao do mtodo analtico proposto. Os espectros de absoro com pr-tratamento (primeira derivada) na regio do Infravermelho prximo para as amostras de calibrao e validao so apresentados na Figura 1. A utilizao do mtodo PLS no tratamento de dados espectroscpicos na determinao de AGL reportada na literatura [13, 15, 16]. A correlao entre os resultados obtidos pelo mtodo FTNIR/PLS e a metodologia de referncia para as etapas de calibrao e validao interna, apresentada na Figura 2.

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Figura 1. Espectros derivativos das amostras obtidos por FT-NIR aps tratamento.

Figura 2. Correlao entre o percentual de AGL predito pelo mtodo FT-NIR e observados pela metodologia de referncia. A capacidade de predio da curva de calibrao desenvolvida foi testada com um grupo independente de amostras, preparadas em concentraes de cido

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olico diferentes das utilizadas na etapa de calibrao e validao interna (Figura 3), denominadas amostras sintticas.
35

AGL Predito [%] Mtodo FT-NIR

30

25

20

15

10

0 0 5 10 15 20 25 30 35

AGL [%] Metodologia de referncia

Figura 3. Correlao entre o percentual de AGL predito pelo mtodo FT-NIR e observados pela metodologia de referncia. A comparao dos resultados obtidos com a literatura especializada apresentada na Tabela 2. Verifica-se que o mtodo proposto apresenta larga faixa de trabalho, quando comparado a demais trabalhos disponveis na literatura. Man e Setiowaty [12] utilizaram o mtodo instrumental IR para analisar o contedo de AGL em leo de palma, por este ser um mtodo rpido e eficiente, investigando ainda a possibilidade deste mtodo ser melhorado a ponto de substituir o mtodo de titulao. Trinta amostras de padres de calibrao foram preparadas pela adio de cido olico leo de palma em valores conhecidos para cobrir uma variao no teor de AGL de 0,08 a 1,04%. A etapa de calibrao inclui o mtodo quimiomtrico dos mnimos quadrados parciais (PLS) como rotina de calibrao. No que se refere a determinao de AGL em leo de peixe, Cozzolino et al [13] reportam a aplicao da regresso por mnimos quadrados parciais (PSL) e espectroscopia de infravermelho prximo (NIR). As medidas realizadas, foram adequadamente determinadas por espectroscopia NIR na faixa de 0,16 a 1,96 % de AGL, desta forma, o mtodo proposto pode ser usado para melhorar a velocidade de relatar os resultados e auxiliar na tomada de decises de gesto com maior eficincia.

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Tabela 2. Comparao dos resultados obtidos com a literatura. Faixa do Mtodo % Material Mtodo
[mg de cido olico/100 mg de amostra] em Estudo leo de Soja + cido olico leo de palma + cido olico leo de Peixe leos Residuais de Fritura leo de Peixe Experimental

Mtodo Quimiomtrico

Este Trabalho Man e Setiowaty [12] Cozzolino et al. [13] Ng et al. [15] Aryee et al. [17]

0,2 a 38 0,08 a 1,04 0,16 a 1,96 0,020 a 0,568 0 a 6,5

FT-NIR FT-IR NIR NIR FT-IR

PLS PLS PLS PLS -

A aplicao de NIR e mnimos quadrados parciais (PLS) na determinao de AGL em leos residuais de fritura relatada por Ng et al. [14]. Um total de 60 amostras foram escolhidas para o conjunto de calibrao, e as 43 amostras foram colocadas em um conjunto de validao. Os limites de determinao do mtodo para AGL variam entre 0,020% a 0,568%, sendo que os resultados obtidos apresentaram baixos desvios em relao ao mtodo de referncia. O estudo de Aryee et al. [17] apresenta a aplicao na espectroscopia NIR para a determinao de AGL em leo de peixe, os autores relatam que da utilizao da metodologia aplicada a simples regresso linear, o mtodo proposto apresenta linearidade para a faixa de 0 a 6,5 % de acidez.

5 Concluses
O estabelecimento de metodologia analtica para determinao de cidos graxos livres em leos vegetais foi estudada. Os resultados obtidos demonstram que a utilizao da espectroscopia FT-NIR acoplada a calibrao multivariada apresentou-se eficiente na determinao de AGL na faixa de 0,2 a 38 (mg de cido olico/100 mg de amostra). Demonstrando ser um mtodo simples e rpido para o estabelecimento de acidez em leos vegetais com potencialidade como matrias-primas para produo de biodiesel. Outra grande vantagem desse mtodo de caracterizao a ampla faixa de utilizao do mtodo quando comparado com os trabalhos da literatura. Vislumbra-se como continuidade do presente trabalho, o monitoramento da reao de esterificao de AGL em leos vegetais, a fim de estabelecer uma ferramenta eficaz para o monitoramento contnuo do rendimento

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de reaes de esterificao, visando uma avaliao rpida durante o processo de produo de biodiesel.

6 Agradecimentos
Os autores agradecem ao CNPq (Projeto Universal 472962/2009-4) pelo suporte financeiro e a Universidade Estadual de Maring Campus Regional de Umuarama pela infra-estrutura.

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