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Le gnie gntique est une discipline regroupant un ensemble de techniques de biologie molculaire prenant appui sur les connaissances

acquises en gntique et permettant dutiliser, de reproduire ou de modifier le gnome des tres vivants. Il trouve des applications, notamment, dans la production de protines recombinantes, lobtention dorganismes gntiquement modifis.

2.3. 4

Exemples dapplications du gnie gntique

1 P RODUCTION

DE PROTINES RECOMBINANTES

Linsuline est un exemple de protine produite par gnie gntique. Lun des procds consiste produire les deux chanes de linsuline sparment en insrant le gne codant pour chacune dentre elles dans deux vecteurs plasmidiques diffrents (figure 1).
Voir fiche mthodes damplification dADN

Dans les deux cas, le gne dintrt est plac sous le contrle du promoteur de lopron lactose. Il est galement associ une partie du gne de la galactosidase et au codon de la mthionine. Par ailleurs, le plasmide contient un gne de rsistance lampicilline.
Voir fiche contrle de lexpression des gnes procaryotes

Les vecteurs recombinants sont introduits par transformation dans des lots diffrents dEscherichia coli. Ces dernires sont mises en culture sur un milieu contenant de lampicilline et, dans un premier temps, dpourvu de lactose, afin dobtenir une biomasse de cellules transformes importante. Lajout, dans un second temps, de lactose dans le milieu induit lexpression du gne, ce qui conduit la synthse dune protine hybride gal-chane A ou galchane B de linsuline. La prsence dune partie de la galactosidase associe la protine dintrt vite sa dgradation par la bactrie. Produite en grande quantit, les protines hybrides prcipitent ce qui facilite leur rcupration. Les chanes de linsuline sont spares des protines hybrides, par action du bromure de cyanogne qui coupe les liaisons peptidiques aprs les rsidus mthionines. Les deux chanes sont alors purifies, mlanges et places en milieu oxydant pour permettre la formation de ponts disulfures.

Figure 1 tapes de production de linsuline recombinante

2 O BTENTION D ANIMAUX

TRANSGNIQUES

Les animaux transgniques peuvent tre obtenus selon diffrents procds. Lune des techniques consiste introduire un gne tranger dans des cellules embryonnaires prleves dans un blastocyste, qualifies de cellules souches

(figure 2). Ces cellules peuvent tre maintenues en culture, et tres modifies par apport dADN tranger laide dun rtovirus recombinant ou par micro-injection. Les cellules dans lesquelles le gne sest intgr sont slectionnes et rinjectes dans la cavit dun blastocyste. Lavantage de ce type de technique est de pouvoir slectionner les cellules souches exprimant le transgne.

Figure 2 Obtention de souris transgniques par modification de cellules souches (SE)

3 T RANSGNESE

VGTALE

La modification gntique des cellules vgtales peut tre ralise laide de bactries du type Agrobacterium. Elles infectent les plantes, au niveau du collet ou des racines, selon les espces, provoquant des tumeurs suivies de ncroses tissulaires. Lune des espces les plus utilises pour la transgnse est A. tumefaciens. Elle hberge le plasmide Ti (tumor induicing) qui contient : une rgion T, ou ADN T, pouvant tre transfre dans les cellules vgtales, et renfermant, entre autres, les gnes responsables de la formation de tumeur ; des gnes impliqus dans le transfert de lADN T (rgion vir) et une origine de rplication. Lors de la transgnse, un plasmide vecteur est construit partir du plasmide Ti. Il contient les extrmits de lADN T, le gne dintrt, la place des gnes responsables de la formation des tumeurs et un gne de slection chez les plantes, en gnral le gne NPT (nomycine phospho-transfrase), qui confre la plante une rsistance spcifique la kanamycine (figure 3). Ce plasmide vecteur est introduit dans une agrobactrie transforme par un plasmide Ti dsarm, cest--dire sans ADN T mais exprimant les protines ncessaires au transfert de la rgion T du plasmide vecteur.

Figure 3 Principe de la transgnse vgtale par Agrobacterium selon la technique du vecteur binaire