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BALANCE DE MATERIA EN BIOPROCESOS

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ALREDEDORES

ALREDEDORES SISTEMA

Sistema cerrado proceso discontinuo

Sistema abierto proceso continuo

Sistema se encuentra separado de los alrededores, los cuales son el resto del universo. El limite del sistema puede ser real como las paredes de un fermentador o imaginario.

SISTEMA ESTACIONARIO
Cuando todas las propieades del sistema como son temperatura, presion, concentracion, volumen, masa, etc no varian con el tiempo.

ECUACION GENERAL DE BALANCE DE MATERIA


Entrada - salida + generacin consumo = acumulacin

Sistema continuo en estado estacionario


Cuando Acumulacin = 0
Entrada + generacin = Salida + consumo

CUANTIFICACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO


Estudio cuantitativo de la cintica de fermentaciones. Mtodos experimentales sencillos para determinar el crecimiento de poblaciones microbianas Considerar el modo de reproduccin de las clulas

Las clulas procariticas bacterianas se reproducen por fisin binaria sin que sea posible diferenciar una clula madre de una clula hija. Edad mxima c/clula es el lapso comprendido entre dos replicaciones sucesivas Edad de cultivo es el tiempo transcurrido desde la inoculacin.

Las bacterianas se presentan en forma individual o en asociaciones dbiles de pocos individuos,pudiendo ser dispersadas homogneamente en el medio de cultivo Las eucariticas como levaduras se desarrollan en clulas individuales fcilmente dispersables que se reproducen por gemacin produciendo una clula hija y una clula madre.

Cultivo de levaduras es heterogneo en cuanto a la edad y por lo tanto el estado fisiolgico de las clulas que lo componen. Los hongos por crecimiento apical formando hifas Caractersticas reolgicas nonewtonianas.

Mtodos de cuantificacin del crecimiento microbiano

Mtodo

Fundamento

Observaciones

Conteo directo No Recuento en celda de clulas Requiere clulas individuales Nefelometra N.M.P. Peso Seco Turbimetra Vol. empacado Fsico Qumicos Conteo directo No RCI Influencias de las condiciones de incubacin de clulas Dispersin de luz Requiere cultivo homog. y traslcido Estadstico Transmisin de luz Centrifugacin Variados indirectos RCI y medio limpio RCI y medio limpio Poco preciso

, pH, anlisis de Comp. celulares, etc


Gran cantidad de datos analticos

Balance de masa Conservacin de masa

dX = .X dt

X
0

dX X

t = . dt 0

X = Xo. e.t

1 dX d(lnX) (lnX) = . = = X dt dt t

X = Xo. e.t

1 dX d(lnX) . = X dt dt

(lnX) t

Ln X

Se estudia el crecimiento celular de un microorganismo obteniendo los siguientes datos

t dias 0 0.2 0.5 1 1.5

X celulas/ml 4.50E+05 5.20E+05 3 6.50E+05 8.10E+05 1.22E+06 3.5 4 4.5 3.55E+06 4.02E+06 3.77E+06 2.20E+06 2 2.5 1.77E+06 2.13E+06

a) Calcular la velocidad especfica del crecimiento celular durante la fase de crecimiento b) El tiempo de duplicacin del cultivo

4.5E+06 4.0E+06 3.5E+06 3.0E+06 2.5E+06

16 15.5 15 14.5 14 13.5 13 12.5 12 0 1 2 3 4 5 Tiempo (dias)

2.0E+06 1.5E+06 1.0E+06 5.0E+05 0.0E+00

Ln X

15.5 15 14.5

Ln (X)

14 13.5 13 12.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 Tiempo (dias) 3 3.5 ln X = 13.01+0.67 t R2 = 0.99

Estequiometra del crecimiento

El crecimiento de las clulas obedece la ley de Conservacin de Energa y Materia Los tomos de (C), (O), (N) y otros elementos consumidos durante el crecimiento se incorporan a las nuevas clulas o se expulsan como productos

SUSTRATO

Fuente de N

Biomasa o clulas (I)

CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi c CHON +dCO2 + eH2O a, b, c, d y e Aprox. macroscpica C,H,O y N C 50 Na


W=6, X=12, Y=6 y Z=0

Coef. Estequiom. 95% 1 0.5 0.5 0.5 0.2 0.3

N O H P

20 14 8 3 1 1

Ca Mg Cl Fe Otros

Composicin de la bacteria Escherichia coli

Calculo de Coeficientes
CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi c CHON +dCO2 + eH2O Balance de C Balance de H Balance de O Balance de N COEFICIENTE RESPIRACION
:

(I)

w = c + d x + b g = c + 2e
:

(i) : ii) (iii) (iv)

y + 2a + bh = c + 2d + e z + bi = c

a b c d e

Moles CO producidos de 2 d RQ = = Moles O consumidos de 2 a

Debemos estar seguros que el sustrato no se utiliza para sintetizar otros productos extracelulares que no sean CO2 y H2O

Resolviendo el sistema de ecuaciones Lineales

Las bacterias tienden a tener contenidos de nitrogeno ligeramente mayores (11-14%). Los hongos tiene (6.3 9%) Cuando no se dispone de la composicin puede utilizarse como formula general : CH1.8O0. 5N1.2
C,H,O,N es por lo tanto 24.6, aunque existe normalmente un 5 - 10% de ceniza residual que no se incluye en la formula.

este es el peso molecular medio de la biomasa basado en los contenidos

14 12

C{e lula s [g/l]

10 8 6 4 2 0 0

y = -0.461x + 11.675 R 2 = 0.9999

10

20

30

Sustra to [g/l]

Rendimiento de biomasa

( Yx/s)

DURANTE el CRECIMIENTO existe una relacin lineal entre [Biomasa] producida y el [Sustrato] consumido
MWClulas Yx/s = c MW Sustrato

g clulas producidas Yx/s = g sustratoconsumido

Yx/s = k durante el crecimiento, su valor deter. experim. puede utilizarse para calcular el coef. estequiom. C Mw = peso molecular. Para utilizar esta ecuacin el sustrato no se debe utilizar para sintetizar otros productos que no sean CO2 y H2O.

Estequiometra del producto

(II)

CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi cCHON +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm


SUSTRATO

Fuente de N

Biomasa

Producto

Rendimiento de producto a partir del sustrato: Yp/s

Yp/s

g producto formado = g sustrato consumido

Y p/s

MW = f MW

roducto

Sustrato

Se debe asegurare de que el sistema experimental utilizado para medir Yp/s corresponde a la ecuacin (II) No puede aplicarse a la produccin metablica secundaria como la fermentacin de la penicilina Formacin de producto debe estar asociado directamente con el crecimiento celular

Balance de electrones y grado de reduccin

[H2O]= k

Balances de H y O pueden presentar dificultades Conservacin de potencia reductora o electrones disponibles

Si no se conoce la composicin de las celulas el B puede tomarse como 4.2

Electrones disponibles
Al nmero de electrones disponibles para transferir al O2 en la combustin del sustrato a CO2, H2O y compuestos que contengan nitrgeno

Se calcula a partir de la valencia de su elementos

C H O P

4 1 -2 5

6 -3 NH3 N2 NO3

0 5

CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi cCHON +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm


Se define como el nmero de equivalentes de electrones disponibles en aquella cantidad de materia que contenga 1 g tomo de carbono

Origen Biomasa Sustrato Producto

Frmula # de electrones disponibles CHON Cw Hx O y Nz CjHkOlNm

Grado de reduccin

4 + - 2 - 3 4w + x - 2y - 3z 4j + k - 2l 3m

4+ -2-3
(4w + x 2y-3z)/w (4j + k - 2l - 3m)/j

Composicin elemental y grado de reduccin para algunos microorganismos (en relacin al NH3)

BALANCE DE MASA Y ENERGIA


Demanda terica de oxigeno La demanda de oxgeno (a) est directamente relacionado con los electrones disponibles O2 es el sustrato limitante en las fermentaciones aerbicas

Cuando existe sntesis de producto, como el representado por la ecuacin (II) el balance de electrones es:

Demanda terica de oxigeno

w s 4 a = c B +f j p a = ( w s - c B - f j p)

(1) (2)

La Ec.(2) es muy til porque si se conoce el microorganismo (B), el sustrato (w y s) y el producto (j y p) involucrados en el cultivo celular, y el rendimiento de biomasa (c ) y de producto (f), la demanda de oxgeno (a) puede calcularse rpidamente. a puede determ. resolviendo los coef. Esteq.de la ecuacin (II). La ec. (2) permite una evaluacin ms rpida y no es necesario conocer las cantidades de NH3, CO2 y H2O involucrados.

Reparto de electrones disponibles en el sustrato Rendimiento mximo posible.

4a w. s (s)

B w. s (B)

f.j. p = 1 w. s (P)
Fraccion de e transferidos al Producto w s f max = j p

fraccin de e fraccin de e disponibles transf disponibles transf desde el Sust al O2 a la Biomasa w s c max = B

si todos los e disponibles se utilizaran para la sntesis de biomasa B = 1

el rendimiento mximo de producto en ausencia de sntesis de biomasa

Rendimientos termodinmicos mximos de biomasa

Requerimientos nutricionales del Medio de Cultivo


para la construccin de una nueva clula esta contenida en los cromosomas. La materia debe ser suministrada a travs de los componentes del medio de cultivo. La E se obtiene del catabolismo de la fuente de C de cultivo. Crecimiento microbiano una ecuacin qumica. C, H, O y N y Mg, S, P,Ca, Na y K Otros compuestos a niveles muy bajos y deben ser suministrados como compuestos aptos para ser metabolizados. La fuente de C: Carbohidrato-orgnico, CO2, CO3-2 HCO3-1 (caso de clulas quimioautotrficas o fotosintticas). La fuente de N : Amonio, nitrgeno amino de aminocidos y protenas, rea, nitrato o nitrgeno elemental

Medios complejos

Son formulados en base a desechos, subproductos y extractos naturales. la melaza, licor de maceracin de maz, extracto de levadura y otros Su composicin qumica es compleja y variable. Contiene varias fuentes de cada elemento. Pueden requerir ser suplementados con compuestos que proporcionen cantidades adicionales de algunos elementos, tales como, N, Mg y P Muy utilizados en microbiologa bsica (taxonoma, fisiologa y gentica), microb. analtica, produccin de algas, alimentos, suelos y en fermentaciones industriales

Componentes de medios complejos industriales

a nivel industrial Baratos

Mejores rendimientos

Medios definidos

Se formulan en base a compuestos puros, tales como la glucosa, sulfato de amonio, metionina, fosfatos, etc composicin qumica es conocida y reproducible. fuentes de cada elemento y los nutriente esenciales que pueden ser requeridos. investigacin y desarrollo de Proceso de fermentacin. permiten un mejor control de las condiciones ambientales de crecimiento y produccin. resultan ms productivas cuando se utilizan medios definidos.

Ejemplo de medios definidos

Ejercicios resueltos de Balance de Materia Problema 1

Continua.

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