Universidad de Concepcin

Facultad de Ciencias Naturales y Oceanogrficas

Ingeniera en Biotecnologa Marina Y Acuicultura

Laboratorio N5:
Manipulacin de animales y anestesia.

Integrantes:

Docentes: Fecha de entrega:

Jonathan Alarcn Guantecura Alonso Daz Alarcn Marcela Espinoza Nancabil Javier Garrido Veloso Alejandra Llanos Rivera Eduardo Tarifeo Silva de Mayo de 2011

Fisiologa de organismos acuticos martes 26 de abril del 2011

Introduccin.
Los anestsicos son agentes fsicos o qumicos, que con el aumento del tiempo de exposicin o de la concentracin, primero sedan al animal y despus causan la prdida progresiva de la movilidad, equilibrio y conciencia, para finalmente bloquear las acciones reflejas (Summerfelt y Smith, 1990). El uso de la anestesia en peces es deseable y/o imprescindible en muchas ocasiones como puede ser en el caso de intervenciones quirrgicas, permitiendo una mayor duracin de los procedimientos y evitando el dolor e incomodidad para el animal. Durante el transporte, en la pesca y acuicultura, reduciendo la actividad de los peces y as disminuyendo el consumo de oxgeno y el estrs (Marking y Meyer, 1985; Summerfelt y smith, 1990). Finalmente, el uso de una sobredosis tambin puede ser utilizado como medio tico para provocar la eutanasia en peces (Brown, 1992; Kreinberg, 2000). Por otra parte, en la acuicultura el estrs puede tener un fuerte impacto negativo en los peces, aumentando la susceptibilidad a las enfermedades, inhibiendo el crecimiento y afectando la reproduccin. Por esto, el uso de los anestsicos durante las tpicas manipulaciones de rutina (durante los pesajes, mediciones, marcaciones, seleccin de reproductores, vacunacin y muestreo) se hace necesario, no solo para evitar y reducir los daos fsicos, sino tambin para minimizar el estrs (Cho y Heath, 2000). La eleccin de un anestsico no depende solo de consideraciones tales como; la disponibilidad, costo, facilidad de uso, seguridad del manipulador o la naturaleza del trabajo, sino tambin de su eficiencia, la cual en acuicultura se define de acuerdo a su capacidad de inmovilizar al pez, permitiendo su manipulacin para llevar a cabo los trabajos de rutina especficos del cultivo.

Objetivos. Definir las condiciones de manutencin en cautiverio ms adecuada para animales acuticos. Evaluar y determinar el anestsico ms conveniente para cada tipo de animal.

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Materiales y mtodos. En el laboratorio se procedi a evaluar los distintos efectos que produjeron don tipos de anestsicos; BZ-20 y ter, en una trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss) y en una rana africana (Xenopus laevis). Previo a esto se discuti la forma de vida de cada animal, considerando: hbitat, formas de percepcin ambiental y reacciones de comportamiento en medio natural y en cautiverio. Para observar el avance del proceso de anestesia, se definieron reflejos de reaccin en cada animal que se utilizaron como indicadores para definir cada etapa. Se inici el procedimiento evaluando el efecto del anestsico benzocana de la marca comercial BZ-20 y del ter, por el modo de aplicacin de inoculacin (diluido en el lquido de transporte) en cada animal. Se comenz con la trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss). Para esto se prepar una cubeta (para cada anestsico por separado) con 2 litros de agua ms el anestsico segn las diluciones calculadas; para BZ-20 se agregaron 4ml, valor que se calcul por medio de una regla de tres simples considerando que 20 ml de BZ-20 estn contenidos en 100 litros de agua; y del ter se agregaron 2ml calculados a partir de una dilucin acuosa 1:1000 (ambos anestsicos se agregaron con una jeringa en su cubeta correspondiente). Una vez introducido el animal en la cubeta (cmara de anestesia) se observ las reacciones de respuesta frente a estmulos y se determin las distintas etapas de la fase anestsica (tiempo de anestesia). Posteriormente cuando el individuo lleg a la fase de anestesia profunda, se devolvi a una cubeta de control, que solo contena agua (2L), y se observ sus distintas reacciones hasta que recuper su estado normal (tiempo de recuperacin). Enseguida para la rana africana se realiz el experimento mediante el mismo procedimiento. Finalmente se evalu el efecto de la anestesia pero esta vez con ter segn el modo de aplicacin por inhalacin pero solo en la rana africana (Xenopus laevis). Para esto se deposit un algodn mojado con ter con 2,6 ml dentro de un frasco de vidrio (cmara de anestesia), se introdujo el animal en el frasco que debi estar en posicin horizontal y tapado para evitar que el anestsico se volatilizara. Se determin el tiempo en que lleg a la anestesia profunda (tiempo de anestesia) y una vez que alcanz esta fase, se sac el animal de la cmara de anestesia y se observ sus reacciones hasta que recuper su estado normal (tiempo de recuperacin). Obtenidos todos los datos de los experimentos, se tabularon y se procedi a discutir el efecto de cada anestsico en cada animal, definiendo cual de ambos fue el ms eficiente en cada uno.

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Resultados. En condiciones de cautiverio y manipulacin de los animales, se observ lo siguiente:

Trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss) Se mantuvo suspendida en la columna de agua. Respiracin normal, observndose movimiento mandibular y opercular. Movimiento de aletas. Respuesta a estmulos. Pigmentacin ms oscura. Rana africana (Xenopus laevis) Se mantuvo en posicin bpeda para alcanzar la superficie y poder respirar, posterior a ello descendi al fondo. La mayor parte del tiempo permaneci quieta. Respuesta a estmulos. Presento inflamacin torcica. Al extraerla de la cubeta con agua, huyo a travs de saltos.

En el caso de la trucha se definieron como reflejos de reaccin; el movimiento opercular y de aletas pectorales, la forma de desplazamiento del pez en el agua y la prdida de equilibrio, los cuales se utilizaron como indicadores de avance del proceso de anestesia. En la rana en cambio se defini como reflejo de reaccin, el tiempo empleado en recuperar la posicin cuadrpeda al ser invertida. En base a esto, se logr establecer las diferencias entre las condiciones inciales que presentaron los animales sin anestesia y las posteriores con anestesia, las cuales se muestran en las tablas 1 y 2.
Tabla N1: Efectos de anestesia observados en trucha arcoris y rana africana, por baos de inmersin con BZ-20. Efectos Trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss) Rana africana (Xenopus laevis)

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Disminucin de movimiento mandibular y opercular. Prdida de equilibrio. No existe respuesta a estmulos.

No se observaron fisiolgicos.

cambios

Tabla N2: Efectos de anestesia observados en trucha y rana africana por baos de inmersin e inhalacin con ter. Especie Inmersin Trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss) Rana africana (Xenopus laevis) Disminucin de movimientos. No hubo prdida de equilibrio. Existe respuesta a estmulos. No se observaron cambios fisiolgicos, aunque reaccion a los estmulos de manera brusca. Efectos Inhalacin No se aplic.

Liberacin de neurotoxina; bufonina. Prdida de equilibrio. No existe respuesta a estmulos. Tiempo de recuperacin: mayor

En ambos animales los efectos aparecieron de forma gradual con respecto al tiempo, lo cual permiti distinguir el modo de accin de cada anestsico de acuerdo a las fases alcanzadas en cada uno de ellos, como ocurri en el caso de la trucha anestesiada con baos de inmersin BZ-20 y en la rana anestesiada por inhalacin con ter (ver tabla 3), a pesar de que en algunos casos solo se presento la primera etapa de excitacin, como ocurri en el caso de la rana al ser anestesiada por medio del bao por inmersin con BZ-20, alcanzando solo la etapa de excitacin. Etapa que se present a los 5 s de aplicado el anestsico, con movimientos ms acelerados, mantenindose en posicin bpeda durante periodos de tiempo prolongado con el propsito de alcanzar la superficie y poder respirar, a pesar de que a los 8,4 min de aplicado el anestsico se duplico la dosis.
Tabla N3: Etapas de la anestesia, observadas en la rana africana (Xenopus laevis) por inhalacin con ter y de la trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss) a travs de baos de inmersin. Etapas Modo de accin Trucha arcoris (Oncorhynchus mikiss). a) Excitacin A los 40 s de aplicado el anestsico, hubo un aumento en el movimiento mandibular, opercular y de aletas. El pez reacciono con mayor brusquedad frente a los estmulos, desplazndose en la columna de agua con mayor Rana africana (Xenopus laevis). Ocurre a los 2 min de aplicado el anestsico. Se desplaza de forma rpida por la cmara de anestesia y se encuentra muy agitada.

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rapidez.

b) Adormecimient o

A los 1,25 min, el pez desciende levemente hacia el fondo, disminuye la frecuencia del movimiento opercular y de aletas y an responde a estmulos. A los 2,1 min, el pez se encuentra ya en el fondo, pierde el equilibrio y no responde a estmulos. A los 3,22 min, se observa una prdida total a las respuestas frente a estmulos y de reflejos.

A los 2,37 min, comienza a disminuir la rapidez de sus movimientos, pero an responde frente a estmulos.

c) Anestesia ligera

A los 2,5 min, permanece quieta y disminuye notablemente sus reflejos. A los 3,32 min, hay una prdida total del equilibrio, se encuentra en posicin invertida e inmvil.

d) Anestesia profunda

**Tiempo de recuperacin trucha arcoris: Luego de la fase de anestesia profunda transcurrieron 2,1 min para que el pez iniciara nuevamente su desplazamiento por la cubeta y respondiera frente a los estmulos. **Tiempo de recuperacin en rana africana: Ocurre de manera gradual; a los 1,33 min comenz a patear; a los 7,75 min se observaron leves movimientos corporales; a los 8,35 min recuper el equilibrio (invirtiendo de posicin) y a los 13,35 min regreso a su estado normalidad.

En el caso de la anestesia por medio de baos de inmersin con ter, sucedi lo mismo que en el caso anterior, en ambos animales se observ respuesta a los estmulos, aceleracin en los movimientos, inflamacin torcica en el caso de la rana y pigmentacin oscura en el pez producto del estrs caracterstico de la manipulacin y de la aplicacin del anestsico. Discusin. De acuerdo a literatura la trucha arcoris es una especie que muestra mayor docilidad a la cautividad, tolerancia y adaptacin a los cambios asociados con su hbitat (Blanco, 1995). A pesar de esto la trucha frente a la manipulacin durante el laboratorio, responde de forma alterada, lo cual indica que se encuentra en un estado de estrs latente, de acuerdo a las respuestas que genera frente a determinados estmulos como por ejemplo en el traslado de una cubeta a otra. En donde se observa un desplazamiento sobre la columna de agua con mayor rapidez, esquivando de manera gil la manipulacin, aumentando su frecuencia de movimiento opercular y de aletas (siendo ms notorio en aletas pectorales), entre otros comportamientos. La

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rana en cambio, en condiciones de hbitat natural se encuentra la mayor parte del tiempo flotando en superficie, como es corto de vista se gua a travs de las vibraciones que se producen en el agua para poder cazar o para escabullirse de algn peligro, es un animal que presenta mayor facilidad a adquirir el estrs cuando se encuentra en el interior de un acuario (Storer, 2003), lo cual se comprueba, debido a la inflacin torcica tpica producto del estrs, que present durante la permanencia en el interior de la cubeta. Al utilizar los anestsicos, se observ que el BZ-20 presenta mayor efectividad en el pez que en la rana. Debido a que en la trucha se logr alcanzar la fase de anestesia profunda en un periodo corto de tiempo en comparacin a la rana que solo alcanzo la fase de excitacin, respondiendo de forma brusca a los estmulos ya sea con saltos para tratar de evadir la manipulacin y la anestesia. Cabe sealar, que como la rana es un anfibio no solo depende del medio acutico para su sobrevivencia, sino que adems necesita del medio areo, por ende durante la aplicacin de la anestesia este anfibio, permaneci en posicin bpeda para alcanzar la superficie y poder as respirar, actividad que podra explicar la ausencia de las diferentes etapas de la anestesia en la rana. En relacin al ter aplicado mediante baos de inmersin, no se observaron mayores efectos de la anestesia en ambos animales como por ejemplo la perdida de equilibrio, la ausencia de respuesta a estmulos, entre otras. Aunque por medio de la inhalacin ocurri todo lo contrario, ya que la rana consigui llegar a los diferentes estados de anestesia ya sea; excitacin, adormecimiento, anestesia ligera y profunda. De tal modo que para este caso la anestesia empleada por medio de la inhalacin resulto ser ms efectiva en la rana. Conclusin. El efecto anestsico depende directamente de la dosis utilizada en el procedimiento y es directamente proporcional a la biomasa del organismo y al tiempo de exposicin. La trucha al ser anestesiada con BZ-20 comenz la primera reaccin, que fue una disminucin en la frecuencia de sus movimientos mandibulares y operculares. Con la dilucin de ter, la trucha disminuy sus movimientos operculares y mandibulares. En la rana se observ todas las fases de la anestesia por inhalacin de ter; la primera reaccin frente fue una disminucin de los movimientos y letargo en la recuperacin de la posicin cuadrpeda. En las diluciones de BZ-20 y ter, no presento respuesta frente a la anestesia.

Referencias bibliogrficas:

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Summerfelt, R. C., y L. S. Smith. 1990. Anesthesia, surgery, and related techniques. En: Methods for Fish Biology. Editado por C. B. Schreck, y P. B. Moyle. American Fisheries Society, USA, pp. 213-272. Marking, L. L., y F. P. Meyer. 1985. Are better anesthetics needed in fisheries? Fisheries, 10:2-5. Mattson, N. S., y T. H. Riple. 1989. Metomidate, a better anesthetic for cod (Gadus morhua) in comparison with benzocaine, MS-222, chlorobutanol, and phenoxyethanol. Aquaculture, 83: 89-94. Brown, S. B., J. G. Eales, R. E. Evans, T. J. Hara. 1984. Interrenal, thyroidal, and carbohydrate responses of rainbow trout (Salmo gairdneri) to environmental acidification. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 41: 36-45. Kreinberg, H. 2000. Stress and anesthesia. En: The laboratory fish. Editado por G. K. Ostrander. Academic Press, New York, pp. 503-511. Cho, G. K., y D. D. Heath. 2000. Comparison of tricaine methanesulphonate (MS222) and clove oil anaesthesia effects on the physiology of juvenile chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha (Walbaum). Aquaculture Research, 31: 537-546. M. Blanco. La trucha cra industrial, Madrid: Ediciones Mundi-Prensa, 2004. 503 pg.

Storer, Usingen, Stebbins & Nybakken (2003), Zoologa general, sexta edicin, 954 pgs.