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LES PLASMIDES : STRUCTURE ,FONCTIONS ET METHODES D’ETUDE

PLAN : I. II. Introduction Structure et organisation des plasmides 1. Structure 2. Organisation A. Elements obligatoires B. Elements facultatifs Fonctions et types de plasmides Classification des plasmides 1. Taille et phénotype 2. Taille , conjugatife ou non , phénotype 3. INC 4. Type pilaire Physiologie des plasmides 1. Replication a. Theta b. En cercles roulants 2. Fonctions de l region OriV Méthodes d’etude des plasmides 1. Méthodes génétiques A. Transferts génétiques B. Cure plasmidique 2. Méthodes physiques a. Extraction et purification b. Revelation - Electrophorese - Hybridation Conclusion

III. IV.

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la forme la plus répondu est un ADN double brun . circulaire fermé super-enroulé . INTRODUCTION : les plasmides sont des fragments d’adn extrachromosomiques acultatifs pour la bacterie mais lui permettent une adaptation rapide en réponse des chngements environnementaux.I. Element obligatoire : representé par la zone de réplication b. on trouve des variants circulaires relâchés avec un brun coupé ou une forme linéaire avec deux bruns coupés. STRUCTURE ET ORGANISATION DES PLASMIDES : 1. II. La taille est variable et va de 1 a plus de 400 kb 2. FONCTIONS ET DIFFERENT TYPES DE PLASMIDES : . Elements facultatifs : Région de transfert (Operon tra) déterminant des Plasmides conjugatifs ou région mob déterminant des plasmides mobilisables. is) ou non (integrons) Divers génes : R aux ATB . Structure Les plasmides sont des molécules d’ADN extrachromosomique le plus souvent . par leurs propriétés de transfert et de plasticité posent un grave probleme car ils sont le support de multirésistance aux antibiotiques et de dissémination dans le monde bacterien. Elements génétiques mobiles (tn . En microbiologie médicale les plasmides . ORGANISATION : elle est variable et flexible en fonction du plasmide considéré One répartit les éléments du plasmide en : a. métabolisme … III.

AA soufrés . Plasmides bacteriocinogenes : codant pour des antibiotiques tuant les autres bactéries. Plasmide métabolique : permettent l’utilisation de certains nutriments ex : citrate . Parmi les fonctions apportés par les plasmides : 1. 2. 5. Taille . urée …) 2. nombre de copies et phénotype : on distingue : . CLASSIFICATION DES PLASMIDES : 1. Les transferts génétiques : La conjugaison CF partie amira    2. 4. Résistance aux antibiotiques Chaines métaboliques particulières supplémentaires Facteurs de virulence Production de bactériocines… Ceci conduit a 5 types de plasmides : 1. 5. toxines … VI. Plasmides de résistance : codent globalement pour des facteurs de résistance dans l’environnement (antibiotiques. 3.Plasmides de virulence : codent pour divers facteurs de virulence qui permettent la transformation de la bacterie en pathogne ex : pili . Plasmides de fertilité : permettant les transferts génétiques. mais trouvent toute leur importance dans des situation ou une adaptation a des changement relativement rapides de l’environnement de la bactérie s’impose. Phénotype : peu de valeur car ne tient pas compte de la plasticité des plasmides. 3. poisons …) 4. Taille .Les plasmides sont des éléments facultatifs a la survie bactérienne.

Mais cette classification est moins sensible que les Inc. Les gros plasmides conjugatifs en nombre de copies limité dont la replication est rigoureusement contrôlée. V. Types pilaires : dans ce cas le pili sexuel peut servir de recepteur aux phages il en découle que des plasmides de meme type pilaires sont sensibles au meme phages. en particulier les plasmides rigoureux seront distribués dans chaque cellule fille. L’operon Par code pour des proteines réalisant par polymerisation un filament portant a chaque bout un plasmide qu’il lie par sa région OriV. Les petits plasmides en grand nombre non conjugatifs pouvant etre mobilisables dont la réplication est relachée b. il existe 2 types de replication plasmidique : A. 3. Physiologie des plasmides : 1. La replication type theta : dans ce cas . LES GROUPES d’incompatibilité (Inc) 4. a partir d’une amorce d’ARN synthétisée au niveau de la region OriV . l’extrémité 3’ servira d’amorce a la réplication quand a l’autre brun il servira de matrice a la synthèse d’ADN. ou deux dans la bidirectionnelle vont ce déplacer le long de la molécule d’ADN pour ce rencontrer respectivement au niveau de la region OriV ou au niveau du site de terminaison B. une fourche de replication dans l‘unidirectionnelle . La replication : elle utilise les enzymes de la bacterie hote . lorsque la cellule ce divise ce filament ce romp liberant le plasmide. le brun transféré dans la cellule réceptrice et celui restant dans la cellule donatrice vont etre répliqués A la fin de la réplication on assiste a la formation de polyméres de plasmides au niveau du site de termnaison (concatemeres) qui subissent une résolution via une recombinaison specifique .a. ce meme mécanisme est retrouvé lors du transfert par conjugaison sauf que la cassure a lieu au niveau de la région OriT . . Grace au systéme de partage (operon Par) chaque plasmide . La réplication en cercle roulant : dans ce cas la réplication a lieu après cassure d’un brun au niveau de la région OriV . Plus la polymerisation avance plus les 2 plasmides s’eloignent .

METHODES D’ETUDE DES PLASMIDES : Les méthodes peuvent etre réparties en méthodes génétiques et des méthodes physiques. Régulation du nombre de copies du plasmide dans la cellule : le nombre de copies determines deux groupes : Les plasmides relachés ou en grand nombre de copies Les plasmides rigoureux ou en petit nombre de copies. C. Vi. Parmi les systémes de régulation du nombre de copies . celui-ci dépondra plus au moins des fonctions de sa bactérie hote . b. Détérmination du spectre d’hote : en fonction du nombre d’éléments requis pour la réplication et codés par le plasmide . Méthodes génétiques : 2 principaux méthodes sont . dans ce cas la les plasmides ont dis « incompatible » et font partie d’un meme groupe « d’incompatibilité ». plus celui-ci est dépendant plus son spectre d’hote sera etroit et vice versa. 1.. Répartition des plasmides (en particulier des plasmides rigoureux) sur les bactérie filles via le systéme PAR. D.La résolution des polymeres et le systéme de partage empechent la perte des plasmides lors de la division (cure) 2. dont une région code pour un ARN II qui lie l’amorce ARN nécessaire a la replication . de maniére stable dans une cellule . quand le nombre de copies est elevé l’ARNII en exés lie l’ARNI et la réplication n’a pas lieu entraiant la limitation du nombre de réplicons. on trouve la régulation par l’ARN dans le plasmide ColE1 qui . Détermination des groupes d’incompatibilité via la régulation des mécanismes de régulation de répartition des plasmides. FONCTIONS DE LA REGION OriV : cette région joue un role clé dans plusieurs ont processus fonctionnels du plasmide a. En effet il est impossible pour certains plasmides de coexister . et il y aura perte d’un des 2 plasmides .

Ex : un plasmide codant pour une beta-lactamase . vie métabolique . toxine . résistance a un ATB autre que les marqueurs de selection b. REVELATION : -par électrophorèse conventionnelle sur gel d’agarose sans ou après réstriction (typage plasmidique par RFLP) -Hybridation ADN-ADN (Southern blot) VII. Les transferts plasmidiques : consiste en l’acquisition d’un ou plusieurs caractéres phénotypiques suite a une conjugaison entre de bactéries porteuses d’un marqueur de selection chromosomique (ex : résistance a un ATB « Ecoli K12NAL par ex ) ex : hémolyse . dans ce cas le marqueur de selection peut etre le plasmide lui-même. EXTRACTION ET PURIFICATION DES PLASMIDES : Les bactéries subissent un traitement détergeant doux. La cure plasmidique : consiste en la perte d’un plasmide par par croissance dans des conditions inhibant specifiquement sa replication. CONCLUSION : les plasmids sont des fragments d’and extrachromosomiques ayant des proprieties génétiques unique dont la conaissance est primordiale afin de les utiliser ou de lutter contre . Le surnageant subira ensuite un traitement de purification physique et chimique (lyse alcaline couplée a une ultracentrifugation sur gradient Chlorure de césium ou plus moderne par chromatographie. NB : on peut proceder en couplant les 2 méthodes (conjugaison puis cure ) NB : l’association des 2 méthodes donne 2. la perte du plasmide résulte en la perte de certaines fonctions . METHODES PHYSIQUES : A. si perdu . suivi d’une centrifugation pour sédimenter le chromosome lourd.a. B. il y aura restoration de la sensibilité de la bacterie a certaines betalactamines.