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CUANTIFICACIN POTENCIOMTRICA DE CIDO ACTICO EN VINAGRE COMERCIAL Y GRADO DE ACIDEZ EN CIFRUT

Objetivos Determinar mediante anlisis potenciomtrico, la cantidad de cido actico en vinagre comercial y el grado de acidez en el Cifrut. Aplicar la titulacin grosera para poder predecir los ml gastados en una titulacin fina. Analizar el fundamento y partes de un HPLC (CENPROFARMA), reconociendo sus funciones en la cuantificacin de Vitamina D3 en muestras problema.

Fundamento terico Cantidad de cido actico en el vinagre: Se da el nombre de vinagre al producto obtenido de la fermentacin actica del vino que presenta una acidez total expresada como cido actico no inferior a 6 g por 100 ml. La acidez total se determina neutralizando el cido actico mediante la adicin de una base. La localizacin del punto final con un indicador cido-base es sencilla pero no es posible si, como ocurre con el vinagre, la disolucin de la muestra es coloreada. Entonces el anlisis puede efectuarse mediante la deteccin potenciomtrica del punto final utilizando un electrodo combinado de vidrio-calomelanos. (1) Comprobacin de calidad de las bebidas carbonatadas: El acedamiento o fermentacin de bebidas gaseosas es debido a la multiplicacin de levaduras, microbios que se alimentan del azcar y se calcula son la causa del 90% de la inutilizacin de las bebidas gaseosa. Las poco cidas o que no contiene poco gas o no lo contienen son ms susceptibles a la invasin por sacaromices, pues los cidos inhiben su desarrollo. Las que se preparar con agua muy alcalina fermentan fcilmente a la causa de la neutralizacin del cido. La bebida gaseosa tpica tiene acidez de 1.23 g de cido ctrico por litro, que basta para inhibir la reproduccin de sacaromices. (2) HPLC: La cuantificacin de vitamina D2 y vitamina D3 es una tarea rdua que aporta poca informacin al clnico. Aunque la determinacin de los niveles de vitamina D,, puede proporcionar un indice de la cantidad de vitamina Ji sintetizada en la piel despus de una exposicin a las radiaciones ultravioleta B, no es una medida adecuada de la situacin de la vitamina D en un individuo, ya que desaparece rpidamente del suero, y su concentracin es muy variable, pudiendo ser baja incluso en verano si el individuo no ha estado expuesto recientemente a una cantidad adecuada de luz solar (3). La vitamina D al ser menos polar que sus metabolitos hidroxilados, no puede ser purificada o aislada adecuadamente mediante una HPLC de fase normal. Precisa una extraccin de los lpidos mediante una cromatografa en columna, purificacin mediante HPLC en fase reversa y cuantificacin mediante HPLC en fase directa (4). Desarrollo de la prctica

1.Cuantificacin potenciomtrica de cido actico en vinagre

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NaOH 0.148 N

Medir la variacin del pH en 2 titulaciones, una fina y otra grosera.

1 ml de vinagre comercial Potencimetro H2O destilada

Metodologa: se dejan caer gotas del titulante sobre el beaker, no muy rpido, ni muy lento, a una velocidad de goteo constante. El electrodo del potencimetro debe estar sumergido y con constante agitacin del mismo. En la titulacin grosera se debe leer consecutivamente la variacin del pH cada ml del titulante, y termina cuando se nota el cambio brusco del pH. En la segunda titulacin, en la fina, se hace ms lenta la lectura, hasta que sea estable; adems, en el salto de pH se debe dejar un intervalo de 0.1 ml entre cada lectura, para encontrar el pH ms exacto posible. Con los datos obtenidos, se proceder a trazar la grfica 1 (pH vs ml), hallando as el punto de equilibrio, y por frmula se podr hallar indirectamente el pH del analito.

2.Grado de acidez en Cifrut

NaOH 0.148 N

Medir la variacin del pH en 2 titulaciones, una fina y otra grosera.

(10) y 20 ml de Cifrut Potencimetro H2O destilada

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Metodologa: sigue casi el mismo procedimiento que la titulacin anterior; se dejan caer gotas del titulante sobre el beaker, no muy rpido, ni muy lento, a una velocidad de goteo constante. El electrodo del potencimetro debe estar sumergido y con constante agitacin del mismo. En la titulacin grosera se debe leer consecutivamente la variacin del pH cada ml del titulante, y termina cuando se nota el cambio brusco del pH. En la segunda titulacin, en la fina, se hace ms lenta la lectura, hasta que sea estable; adems, en el salto de pH se debe dejar un intervalo de 0.1 ml entre cada lectura, para encontrar el pH ms exacto posible. Con los datos obtenidos, se proceder a trazar la grfica 1 (pH vs ml), hallando as el punto de equilibrio, y por frmula se podr hallar indirectamente el pH del analito.

3.Anlisis de una muestra que contiene Vit. D3 con mtodo HPLC

Metodologa: se utiliz el equipo de HPLC UV/VIS del CENPROFARMA, marca: Perkin Elmer Modelo 785 con inyector manual. Este tipo de anlisis se utiliza en el campo farmacutico, para separar analitos utilizando las tcnicas de la farmacopea. En este caso se cuantific Vitamina D3 (colecalciferol) en una muestra problema. Las columnas fueron HPLC Column 25cm x 4mm, 5 m. La fase mvil est constituida por metanol : agua (97:3), el flujo es de 2 ml/min y el tiempo de corte 10 min; el detector UV-VIS trabaj con una longitud de onda igual a 264 nm. Clculos

1.

Cuantificacin potenciomtrica de cido actico en vinagre Titulacin ml 0 ml 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml 7 ml 7.1 ml 7.2 ml 7.3 ml Grosera pH (1 ml) 3.54 3.84 3.97 4.23 4.61 4.94 5.50 6.79 Fina pH (1 ml) 3.36 3.86 4.21 4.47 4.74 5.06 5.57 6.77 7.25 8.87 9.25

UNMSM FAC. FARMACIA Y BIOQUMICA 7.4 ml 7.5 ml 7.6 ml 7.7 ml 7.8 ml 7.9 ml 8 ml 8.5 ml 9 ml 10 ml 9.47 9.96 9.77 9.9 10.04 10.08 10.14 10.56 10.81 11.11

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9.76 10.97

2.

Grado de acidez en Cifrut Titulacin ml 0 ml 1 ml 2 ml 2.2. ml 2.5 ml 2.7 ml 2.8 ml 2.9 ml 3 ml 3.1 ml 3.2 ml 3.3 ml 3.4 ml 3.5 ml 3.6 ml 3.7 ml 3.8 ml 3.9 ml 4 ml 4.1 ml 4.2 ml 4.3 ml 4.4 ml 4.5 ml 4.6 ml 4.7 ml 4.8 ml 4.9 ml 5 ml 5.5 ml 6 ml 6.5 ml 7 ml Grosera pH (10 ml) 3.30 3.36 3.598 Fina pH (20 ml) 3.09 3.40 3.99 4.15 4.20 4.27 4.29 4.34 4.38 4.45 4.48 4.53 4.57 4.65 4.67 4.75 4.81 4.86 4.93 5.01 5.08 5.15 5.19 5.38 5.41 5.46 5.54 5.67 6.10 6.55 7.37 9.46

7.59

7.65

9.22

UNMSM FAC. FARMACIA Y BIOQUMICA 7.5 ml 8 ml 8.5 ml 9 ml 9.5 ml 10 ml 9.86 10.09 10.24 10.35 10.45 10.54

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3.

Anlisis de una muestra que contiene Vit. D3 con mtodo HPLC

ESTNDAR Longitud de onda: 264 nm Tiempo de retencin: 6.759 minutos rea (concentracin): 69.307 (33.435%).

ESTNDAR Longitud de onda: 264 nm Tiempo de retencin: 6.759 minutos rea (concentracin): 69.307 (33.435%).

MUESTRA Longitud de onda: 280 nm Tiempo de retencin: 6.725 minutos rea (concentracin): 605.7134 (3.315%).

MUESTRA Longitud de onda: 264 nm Tiempo de retencin: 6.725 minutos rea (concentracin): 700.2454 (3.1164%).

Resultados Clculos para hallar la normalidad del acido actico

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Se encontr un porcentaje de cido actico de 6.3048% en el vinagre comercial.

Para hallar el % de acidez de Cifrut

Se encontr un porcentaje de acidez de 5.63/10% en el Cifrut.

Discusiones En la primera prctica, segn las regulaciones federales especifican 5 gr. de cido actico por 100 gr. de vinagre (5). De acuerdo a los resultados, se determin que el porcentaje fue 6.3048%, lo que indicara una cantidad de cido actico mayor que la especificada. Esto se puede dar por diversos factores, desde una deficiente titulacin por parte del operario, hasta una mala calibracin del equipo potencimetro y de las soluciones titulantes. (6) Otra forma de realizar esta misma experiencia es titulando el vinagre comercial con una base estndar, utilizando fenolftalena como indicador, aunque estn presentes otros cidos el resultado se calcula como cido actico (7) En la segunda experiencia, la finalidad era la de determinar el grado de acidez en una bebida carbonatada como lo es el Cifrut, en los parmetros normales, la bebida gaseosa tpica tiene una acidez de 1.23 g de cido ctrico por litro y de acuerdo a los resultados obtenidos, el porcentaje de acidez hallado fue de 5.63/10%, esto quiere decir que la bebida tiene cierto grado de acidez, lo suficientemente cida para cubrir factores como lo es el sabor, pero es inocua para la salud en el consumo humano. En la tercera experiencia se encontraron diferentes valores de concentracin para las muestras analizadas, de acuerdo a la cantidad de Vitamina D3 que contenan; en un trabajo similar, desarrollado por ngel Nogales Espert en su tesis doctoral MARCADORES BIOQUMICOS DEL METABOLISMO SEO EN LACTANTES Validacin de los mtodos de cuantificacin de los metabolitos 25-hidroxicalciferol y 1,25dihidroxicalcferol, se encontraron los siguientes datos: En los procedimientos de HPLC, el suero se equilibra con el trazador 11-25(011)1), para determinar la recuperacin del esterol durante la extraccin y la cromatografa. El 25(OH) D se fracciona previamente por cromatografa en columna o por HPLC (136,141). La

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separacin y determinacin final se realiza mediante HPLC en columnas con micropartculas de slice (109,123) o slice y C18 (139). La deteccin se lleva a cabo por espectroscopia ultravioleta, utilizando un filtro de 254 nm. La concentracin se calcula relacionando el rea del pico de la muestra desconocida, con una curva de calibracin generada por HPLC de cantidades conocidas de 25(OH) D. se obtiene cierto grado de comparacin con los 2 estudios. (8)

Conclusiones

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1) Determinacin potenciomtrica de la acidez de un vinagre, DEPARTAMENTO DE QUMICA Y CIENCIAS DE LOS MATERIALES (rea de Qumica Analtica), Universidad de Huelva, citado el 08 de noviembre del 2010 extrado de:

www.uhu.es/alfredo_velasco/practicas/Forestales/ vinagre.doc 2) KirK, Raymond E., Enciclopedia de Tecnologa Qumica, Tomo 3, 1ra. Edicin espaol, Editorial Hispano Amrica, Mxico 1962, Pgs. 67-78. 3) Adams JS, Clemens TL, Parrish JA, Holick MF. Vitamin- synthesis and metabolism alier ultraviolet radiation of normal and vitamin-D-deficient subjects. N EngI J Med 1982; 306:722-725. 4) Clemens TL, Adams JS, Nolan JM, Holick MF. Measurement of circulating vitamin D in man. Clin Chim Acta 1982; 121:301-308. 5) Prctica No. 7: Determinacin de acido actico en vinagre Prcticas de Qumica Analtica I, Instituto Tecnolgico de Toluca, Ingeniera Qumica, Q.F.I. Benjamn Portillo Alva, Metepec, Mxico, enero de 2008. 6) DETERMINACION DE LA ACIDEZ DE UN VINAGRE COMERCIAL, citado el 08 noviembre del 2010, extrado de: http://personal.us.es/jmorillo/ai3/Acidezvinagre.pdf 7) EXPERIMENTACIN EN QUMICA ANALTICA, citado el 08 noviembre del 2010, extrado de: http://www.uclm.es/profesorado/pablofernandez/p-1-docenciaen

experimentacion%20en%20quimica%20analitica.htm 8) MARCADORES BIOQUMICOS DEL METABOLISMO SEO EN LACTANTES Validacin de los mtodos de cuantificacin de los metabolitos 25-hidroxicalciferol y 1,25dihidroxicalcferol - Tesis Doctoral, ngel Nogales Espert, Catedratico del Departamento de Pediatra de la Universidad Complutense de Madrid, Concepcin Garc a Lacalle. 9) Cuantificacin de vitamina D3 (colecalciferol) y D2 (ergocalciferol) por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), Bravo Cazar, Daniel Francisco (Autor), Bueso, Francisco Javier (ASESOR), Tegucigalpa, Honduras: EAP, 2006 Ingeniera Agrnoma.

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Anexos CUANTIFICACIN DE VITAMINA D3 (COLECALCIFEROL) Y D2 (ERGOCALCIFEROL) POR CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (HPLC) Bravo Cazar, Daniel Francisco (Autor), Bueso, Francisco Javier (ASESOR) Tegucigalpa, Honduras: EAP, 2006 Ingeniera Agrnoma.

Resumen: La deficiencia de vitamina D causa osteoporosis en adultos y raquitismo en nios. Es as que los cereales de desayuno y algunos productos lcteos han sido fortificados para suplir las necesidades nutricionales. Este estudio implement los mtodos y valid las curvas estndares para cuantificacin de vitamina D3 y D2 por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC) basado en el mtodo AOAC 982.29 y el estudio de Mistry y otros (2002). Se cuantificaron 6 niveles de dilucin estndar de colecalciferol y 5 de ergocalciferol con tres lecturas por cada nivel. El rango de concentracin detectable que cubri la curva de calibracin de colecalciferol fue de 3.15 a 4200 g/100 g de muestra y para ergocalciferol fue de 37.8 a 4200 g/100 g de muestra. El tiempo promedio de elucin de la vitamina D3 fue 9.84 0.094 minutos (%CV=0.958). Para vitamina D2 el tiempo promedio fue 9.17 0.061 minutos (%CV=0.663). Se realiz un anlisis de regresin lineal para evaluar el ajuste de cada curva de calibracin, en el que se compar la concentracin de vitamina D3 y D2 [g /mL de acetonitrilo] con el rea de colecalciferol y ergocalciferol registrados en los cromatogramas. Se obtuvo un R2=0.999 para colecalciferol asegurando el poder de prediccin de la curva estndar con un coeficiente de correlacin del 100% (P<0.05). El poder de prediccin de la curva de ergocalciferol no fue bueno ya que el HPLC subestim la concentracin en todos los niveles estndares y de validacin. Se obtuvo un R2=0.990 siendo bajo considerando que debe ser =0.999, sin embargo se obtuvo un coeficiente de correlacin de 99.99% (P<0.05). Se recomienda repetir la curva estndar de ergocalciferol y validacin siguiendo las condiciones de almacenamiento del estndar propuesta por el proveedor. (9)