Enzimas Digestivas

P.A. Espinoza-Tomayquispe1i, T.G. Anaya-Araujo2, F.A. Bello-Peralta1, E.A. Molinari-Novoa2, G.J. Ros Cairo1 Resumen
Se estudi el sistema digestivo del pollo (Gallus gallus) y se verific la presencia de amilasas e invertasas en su tracto digestivo. Adems de lograr ver la anatoma, se pudo verificar los resultados de ubicacin de las enzimas a travs de la literatura. Se hall que el pncreas posee amilasas e invertasas; el duodeno, invertasas; el proventrculo, una pequea cantidad de invertasa.

Introduccin Una enzima es una protena que se combine con uno o ms compuesto de forma que reaccionan especficamente a mucha mayor velocidad que lo hara sin el enzima. Los enzimas son como las dems protenas, tienen estructura primaria y se pliegan en una conformacin particular de manera que sus grupos reactivos estn dispuestos del modo apropiado para dar el conjunto actividad biolgica (McGilvery 1997) Las enzimas digestivas se pueden clasificar en cuatro grupos sobre las base de sus sustratos: amilasa (almidn), proteasas (protenas y pptidos), lipasas (triglicridos y fosfolipidos) y nucleasas (DNA, RNA) (Kelley 1992) Al igual que otras enzimas, las enzimas digestivas en general se encuentran presentes en diversas formas moleculares. Es frecuente que distintas especies sinteticen distintas formas moleculares de una misma enzima. Adems, si dos tejidos diferentes de una misma especie sintetizan la misma enzima digestiva, las formas moleculares presentes en cada uno de estos tejidos a menudo son diferentes entre s. Las enzimas digestivas de los animales actan en tres contextos espaciales distintos. Una enzima que acta en un contexto en un grupo de animales puede actuar en otro grupo de organismos. Por lo tanto, las tres categoras espaciales de accin enzimtica no se corresponden directamente con las categoras qumicas de las enzimas (Hill et al., 2006) Enzimas intraluminares: las enzimas digestivas pueden secretarse en la luz de cavidades corporales, como el estomago o el intestino medio, en las que las molculas enzimticas se dispersan con libertad entre los materiales alimentarios y catalizan reacciones digestivas. La accin enzimtica en este contexto espacial se denomina intraluminal (en el interior de la luz) Enzimas asociadas a la membrana: algunas enzimas digestivas consisten en protenas de membrana celular que son sintetizadas por las clulas epiteliales que tapizan el intestino y permanecen asociadas a estas clulas durante el proceso de digestin de molculas alimentarias en la luz intestinal. Estas enzimas asociadas a la membrana se localizan en las membranas apicales
1

: Estudiante de Biologa Biotecnologa. Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Agraria la Molina. Av. La Universidad s/n, La Molina, Lima, Per. 2 Estudiante de Biologa Ecologa. Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Agraria la Molina. Av. La Universidad s/n, La Molina, Lima, Per.

de las clulas y se ubican de manera que los sitios catalticos estn expuestos a la luz intestinal. Las molculas alimentarias deben acercarse al epitelio para poder ser digeridas por las enzimas asociadas a la membrana. Enzimas intracelulares: las enzimas digestivas tambin pueden localizarse y actuar en el interior de las clulas. Para poder ser digeridas por estas enzimas, las partculas alimentarias deben ingresar en las clulas. (Daz et al 102) Se pretendi que el alumno conozca, comprenda y pueda observar y valorar la accin de las enzimas en los procesos de digestin y as comprender cada uno de los conceptos relacionados con las enzimas como son la catalasa, amilasa, lipasas y proteasas en las prcticas a realizar en vsceras de animales (Gallus gallus) y le permita comprender el proceso para de esta manera poder aplicarlo en la adquisicin de conocimientos bsicos y en los procesos industriales y de investigacin. Materiales y Mtodos Vsceras de pollo (pncreas, proventrculo, duodeno, vesicular biliar) Set de diseccin Tubos de ensayo Vaso de precipitado Cocinilla elctrica Mortero Agua Destilada Suero Lugol Reactivo de Benedict Sacarosa cido ntrico Azufre Agua Tampn fosfato En la prctica de enzimas digestivas se utilizaron rganos de pollo (proventrculo, pncreas, vescula biliar y duodeno) con el fin de observar las propiedades de la vescula biliar y las enzimas que llevan a cabo la digestin y evaluar su actividad ante la sacarosa o el almidn fuera del organismo sometiendo los extractos de enzimas a condiciones como temperaturas altas para la desnaturalizacin o temperatura corporal normal, con ayuda de sistemas de amortiguacin como el caso del tampn fosfato. Para la extraccin de enzimas se necesit un pncreas y proventrculo ambos de pollo, dos morteros, agua destilada, un bistur y tijeras de diseccin rectas. Se disect los rganos con el

bistur, se cort con la tijeras en piezas pequeas y luego se tritur con el mortero, agregando agua destilada para obtener un extracto ms lquido. Para la evaluacin de los extractos se utilizaron 4 tubos de ensayo, una hornilla de resistencia, un vaso de precipitados, sacarosa, almidn y tampn fosfato. Luego de preparar los extractos enzimticos de pncreas y ventrculo, se depositan 20 gotas de cada uno en dos tubos de ensayo a los que se les agregan 40 gotas de agua destilada respectivamente. Estos tubos de ensayo se llevan al vaso de precipitados, el cual ha sido llenado con agua y llevado a la hornilla de resistencia. Ambas muestras se desnaturalizarn. Se preparan otras dos muestras en tubos de ensayo, cada una de 20 gotas de extracto enzimtico y 40 gotas de agua destilada, una vez que se tienen los 4 tubos, las muestras desnaturalizadas y las que se acaban preparar, se dividen estas a la vez cada una en 2 tubos de ensayo. Es decir, se tendrn 2 tubos de ensayo del extracto de pncreas desnaturalizado y dos tubos de ensayo de pncreas recin preparado, idntico el tratamiento del extracto de proventrculo. Cada uno de estos tubos tendr 10 gotas del contenido del tubo anterior y a cada tubo se le agregarn 20 gotas del amortiguador fosfato. Luego, cada una de las muestras similares, por ejemplo los dos tubos con muestras de extracto desnaturalizado de pncreas y amortiguador fosfato, se les agregar sacarosa y almidn por separado. Ya listas las 8 muestras, 4 de pncreas y 4 de proventrculo, sern llevadas a bao mara a 37oC por 40 minutos. Para la observacin de las propiedades de la vescula biliar se necesitaron 3 tubos de ensayo, cido ntrico, azufre y agua. En el primer par de tubos de ensayo de agreg agua y en uno de estos tambin se adicion bilis. En el tubo con agua y azufre, el azufre se mantuvo sobre el agua, sin poder atravesarla, en el segundo tubo en cambio la bilis, al ser un emulsificante, puede romper fcilmente la tensin superficial del agua y as el azufre puede llegar al fondo del tubo. En el ltimo tubo, se agrega primero cido ntrico, luego, cuidadosamente escurriendo la bilis por la pared del tubo de ensayo, se ver cmo se empiezan a separar los pigmentos de la bilis y observar distintas coloraciones de la muestra biliar. Resultados y discusiones

(c)

De izquierda a derecha tubo (a) azufre con bilis, se observ que el azufre flota en presencia de bilis diferencia del tubo (b) en el que se observ al azufre en presencia de agua; en este caso el azufre (d) sedimenta. En el tubo (c) se observ a la bilis en presencia de lpidos y en el tubo (d) bilis en presencia de acido ntrico, en donde se pudo apreciar la cromatografa de la bilis (en donde encontramos los 3 pigmentos de la bilis bilirrubina de color marrn, bilifucsina color fucsia y biliverdina en color verde) Respecto a la presencia de amilasa en el tracto digestivo, se obtuvo los siguientes resultados:

Efectivamente, el pncreas secreta amilasa y sacarasa (Brandan et al., 2008, Black, 2011), mientras que en el duodeno se encontr trazas de sacarasa. Esto coincide con la literatura, que indica que la sacarasa es producida por el intestino delgado. Al respecto del proventrculo, no se encontr referencia a los proventrculos de aves, ms que una referencia al proventrculo de avestruz, de Illanes et al., 2006; que no menciona las enzimas en cuestin. Sin embargo, las referencias nos indican de que existen glndulas secretoras de pepsingeno y cido clorhdrico. Al respecto de la vescula biliar, la literatura nos indica que este fluido no posee enzimas, pero su funcin es de emulsionante de grasas, posee cidos, sales, colesterol y otros componentes anfipticos que permiten la emulsin de componentes lipdicos y la solubilizacin de estos en medios acuosos) (Bowen, sine data) Conclusin Se logr entender el funcionamiento enzimtico del tracto digestivo del animal en cuestin. Recomendaciones Emplear vsceras frescas si es posible del mismo da en caso contrario, no congelar solo mantener en un lugar fro, pues al congelar algn rgano puede quebrarse en el proceso de descongelado y si el caso de la vescula biliar los resultados que se obtendran seran errados. Pregunta Por qu el azufre flota cuando esta en presencia de bilis a diferencia de cuando esta en presencia de agua? Bibliografa MCGILVERY, Robert W. 1997. Conceptos bioqumicos. Revert. pag. 103 HILL, Richard W., Gordon A. WYSE. 2006. Fisiologa Animal. Mdica Panamericana. Pg. 102 KELLEY, William N. 1992. Medicina Interna, Volumen 1. Panamericana. pg. 448 BOWEN, Richard. s/d. Secretion of Bile and the Role of Bile Acids In Digestion. Disponible en lnea: http://biology.about.com/library/organs/bldigestliver3.htm DAZ PORTILLO, Jacobo; Mara Teresa FERNNDEZ DEL BARRIO, Fernando PAREDES SALIDO. 1997. Aspectos bsicos de bioqumica clnica. Daz de Santos S.A. pg. 102 BRANDAN, Nora, LLANOS, Cristina, BARRIOS, Beln Itat, ESCALANTE MARASSI, Andrea P., RUZ DAZ, Daniel A. N. 2008. Enzimas. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE.

BLACK, John Janvier. 2011. Digestion In The Intestines. Disponible http://chestofbooks.com/food/science/Eating-To-Live/Digestion-In-The-Intestines.html

en

web:

ILLANES, J; FERTILIO,B.; QUIJADA, M.; LEYTON, V. & VERDUGO, F. Descripcin Histolgica de las Glndulas Anexas del Aparato Digestivo de Avestruz (Struthio camelus var. domesticus). Int. J. Morphol. [online]. 2006, vol.24, n.3 [citado 2012-04-24], pp. 297-302. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-95022006000400001
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Autor de correspondencia: pedro_ca40@hotmail.com