LES PLASMIDES : STRUCTURE ,FONCTIONS ET METHODES D’ETUDE

PLAN : I. II. Introduction Structure et organisation des plasmides 1. Structure 2. Organisation A. Elements obligatoires B. Elements facultatifs Fonctions et types de plasmides Classification des plasmides 1. Taille et phénotype 2. Taille , conjugatife ou non , phénotype 3. INC 4. Type pilaire Physiologie des plasmides 1. Replication a. Theta b. En cercles roulants 2. Fonctions de l region OriV Méthodes d’etude des plasmides 1. Méthodes génétiques A. Transferts génétiques B. Cure plasmidique 2. Méthodes physiques a. Extraction et purification b. Revelation - Electrophorese - Hybridation Conclusion

III. IV.

V.

VI.

VII. VIII.

on trouve des variants circulaires relâchés avec un brun coupé ou une forme linéaire avec deux bruns coupés. par leurs propriétés de transfert et de plasticité posent un grave probleme car ils sont le support de multirésistance aux antibiotiques et de dissémination dans le monde bacterien. Elements facultatifs : Région de transfert (Operon tra) déterminant des Plasmides conjugatifs ou région mob déterminant des plasmides mobilisables. la forme la plus répondu est un ADN double brun . FONCTIONS ET DIFFERENT TYPES DE PLASMIDES : . is) ou non (integrons) Divers génes : R aux ATB . Structure Les plasmides sont des molécules d’ADN extrachromosomique le plus souvent . La taille est variable et va de 1 a plus de 400 kb 2.I. circulaire fermé super-enroulé . métabolisme … III. Elements génétiques mobiles (tn . INTRODUCTION : les plasmides sont des fragments d’adn extrachromosomiques acultatifs pour la bacterie mais lui permettent une adaptation rapide en réponse des chngements environnementaux. Element obligatoire : representé par la zone de réplication b. II. En microbiologie médicale les plasmides . STRUCTURE ET ORGANISATION DES PLASMIDES : 1. ORGANISATION : elle est variable et flexible en fonction du plasmide considéré One répartit les éléments du plasmide en : a.

Plasmides de virulence : codent pour divers facteurs de virulence qui permettent la transformation de la bacterie en pathogne ex : pili . Plasmide métabolique : permettent l’utilisation de certains nutriments ex : citrate . 4. 3. toxines … VI. Taille . Parmi les fonctions apportés par les plasmides : 1. Résistance aux antibiotiques Chaines métaboliques particulières supplémentaires Facteurs de virulence Production de bactériocines… Ceci conduit a 5 types de plasmides : 1. Taille . Plasmides de résistance : codent globalement pour des facteurs de résistance dans l’environnement (antibiotiques. urée …) 2. nombre de copies et phénotype : on distingue : . AA soufrés . 3. Plasmides bacteriocinogenes : codant pour des antibiotiques tuant les autres bactéries. 5.Les plasmides sont des éléments facultatifs a la survie bactérienne. Les transferts génétiques : La conjugaison CF partie amira    2. CLASSIFICATION DES PLASMIDES : 1. 5. poisons …) 4. 2. Phénotype : peu de valeur car ne tient pas compte de la plasticité des plasmides. mais trouvent toute leur importance dans des situation ou une adaptation a des changement relativement rapides de l’environnement de la bactérie s’impose. Plasmides de fertilité : permettant les transferts génétiques.

a. L’operon Par code pour des proteines réalisant par polymerisation un filament portant a chaque bout un plasmide qu’il lie par sa région OriV. La réplication en cercle roulant : dans ce cas la réplication a lieu après cassure d’un brun au niveau de la région OriV . ce meme mécanisme est retrouvé lors du transfert par conjugaison sauf que la cassure a lieu au niveau de la région OriT . a partir d’une amorce d’ARN synthétisée au niveau de la region OriV . il existe 2 types de replication plasmidique : A. en particulier les plasmides rigoureux seront distribués dans chaque cellule fille. La replication type theta : dans ce cas . V. le brun transféré dans la cellule réceptrice et celui restant dans la cellule donatrice vont etre répliqués A la fin de la réplication on assiste a la formation de polyméres de plasmides au niveau du site de termnaison (concatemeres) qui subissent une résolution via une recombinaison specifique . Les petits plasmides en grand nombre non conjugatifs pouvant etre mobilisables dont la réplication est relachée b. Types pilaires : dans ce cas le pili sexuel peut servir de recepteur aux phages il en découle que des plasmides de meme type pilaires sont sensibles au meme phages. Physiologie des plasmides : 1. . Plus la polymerisation avance plus les 2 plasmides s’eloignent . La replication : elle utilise les enzymes de la bacterie hote . LES GROUPES d’incompatibilité (Inc) 4. ou deux dans la bidirectionnelle vont ce déplacer le long de la molécule d’ADN pour ce rencontrer respectivement au niveau de la region OriV ou au niveau du site de terminaison B. 3. lorsque la cellule ce divise ce filament ce romp liberant le plasmide. une fourche de replication dans l‘unidirectionnelle . Grace au systéme de partage (operon Par) chaque plasmide . Mais cette classification est moins sensible que les Inc. l’extrémité 3’ servira d’amorce a la réplication quand a l’autre brun il servira de matrice a la synthèse d’ADN. Les gros plasmides conjugatifs en nombre de copies limité dont la replication est rigoureusement contrôlée.

1. dont une région code pour un ARN II qui lie l’amorce ARN nécessaire a la replication . C. quand le nombre de copies est elevé l’ARNII en exés lie l’ARNI et la réplication n’a pas lieu entraiant la limitation du nombre de réplicons..METHODES D’ETUDE DES PLASMIDES : Les méthodes peuvent etre réparties en méthodes génétiques et des méthodes physiques. Régulation du nombre de copies du plasmide dans la cellule : le nombre de copies determines deux groupes : Les plasmides relachés ou en grand nombre de copies Les plasmides rigoureux ou en petit nombre de copies. Détérmination du spectre d’hote : en fonction du nombre d’éléments requis pour la réplication et codés par le plasmide . de maniére stable dans une cellule . et il y aura perte d’un des 2 plasmides . plus celui-ci est dépendant plus son spectre d’hote sera etroit et vice versa. Vi. En effet il est impossible pour certains plasmides de coexister .La résolution des polymeres et le systéme de partage empechent la perte des plasmides lors de la division (cure) 2. Parmi les systémes de régulation du nombre de copies . Méthodes génétiques : 2 principaux méthodes sont . dans ce cas la les plasmides ont dis « incompatible » et font partie d’un meme groupe « d’incompatibilité ». D. FONCTIONS DE LA REGION OriV : cette région joue un role clé dans plusieurs ont processus fonctionnels du plasmide a. b. celui-ci dépondra plus au moins des fonctions de sa bactérie hote . Détermination des groupes d’incompatibilité via la régulation des mécanismes de régulation de répartition des plasmides. Répartition des plasmides (en particulier des plasmides rigoureux) sur les bactérie filles via le systéme PAR. on trouve la régulation par l’ARN dans le plasmide ColE1 qui .

la perte du plasmide résulte en la perte de certaines fonctions . Les transferts plasmidiques : consiste en l’acquisition d’un ou plusieurs caractéres phénotypiques suite a une conjugaison entre de bactéries porteuses d’un marqueur de selection chromosomique (ex : résistance a un ATB « Ecoli K12NAL par ex ) ex : hémolyse . EXTRACTION ET PURIFICATION DES PLASMIDES : Les bactéries subissent un traitement détergeant doux. La cure plasmidique : consiste en la perte d’un plasmide par par croissance dans des conditions inhibant specifiquement sa replication. NB : on peut proceder en couplant les 2 méthodes (conjugaison puis cure ) NB : l’association des 2 méthodes donne 2. METHODES PHYSIQUES : A. Ex : un plasmide codant pour une beta-lactamase . B. résistance a un ATB autre que les marqueurs de selection b. vie métabolique . suivi d’une centrifugation pour sédimenter le chromosome lourd. Le surnageant subira ensuite un traitement de purification physique et chimique (lyse alcaline couplée a une ultracentrifugation sur gradient Chlorure de césium ou plus moderne par chromatographie. si perdu . CONCLUSION : les plasmids sont des fragments d’and extrachromosomiques ayant des proprieties génétiques unique dont la conaissance est primordiale afin de les utiliser ou de lutter contre . dans ce cas le marqueur de selection peut etre le plasmide lui-même. toxine . REVELATION : -par électrophorèse conventionnelle sur gel d’agarose sans ou après réstriction (typage plasmidique par RFLP) -Hybridation ADN-ADN (Southern blot) VII. il y aura restoration de la sensibilité de la bacterie a certaines betalactamines.a.