UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL PEREIRA

FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA PREPARCION DE MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA

OBJETIVOS: - Describir las clases y utilidad de los medios de cultivo. - Relacionarse con terminologa propia del laboratorio. GENERALIDADES La microbiologa es la subdivisin de la biologa encargada del estudio de aquellos seres tan pequeos (menores de 1m) que requieren un sistema de amplificacin para observarlos en detalle, uno de los sistemas de amplificacin son los medios de cultivo que permiten aumentar la poblacin bacteriana y el otro es el microscopio que permite amplificar el tamao de las bacterias para que pueda ser observadas su morfologa con facilidad. Los microorganismos requieren para crecer y multiplicarse un sustrato o una solucin de nutrientes. Los medios de cultivo proporcionan esta mezcla equilibrada de elementos necesarios para un buen crecimiento. La presencia de un nutriente en exceso puede ser inhibitorio y toxico para los microorganismos. Para poder llevar a cabo el estudio de las bacterias es necesario recuperarlas del hbitat natural en medios artificiales que proporcionen sus requerimientos nutricionales. Este procedimiento se le conoce como cultivo bacteriano in Vitro. Las bacterias para su metabolismo necesitan donadores y aceptores de electrones, fuentes de carbono, fuentes de nitrgeno y minerales. Adems del uso de un medio nutritivamente adecuado para el cultivo bacteriano, es necesario considerar factores ambientales tales como la temperatura, pH, humedad relativa y atmsfera de incubacin. Donadores de electrones: Las bacterias, como cualquier organismo vivo, requieren de una fuente de energa en forma de donadores de electrones, es decir substratos oxidables. El substrato mas usado es la glucosa.

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Aceptores de electrones: Estos se requieren para la realizacin de reacciones de oxidacin que conducen a la sntesis de ATP. Las bacterias aerobias requieren oxigeno, mientras que las bacterias anaerobias utilizan compuestos orgnicos o inorgnicos (sulfatos y nitratos). Fuentes de carbono: Todos organismos requieren.

METODOS DE SIEMBRA Los mtodos de siembra bacteriana en medios de cultivo estn directamente relacionados con la consistencia de los mismos. Medios lquidos: Se inoculan por medio de asas, pipetas Pasteur, hisopos y/o depositando una porcin de una muestra clnica. La utilidad de estos medios es aumentar las posibilidades de crecimiento cuando las bacterias no son muy abundantes en el inoculo. Medios Slidos: su siembra se hace por agotamiento o masiva en caja de petri y en los tubos puede ser por picadura o estras. SIEMBRA EN CAJA DE PETRI Y EN TUBOS CON MEDIO DE CULTIVO SOLIDO Y LIQUIDO: En toda siembra se debe anotar en la caja de petri con agar en la base en forma clara la FECHA y NOMBRE. Las cajas se incuban a 37 grados e invertidas para evitar que el agua de la condensacin y los productos txicos producidos por las bacterias caigan sobre el cultivo. Las asas bacteriolgicas con la cual se realiza la siembra deben esterilizarse en la llama del mechero antes y despus de su uso. Existen dos tipos de siembra en caja, una llamada siembra masiva y otra siembra por agotamiento, en los dos casos la caja debe mantenerse en la palma de la mano izquierda ligeramente inclinada.

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PARA CONSULTA: 1. Qu tipos de medio de cultivos existen? 2. En qu consiste una siembra masiva, por agotamiento y en estras. Describir grficamente? 3. En qu consiste la tincin de gram, describir el procedimiento. 4. Describir textual y grficamente la estructura de una bacteria. 5. Qu diferencias existen entre las bacterias gran positivas y gran negativas? NOTA: Las preguntas 1 y 2 deben llevarse resultas para el laboratorio. De la 3 a la 5 sern necesarias para la siguiente prctica. BIBLIOGRAFA VILLEE, C.A. 1981. Biologa. Interamericana. 7 Edicin. Mxico. KARP, Gerald. Biologa Celular y Molcula. Conceptos y experimentos. Cuarta edicin. Interamericana McGraw Hill. 2006.

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