Instituto de Biologia Roberto Alcntara Gomes Departamento de Biologia Celular Disciplina: Biologia Celular Curso Nutrio 2011/2 Prof:

Viviane Mignone

Protenas so as macromolculas mais abundantes nas clulas vivas e constituem 50% ou mais do seu peso seco; Todas as protenas so constituidas com o mesmo conjunto aminocidos, unidos covalentemente em sequncias caractesticas.

Os aminocidos primrios receberam abreviaes de trs letras, ou um smbolo de uma nica letra, que so usados para indicar a composio e sequncia dos aminocidos em cadeias polipeptdicas.

Os aminocidos tm caractersticas estruturais comuns a todos. Todos tem em comum um grupo carboxila e um grupo amino, ligados ao mesmo tomo de carbono.

Os aminocidos podem ser classificados com base em seus grupos R

Os aminocidos esto ionizados em soluo aquosa e podem agir como cidos ou bases.

Relembrando....

+ H+

Os aminocidos tm curvas de titulao caractersticas

P.I Ponto isoeltrico: pH onde a carga lquida do aa zero. calculado pela mdia entre o Pka do grupo amino e o Pka do grupo carboxila.

AA com o radical R ionizvel

O PI de aa com radicais ionizveis calculado pela mdia entre o pka do radical e o pka de valor mais prximo. pKr = 4,25 pK1= 2,19

pI = 3,22

pKr = 6 pK2= 9,17

pI = 7,59

Carter cido-bsico dos aminocidos

PI < 7 - cido

PI = 7 - neutro

PI > 7 - bsico

PI = 3,22

PI = 7,59

Carga lquida do aa e o pH da soluo

pH>pI ------------0 pH=pI + ++ +++ +++++ pH<pI

Os peptdeos so cadeias de aminocidos

Ligao peptdica

A estrututura protica pode ser dividida em quatro nveis principais:

1- Estrtutura primria: sequncia de aminocidos

2- Estrutura secundria: *-hlice os aa se enovelam ao redor de um eixo imaginrio. Os grupos R se projetam pra fora e a toro dada pelas ligaes de hidrognio formadas entre os grupo s N-H e C=O

*Folha : as cadeias peptdicas se arranjam lado a lado e as pontes de hidrognio formadas entre segmentos adjacentes

3- Estrutura terciria: o arranjo tridimensional da protena e mantida pelas interaes entre os radicais R dos aa.

Pontes dissulfeto, pontes de hidrognio, foras hidrofbicas, interao de van der walls, atraes inicas,...

4- Estrtutura quaternria: Ocorre em protenas formadas por mais de duas cadeias polipeptdica distintas.

Estrutura, Funo e Desnaturao protica

A sequncia primria da protena ir determinar como ela ir se arranjar no espao, atravs das interaes entre seus radicais R.
_ + _
+

+ + _

OBS : Nem sempre as protenas conseguem alcanar sua correta conformao, precisando pra isso ajuda de chaperonas, famlia de protenas que auxiliam o correto enovelamento protico.

Chaperona

O arranjo espacial responsvel pela funo da protena

Enzima

Stio ativo

aa negativos aa hidrofbicos aa positivos -

Desnaturao proteica Desnaturao: perda da estrutura terciria da protena - perda da funo. (no h alterao da estrutura primria)

Fatores como a temperatura e o pH podem alterar as interaes entre os aminocidos, interferindo assim na sua estrutura terciria, desnaturando a protena.

Temperatura

Aumento da vibrao entre as molculas, podendo romper interaes intermoleculares como as pontes de hidrognio

O pH da soluo pode alterar o estado de ionizao dos aminocidos e mudar a interao eltrica entre eles.

pH>pI ------------0 pH=pI + ++ +++ +++++ pH<pI

Enzima pH 7,4

Interao inica
+

substrato

pH 2

A alterao da estrutura primria pode modificar a interao entre os aa, modificando a estrutura terciria, logo interferindo na sua funo.

_ _ _ + + _
+

+ + _

Classificao das Protenas de Acordo com a Funo Biolgica

Classe Enzimas Protenas transportadoras Protenas nutritivas e de reserva Protenas contrteis ou de movimento Protenas estruturais Protenas de defesa Exemplo Ribonuclease, Tripsina Hemoglobina, Albumina srica, Mioglobina, 1lipoprotena Gliadina (trigo), Ovoalbumina (ovo), Casena (leite), Ferritina Actina, Miosina, Tubulina, Dinena Queratina, Fibrona, Colgeno, Elastina, Proteoglicanas Anticorpos, Fibrinognio, Trombina, Toxina botulnica, Toxina diftrica, Veneno de serpentes, Ricina Insulina, Hormnio do crescimento, Costicotrofina, Repressores

Protenas reguladoras

As protenas podem ser separadas e purificadas Como????

Cromatografia: Pode separar as protenas por carga, tamanho, afinidade de ligao,...

Um material slido poroso mantido em uma coluna na qual percolada uma soluo contendo as protenas de interesse. As protenas vo migrar mais rpido ou devagar pela coluna dependendo das suas prorpiedades

Cromatografia por excluso de tamanho

Cromatografia de troca inica

Eletroforese SDS
SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)
As protenas so tratadas com SDS, que se liga aos aa de maneira proporcional ( 1Mol de SDS para cada 2 resduos de aa), deixando as protenas com carga (-) de modo massa-dependente. As ptns-SDS correm por um gel na presena de um campo eltrico, sendo separadas pelo peso

Eletroforese bidimensional
Isoeletrofocalizao

Separa 2 protenas com mesma massa, mas com PI diferentes

Proteoma
Conjunto de todas as protenas de uma clula, organela celular ou fludo biolgico, que interagem entre si formando redes moleculares com funes especficas e que podem apresentar mudanas qualitativas / quantitativas no tempo e no espao. Portanto, sugere-se que o proteoma possa ser capaz de fornecer a mais precisa e detalhada descrio do estado molecular de um sistema biolgico.

Protemica

Conjunto de mtodos analticos para a anlise simultnea, em grande escala, de misturas complexas proticas (proteoma), com objetivo de detectar em definidas condies biolgicas, as mudanas globais qualitativas na estrutura DAS PROTENAS e as mudanas globais quantitativas nos nveis de expresso dos produtos gnicos: AS PROTENAS.

TCNICAS PROTEMICAS
Separao de protenas Eletroforese bidimensional em gel Cromatografia multidimensional Cromatografia capilar
Identificao de protenas Anlise de cidos aminados Microsequenciamento Espectrometria de Massa