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BLANCO DE CARCOFLOR E HIDRXIDO DE POTASIO MTODO. 1.

- Se coloca una gota de reactivo de blanco de carcoflor (BC) y una gota de hidrxido de potasio (KOH) al 10% en glicerina en el centro del portaobjetos. 2.- Se agrega una porcin de la muestra clnica a la solucin de BC-KOH y se aplica un cubreobjetos. 3.- Si es necesario se disocian las partculas por medio de una presin leve sobre el cubreobjetos con el extremo de la goma de un lpiz. Se deja reposar 5 minutos. Si las partculas no se disocian, se repite este paso. 4.- El examen para detectar elementos micticos se realiza por medio de un microscopio de fluorescencia con un filtro excitador de 400 a 500 nm. Los portaobjetos se examinan con un aumento de 10x a fin de observar los elementos micticos fluorescentes. La presencia y la naturaleza de los elementos micticos se distinguen con un aumento de 40x.

REACTIVOS. Reactivo KOH: (10 g de KOH, 10 ml de glicerina y 80 ml de agua destilada) Reactivo BC: (0.05 g de BC, 0.02 g de azul de Evans y 50 ml de agua destilada) El blanco de carcoflor es un abrillantador utilizado en la industria textil que se una de manera inespecfica a la quitina y otros elementos de la pared celular de los hongos. La fluorescencia mxima del BC se produce una longitud de onda de excitacin de 440 nm. En estas condiciones los elementos micticos emiten una fluorescencia de color blanco azulado. Dado que el BC es una tincin inespecfica, para la interpretacin adecuada es fundamental la apreciacin de la morfologa de los elementos micticos en el examen directo. La presencia de KOH en la solucin disuelve los elementos de las clulas humanas y los detritos; lo que facilita la visualizacin de los elementos micticos.

TINCIN CON NARANJA DE ACRIDINA PRINCIPIO El colorante naranja de acridina, una tincin vital, se intercalar con el cido nucleico y eso modificar las caractersticas pticas del colorante, de modo que fluorescer con un color anaranjado brillante con la luz ultravioleta. Todas las clulas que tengan acido nucleico fluorescern con un color anaranjado. MTODO. 1.- Fijar el portaobjeto, sea con metanol o con calor, como se describi antes para la tincin de Gramm. 2.- Cubrir el portaobjeto con el colorante naranja de acridina (disponible a partir de diversos proveedores comerciales). Dejar actuar durante 2 minutos en la superficie del portaobjeto sin secar. 3.- Lavar con agua de la canilla, dejar escurrir del portaobjeto y secar al aire. 4.- Examinar el portaobjeto con microscopio de fluorescencia. RESULTADOS ESPERADOS. Las bacterias fluorescern con un color anaranjado brillante sobre un fondo verde fluorescente o sobre un fondo oscuro. El ncleo de las clulas husped tambin pueden fluorescer.

TINCIN DE FLUOROCROMO CON AURAMINA-RODAMINA PRINCIPIO Los colorantes de fluorocromo utilizados en esta tincin forman complejos con los acidos miclicos de las paredes celulares de las cido-alcohol resistentes. Las clulas fluorescentes se detectan mejor porque brillan y contrastan con el fondo oscuro. MTODO 1.- Los frotis se fijan con calor a 80 C durante por lo menos 15 minutos o a 6570C durante 2 horas. 2.- Se cubren con reactivo de auramina-rodamina y se dejan durante 15 20 minutos a temperatura ambiente. 3.- Se lava con agua desionizada y se inclinan para eliminar el exceso de agua. 4.- Se decoloran con cido-alcohol al 0.5% (etanol al 70% y cido clorhdrico al 0.5%) durante 2-3 minutos. 5.- Se lavan con agua desionizada y se inclinan para eliminar el exceso de agua. 6.- Se cubren con permanganato de potasio al 0.5% durante 2 -4 minutos. 7.- Se lavan con agua desionizada y se inclinan para eliminar el exceso de agua. 8.- Se realiza un examen con bajo aumento (250x) para detectar fluorescencia. RESULTADOS ESPERADOS Las especies de Mycobacterium emitirn una fluorescencia de color amarillo a naranja, segn el sistema de filtros utilizado.