UNIVERSIDAD DE SANTANDER-UDES

PRCTICA NUMERO CUATRO METODOS ESPECTROSCOPICOS DE ANALISIS ESPECTROFOTOMETRIA

LABORATORIO DE ANALISIS QUIMICO INSTRUMENTRAL

CESAR BERMUDEZ COD. 11171014

LINA GARCIA COD.10172025

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO

RESUMEN La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.

INTRODUCCIN Este elemento es de gran relevancia para todos los anlisis que buscan hallar la concentracin de un analito de una muestra ya preparada, conociendo que es un instrumento que cuyo objetivo es comparar transmitida la radiacin por una absorbida solucin o

Dos balones aforados (100 ml) Pera. Dos balones aforados (25ml) Dos vasos precipitados (100ml). Un churrusco. Rtulos. Un frasco lavador Dos portaceldas. Frasco lavador. Colorantes hidrosolubles (rojo y azul).

que

contiene una cantidad desconocida de soluto, comprendiendo su fundamento y realizando ecuaciones matemticas para obtener datos cuantitavos de la muestra problema.

METODOLOGIA OBJETIVOS Conocer el funcionamiento del espectrofotmetro. Aprender el fundamento espectrofotometra. Determinar absorbancia y de la Realizar calculos para determinar la masa a pesar (azul, 0,02g ;rojo 0,01 g). 1. Preparacin de las soluciones stock.

seleccionar la longitud de onda de mxima absorbancia. PARTE EXPERIMENTAL MATERIALES Espectrofotmetro. Balanza. Pipeta graduada de (5 ml,10ml). Preparar curvas de calibracin. Hallar analito. la concentracin del

Aadir mezcla del colorante con agua al balon aforado de 100 ml , y llenar el aforo con agua destilada

2. Preparacin de las soluciones patrn. Realizar los calculos

RESULTADOS Y DISCUSION 1. Preparacin de las soluciones stock.

sln azul( 40 ppm, 4 ml ; 80 ppm, 8ml ; 120 ppm, 12 ml; 160 ppm, 16 ml) . sln roja ( 10 ppm, 2,5 ml ; 30 ppm, 7,5 ml ; 50 ppm, 12 ,5 ml; 70 ppm, 17,5 ml)

Llenar hasta el aforo de 25 ml co nagua destilada.

Se realizaron las dos soluciones stock del colorante rojo y azul, se tuvo dificultad al pesar el colorante rojo por que estaba en estado lquido.

3. Determinacin del espectro de absorcin del colorante. Clculos: PPM=mg/L Encienda el espectofotometr o 15 mns antes de su uso. Anotar datos de A y T de la sln patron con diferente longitudes de onda. calibrar 100% de transmitancia con celda limpia y con agua.

Colorante azul Miligramo=ppm * L Miligramo= 250 * 0.1= 25 mg

Ajustar la longitud de onda a 350 nm.

calibrar 0% de transmitancia sin celda .

Colorante rojo Miligramo=ppm * L Miligramo= 100 * 0.1= 10 mg

2. Preparaciones

de

las

Color rojo Longitud de onda (nm) 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450 absorbancia 0.130 -0.00 -0.019 0.93 -0.510 -0.621 -0.782 -0.860 -0.955 -01.015 -1.094 % transmitancia 73.1 99.9 104.5 80.9 329.8 458.1 605.5 725.7 881.0 1035 1241

soluciones patrnes
Antes de preparar las soluciones se realizaron los siguientes clculos: Colorante Azul

V1=25*40/250= 4ml V1=25*80/250= 8ml V1=25*120/250= 12ml V1= 25*160/250= 16ml Colorante rojo

Colorante azul

V1= 25*10/100= 2,5ml V2= 25*30/100= 7,5ml V3= 25*50/100=12,5ml V4=25*70/100=17.5ml

Longitud de inda en (nm) 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450

Absorbancia

Transmitancia 85,3

-0,22 -0.58 -0,266 - 0,078 -0,647 -0,787 -0,923 -1,040 -1,142 -1,342
-1,456

95,0 143.7 160,8 111.6 443.8 612.4 836.9 1096 1387 2196

3. Determinacin del espectro de

absorcin del colorante.

Se tomo la solucin patrn intermedia de cada colorante obtenindole los valores de A y T.

CONCLUSIONES -Que un aumento proporcional de la longitud de onda, aumenta la

transmitancia absorbancia. -que obtener

pero

disminuye

la

clculos

exactos

nos

ayudara a realizar una practica precisa. -Al aumentar la concentracin de la muestra disminuye la cantidad de luz transmitida. -El calibrar la herramienta nos ayudara de a

espectrofotometra disminuir

errores

sistemtico

BIBLIOGRAFIA

http://perso.wanadoo.es/sergiora m1/espectrofotometria.htm

http://www.doschivos.com/trabajo s/tecnologia/1902.htm