TINCIONES HEMATOLGICAS CONTENIDOS 1. Concepto 2. Tipos de tinciones: 2.1. 2.2.

Tinciones vitales y no vitales tinciones habituales y especiales

3. Denominacin de las estructuras coloreadas 4. Causas de error en las tinciones habituales de frotis sanguneos Prctica n VIII: Tincin de Giemsa Prctica n IX: Tincin de Wright Prctica n X: Tincin panptico rpida.

1. CONCEPTO Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las clulas sean visualizadas microscpicamente con mayor facilidad. 2. TIPOS DE TINCIONES Las tinciones hematolgicas pueden clasificarse segn distintos criterios: Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se pretenden colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales.

Atendiendo a su frecuencia de realizacin en el diagnostico hematolgico cotidiano, se dividen en tinciones habituales y especiales.

2.1. Tinciones vitales y no vitales Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre clulas que estn vivas. Son colorantes vitales, por ejemplo, las sales de tetrazolio y el verde Jano. Las tinciones no vitales se realizan sobre clulas muertas. La coloracin de clulas muertas requiere un proceso previo de fijacin, que tiene por objeto el conservar inalterada la estructura de las clulas y el adherir a stas firmemente a la superficie del porta. La fijacin puede realizarse mediante calor, aunque habitualmente se realiza con etanol o metanol. 2.2. Tinciones habituales y especiales Las tinciones habituales se logran generalmente mediante el uso de colorantes derivados de la anilina. Estos se renen en 3 grupos. Colorantes cidos: tienen una especial afinidad con las estructuras alcalinas de las clulas, como por ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos es la eosina. Colorantes bsicos: tienen una especial afinidad con las estructuras cidas de las clulas, como por ejemplo los cidos nucleicos. Uno de ellos es el azul de metileno. Colorantes neutros: son sales de un cido y de una base coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno. Colorantes indiferentes: son los que no tienen afinidad con estructuras cidas o bsicas. Son insolubles en el agua y tien a aquellas sustancias que tiene un poder de disolucin superior al del lquido empleado para prepara la solucin colorante.

Uno de ellos es el Sudn III empleado para teir las grasas. Tambin hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones policromas. Una coloracin es panptica cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes neutras y es pancrmica se aplican todas las sustancias colorantes neutras juntas. El primer que tuvo la idea de realizar una de estas combinaciones fue Romanowsky, y los colorantes hematolgicos utilizados en la actualidad suelen derivar del que l prepar. Los colorantes de tipo Romanowsky, que ms frecuentemente se emplean, son la de Wright y la de Giemsa (utilizada sola o en combinacin con la de May-Grunwald). Tambin hay tinciones panptica rpidas que producen una coloracion fcil y rpida de las estructuras celulares. Las tinciones especiales slo se usan en circunstancias especificas. Son de dos clases. Tinciones fluorescentes: emplean colorantes (fluorocromos) que se fijan a las clulas y que, cuando son estimulados por una luz ultravioleta, emiten una radiacin visible, de un color caracterstico. Los fluorocromos ms utilizados en esta clase de tinciones con el naranja de acridina y el rojo neutro. Tinciones citoqumicas: demuestran la presencia, ms o menos abundante, o la ausencia de determinadas sustancias, localizadas en el interior de los grnulos citoplasmticos de los leucocitos. Sirven para reconocer clulas leucocitarias (normales o anmalas) y, por tanto, para diferenciar unas clases de leucemias de otras. Por ejemplo, un colorante preparado a base de diaminobenzidina y de agua oxigenada, descubre la presencia de peroxidas endocelular, y por consiguiente permite atribuir el origen de unas clulas leucocitarias inmaduras a la lnea granuloctica o a la monoltica.

3. DENOMINACION DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS Atendiendo a sus apetencias tintoriales, las estructuras celulares pueden nombrarse de las siguientes formas: Estructuras acidfilas u oxfilas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza cida. Si el colorante cido que captan es la eosina, se dice que son eosinfilas. Con las tinciones habituales adquieren un color rosado. Estructuras basfilas; son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina. Con las tinciones habituales adquiern un color azulado. Si se tien de lila o prpura con colorantes de tipo azur, se llaman azurfilas. 4. CAUSAS DE ERROR EN LAS TINCIONES HABITUALES DE FRONTIS SANGUINEOS Si la tincin de una extensin sangunea es demasiado rosa, probablemente se deba a: Un pH bajo del colorante. Un tiempo de coloracin insuficiente. Un lavado excesivamente prolongado. Si la tincin es demasiado azul, posiblemente, est causado por: Un grosor excesivo de la extensin. Un pH alto del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada. Un lavado insuficiente. Si tras la tincin, aparecen artefactos o/y precipitados en la extensin, probablemente, se deba a: Un empleo de portas sucios.

Una falta de filtracin del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada Un secado del colorante durante la tincin. Un lavado insuficiente.

Muchos de estos errores pueden obviarse utilizando teidores automticos de las extensiones sanguneas. Uno de estos teidores automticos es. Por ejemplo, el Hematek de los laboratorios Bayer. TINCIN DE GIEMSA INTRODUCCIN Las tinciones hematolgicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus productos de oxidacin (azur A, Azur B y azur C) como colorantes bsicos, combinndolos con la eosna como colorante cido. De este modo obtenemos una tincin diferencial, es decir, que es capaz de diferenciar distintas estructuras celulares segn se tian con el colorante cido, bsico o con la mezcla de ambos. Segn la proporcin de azul de metileno y eosina que compongan el colorante tendremos distintos mtodos de tincin. Entre ello, los ms conocidos son el mtodo de Gemsa, de Wright, de Leishman y el panptico de Pappenheim. METDICA Es un extracto de las tcnicas de tincin hematolgicas de la casa Panreac. Fundamento Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa. Material necesario

 Reactivos Muestra

Microscopio ptico Portas bien limpios Cristalizador Puentes de tincin Pipetas Pasteur con chupete Frascos lavadores Tubos de ensayo

Colorantes en solucin segn Giemsa de Panreac Solucin tampn pH 7,2 de Panreac Metanol Aceite de inmersin.

Sangre capilar fresca o vanosa anticoagulada. El anticoagulante de eleccin es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sdico y el oxalato potsico pueden dar preparaciones defectuosas. Tcnica Preparamos una frotis sanguneo segn la tcnica descrita e la prctica n VII. Colocamos el frotis sobre el puente de tincin en el cristalizador en posicin horizontal. Cubrimos con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis. Diluimos en el tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno segn Giemsa con 2 ml de solucin tampn pH 7,2. es importante realizar esta dilucin en el momento de la tincin, ya que el colorante precipita y no es vlido para otro da. Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frontis dejando actuar durante 25 minutos.

Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con tampn pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Dejamos escurrir y secamos en posicin vertical (vase figura 4.VIII.1) Lectura de resultados Una vez seca la tincin, echamos una gota de aceite de inmersin y examinamos al microscopio ptico con el objetivo de 100x. Los eritrocitos se tien de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta. Los neutrfilos presentan el ncleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulacin de un color violeta rojizo.

Figura 4.VIII.1. Tincin de Giemsa Los eosinfilos se observan con el ncleo azul violeta, el citoplasma azul y los grnulos de color rojo anaranjado. Los basfilos presentan un ncleo de color prpura y granulacin de color azul oscuro. Los monolitos y linfocitos se observan con un ncleo color violeta y el citoplasma azul, un poco ms claro en el monolito. 1 Cules son los anticoagulantes ms adecuados para esta tcnica? 2 Con qu reactivo fijamos el frotis?

3 Cunto tiempo debe actuar el colorante en el frontis? Resultados obtenidos Dibuje las clulas observadas con colores semejantes a los que ha visto en el microscopio. TINCIN DE WRIGHT METDICA Extracto de las tcnicas de tincin hematolgicas de las casa Panreac. Fundamento El colorante utilizado es una solucin de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azur B (del 10 25%) junto con otros derivados del alcohol metlico. Dada la presencia de metanol en la composicin del colorante, no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin. Slo si se van a guardar las extensiones sin teir de un da para otro precederemos a su fijacin para evitar el deterioro del frotis. Material necesario Reactivos Microscopio ptico Cristalizador Puentes de tincin Pipetas Pasteur con chupete. Frasco lavador Guantes Tubos de ensayo.

 Muestra

Solucin de eosina-azul de metileno segn Wright. Solucin tampn pH 7,2 Aceite de inmersin.

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes ms adecuados son la heparina y el EDTA. Tcnica Realizar un frotis sanguneo muy fino. Dejar secar al aire. Sobre la extensin colocada horizontalmente en el puente de tincin verter 1ml de eosina azul de metileno. Dejamos actuar un minuto y lavamos con solucin tampn pH 7,2. Dejamos escurrir y se4car en posicin vertical. Inmediatamente antes de su empleo y en un tubo de ensayo, diluimos 0,5 ml, de eosina - azul de metileno con 0,5 ml de solucin tampn pH 7,2. Mezclamos bien y cubrimos con esta dilucin la extensin. Teimos durante 3-5 minutos y lavamos con agua del grifo volvemos a lavar con solucin tampn pH 7,2. Dejamos escurrir y secar en posicin vertical (vase figura 4.IX,1).

Figura 4.IX.1. Tincin de Wright.

Lectura de resultados Depositamos una gota de aceite de inmersin y observamos con el objetivo de 100x. Las clulas se observan coloreadas de la misma manera que con la tincin de Giemsa. 1 Qu tipo de colorante utilizamos en esta tincin? 2 Qu sustancia empleamos como fijador? 3 Cunto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante diluido? Resultados obtenidos Dibuje las clulas observadas coloreando adecuadamente las caractersticas morfolgicas de cada una. TINCIN PANPTICO RPIDO METDICA Extracto de la tcnica Panptico rpido de la casa QCA Fundamento Este mtodo de tincin diferencial es un sistema que ana la policroma y la calidad que proporcionan los mtodos clsicos (Giemsa y Wright) con una gran rapidez de ejecucin (15 segundos solamente). Frente a las tcnicas de tincin descritas anteriormente, donde el colorante se extenda sobre el frotis, sta presenta la peculiaridad de ser un mtodo de inmersin donde el frotis se sumerge en la solucin colorante durante un tiempo determinado. Material necesario Reactivos Cubetas de Wertheim o similares Cestillo para portas Frasco lavador.

 Muestra

Solucin n 1: Solucin alcohlica de triarilmetano. Solucin n 2: Solucin tamponada de xanteno Solucin n 3: Solucin tamponada de tiamina. Agua destilada

Frotis sanguneo preparado recientemente que se ha dejado secar al aire. Tcnica En tres cubetas de Wertheim o similares se disponen los colorantes solucin n 1, n2 y n3 (vase figura 4.X.1).

Figura 4.X.1. Cubeta de Wertheim y su tapa

Colocamos los frotis en el cestillos para portas y lo sumergimos en la cubeta con la solucin n 1 durante 1 segundo. Repetimos la inmersin cuatro veces (en total 5 segundos). Dejamos escurrir (vase Figura 4.X.2)

Figura 4.X.2. Cestillo para portas

Sumergimos a continuacin otras cinco veces, cada una de un segundo de duracin, en la cubeta con la solucin n2. Dejamos escurrir. Finalmente, sumergimos otras cinco veces de un segundo cada una en la cubeta con la solucin n3. Lavamos con agua destilada y dejamos secar. Lectura de resultados Depositamos una gota de aceite de inmersin sobre el frotis y observamos con el objetivo de 100 x. Las coloraciones obtenidas en las clulas sanguneas son similares a las de la tincin de Wright y Giemsa. Sin embargo, podemos variar la intensidad de la tincin modificando el nmero de inmersiones en los colorantes n 2 y n 3, segn se desee destacar las tonalidades rosas o las azules. * Notas sobre el mtodo: Las cubetas con las soluciones colorantes, especialmente la del n 1, debern guardarse siempre bien tapadas, a fin de evitar una evaporacin excesiva que podra inducir a desviaciones de color respecto a las tinciones habituales. Antes de agotar el contenido de una cubeta, debemos ir adicionando una nueva cantidad de solucin colorante para mantener, da a da, un nivel apropiado. De vez en cuando se debe renovar todo el contenido de la cubeta. En aquellos laboratorios con pequeo nmero de frmulas hemticas, las cubetas de Wertheim pueden ser sustituidas ventajosamente por pequeos frascos de cristal con tampn a rosca. 1 En qu se diferencia este mtodo de las otras tinciones clsicas? 2 Cuntos segundos deben sumergirse el frotis en cada una de las soluciones? 3 Cul cree que es la solucin fijadora?

Resultados obtenidos Dibuje las clulas observadas con sus colores correspondientes RECUENTOS CELULARES CONTENIDOS 1. Concepto 2. Recuentos en cmara 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. Material necesario reactivos muestra limpieza del material

3. Recuentos en contadores electrnicos 3.1. 3.2. Componentes de que consta un contador electrnico Mtodos electrnicos de recuento celular 3.2.1. Mtodo de la resistencia elctrica o de la impedancia 3.2.2. 3.3. Mtodos de la dispersin de la luz o de la difraccin

Parmetros que determina un contador electrnico

Prctica n XI: Visualizacin de una cmara de recuento. 1. CONCEPTO Los recuentos celulares son una serie de procedimientos que tienen por objeto determinar el nmero de cada uno de los tipos celulares que estn comprendidos en una unidad de volumen de sangre (generalmente, en 1 mm3). Todos los recuentos celulares constan de 3 fases:

1 Dilucin de la sangre. 2 Cmputo del nmero de clulas. 3 Clculo matemtico del nmero de clulas presentes en 1 mm3 de sangre. Los recuentos celulares pueden realizarse mediante mtodos manuales (recuentos en cmaras) o automticos (recuentos en contadores electrnicos). 2. RECUENTOS DE CMARA 2.1. Material necesario Cmara de recuento Tambin se llama cmara cuentaglbulos o hemocitmetro. Consiste en una placa gruesa de cristal con forma de porta, cuya porcin central est divida en 3 bandas perpendiculares al eje longitudinal de la cmara. De ellas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0,1 mm con respecto a la central, y en una ltima hay grabado un retculo cuadrangular. La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semibandas idnticas y separadas por un surco paralelo el eje longitudinal de la banda. En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retculo idntico (vase figura 5.1).

Figura 5.1. Cmara de recuento. A = Visin superior (cmara con un retculo). B = Visin superior (cmara con dos retculos). C= Visin lateral.

Hay varios tipos de retculos, de los cuales los ms utilizados son el de Burker, el de Thoma, y sobre todo el de Neubauer (Vase figura 5.2).

Figura 5.2. Cuadrados de los distintos tipos de retculos de recuento A = Cuadrado grande. B = Cuadrado mediano C = Cuadrado pequeo.

Cubreobjetos Preferiblemente, debe ser algo ms grueso que los normalmente utilizados. Se coloca de forma que apoye sobre las dos bandas laterales de la porcin central de la cmara. De esta manera queda delimitado un espacio entre la banda central y el cubre, en el que se deposita la muestra y cuyo espesor es de 0,1 mm. Algunas cmaras tambin constan de dos pinzas especiales que parten, cada una, de una de las porciones laterales de la cmara y que tienen por misin la de asegurar la fijacin del cubre a la misma. Cuando est bien montado sobre la cmara, se observan unas irisaciones de colores entre las dos lminas de vidrio llamadas anillos de Newton. Pipetas diluidotas de Thoma

Son una pipetas especiales de cristal que constan de un largo tubo capilar graduado y de una dilatacin ampular o bulbo. El tubo capilar termina en punta, a nivel de uno de sus extremos, y se contina con el bulbo, a nivel del otro de sus extremos. Adems est dividido en 10 partes iguale, y en su superficie estn especialmente bien marcadas la 5 divisin (con un 0,5) y la 10 (con un 1). El bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre con el liquido de dilucin, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de vidrio es roja en las pipetas empleadas para el recuento de hemates, y blanca en las usadas para el recuento de leucocitos. Adems, en as pipetas para hemates la capacidad del bulbo es 100 veces superior a la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 101, y en las pipetas para leucocitos la capacidad del bulbo es 10 veces mayor que la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 11. Goma de aspiracin Es un tubo de goma que permite la aspiracin de la muestra y del lquido de dilucin. Es uno de sus extremos tiene encajada una boquilla, y por el otro se ensambla al tubo capilar corto de cualquiera de las pipetas de Thoma (vase figura 5.3).

Figura 5.3. Pipetas diluidotas: A = pipetas para recuento de glbulos rojos B = pipeta para recuento de glbulos blancos.

2.2.

Reactivos

Liquido de dilucin Hay varias clases Su composicin vara segn el tipo de clulas que se pretende contar. Los que se utilizan para el recuento de hemates contienen cloruro sdico para hacerlos isotnicos* con respecto al plasma y evitar, de esta forma, la hemlisis. Pero algunos incorporan tambin anticoagulantes como el citrato de sodio, e incluso antispticos como la formalina. Los que se emplean para el recuento de leucocitos contienen una sustancia, como el cido actico glacial, que rompe los hemates y un colorante, como el violeta de genciana, que tie el ncleo de los leucocitos. Los que se usan para el recuento de plaquetas pueden incorporar una sustancia hemoltica y un antigregante plaquetario. Los lquidos diluyentes ms utilizados son el de Harem, para el recuento de hemates, y el de Turck, para el recuento de leucocitos. 2.3. Muestra

Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA. Esta sangre se utilizar convenientemente diluida. 2.4. Limpieza del material

Limpieza de las pipetas diluidotas Tras su uso, ha de ser aclarada con agua tibia y posteriormente debe secarse con un pao suave y limpio o dejndola al aire. Limpieza de las pipetas diluidoras Despus de su empleo, tienen que lavarse interiormente de la siguiente forma: Primero, haciendo pasar a travs de ellas agua corriente, una vez. Luego, haciendo pasar a travs de ellas agua destilada, 3 veces

 Y, finalmente, haciendo pasar a travs de ellas acetona o alcohol de 95, otra vez Tras ello, ha de secarse su interior, preferentemente mediante un secado de aire. 3. RECENTOS EN CONTADORES ELECTRNICOS 3.1. Componentes de que consta un contador electrnico Disminuye la concentracin de la sangre hasta el nivel adecuando para el funcionamiento del contador (generalmente diluye a 1/500 para el recuento de leucocitos, y a 1/50.000 para el de hemates). Como lquidos diluyente utiliza una solucin isotnica con capacidad conductora. Compresor - aspirador Aporta la presin y el vaco necesarios para transportar la sangre, convenientemente diluida, al dispositivo de medida. Dispositivo de medida Es la cmara donde se cuentan realmente las clulas sanguneas. Su diseo depende del mtodo de recuento utilizado por cada modelo de contador. Transductor Transforma las seales, procedentes del dispositivo de medida, en impulsos elctricos. Suele ser un fotomultiplicador Discriminador Diferencia los impulsos elctricos generados por cada uno de los tipos de clulas sanguneas. Lector Recoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla. Registrador Imprime en papel los resultados conseguidos.

3.2.

Mtodos electrnicos de recuento celular Es el utilizado por los primeros contadores, ya que fue descubierto por Coulter en 1956. Se basa en lo siguiente: Mientras que las clulas sanguneas conducen mal la electricidad, el lquido diluyente es un buen conductor de la electricidad (posee una gran conductividad elctrica). El dispositivo de medida consiste en un pequeo orificio, a travs del cual se hace pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su entrada y otro a su salida. Tambin se hace pasar una corriente elctrica Si el orificio es atravesado solamente por lquido constante a travs de ese mismo orificio. diluyente, la resistencia elctrica medida por los electrodos es mnima y constante, pero cuando el orificio es atravesado por una clula sangunea, se produce un aumento de la resistencia elctrica y un cambio de potencial entre los electrodos. El nmero de seales elctricas generales indica el nmero de clulas presentes en la sangre y la amplitud de estas seales es directamente proporcional al volumen celular (vase figura 5.4).

3.2.1. Mtodo de la resistencia o de la impedancia

Figura 5.4. Esquema de la dispersin de la luz o de la difraccin

3.2.2. Mtodos de la dispersin de la luz o de la difraccin Mtodo del campo oscuro El dispositivo de medida consiste en un capilar por el que circula la sangre diluida y que se atravesado por un haz de luz halgena. Cuando no pasan clulas a lo largo del capilar, el haz de luz incide sobre una zona no sensible (disco de campo oscuro); pero si una clula pasa a travs del capilar, dispersa los rayos el haz luminoso hacia fuera del disco, donde son captados por un fotodetector. El nmero de seales lumnicas detectado indica el nmero de clulas presentes en la sangre, y la intensidad de la dispersin lumnica producida por cada una de ellas es directamente proporcional al tamao de stas (vase figura 5.5)

Figura 5.5. Esquema del dispositivo de medida basado en el mtodo del campo oscuro

Mtodo del rayo lser El dispositivo de media consta de un detector situado detrs de un capilar por el que circula un flujo continuo de sangre diluida; es pues un citmetro de flujo. Un rayo lser* atraviesa el capilar y se dirige hacia el detector. Cuando no pasan clulas a lo largo del capilar, el rayo lser incide sobre el detector, pero si una clula pasa a travs del capilar, el rayo lser es interceptado por ella y deja de incidir sobre el detector. El nmero de interferencias indica el nmero de clulas presentes en la sangre, y el grado de interferencia que produce cada clula a su paso es directamente proporcional a su tamao. En este mtodo se basan, por ejemplo, los autoanalizadores Technicon de la serie H (vase figura 5.6).

Figura 5.6. Esquema del dispositivo de medida basado en el mtodo del rayo lser.

3.3.

Parmetros que determina un contador electrnico Los contadores electrnicos pueden llegar a determinar los siguientes parmetros: Nmero de hemates por mm3 de sangre Nmero de leucocitos por mm3 de sangre Nmero de plaquetas por mm3 de sangre.

 Valor hematocrito Concentracin de Hb en la sangre ndices hematimtricos Frmula leucocitaria. Para el recuento de leucocitos es necesaria una lisis previa de los hemates mediante sustancias tensioactivas (detergentes). Para el recuento de plaquetas es necesaria la separacin de los hemates, por ejemplo, mediante centrifugacin. La concentracin de la Hb se mide colorimtricamente con el mtodo de la cianmetahemogobina. Los ndices hematimtricos pueden ser calculados electrnicamente. Los autoanalizadores Technicon de la serie H determinan la frmula leucocitaria mediante el estudio de los leucocitos bajo dos aspectos: El aspecto morfolgico de su ncleo, mediante su anlisis con tcnicas de difraccin* luminosa. Su actividad biolgica, mediante la cuantificacin del contenido en peroxidasa de su citoplasma (vase figura 5.7).

Figura 5.7. Esquema de un automatizador hematolgico

VISUALIZACIN DE UNA CMARA DE RECUENTO METDICA Material necesario Un microscopio Una cmara de recuento con un retculo de Neubauer mejorado

Procedimiento 1. Observar con el microscopio el retculo de la cmara de recuento Primero, con el objetivo de pequeo aumento (4 x) Luego, con el objetivo de mediano aumento (10 x) Despus, con el objetivo de gran aumento (40 x) 2. enfocar, con el objetivo de 10x, uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del retculo. Contar el nmero de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande perifrico: Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retculo es de 3 mm, calcular: La longitud de los lados de cada cuadrado grande perifrico: La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadrado grande perifrico: Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido ente el retculo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cmara de recuento montada, a nivel de: El retculo entero: ... Un cuadrado grande perifrico ... Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande perifrico. 3. Enfocar, con el objetivo de 10 x, el cuadrado grande central.

Contra el nmero de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central. Contar el nmero de cuadrados pequeos englobados en uno de esos cuadrados medianos. Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retculo es de 3mm, calcular. La longitud de los lados del cuadrado grande central. La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central Al longitud de los lados de cada uno de los cuadrados pequeos contenida en uno de esos cuadrados medianos: Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retculo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cmara de recuento montada, a nivel de: El cuadrado grande central. ... Un cuadrado mediano englobado en el cuadrado grande central ... Un cuadrado pequeo incluido en uno de esos cuadrados medianos. ...