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Dosage Spectrophotométrique de l'ADN

Ce compte rendu présente une expérience de dosage spectrophotométrique de l'ADN avant une PCR, soulignant l'importance de la qualité de l'ADN pour des résultats fiables. Les résultats montrent des variations de pureté et de concentration entre les échantillons, indiquant la nécessité de purification pour certains d'entre eux. Le rapport A260/A280 est utilisé pour évaluer la pureté, et des recommandations sont faites pour assurer une meilleure reproductibilité lors des analyses moléculaires.

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Dosage Spectrophotométrique de l'ADN

Ce compte rendu présente une expérience de dosage spectrophotométrique de l'ADN avant une PCR, soulignant l'importance de la qualité de l'ADN pour des résultats fiables. Les résultats montrent des variations de pureté et de concentration entre les échantillons, indiquant la nécessité de purification pour certains d'entre eux. Le rapport A260/A280 est utilisé pour évaluer la pureté, et des recommandations sont faites pour assurer une meilleure reproductibilité lors des analyses moléculaires.

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UNIVERSITÉ: AHMED BEN BELLA -ORAN2-

SPÉCIALITÉ: BIOTECHNOLOGIE ET
MICROBIOLOGIE APPLIQUÉE

ANNEE UNIVERSITAIRE :
2025/2026
COMPTE RENDU DE TP PAR:
AZOUZ ROUAIDA GHOFRANE

ENCADRANT:
DR ATTAB K
OBJECTIF :
RÉALISATION DE DOSAGE DE
MATÉRIEL GÉNÉTIQUE MODULE:
PRINCIPES ET TECHNIQUES DE BIOLOGIE
MOLÉCULAIRE
La réaction de polymérisation en chaîne (PCR) nécessite un ADN de haute qualité pour
assurer une amplification spécifique et efficace. Avant toute PCR, le dosage
spectrophotométrique à 260/280 nm permet d’évaluer la concentration et la pureté des
échantillons. Cette étape garantit la fiabilité des résultats moléculaires obtenus lors des
analyses génétiques ultérieures.

PRINCIPE :
L’ADN absorbe la lumière ultraviolette à 260 nm, tandis que les protéines absorbent à 280
nm.
Le rapport A260/A280 évalue la pureté de l’échantillon, et l’absorbance à 260 nm permet
d’en déduire la concentration.

MATÉRIEL ET MÉTHODES :
Des échantillons d’ADN purifiés ont été utilisés pour évaluer leur qualité avant la PCR. Le dosage a été
réalisé à l’aide d’un spectrophotomètre UV, en mesurant les absorbances à 260 nm et 280 nm.
Une dilution préalable a été préparée en mélangeant 10 µL d’ADN avec 1990 µL d’eau distillée stérile,
correspondant à un facteur de dilution (F = 200).
Après étalonnage de l’appareil avec de l’eau distillée (blanc), les lectures d’absorbance ont permis de calculer
la concentration selon la formule :

[ADN] = A_{260} \TIMES 50\,ΜG/ML \TIMES F

RÉSULTATS:

ÉCHANTILLON A260. A280 R [ADN] (ng/μL)

ADN1 0.082 0.076 1.08 1950


ADN2 0.125 0.105 1.19 1250
ADN3 0.075 0.067 1.12 750
INTERPRÉTATION :
ADN 1: Rapport faible : contamination protéique ou phénolique importante.
ADN2: Pureté moyenne : présence probable de protéines ou solvants organiques.
ADN3: ADN dégradé ou impur ; nécessite une purification avant PCR.

CONCLUSIONS:

1. Le dosage spectrophotométrique des échantillons d’ADN a permis de déterminer leur


concentration et leur pureté avec précision.

2. Les valeurs du rapport A260/A280 inférieures à 1,8 indiquent la présence d’impuretés


protéiques ou organiques pouvant interférer avec les réactions enzymatiques telles que la
PCR.

3. Malgré des concentrations suffisantes pour l’analyse moléculaire, une étape de


purification est indispensable afin d’obtenir un ADN de haute qualité.

4. Les dilutions préparées à 50 ng/µL assureront une meilleure reproductibilité et une


efficacité optimale lors des étapes d’amplification PCR-FRLP.

5. Ce travail souligne l’importance du contrôle qualité des acides nucléiques avant toute
expérimentation moléculaire.

RÉFÉRENCES:

1. Sambrook, J. & Russell, D. W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd


ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.

2. Wilfinger, W. W., Mackey, K. & Krug, D. E. (1997). Effect of pH and ionic strength on
the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity. BioTechniques, 22(3), 474–481.

3. Desjardins, P. & Conklin, D. (2010). NanoDrop microvolume quantitation of nucleic


acids. Journal of Visualized Experiments, 45, e2565.

4. Green, M. R. & Sambrook, J. (2012). Molecular Cloning: Preparation and Analysis of


DNA. Cold Spring Harbor Protocols.

5. Wilson, K. (2005). Preparation of genomic DNA from bacteria. Current Protocols in


Molecular Biology, John Wiley & Sons, Chapter 2: Unit 2.4.
ANNEXES :

CUVETTES EN KWARTZ

MICROPIPETTE

SPECTROPHOTOMETRE

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