REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DEL ZULIA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGA Y VIROLOGA

Lic. Liliana Gmez Gamboa (Mg.Sc.)

MARACAIBO, MAYO DE 2012.

GENOTIPO Y FENOTIPO

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL MATERIAL GENTICO

ADN Y CROMOSOMAS FLUJO DE LA INFORMACIN GENTICA

ARN Y SNTESIS DE PROTENAS

Transcripcin Traduccin
REPLICACIN DEL ADN

Represin e induccin Mutacin

REGULACIN DE LA EXPRESIN GENTICA BACTERIANA

Transformacin Conjugacin Transduccin Plsmidos y transposones

GENES Y EVOLUCIN

TRANSFERENCIA Y RECOMBINACIN GENTICA

BIOTECNOLOGA Y ADN RECOMBINANTE

Gentica
Ciencia de la herencia que estudia los genes , transporte de la informacin gentica, replicacin y transmisin a generaciones ulteriores y expresin de la informacin dentro de un organismo.

La informacin gentica contenida en una clula se denomina GENOMA.

El genoma de una clula incluye sus cromosomas y plsmidos

Los CROMOSOMAS son estructuras que contienen ADN y que fsicamente portan informacin hereditaria. Contienen los genes.

Los GENES son segmentos de ADN (excepto algunos virus) que codifican productos funcionales.

GENOTIPO Y FENOTIPO

El GENOTIPO de un organismo es su constitucin gentica (su coleccin de genes, su ADN completo), la informacin que codifica la totalidad de las caractersticas particulares del organismo.

El FENOTIPO se refiere a las propiedades reales y expresadas, como la capacidad del organismo de llevar a cabo una reaccin qumica particular. Es la manifestacin del genotipo. Es la coleccin de protenas de un organismo.

ADN Y CROMOSOMAS
Las bacterias tienen un cromosoma circular nico formado por una sola molcula circular de ADN asociada con protenas. El genoma bacteriano es el conjunto total de genes que porta una bacteria tanto en su cromosoma como en sus elementos genticos extracromosmicos.

E. coli el cromosoma consta de una sola molcula circular bicatenaria de ADN que contiene aprox. 4,6 millones de pares de bases y casi 1 mm de longitud, o sea que es 1000 veces ms largo que la clula completa. Sin embargo, el cromosoma slo constituye alrededor del 10% del volumen de la clula porque el ADN est retorcido o superenrollado.

FLUJO DE LA INFORMACIN GENTICA

La replicacin del ADN posibilita el flujo de la informacin gentica de una generacin a la siguiente.

REPLICACIN DEL ADN

En la replicacin del ADN una molcula de ADN parental de doble cadena se convierte en dos molculas hijas (primera copia) idnticas.

La clave para entender la replicacin del ADN es la estructura complementaria de las secuencias de bases nitrogenadas en la molcula de ADN una cadena acta como molde para la formacin de la otra cadena.

La doble hlice del ADN parental se separa cuando se rompen los enlaces de hidrgeno dbiles que unen los nucletidos en las cadenas opuestas en respuesta a la accin de las enzimas de replicacin.

REPLICACIN DEL ADN

A continuacin se forman enlaces de hidrgeno entre nucletidos complementarios nuevos y cada cadena del molde parental, para formar nuevos pares de bases. Ciertas enzimas catalizan la formacin de los enlaces azcar-fosfato entre los sucesivos nucletidos en cada una de las cadenas hijas (primera copia).

REPLICACIN DEL ADN

Las dos cadenas de ADN son antiparalelas. El esqueleto azcar-fosfato de una cadena est invertido en relacin con el esqueleto de la otra.

ENZIMAS IMPORTANTES EN LA REPLICACIN, EXPRESIN Y REPARACIN DEL ADN

ADN girasa ADN ligasa ADN polimerasa Endonucleasas Exonucleasas

Relaja el superenrollamiento por delante de la horquilla de replicacin Forma enlaces covalentes para unir las cadenas de ADN Sintetiza ADN; corrige y repara el ADN Corta el esqueleto de ADN en una cadena de ADN; facilita la reparacin y las inserciones Corta el ADN desde un extremo expuesto del ADN; facilita la reparacin Desenrolla las dos cadenas de ADN Agrega grupos metilo a bases seleccionadas en el ADN recin sintetizado Utiliza la energa de la luz visible para separar los dmeros de pirimidina inducidos por la luz UV

Helicasa
Metilasa Fotoliasas

Primasa
Ribozima ARN polimerasa

Forma cebadores de ARN a partir de un molde de ADN

Enzima con ARN que elimina intrones y empalma exones Copia ARN a partir de un molde de ADN Relaja el superenrollamiento por delante de la horquilla de replicacin; separa los crculos de ADN al final de la replicacin del ADN Corta el esqueleto de ADN y deja extremos cohesivos formados por una sola cadena

Topoisomerasa
Transposasa

Las protenas estabilizan el ADN parental desenrollado

La cadena conductora es sintetizada de forma continua por la ADN polimerasa

Las enzimas desenrollan la doble hlice parental

La cadena retrasada se sintetiza de forma discontinua. La ARN polimerasa sintetiza un ARN cebador corto, que luego es ampliado por la ADN polimerasa

La ADN polimerasa digiere el ARN cebador y lo reemplaza por ADN

La ADN ligasa une los fragmentos discontinuos de la cadena retrasada

REPLICACIN DEL ADN

La sntesis de ADN de novo se produce en horquillas de crecimiento y avanza en ambas direcciones. La sntesis de ADN tiene lugar de manera continua en sentido 5' a 3' (cadena adelantada) o en fragmentos (cadena rezagada).

Durante la fase logartmica de crecimiento en un medio rico, pueden tener lugar numerosos inicios del proceso de replicacin cromosmica antes de que tenga lugar la divisin celular.
Este proceso genera una serie de nidos de burbujas en los cromosomas hijos, cada uno de los cuales contiene su propio par de horquillas de crecimiento para efectuar la sntesis de una nueva molcula de ADN.

Modelo bidireccional alrededor del cromosoma

REPLICACIN DEL ADN

ARN Y SNTESIS DE PROTENAS

La ARN polimerasa se une al promotor y el ADN se desenrolla al comienzo de un gen. El ARN se sintetiza por apareamiento de bases complementarias de los nucletidos libres con las bases nucleotdicas sobre la cadena molde de ADN. El sitio de sntesis se desplaza a lo largo del ADN; se desenrolla el ADN que se ha transcrito. La transcripcin alcanza el terminador.

El ARN y la ARN polimerasa se liberan y se vuelve a formar la hlice de ADN.

Se renen los componentes necesarios para comenzar la traduccin.

En el ribosoma un ARNt que transporta el primer aminocido se aparea con el codn de iniciacin en el ARNm. Un ARNt que transporta el segundo aminocido se aproxima.

El lugar del ribosoma donde se asienta el primer ARNt se denomina sitio P. En el sitio A que le sigue el segundo codn del ARNm se aparea con un ARNt que transporta el segundo aminocido.

El primer aminocido se une al segundo por medio de un enlace peptdico y se libera el primer ARNt.

El ribosoma se desplaza a lo largo del ARNm hasta que el segundo ARNt se encuentra en el sitio P y el proceso contina.

El ribosoma contina su desplazamiento a lo largo del ARNm y se acoplan nuevos aminocidos al polipptido.

Cuando el ribosoma alcanza un codn de terminacin se libera el polipptido.

Por ltimo, se libera el ltimo ARNt y el ribosoma se separa. El polipptido liberado forma una nueva protena.

REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA BACTERIANA

La maquinaria gentica de una clula y su maquinaria metablica estn integradas y son interdependientes.

La caracterstica comn de todas las reacciones metablicas es que son catalizadas por enzimas y la inhibicin por retroalimentacin detiene a las enzimas que ya son sintetizadas.

MECANISMOS PARA EVITAR LA SNTESIS DE ENZIMAS QUE NO SON NECESARIAS.

Los genes, a travs de la transcripcin y la traduccin, dirigen la sntesis de protenas, muchas de las cuales funcionan como enzimas (utilizadas para le metabolismo celular)

La sntesis de protenas requiere un enorme gasto de energa, por lo que su regulacin es importante para la economa de la energa celular. La clula conserva energa mediante la sntesis exclusiva de las protenas necesarias en un momento particular.

REPRESIN E INDUCCIN

Regulan la transcripcin y por consiguiente la sntesis de enzimas. Controlan la formacin y la cantidad de enzimas en la clula, no las actividades de las enzimas.

Proceso que activa la transcripcin de un gen o de varios genes. INDUCTOR sustancia que induce la transcripcin de un gen. ENZIMAS INDUCIBLES enzimas que se sintetizan en presencia de inductores. En estado basal, un gen inducible est inactivado.

Mecanismo que inhibe la expresin gnica y disminuye la sntesis de enzimas. Suele ser una respuesta al exceso de un producto final de una va metablica y provoca la disminucin de la velocidad de sntesis de enzimas que conducen a la formacin de ese producto. Mediada por REPRESORES bloquean la capacidad de la ARN polimerasa de iniciar la transcripcin de los genes reprimidos. En estado basal un gen reprimible est activado.

LOS DETALLES DEL CONTROL DE LA EXPRESIN GNICA POR INDUCCIN Y REPRESIN

se describen mediante el

formulado en 1961 por ESTUDIOS DE LA INDUCCIN DE REGULACIN DE LA LAS ENZIMAS DEL CATABOLISMO SNTESIS DE DE LA LACTOSA EN PROTENAS ESCHERICHIA COLI tales enzimas son

FRANOIS JACOB Y JACQUES MONOD

-galactosidasa

lac permeasa
Participa en el transporte de la lactosa a la clula

acetilasa

Los genes para las tres enzimas que participan en la captacin y la utilizacin de la lactosa estn prximos entre s en el cromosoma bacteriano y se regulan juntos.

Metaboliza ciertos disacridos distintos de la lactosa

Estructura del opern. El opern consta de los sitios promotor (P) y operador (O) y de los genes estructurales que codifican la protena. El opern est regulado por el producto del gen regulador (I).

Represor activo, opern inactivo. La protena represora se une con el operador e impide la transcripcin del opern.

Represor inactivo, opern activo. Cuando el inductor alolactosa se une a la protena represora el represor inactivado ya no puede bloquear la transcripcin. Los genes estructurales se transcriben y por ltimo dan como resultado la produccin de las enzimas necesarias para el catabolismo de la lactosa.

CONTROL DE LA TRANSCRIPCIN

Regulacin de la expresin gentica

En respuesta a un estmulo nutricional, la organizacin de los genes de una ruta bioqumica en un opern dotado de unos mecanismos de control gentico adecuados permite la produccin coordinada de las enzimas necesarias. La transcripcin del gen es regulada directamente por unas protenas represoras (que se unen a los operadores) como respuesta a seales nutricionales en el interior de la clula.

La velocidad de sntesis de las protenas por el ribosoma puede regular el proceso de transcripcin en los procariotas.

CONTROL DE LA TRANSCRIPCIN

Regulacin de la transcripcin

El inicio de la transcripcin puede estar sometido a unos mecanismos de control positivo o negativo.

Los genes sometidos a un control negativo se expresan a menos que una protena represora los desconecte.

Esta protena impide la expresin del gen al unirse a una secuencia especfica del ADN (operador) lo que impide que la polimerasa de ARN inicie la transcripcin en el promotor.

CONTROL DE LA TRANSCRIPCIN

Regulacin de la transcripcin

Los genes cuya expresin se encuentra sometida a un control positivo tan slo se transcriben en presencia de una protena reguladora activa (apoinductor) que se une a una secuencia especfica de ADN y colabora con la polimerasa de ARN en los pasos iniciales mediante un mecanismo desconocido.

OPERN INDUCTOR

La introduccin de un sustrato en el medio de crecimiento induce un aumento de la expresin por parte del opern de las enzimas necesarias para el metabolismo de dicho compuesto.

OPERN REPRESIBLE

La acumulacin de los productos finales (corepresores) de una ruta puede sealar la necesidad de desconectarla o reprimirla mediante una disminucin de la sntesis de sus enzimas.

La velocidad y eficiencia de la sntesis de protenas pueden estar controladas por otros factores, como la estructura del ARNm o las concentraciones celulares del ARNt y de ciertos aminocidos.

MUTACIN: CAMBIO EN EL MATERIAL GENTICO

TIPOS DE MUTACIONES MUTGENOS FRECUENCIA DE LAS MUTACIONES IDENTIFICACIN DE MUTANTES IDENTIFICACIN DE CARCINGENOS QUMICOS

CUALQUIER MODIFICACIN O CAMBIO EN LA SECUENCIA DE BASES DEL ADN UN CAMBIO EN LA SECUENCIA DE BASES DE UN GEN EN OCASIONES PRODUCIR UN CAMBIO EN EL PRODUCTO CODIFICADO POR ESE GEN.

TRANSICIN Cambio de una purina o pirimidina por otra purina o pirimidina. TRANSVERSIN cambio de purina por pirimidina o viceversa.

Una nica base en un punto de la secuencia del ADN es sustituida por otra base diferente

Cuando la sustitucin de bases produce una sustitucin de aminocidos en la protena sintetizada

MUTACIN PUNTUAL (SUSTITUCIN DE BASES)

Mutacin de cambio de sentido

Mutacin terminadora

MUTACIONES DE CAMBIO DEL MARCO DE LECTURA

Cuando la sustitucin de bases produce un codn de terminacin

Las sustituciones de bases y las mutaciones de cambio del marco de lectura pueden aparecer de forma espontnea debido a errores ocasionales durante la replicacin del ADN. Suceden en ausencia de agentes productores de mutaciones.

MUTACIONES ESPONTNEAS

SUSTITUCIN DE BASES

TIPOS DE MUTACIONES Y SUS EFECTOS SOBRE LAS SECUENCIAS DE AMINOCIDOS DE LAS PROTENAS

Molcula de ADN normal

Mutacin de cambio de sentido

Es cuando la sustitucin de bases produce una sustitucin de aminocidos en la protena sintetizada.

TIPOS DE MUTACIONES Y SUS EFECTOS SOBRE LAS SECUENCIAS DE AMINOCIDOS DE LAS PROTENAS
Cuando una sustitucin de bases produce un codn de terminacin.
Mutacin de terminacin

Mutacin de cambio del marco de lectura

Cuando un par de nucletidos o algunos pares de nucletidos pesentan delecin o se insertan en el ADN.

Agentes ambientales que de forma directa o indirecta causan mutaciones

cido nitroso Anlogos de los nuclesidos

RADIACIN
Rayos X Rayos gamma Luz UV

QUMICOS

cido Nitroso (HNO2) como mutgeno

Anlogos de nuclesidos y bases nitrogenadas que reemplazan

La 2-aminopurina se incorpora al ADN en lugar de la adenina pero puede aparearse con la citosina de modo que un par AT se convierte en un par CG.

El 5-bromouracilo se usa como droga anticancerosa porque las enzimas celulares lo reconocen en forma errnea como timina pero se aparea con citosina. En la siguiente replicacin del ADN, un par AT se convierte en un par GC.

Creacin y reparacin de un dmero de timina causado por la luz ultravioleta

La exposicin a la luz UV determina que las timinas adyacentes se entrecrucen y formen un dmero de timina (enlace covalente lesivo entre ciertas pares de bases) que altera su apareamiento normal de bases y pueden causar daos graves o la muerte de la clula debido a que sta no puede transcribir o replicar de manera adecuada el ADN.

Una endonucleasa corta el ADN y una exonucleasa elimina el ADN daado.

La ADN polimerasa llena la brecha mediante la sntesis de ADN nuevo, para la que utiliza la cadena intacta como molde.
La ADN ligasa sella la brecha remanente mediante la unin de las cadenas nueva y vieja de ADN.

La tasa suele establecerse como una potencia de 10

Es la probabilidad de que un gen mute cuando una clula se divide

Tasa de mutacin

Y debido a que las mutaciones son muy raras, el exponente siempre es un nmero negativo.

Las mutaciones suelen producirse ms o menos al azar a lo largo del cromosoma.

La aparicin de mutaciones aleatorias con baja frecuencia es un aspecto esencial de la adaptacin de las especies a su ambiente.
La evolucin requiere que la diversidad gentica se genere al azar y con una tasa reducida.

 Casi todas las mutaciones son perjudiciales y es probable que sean eliminadas de la dotacin gentica cuando la clula individual muere o que sean neutras. Sin embargo, algunas mutaciones son beneficiosas.

Por ejemplo, una mutacin que confiere resistencia a los antibiticos es beneficiosa para una poblacin de bacterias que est expuesta de manera regular a los antibiticos.
Una vez que un rasgo de este tipo ha aparecido a travs de la mutacin las clulas que portan el gen mutado tienen ms probabilidades de sobrevivir y reproducirse que otras clulas siempre que el ambiente permanezca igual. Muy pronto la mayora de las clulas de la poblacin tendr el gen; habr sucedido un cambio evolutivo en pequea escala.

Los mutantes pueden detectarse mediante la seleccin o la comprobacin de un fenotipo alterado.

Lo habitual es realizar experimentos con BACTERIAS.

1. Reproduccin rpida pueden utilizarse grandes cantidades de microorganismos. 2. Las bacterias suelen tener una sola copia de cada gen por clula los efectos de un gen mutado no son enmascarados por la presencia de una versin normal del gen.

SELECCIN POSITIVA (DIRECTA)

Deteccin de clulas mutantes por eliminacin de clulas parentales no mutadas. Ejm: Seleccin
de bacterias mutantes resistentes a penicilina.

SELECCIN NEGATIVA (INDIRECTA)

Identificacin de mutaciones en otros tipos de genes (rplicas en placas)

Asa
El terciopelo estril se presiona sobre las colonias que crecen en la placa madre

RPLICAS EN PLACAS

Superficie de terciopelo (esterilizado)

Placa madre con medio que contiene histidina

La clulas correspondientes a cada colonia se transfieren del terciopelo a las placas nuevas

Las placas se incuban

Placa de Petri con medio que contiene histidina

Placa de Petri con medio carente de histidina

Mutante auxtrofa

Se compara el crecimiento en las placas. Una colonia que crece en el medio con histidina pero que no pudo desarrollarse en el medio sin histidina es un auxtrofo (mutante que requiere histidina)
Colonia faltante

Muchos mutgenos conocidos son carcingenos, sustancias que causan cncer en los animales, incluidos los seres humanos.
SELECCIN PRELIMINAR DE CARCINGENOS POTENCIALES

Cuanto ms mutagnica sea una sustancia mayor ser su poder carcinognico.

1. Varios mutgenos potenciales pueden ser probados cualitativamente mediante el agregado de las sustancias qumicas individuales sobre pequeos discos del papel en una nica placa inoculada con las bacterias. 2. Pueden utilizarse mezclas como vino, sangre, humo condensado y extractos de alimentos para comprobar si contienen mutgenos.

Se compara la cantidad de colonias en las placas experimental y de control. La placa de control puede mostrar algunas bacterias con mutaciones inversas que sintetizan histidina de forma espontnea. Las placas de prueba mostrarn un aumento del nmero de bacterias con mutaciones inversas que sintetizan histidina si la sustancia qumica probada en realidad es un mutgeno y un carcingeno potencial. Cuanto mayor sea la concentracin de mutgeno utilizada mayor ser la cantidad de colonias que sufran mutacin inversa. Se preparan dos cultivos de Salmonella que han perdido su capacidad de sintetizar histidina (dependientes de histidina) Se agrega el mutgeno potencial slo a la muestra experimental; el extracto de hgado de rata (un activador) se agrega a ambas muestras Cada muestra se vierte sobre una placa de medio sin histidina. Se incuban a 37C durante 48 h. Slo las bacterias cuyo fenotipo dependiente de histidina ha sufrido una mutacin inversa (inversin) a sintetizador de histidina formarn colonias.

Transferencia gnica VERTICAL

RECOMBINACIN GENTICA
Intercambio de genes entre dos molculas de ADN para formar nuevas combinaciones de genes en un cromosoma

Transferencia gnica HORIZONTAL

Paso de genes entre bacterias de manera lateral, es decir, a otros microorganismos de la misma generacin.

ENTRECRUZAMIENTO TRANSFERENCIA GNICA (Vertical y horizontal)

Transformacin Conjugacin Transduccin

ENTRECRUZAMIENTO
El ADN de una clula se alinea con el ADN en la clula receptora. El ADN donante tiene una muesca. El ADN donante se alinea con los pares de base complementarios en el cromosoma receptor. Esto puede involucrar miles de pares de bases.
ADN donante Cromosoma receptor

La protena RecA cataliza la unin de las dos cadenas.

Protena RecA

El resultado es que el cromosoma receptor contiene ADN nuevo. Los pares de bases complementarios entre las dos cadenas ser resuelto por la ADN polimerasa y la ligasa. El ADN donante ser destrudo. El receptor puede ahora tener uno o ms genes nuevos.

Experimento de Griffith (1928)

Se le inyectaron al ratn bacterias vivas encapsuladas Se le inyectaron al ratn bacterias vivas no encapsuladas

Proceso mediante el cual los genes se transfieren de una bacteria a otra como ADN desnudo en solucin.
Se le inyectaron al ratn bacterias encapsuladas muertas por calor Se le inyectan al ratn bacterias vivas no encapsuladas y bacterias encapsuladas muertas por calor

El ratn muri

El ratn permaneci sano

El ratn permaneci sano

El ratn muri

Del ratn muerto se aislaron colonias de bacterias encapsuladas.

Se aislaron algunas colonias de bacterias no encapsuladas del ratn; los fagocitos destruyeron las bacterias no encapsuladas

No se aislaron colonias del ratn

Del ratn muerto se aislaron colonias de bacterias encapsuladas.

La transformacin sucede naturalmente entre muy pocos gneros de bacterias, como Bacillus, Haemophilus, Neisseria, Acinetobacter y ciertas cepas de los gneros Streptococcus y Staphylococcus.
Cuando una clula receptora se haya en un estado fisiolgico en el cual puede captar el ADN donante, se dice que es competente. La competencia es resultado de alteraciones de la pared celular que la tornan permeable a las molculas de ADN grandes.

La clula receptora capta el ADN de la clula donante

El ADN donante se alinea con bases complementarias

Se produce la recombinacin entre el ADN de la clula donante y el ADN de la clula receptora

Mecanismo por el cual se transfiere material gentico de una bacteria a otra. La conjugacin es mediada por una clase de plsmido (fragmento circular de ADN que se replica independientemente del cromosoma de la clula).

El ADN bacteriano se transfiere de una clula donante a una clula receptora dentro de un virus que infecta a las bacterias (bacterifagos o fago)

Fragmentos circulares autorreplicantes de ADN que contienen genes y que constituyen entre el 1% y el 5% del tamao del cromosoma bacteriano. Presentes en bacterias y algunos microorganismos eucariotas.

Son segmentos pequeos de ADN que pueden trasladarse (ser transpuestos) de una regin de una molcula de ADN a otra (700 a 40.000 pares de base de longitud).

Una secuencia de insercin (IS), el transposn ms simple, contiene un gen para la transposasa, la enzima que cataliza la transposicin. El gen de la transposasa se une a cada extremo por secuencias repetidas invertidas que funcionan como sitios de reconocimiento para el transposn. IS1 es un ejemplo de una secuencia de insercin, mostrado aqu como secuencia IR simplificada.

El transposon complejo transporta otro material gentico en adicin a los genes transposasa. El Tn5 transporta el gen para resistencia a Kanamicina y tiene copias completas de la insercin de la secuencia IS1 en cada extremo.

La transposasa corta el ADN y deja extremos cohesivos.

Los extremos cohesivos del transposn y el ADN diana forman una estructura anular.

La diversidad proporciona la materia prima para la evolucin y la seleccin natural la fuerza directriz La actividad gnica puede ser controlada por mecanismos reguladores internos de la clula Los genes mismos pueden ser alterados o reordenados por mutacin, transposicin y recombinacin

La seleccin natural puede actuar sobre diversas poblaciones para asegurar la supervivencia de las que se adapten a ese ambiente particular

Todos estos procesos proveen diversidad en la descendencia de las clulas

Las diferentes clases de microorganismos que existen en la actualidad son resultado de una larga historia de evolucin.
Los microorganismos han sufrido cambios continuos por alteraciones en sus propiedades gnicas y la adquisicin de adaptaciones a hbitats muy diferentes.

BIOTECNOLOGA
Empleo de microorganismos, clulas o componentes celulares para elaborar un producto.
En la actualidad se utilizan microorganismos y tambin plantas completas como si fueran fbricas para producir sustancias qumicas que los microorganismos no sintetizan naturalmente.

Esto ltimo es posibilitado por la insercin de genes en las clulas mediante la tecnologa del ADN recombinante (ADNr), que a veces se denomina ingeniera gentica.

El objetivo puede ser formar copias del gen

El objetivo puede ser formar un producto proteico del gen

Vectores Enzimas de restriccin

Reaccin en cadena de la polimerasa

Clase especial de enzimas que cortan el ADN presentes en muchas bacterias.

Lo importante en las tcnicas de ADN r es que la enzima de restriccin reconozca y corte, o digiera, slo una secuencia particular de bases nucleotdicas en el ADN y que corte esa secuencia del mismo modo cada vez.

Las enzimas de restriccin tpicas utilizadas en los experimentos de clonacin reconocen secuencias de cuatro, seis u ocho bases. Muchas enzimas de restriccin producen cortes alternados en las dos cadenas de una molcula de ADN, es decir cortes en sitios que no son directamente opuestos entre s.

Molcula de ADN

Capacidad de autoreplicacin. Tamao: que permita su manipulacin fuera de la clula durante los procedimientos de ADN recombinante. Forma: que proteja de la destruccin. Presencia de un gen marcador. Ejemplos: plsmidos, ADN viral.

Es una tcnica que permite amplificar rpidamente muestras pequeas de cido nucleco, es decir, aumentar su cantidad de modo que sea suficiente para poder analizarlo.

 Insercin de ADN extrao en las clulas Obtencin del ADN Seleccin de un clon Formacin de un producto gnico Hibridacin de colonias

Tanto el ADN del plsmido como ADN extrao son cortados con la misma enzima de restriccin. El plsmido tiene genes para la hidrlisis de la lactosa (lacZ) y resistencia a ampicilina

El ADN extrao se inserta en el gen lacZ. La bacteria que recibe el vector plasmdico no producir la enzima galactosidasa si el ADN extrao ha sido insertado en el plsmido.
El plsmido recombinante se introduce en la bacteria, la cual se vuelve resistente a ampicilina. Todas las bacterias tratadas se siembran en placas de agar nutritivo que contiene ampicilina y un sustrato de -galactosidasa. Se incuban. El sustrato -galactosidasa se denomina X-gal.
Slo las bacterias con el plsmido crecern en presencia de ampicilina. Las bacterias que hidrolizan el X-gal producen galactosa y un compuesto ndigo, el cual tie las colonias bacterianas de color azul. Las colonias blancas que aparecen deben contener el ADN extrao. Las colonias azules no contienen el ADN extrao.

LOS GENES CLONADOS PUEDEN APLICARSE DE DIVERSOS MODOS

Producir sustancias tiles de una manera ms eficiente y menos costosa

Obtener informacin del ADN clonado que sea til en el marco de la investigacin bsica, la medicina aplicada o la medicina forense

Utilizar genes clonados para alterar las caractersticas de clulas u rganos

Aplicaciones teraputicas

Produccin de hormonas como la INSULINA y la SOMATOSTATINA. Produccin de Vacunas de subunidades (hepatitis B) y vacunas de ADN (HIV, SARS, influenza y paludismo) Preparacin de sangre artificial (transfusiones) Terapia gnica para curacin de enfermedades genticas (hemofilia B e inmunodeficiencia combinada grave) Interferencia por ARN (RNAi) silenciamiento gnico (silencia la expresin de un gen) se introducen en una clula ARN bicatenarios (siRNA) que se dirigen contra un gen particular (gen viral) inhibicin del VHB.