Objetivos:

Cumprir regras fundamentais seguindo a tcnica de trabalho assptico para trabalhar em Laboratrio de Biologia/Microbiologia Executar corretamente tcnicas de coloraes simples e diferencial Diferenciar os vrios tipos morfolgicos bacterianos (forma e agrupamento) Classificar as bactrias em Gram positivas, Gram negativas e lcool-cido resistentes.

Colorao Simples com azul de metileno

Amostra: Iogurte (Cultura de Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus) 1. Lavar e desinfectar as mos;
2. Desinfectar as bancadas;

3. Esterilizar a ala de inoculao no bico de Bunsen; 4. Com a ala retirar um pouco de iogurte e espalhar sobre uma lmina limpa
Deixar secar ao ar. Esterilizar a ala passando pela chama; (esfregao).

5. Passar a lmina trs vezes sobre a chama para fixar o material; 6. Colocar a lmina sobre um suporte e cobrir o esfregao com soluo de azul de metileno e
deixar atuar durante 2 minutos;

7. Lavar com gua para eliminar o excesso de corante. Deixar correr a gua desde a extremidade
da lmina (nunca aplicar sobre o esfregao). Deixar seca;. 8. Secar; 9. Observar ao microscpio com a objectiva de imerso.

Colorao de Gram (Colorao diferencial) Amostra: Escherichia Coli, Staphylococcus aureus, Candida spp
1. Preparar e fixar esfregao; 2. Colocar a lmina sobre um suporte e cobrir com soluo de Cristal Violeta e deixar atuar
durante um minuto;

3. Lavar com gua; 4. Cobrir o esfregao com soluo de Lugol e deixar atuar durante 1 minuto; 5. Lavar com gua; 6. Descorar com lcool; 7. Lavar com gua; 8. Corar com soluo de Safranina durante 30 segundos; 9. Lavar com gua; 10. Secar; 11. Observar ao microscpio com a objetiva de imerso.

Colorao de Ziehl Neelsen (Colorao diferencial) Amostra: Gneros Mycobacterium e Nocardia

1. 2.
3. 4. 5. Preparar e fixar esfregao; Cobrir a lmina com fucsina fenicada (o mordente o cido fnico); Aquecer a lmina at emisso de vapores ( importante no deixar ferver); Aguardar 5 a 8 minutos; Lavar com gua corrente; Cobrir a lmina com lcool-cido 3% at descorar totalmente o esfregao; Lavar com gua corrente; Cobrir a lmina com azul de metileno durante 1 minuto; Lavar com gua corrente; Secar;

6.
7.

8.
9. 10.

11. Observar ao microscpio com a objetiva de imerso.

Colorao de Fontana -Tribondeau (Colorao diferencial) Amostra: Sulco gengival, Espiroquetas

1. 2. Preparar e fixar esfregao; Deixar secar ao ar; 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Cobrir a lmina com lquido de Ruge por 1 minuto; Lavar com gua; Cobrir a lmina com soluo de tanino fenicado, aquecendo a lmina at a emisso de Lavar com gua; Cobrir a lmina com nitrato de prata, aquecendo a lmina at a emisso de vapores, Lavar com gua corrente; Secar.

vapores, aguardar 1 min.

aguardar 30 seg;

10. Observar ao microscpio com a objetiva de imerso.